출혈성 쇼크 GM053789의 기금 소스 / 번호 분자 생물학

1. 악기, 외과 필드 준비 : 모든 실험 절차는 무균 기술을 사용하여 수행됩니다. 시작하기 전에 실험 지역은 철저하게 청소하고 소독해야합니다. benchtop은 공기 건조 후 70 % 알코올로 닦여 수, 소독해야합니다. 실험 작업 영역에 드레싱 수술 블루 패드 및 살균 필드를 배치합니다. 모든 자료와 악기 압력솥 사용하기 전에 소독을하고 있습니다. 주사기와 바늘은 멸균 접수하고 있습니다. 연구원은 적절하게 실험실 외투, 수술 마스크 및 불임 수술 장갑에 garbed해야합니다. 우리 수술 악기 압력솥 매일 저녁 소독하고 있습니다. 그들은 항균 비누와 물을 사용하여 수술 후 씻어입니다. 그들은 깨끗한 수술 블루 패드에 건조 사용할 수 있습니다. 그들은 다음 조심스럽게 살균 주머니에 배치하고 나중에 사용하기 위해 소독하고 있습니다. ° F 실험을 시작하기 전에 300-350 - 그것은 적절한 온도에 도달하기 위해 핫 비드 살균기를 켭니다. 이 살균기는 각각의 생쥐에 대한 실험 절차 사이에 악기를 청소하는 데 사용됩니다. 스테인레스 스틸 악기 트레이를 70 %의 에탄올과 방법과 그 1 / 3 입력하십시오. 귀하의 수술기구를 감추기에 충분 할만큼 70 %의 에탄올이 있어야합니다. 순환 가열 패드의 전원을 켜고 그 위에 수술 블루 패드 그리고 그 위에 드레싱 멸균 필드를 놓으십시오. 이 히터는 실험 절차 및 복구 기간 동안 마우스의 적절한 온기를 보장하기 위해 사용됩니다. 멸균 드레싱 필드에있는 모든 멸균기구, 거즈, 주사기, 주사 바늘 및 1.5mL microfuge 튜브를 놓습니다. 모든 무균 악기 및 기타 항목을 열 때주의하십시오, 그들을 만져을 오염하지 않습니다. 이 설치 절차를 수행할 때 멸균 장갑을 사용하는 것이 좋습니다. 2. Pseudofracture 모델 - 실험 절차 : 1. 마취와 마우스의 위치의 유도. Pentobarbitol의 intraperitoneal 주사 (70mg/kg)을 관리하여 시작합니다. 이것은 먼저 꼬리의 근위 끝에를 사용하여 케이지에서 마우스를 리프팅하여 수행됩니다. 마우스는 다음 anaesthesic의 정확한 복용량을 계산하는 데 무게해야합니다. 여전히 꼬리를 누른 상태 다음은 새장의 상단에있는 동물을 놓으십시오. 그냥 forepaws 뒤에 마우스의 양쪽 엄지와 가운데 손가락으로 마우스의 목의 아저씨를 잡아. 검지 손가락은 다시 머리 / 목 지역에있는 피부를 당길 사용하고 부분적으로 머리를 고정합니다. 손가락이 마우스의 척추의 요추에 누르고있는 동안 마우스의 꼬리는 작은 손가락과 손가락 사이에 개최됩니다. 마취는 약 5 분 이내에 전체 적용해야하고, 반사 테스트로 확인되어야합니다. 동물이 자고 후, 플렉시 글라스 보드에 위로 향한 위치에 마우스를 놓고 자신의 사지를 녹화하여를 무력화하기 위해 느슨한 루프 테이프 기술을 사용합니다. 느슨한 루프 기술은 단순히 테이프 얇은 스트립을 절단하고 각 끝단의 말초 부분 주위에 느슨하게 테이프를 포장 알아볼 수 있습니다. 테이프 그런 다음 자체로 붙어 있으며, 테이프를 통해 왼쪽은 보드에 첨부되어 있습니다. 이것은 일관된 방식뿐만 아니라 생쥐의 사지를 보장에서 수행하는 실험 조작이보다 자연스러운 자세를 취하 수 있습니다. 동물의 복부, 사타구니와 허벅지 영역은 다음 살균 필드를 유지하기 위해 오스터 A5의 가위 (크기 40 블레이드)를 사용하여 면도 있습니다. 4X4의 거즈는 betadine 함께 묻은 거 같아요이고 수술 영역이 다음 소독을 닦아 있습니다. 무균 필드 드레싱은 다음 접힌만을 하반신과 머리의 노출을 허용하는 마우스에 걸쳐 draped 있습니다. 고정 및 살균 후, 실험 절차를 시작하기 전에 몇 초 동안 마우스의 코를 통해 isoflurane과 코 콘을 넣으십시오. 코 콘은 거즈로 가득 50cc 원뿔 튜브로 구성되어 있습니다. 튜브의 하단 끝의 절반은에 맞게 마우스의 코에있는 공간을 만드는 잘라입니다. 모자 (조직 스토리지 컨테이너 즉, 바로 옆에 넓은 입 항아리의 바닥)는 isoflurane 증기는 튜브를 사용하지 않을에 남아 있도록 원뿔의 절단 끝에 배치됩니다. isoflurane 중 하나 ML은 원추 내에 거즈에 추가되어 있어야합니다. 세심한주의가 마취의 사용 중에 마우스를 지불하고 특히 코 콘을 통해 isoflurane을 사용해야합니다. 동물의 호흡이 느린 시작되면, 실험을 시작할 수 있으며 코 콘은 제거하고 폐쇄하여야한다. 추가 마취가 실험의 어떤 부분에 걸쳐 필요한 경우, 추가 pentobarbital은 주입이나 isoflurane 관리 수 있습니다. isofluorane 관리의 대체 방법이 제공 및 지침 recomm 업데이 트됩니다가능한 경우, 마취의 더 나은 통제를 허용하는 정밀 기화기의 사용을 종료합니다. 그러나, 마우스의 호흡 생리에 가까운 관심은 이러한 방법 중 하나와 함께 보장되어야합니다. 2. Pseudofracture 실험. 의사 - 골절이 부상 근육 뼈 솔루션 주입에 의해 다음과 hindlimbs에 좌우 대칭으로 수행 부드러운 조직 손상의 조합입니다. 받는 생쥐의 실험 조작을 시작하기 전에 본 솔루션은 준비하셔야합니다. 3. 본 솔루션 준비. 한 사람 거였어요 마우스에서 준비 뼈를 솔루션은 충분히 3받는 마우스에 대한 것입니다. syngeneic 기증자 마우스는 연령과받는 실험 마우스 체중 일치하는 것을 사용해야합니다. 기증자 마우스 흡입 isoflurane과 euthanized 것입니다. 기증자는 다음 테이프에만 발 끝에 하반신에 세심한주의와 플렉시 글라스 보드에 녹화됩니다. 하반신은 신중하게 면도하고 철저하게 betadine로 덮여있을, 그리고 불임에 대한 알코올로 닦아해야합니다. 다음 대퇴골과 경골은 수술 두 하반신에서 살균 방식으로 제거됩니다. 낮은 말단의 긴 뼈를 제거하려면, 사타구니 지역에있는 피부에 절개 수술을하고, 아래 발목에, 말단의 길이를 따라 피부를 잘라 계속. 피부를 철회하고, 모두 최대 노출을위한 중간과 측면 측면에 피하 근막과 근육에서 멀리 해부하다. 앞쪽에 및 발목 부분의 경골 (정강뼈 앞쪽에, 신근 digitorum의 longus, 신근 hallicus의 longus, peroneus longus, peroneus brevis)와 깔끔하게 떨어져에서 근육을 리프트에 proximally와 distally 블레이드를 슬라이드 측면 거짓말 근육 아래에있는 가위 중 하나 블레이드를 삽입 뼈가 기본. 발목 부분의 경골 (gastrocnemius, soleus, plantaris 후부, 정강뼈, flexor digitorum longus의, flexor hallicus의 longus) 아래 근육을 분리하기 위해 경골의 뒷부분과 중간 아래쪽에이 기법을 반복합니다. distally 슬라이딩 때 최소한의 추가적인 노력이 떨어져 발목 부분의 경골에서 비골 스냅인을하기 위해, 뒷부분 측면에 사용해야합니다. 작은 예인선이 발목 관절에서 이러한 근육의 말초 첨부 파일을 출시할 예정 하향 방식으로 함께 근육 그룹에 당기면서이 다리 근육의 근위 끝에, 가장 가까운 자신의 삽입 가능한 힘줄을 잘라 distally 근육을 철회. 발목 관절은 가위로 직접 통과하여 갈 수 있습니다. 이 시점에서 대퇴골에서 경골을 분리하지 마십시오! 이 연결은 엉덩이 관절에서 대퇴골의 해부에 도움이 추가로 활용할 수 있습니다. 대퇴골에서 근육의 릴리스 비슷한 기법을 따라이 뒤로 두 medially하고 옆으로 또한 필요한 경우를 수행합니다. 무릎 관절에서 그들을 풀어 이러한 근육 그룹의 말초 첨부 파일을 잘라요. 절개를 계속 밖으로 엉덩이 관절의 대퇴골의 끝을 해부하다하는 근육 아래에 따르십시오. 이 부검에 투입, 피부 절개는 지금까지와 같은 적절한 노출을 달성하기 위해 필요에 따라 확장되어야합니다. 엉덩이 관절에서 대퇴골 Motion은 해부 동안 대퇴골의 근위 끝을 찾을 수 있습니다. 일단 대퇴골이 (첨부 경골)를 기증 마우스에서 제거하면 살균 4x4gauze 그들을 놓으십시오. 두 뼈를 단순히 별도의 손에 각 뼈를 쥐고 부드럽게 비틀 / 자신의 긴 축을 따라 반대 방향으로 두 뼈를 돌려 무릎 관절에서 분리하실 수 있습니다. 그들이 쉽게 수동 조작의 과잉 노력과 골절 수 있듯이 두 뼈 부드러운 절개 및 취급을 권장합니다. 긴 뼈가 남아있는 힘줄이 첨부 파일을 제거하려면 뼈의 길이 주위에 싸서 4X4의 거즈의 건조 살균 조각을 사용합니다. 그들은 거즈를 준수하고 뼈에서 끌려나 쉽고 빠르게 될 것이다 뼈에 대해 단단히이 거즈을 파악이에게 뼈 여러 번의 전체 길이를 당겨, 이것은 뼈의 표면에 묻은 나머지 조직을 다쳤어요 것입니다. 수집된 뼈가 다음 멸균 1.5mL microfuge 튜브에 직접 배치 및 전송을위한 얼음에 배치해야합니다. 이 네 기증자 뼈는 뼈 솔루션에 대한 준비를위한 생물 학적 안전 캐비닛로 이동합니다. 후드가 완전히 사용하기 전에 소독해야하며, 후드 내에서 작업 영역 드레싱 멸균 필드를 놓으십시오. 살균 박격포와 유봉, 살균 8mL 튜브 및 멸균 인산을 장소는 작업 영역에 살린 (PBS)를 버퍼. 1mL pipetteman, 그리고 각각의 조언은 후드 내에서 사용 가능한 있어야합니다. 포셉의 살균 쌍의는 1.5mL microfuge 관에서 살균 방식으로 수확 뼈를 제거하고 박격포에 배치하는 데 사용해야합니다, 유봉은 부드럽게 뼈를 부셔하는 데 사용됩니다. Phosph먹고 버퍼 호수가 주사에 대한 뼈 조각을 resuspend하는 데 사용되는 차량입니다. 피펫 박격포로 PBS의 1mL 및 전체 resuspension을 보장하기 위해 추가적인 원형 동작으로 남아있는 조각을 부수기 위해서는 계속합니다. 다음 PBS의 다른 1mL를 추가하고 &#39;뼈 솔루션&#39;을 만들 수 분쇄 진행합니다. 솔루션은 핑크 색상을 가지고 있어야하고, 완전히 깨진 수없는 박격포의 하단에있는 왼쪽부터 이어져 온있을 것입니다. 더 큰 잔존물은 절구에 남아서 확보하면서 천천히, 최대 볼륨을 잡으려고, 8mL 튜브에 박격포의 솔루션을 부어. 이 뼈를 솔루션은 실험적인 사용까지 얼음에 남아 있어야하며 주사 1mL 주사기로 전송됩니다. 는 20 게이지 바늘은 나중에 마우스로 관리하기 위해 뼈를 솔루션을 포함하는 1mL 주사기에 연결된 것입니다. 이 대형 바늘 크기는 모두 뼈 조각이 주사시 지역을 입력하고 바늘을 차단하지 않도록 선택했습니다. 받는 마우스, 뼈 솔루션의 한 방울을 분사는 문화 MacConkey 한천 플레이트 (24~48시간을위한 인큐베이션)에 배치되기 전에. 이것은 뼈 솔루션의 불임을 보장하는 것입니다. 뼈 솔루션의 산도는 중성 산도를 보장하기 위해 검사를해야합니다. 4. 연조직 손상. 이 부드러운 조직 부상은 양자 hindlimb의 호감의 부상이다. 뒷다리 팔다리 약간 납치 옆으로 회전 마우스의 초기 위치는, 올바른 근육 그룹, 무릎이 박혀 (팔뚝 femoris, semitendinosus 및 semimembranosus 근육)에 접근에 도움이됩니다. 대형 18cm hemostat는 호감 부상을 수행하는 데 사용됩니다. 이러한 응용 hemostats의 힘의 분포 분석 및 hemostat는 대퇴골에 직면하고 자사의 볼록 곡선과 대퇴골 따라 후부 허벅지의 근육, 미드 주위에 고정되어 있어야합니다 센서 제품 주식 회사에 의해 Topaq 압력 분석 시스템을 사용하여 270psi로 발견되었습니다. hemostat은 다음 첫 번째 클릭에만 잠겨 종료하고 30 초 동안 유지한다. 이 hemostat의 위치에 세심한주의가 중요하다 - 그것은 그것이 골절이 안되도록, 대퇴골을 통해 채워해서는 안됩니다. 이것은 쥐 간의 재현성 부상을 보장 때마다 일관된 방식으로 수행되어야합니다. 이 호감 부상은 모두 하반신에서 수행됩니다. 5. 본 솔루션을 주입. 받는 실험 마우스 anesthetized 이전에 설명된대로 준비되며, 이전이 뼈 주사로 부드러운 조직 부상을받은 것입니다. 본 솔루션은 다음 좌우 대칭으로받는 마우스의 조각 허벅지의 근육에 주입됩니다. 이 솔루션의 0.15mL 20 게이지 바늘을 사용하는 것은 각각의 허벅지의 뒷부분 근육에 주입됩니다. 피부를 통해 약 2 ~ 3mm를 바늘을 입력하고 바늘의 삽입의 거리에주의 - 베벨의 끝에 그냥 대퇴골에 대한 감동으로 기분 것입니다,이 위치는 이상적입니다. 이제 뼈 솔루션을 주사. 바늘을 철회하고 신속하게 상처를 밖으로 뼈 솔루션의 다시 흐름을 막을 수있는 주사 사이트를 통해 멸균 장갑 낀 손가락을 넣으십시오. 몇 초 동안이이 손가락을 잡아. 마우스는 다음 케이지에 다시 배치 직접 마취의 앉다과 같은 운동의 완전 자유를 허용됩니다. 마우스가 깨어난다 같은 적절한 통증 관리는 관리해야합니다. 6. Post-operative/recovery 기간. 느슨한 루프 테이프가 제거되고 동물은 몇 시간 포스트 복구를 위해 순환 가열 패드에 보관 깨끗한 케이지에 넣습니다. 필요한 경우 적절한 온기가 추가로 가열 램프와 함께 보장되어야합니다. 음식과 물이 쉽게 사용할 수 있습니다. 동물이 고통을 제대로 관리하기 위해서는 마취에서 waken 시작으로 진통을 관리해야합니다. Buprenorphine은 동물들이 신체 활동을 시작으로 (0.1mg/kg) subcutaneously 주입 아니지만 전에 않도록 호흡 기능을 손상하지 않습니다. 생쥐는 지속적으로 마취 또는 실험 종점에서 복구까지 마취 동안 모니터해야합니다. 생쥐도 매우 신중하게 수술 후 기간에 모니터링할 수 있어야하고 필요한 추가적인 진통제는 필요에 따라 관리되어야합니다. 모니터 동물 신체 활동, 호흡 상태, 음식과 물을 섭취와 고민의 흔적 (고심한 흔적이있는 호흡은 고통은 습관을 음식의 변화)을 따라 해결되어야합니다. 70 % 알코올로 수술 도구를 삽입하고 멸균 거즈 그들을 닦아 다음 동물 사이의 살균을위한 ~ 20 초 동안 microbead 살균기에 넣어 두었어요. 수술 도구를 제거하고 그들을 식히고 수 있도록 70 %의 알코올을 스프레이. 세인트에 그들을 플레이스erile 필드 드레싱. 다음 동물에 다시 똑됩니다 악기에 남아있는 알코올이없는 있는지 확인합니다. 3. 비교 정무 대퇴골 골절 모델 - 실험 절차 : 실험 마우스 anesthetized과 처음 설명한대로 준비합니다. 대형 18cm hemostat 약 2~3밀리미터 무릎을 마주의 볼록한 표면과 무릎 관절 위의 hindlimb 주위에 고정되어 있어야합니다. hemostat와 엉덩이 사이에 고정되어 hemostat와 검지 손가락 위에 엄지를 놓습니다. 당신이 깨고 어디 있는지 알 수 있도록 비틀 전에 대퇴골을 느낄 수 있어야합니다. 다른 손으로 시계 방향으로 비틀면서 다음 트위스트 hemostat는 반시계. contralateral 다리와 절차를 반복합니다. 4. 여러 외상 모델 - 출혈성 쇼크로 Pseudofracture의 조합에 대한 실험 절차 : 받는 마우스 anesthetized과 처음 설명한대로 준비합니다. 의사 파괴와 함께 출혈성 쇼크를 받아야하는 아르 생쥐는 pseudofracture 절차 전에 대퇴 동맥 cannulation을하고 다음 의사 골절이 완료되고 나면이 카테터에서 hemorrhaged 것입니다. 5. 성공을위한 비밀 : 일반 : <ul><li> 당신은 가능한 한 무균 유지하기 위해 여분의 노력을했는지 확인하십시오. </li><li> 세심한주의가 마취 관리 동안 호흡 속도를 포함하여, 마우스의 전체적인 생리 상태로 지불하고 코 콘을 통해 특히 isoflurane해야합니다. </li></ul> 본 솔루션 준비 : <ul><li> 뼈 부드러운 조작 -이 쉽게 간단한 수동 조작하는 동안 - 노력과 골절 수 있습니다! </li><li> 발목 부분의 경골에서 비골 제거는 절개에 보장하여야한다. </li><li> 처음에는 부드럽게 뼈를 분쇄하여 시작 - 박격포 내의 모든 조각을 유지 않도록! </li><li> 초기 단 1 ML PBS를 추가하고, 한 번 좋은 서스펜션은 형성했다, 나머지 뼈 조각을 깔아 뭉 갠다고 계속 나머지 1mL를 추가합니다. </li><li> 박격포와 유봉에서만 솔루션 수집해야합니다 - 완전히 분해되지 않을 수있는 큰 나머지 조직없이 -이 수가받는 마우스에 주입시 주사 바늘에 박혀 타 / 차단할 수 있습니다. </li></ul> 연조직 손상 : <ul><li> 아니라 대퇴골 이상이나 골절 것입니다 -이 hemostat주의 게재 중요합니다. 재현성 부상 - 올바른 근육 (무릎이 박혀 후부 허벅지) 위에 hemostat를 클램프. </li></ul> 본 솔루션 주입 : <ul><li> 솔루션을 주입하면 바늘의 삽입의 거리를 관심을 지불 - 베벨의 끝에 그냥 대퇴골에 대한 감동으로 기분 것입니다,이 위치는 이상적입니다. </li><li> 바늘을 철회하고 신속하게 상처를 밖으로 뼈 솔루션의 다시 흐름을 막을 수있는 주사 사이트를 통해 손가락을 넣으십시오. 몇 초 거기에 손가락을 잡아. </li></ul> 6. 수술의 우려를 게시 : <ul><li> 다리에 감염 확인하십시오. </li><li> 뼈 솔루션의 문화를 확인하십시오. </li><li> 동물 실험 조작과 관련된 염증의 결과로 뒷다리 팔다리를 사용하여 문제가 수 있습니다. 적절하게 고통을 관리합니다. </li></ul>

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B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemorrhagic+shock+in+endotoxin+resistant+mice+:+Improved+survival+unrelated+to+deficient+production+of+tumor+necrosis+factor.">Hemorrhagic shock in endotoxin resistant mice : Improved survival unrelated to deficient production of tumor necrosis factor.</a> J Trauma. 35, 720-724 (1993).</li><li>Jamsa, T., Jalovaara, P., Peng, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+three-point+bending+test+and+peripheral+quantitative+computed+tomography+analysis+in+the+evaluation+of+the+strength+of+mouse+femur.">Comparison of three-point bending test and peripheral quantitative computed tomography analysis in the evaluation of the strength of mouse femur.</a> Bone. 23, 155-161 (1998).</li><li>Bounarens, F., Einhorn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+a+standard+closed+fracture+in+laboratory+animal+bone.">Production of a standard closed fracture in laboratory animal bone.</a> J Ortho Res. 2, 97-101 (1984).</li><li>Holstein, J. H., Menger, M. D., Culemann, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+locking+femur+nail+for+mice.">Development of a locking femur nail for mice.</a> J Biomech. 40, 215-219 (2007).</li><li>Holstein, J. H., Garcia, P., Histing, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+establishment+of+defined+mouse+models+for+the+study+of+fracture+healing+and+bone+regeneration.">Advances in the establishment of defined mouse models for the study of fracture healing and bone regeneration.</a> J Orthop Trauma. 23, S31-S38 (2009).</li><li>Histing, T., Garcia, P., Matthys, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+internal+locking+plate+to+study+intramembranous+bone+healing+in+a+mouse+femur+fracture+model.">An internal locking plate to study intramembranous bone healing in a mouse femur fracture model.</a> J Orthop Research. 28, 397-402 .</li><li>Manigrasso, M. B., O'Connor, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+closed+femur+fracture+model+in+mice.">Characterization of a closed femur fracture model in mice.</a> J Ortho Trauma. 18, 687-695 (2004).</li><li>Mark, H., Bergholm, J., Nilsson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+external+fixation+method+and+device+to+study+fracture+healing+in+rats.">An external fixation method and device to study fracture healing in rats.</a> Acta Orthop Scand. 74, 476-487 (2003).</li><li>Bhandari, M., Shanghnessy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+minimally+invasive+percutaneous+technique+of+intramedullary+nail+insertion+in+an+animal+model+of+fracture+healing.">A minimally invasive percutaneous technique of intramedullary nail insertion in an animal model of fracture healing.</a> Arch Orthop Trauma Surg. 121, 591-593 (2001).</li><li>Sonanis, S. V., Lampard, A. L., Kamat, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+technique+to+remove+a+bent+femoral+intramedullary+nail+and+broken+interlocking+screw.">A simple technique to remove a bent femoral intramedullary nail and broken interlocking screw.</a> J Trauma. 63, 435-438 (2007).</li><li>Kobbe, P., Kaczorwoski, D. J., Vodovotz, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+exposure+of+bone+components+to+injured+soft+tissue+induces+Toll-like+receptor+4-dependent+systemic+inflammation+with+acute+lung+injury.">Local exposure of bone components to injured soft tissue induces Toll-like receptor 4-dependent systemic inflammation with acute lung injury.</a> Shock. 30, 686-691 (2008).</li><li>Bumann, M., Henke, T., Gerngross, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+haemorrhagic+shock+on+fracture+healing.">Influence of haemorrhagic shock on fracture healing.</a> Lang Arch Surg. 388, 331-338 (2003).</li><li>Santry, H. P., Alam, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid+resuscitation:+past,+present,+and+the+future.">Fluid resuscitation: past, present, and the future.</a> Shock. 33, 229-241 (2010).</li><li>Hierholzer, C., Billiar, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+in+the+early+phase+of+hemorrhagic+shock.">Molecular mechanisms in the early phase of hemorrhagic shock.</a> Lang Arch Surg. 386, 302-308 (2001).</li><li>Chaudry, I., Ayala, A., Ertel, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemorrhage+and+resuscitation:+immunological+aspects.">Hemorrhage and resuscitation: immunological aspects.</a> Am J Physiol. 259, 63-678 (1990).</li><li>Kawasaki, T., Hubbard, W. J., Choudhry, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trauma-hemorrhage+induces+depressed+splenic+dendritic+cell+functions+in+mice.">Trauma-hemorrhage induces depressed splenic dendritic cell functions in mice.</a> J Immunol. 177, 4514-4520 (2006).</li><li>Kohut, L., Darwiche, S. S., Frank, A. M., Brumfield, J. M., Billiar, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fixed+volume+or+Fixed+Pressure:+A+Murine+Model+of+Hemorrhgaic+Shock.">Fixed volume or Fixed Pressure: A Murine Model of Hemorrhgaic Shock.</a> J Vis Exp. , (2010).</li><li>Menzel, C. L., Pfeifer, R., Darwiche, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+lower+extremity+damage+in+mice:+time+course+of+organ+damage+and+immune+response.">Models of lower extremity damage in mice: time course of organ damage and immune response.</a> J Surg Res. 166, e149-e156 (2011).</li><li>Pfeifer, R., Kobbe, P., Darwiche, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+hemorrhage+in+the+induction+of+systemic+inflammation+and+remote+organ+damage:+Analysis+of+combined+pseudo-fracture+and+hemorrhagic+shock.">Role of hemorrhage in the induction of systemic inflammation and remote organ damage: Analysis of combined pseudo-fracture and hemorrhagic shock.</a> J Orthop Res. 29, 270-274 (2011).</li></ol>

동물 실험 기관 애니멀 케어 및 사용위원회 및 연구 실시와 피츠버그 대학, AALAS / AAALAC 인증 기관의 준수 사무실에서 정한 지침과 규정에 따라 수행되었다. 동물 소스 잭슨 연구소와 찰스 리버스 연구소를 포함합니다. 모든 동물은 광범위한 건강 각 업체를 통해 보증뿐만 아니라, 피츠버그의 내부 동물 건강 모니터링 프로그램의 대학을 받고있다. 이 연구는 척추 동물의 사용에 대한 미국 정부의 원칙에 따라 실시됩니다. 이 프로그램은 USDA에 등록하고, 실험실 동물 복지의 보건 서비스 사무소와 보증의 편지를 가지고있다.

Pseudofracture, 무균 musculoskeletal 외상의 재현성 murine 모델, 외상후 면역 반응의 평가를 위해 수 있습니다. pseudofracture 모델 immunologically 긴 골절의 기능의 레크 리에이션을 통해 끝단 파괴 환경을 모방 : 부상 근육과 부드러운 조직은 원래 뼈 한방울 흘리지 않고 손상된 뼈 및 골수에 노출되는 38,39 biphasic 면역 반응은 다음과 같은 볼 수 있습니다. 48hrs 주변 여물로 묘사 지연 immunosuppression의 두 ?...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Surgical blue pad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>50-7105</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterile Field dressings</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>NC9517505</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Circulating heating pad 18"x26"</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard</td>
<td>py872-5272</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hot bead instrument sterilizer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>11156-002</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stainless steel tray 8" x 11"</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>62687-049</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plexiglass boards (10x15x0.5cm) </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>University of Pittsburgh Machine shop</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tape rolls 1"</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corporate Express</td>
<td>MMM26001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>50cc conical tube</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>can be purchased through any global vendor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Straight side wide mouth jars (used as cap for nose cone)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>159000-058</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oster A5 clippers w. size 40 blade</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>10749-020</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Surgical scissors (straight &#x2013; 12cm)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>14068-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hemostats curved -18cm</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard</td>
<td>81331718</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps (0.8mm-tip, curved-10cm)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11050-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Gauze 4"x4"</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>can be purchased through any global vendor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1.5cc microfuge tube</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>can be purchased through any global vendor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ice bucket</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>can be purchased through any global vendor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mortar and Pestle </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>12-961AA</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1cc syringe w/ 25G needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>14-826-88</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>20G needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>can be purchased through any global vendor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL pipetteman</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>can be purchased through any global vendor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL pipette tips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>can be purchased through any global vendor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Falcon polystyrene 8ml tubes </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>60819-331</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterilization pouch 3"x8"</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>24008</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterilization pouch 5"x10"</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>24010</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MacConkey II Agar plate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>221172</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ethyl Alcohol - 200 proof </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pharmaco-AAPER</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>[70%]</td>
</tr>
<tr>
<td>Pentobarbital Sodium (Nembutol Sodium Solution)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ovation </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>70mg/kg</td>
</tr>
<tr>
<td>Aerrane (Isoflurane)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Baxter </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>99.9%</td>
</tr>
<tr>
<td>Triadine Povidone Iodine (Betadine)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Triad disposables</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Buprenorphine HCl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bedford Laboratories</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>0.1mg/kg</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

pseudofracture: an acute peripheral tissue trauma model

외상 다음 여러 장기의 장애와 외상 환자에서 높은 사망률을 초래할 수있는 초기 하이퍼 반응 염증 반응이있다,이 반응은 종종 감염의 임상적 합병증을 추가 지연 immunosuppression 동반되며 사망률을 높일 수 있습니다 1-9가. 많은 연구 외상 다음 면역 체계의 반응에서 이러한 변화를 평가하기 시작했습니다. 10-15도 Immunologic 연구는 크게 유전자 변형 및 생체내 모델링에 사용할 수 녹아웃 마우스의 다양한 통해 지원되며. 자세한 조사에서 이러한 변종이 원조는 immunologic 응답에 관련된 분자 경로를 평가할 16-21 마우스의 파괴 고정 기술이 복잡하고 쉽게 재현할 수는 없습니다로서 실험 murine 외상 모델링에 도전, 장기 조사입니다. 22-30 마취의 지속, 장기간 사용하지 않고 동물과 장기 생존에 이동의 자유를 허용하면서이 pseudofracture 모델, 쉽게 복제 외상 모델은, immunologically 끝단 파괴 환경을 흉내낸하여 이러한 어려움을 극복. 목적은 긴 골절의 기능을 재현하는 것입니다, 부상 근육과 부드러운 조직은 원래 뼈 한방울 흘리지 않고 손상된 뼈 및 골수에 노출되어 있습니다. hindlimbs에 양자 근육 호감 부상이 부상을 근육으로 뼈를 솔루션의 주입에 의해 다음 : pseudofracture 모델은 두 부분으로 구성되어 있습니다. 본 솔루션은 연령과 체중 일치 syngeneic 기증자 모두 hindlimbs에서 긴 뼈가 수확하여 준비가되어 있습니다. 이 유골은 다음 조각과 인산염의 resuspended하는 것은 뼈 솔루션을 만들 수 살린 버퍼. 양자 대퇴골 골절은 끝단 외상의 일반적으로 사용하고 잘 구축 모델이며, pseudofracture 모델의 개발 기간 동안 비교 모델. 우리가 멸균 아직 비례 심한 말초 조직 외상 모델을 원하는 사용 가능한 파괴 모델의 다양한 가운데, 우리는 pseudofracture 우리의 비교와 같은 부드러운 조직 손상과 파괴의 폐쇄 방법을 사용하기로 결정했습니다. 31 출혈성 쇼크가 심각한 외상의 설정에서 일반적인 발견이며, 세계 hypoperfusion는 외상 모델에 매우 관련된 요소를 추가합니다. 32-36 pseudofracture 모델이 쉽게 높은 심각도의 여러 외상 모델 출혈성 쇼크 모델과 결합 수 있습니다 . 37

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Pseudofracture: An Acute Peripheral Tissue Trauma Model

Pseudofracture, 무균 musculoskeletal 외상의 재현성 murine 모델은, 늦은 용어 외상후 면역 반응의 평가를 위해 수 있습니다. 이 문서는 여러 외상의 연구를 허용하는 실험 모델 조합의 가능성을 포함하여 단계 모델 단계의 절차 실행을 설명합니다.

Pseudofracture : 급성 주변 조직 외상 모델

Following trauma there is an early hyper-reactive inflammatory response that can lead to multiple organ dysfunction and high mortality in trauma patients; ...

pseudofracture-an-acute-peripheral-tissue-trauma-model

Research

JoVE Journal

Medicine

14.7K 조회수.  University of Pittsburgh. Pseudofracture, 무균 musculoskeletal 외상의 재현성 murine 모델은, 늦은 용어 외상후 면역 반응의 평가를 위해 수 있습니다. 이 문서는 여러 외상의 연구를 허용하는 실험 모델 조합의 가능성을 포함하여 단계 모델 단계의 절차 실행을 설명합니다.

비디오: Pseudofracture: An Acute Peripheral Tissue Trauma Model

Expired CO2 Measurement in Intubated or Spontaneously Breathing Patients from the Emergency Department

Carbon dioxide (CO2) along with oxygen (O2) share the role of being the most important gases in the human body. The measuring of expired CO2 at the mouth has solicited growing clinical interest among physicians in the emergency department for various indications: (1) surveillance et monitoring of the intubated patient; (2) verification of the correct positioning of an endotracheal tube; (3) monitoring of a patient in cardiac arrest; (4) achieving normocapnia in intubated head trauma patients; (5) monitoring ventilation during procedural sedation. The video allows physicians to familiarize themselves with the use of capnography and the text offers a review of the theory and principals involved. In particular, the importance of CO2 for the organism, the relevance of measuring expired CO2, the differences between arterial and expired CO2, the material used in capnography with their artifacts and traps, will be reviewed. Since the main reluctance in the use of expired CO2 measurement is due to lack of correct knowledge concerning the physiopathology of CO2 by the physician, we hope that this explanation and the video sequences accompanying will help resolve this limitation.

Expired CO2 Measurement in Intubated or Spontaneously Breathing Patients from the Emergency Department

This video describes how to perform CO2 measurement in intubated as well as spontaneously breathing patients. The main clinical indications refer to emergency situations: (1) verifying adequate positioning of an endotracheal tube; (2) achieving normocapnia in trauma patients; (3) monitoring ventilation in the case of procedural sedation.

만료 CO 2</sub응급실에서 Intubated 또는 자연스럽게 호흡 환자> 측정

Carbon dioxide (CO2) along with oxygen (O2) share the role of being the most important gases in the human body. The measuring of expired CO2 at the mouth ...

연구

의학

Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules that regulate HSCs. In these transplant model systems, the function of HSCs is determined by the ability of these cells to engraft and reconstitute lethally irradiated recipient mice. Commonly, the donor cell contribution/engraftment is measured by antibodies to donor- specific cell surface proteins using flow cytometry. However, this method heavily depends on the specificity and the ability of the cell surface marker to differentiate donor-derived cells from recipient-originated cells, which may not be available for all mouse strains. Considering the various backgrounds of genetically modified mouse strains in the market, this cell surface/ flow cytometry-based method has significant limitations especially in mouse strains that lack well-defined surface markers to separate donor cells from congenic recipient cells. Here, we reported a PCR-based technique to determine donor cell engraftment/contribution in transplant recipient mice. We transplanted male donor bone marrow HSCs to lethally irradiated congenic female mice. Peripheral blood samples were collected at different time points post transplantation. Bone marrow samples were obtained at the end of the experiments. Genomic DNA was isolated and the Y chromosome specific gene, Zfy1, was amplified using quantitative Real time PCR. The engraftment of male donor-derived cells in the female recipient mice was calculated against standard curve with known percentage of male vs. female DNAs. Bcl2 was used as a reference gene to normalize the total DNA amount. Our data suggested that this approach reliably determines donor cell engraftment and provides a useful, yet simple method in measuring hematopoietic cell reconstitution in murine bone marrow transplantation models. Our method can be routinely performed in most laboratories because no costly equipment such as flow cytometry is required.

Determining donor cell engraftment presents a challenge in mouse bone marrow transplant models that lack well-defined phenotypical markers. We described a methodology to quantify male donor cell engraftment in female transplant recipient mice. This method can be used in all mouse strains for the study of HSC functions.

경쟁 손쥐 골수 이식 모델에서 기증자 세포 Engraftment를 확인하려면 수량 실시간 PCR을 사용하여

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

Acute Brain Trauma in Mice Followed By Longitudinal Two-photon Imaging

Although acute brain trauma often results from head damage in different accidents and affects a substantial fraction of the population, there is no effective treatment for it yet. Limitations of currently used animal models impede understanding of the pathology mechanism. Multiphoton microscopy allows studying cells and tissues within intact animal brains longitudinally under physiological and pathological conditions. Here, we describe two models of acute brain injury studied by means of two-photon imaging of brain cell behavior under posttraumatic conditions. A selected brain region is injured with a sharp needle to produce a trauma of a controlled width and depth in the brain parenchyma. Our method uses stereotaxic prick with a syringe needle, which can be combined with simultaneous drug application. We propose that this method can be used as an advanced tool to study cellular mechanisms of pathophysiological consequences of acute trauma in mammalian brain in vivo. In this video, we combine acute brain injury with two preparations: cranial window and skull thinning. We also discuss advantages and limitations of both preparations for multisession imaging of brain regeneration after trauma.

Acute brain trauma is a severe injury that has no adequate treatment to date. Multiphoton microscopy allows studying longitudinally the process of acute brain trauma development and probing therapeutical strategies in rodents. Two models of acute brain trauma studied with in vivo two-photon imaging of brain are demonstrated in this protocol.

세로 두 광자 이미징 다음 마우스의 급성 뇌 외상

Although acute brain trauma often results from head damage in different accidents and affects a substantial fraction of the population, there is no ...

Ischemic Tissue Injury in the Dorsal Skinfold Chamber of the Mouse: A Skin Flap Model to Investigate Acute Persistent Ischemia

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are still occurring, particularly in reconstructive flap surgery. Multiple experimental flap models have been developed to analyze underlying causes and mechanisms and to investigate treatment strategies to prevent ischemic complications. The limiting factor of most models is the lacking possibility to directly and repetitively visualize microvascular architecture and hemodynamics. The goal of the protocol was to present a well-established mouse model affiliating these before mentioned lacking elements. Harder et al. have developed a model of a musculocutaneous flap with a random perfusion pattern that undergoes acute persistent ischemia and results in ~50% necrosis after 10 days if kept untreated. With the aid of intravital epi-fluorescence microscopy, this chamber model allows repetitive visualization of morphology and hemodynamics in different regions of interest over time. Associated processes such as apoptosis, inflammation, microvascular leakage and angiogenesis can be investigated and correlated to immunohistochemical and molecular protein assays. To date, the model has proven feasibility and reproducibility in several published experimental studies investigating the effect of pre-, peri- and postconditioning of ischemically challenged tissue.

The window of the murine dorsal skinfold chamber presented visualizes a zone of acute persistent ischemia of a musculocutaneous flap. Intravital epi-fluorescence microscopy permits for direct and repetitive assessment of the microvasculature and quantification of hemodynamics. Morphologic and hemodynamic results can further be correlated with histological and molecular analyses.

마우스의 등쪽 피하 지방 상공 회의소에서 허혈성 조직 손상 : 피부 플랩 모델은 급성 영구 허혈을 조사하기

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are ...

Direct Mouse Trauma/Burn Model of Heterotopic Ossification

Heterotopic ossification (HO) is the formation of bone outside of the skeleton which forms following major trauma, burn injuries, and orthopaedic surgical procedures. The majority of animal models used to study HO rely on the application of exogenous substances, such as bone morphogenetic protein (BMP), exogenous cell constructs, or genetic mutations in BMP signaling. While these models are useful they do not accurately reproduce the inflammatory states that cause the majority of cases of HO. Here we describe a burn/tenotomy model in mice that reliably produces focused HO. This protocol involves creating a 30% total body surface area partial thickness contact burn on the dorsal skin as well as division of the Achilles tendon at its midpoint. Relying solely on traumatic injury to induce HO at a predictable location allows for time-course study of endochondral heterotopic bone formation from intrinsic physiologic processes and environment only. This method could prove instrumental in understanding the inflammatory and osteogenic pathways involved in trauma-induced HO. Furthermore, because HO develops in a predictable location and time-course in this model, it allows for research to improve early imaging strategies and treatment modalities to prevent HO formation.

An Achilles tenotomy and burn injury model of heterotopic ossification allows for the reliable study of trauma induced ectopic bone formation without the application of exogenous factors.

직접 마우스 외상 / 이소성 골화의 모델을 굽기

Heterotopic ossification (HO) is the formation of bone outside of the skeleton which forms following major trauma, burn injuries, and orthopaedic surgical ...

An Acute Retinal Model for Evaluating Blood Retinal Barrier Breach and Potential Drugs for Treatment

A low-cost, easy-to-use and powerful model system is established to evaluate potential treatments that could ameliorate blood retinal barrier breach. An inflammatory factor, histamine, is demonstrated to compromise vessel integrity in the cultured retina through positive staining of IgG outside of the blood vessels. The effects of histamine itself and those of candidate drugs for potential treatments, such as lipoxin A4, are assessed using three parameters: blood vessel leakage via IgG immunostaining, activation of M&#252;ller cells via GFAP staining and change in neuronal dendrites through staining for MAP2. Furthermore, the layered organization of the retina allows a detailed analysis of the processes of M&#252;ller and ganglion cells, such as changes in width and continuity. While the data presented is with swine retinal culture, the system is applicable to multiple species. Thus, the model provides a reliable tool to investigate the early effects of compromised retinal vessel integrity on different cell types and also to evaluate potential drug candidates for treatment.

A low-cost, easy-to-use and powerful system is established to evaluate potential treatments that could ameliorate blood retinal barrier breach induced by histamine. Blood vessel leakage, M&#252;ller cell activation and the continuity of neuronal processes are utilized to assess the damage response and its reversal with a potential drug, lipoxin A4.

치료를 위해 혈액 망막 장벽 위반 및 잠재적 인 마약을 평가하는 급성 망막 모델

A low-cost, easy-to-use and powerful model system is established to evaluate potential treatments that could ameliorate blood retinal barrier breach. An ...

Open Tracheostomy Gastric Acid Aspiration Murine Model of Acute Lung Injury Results in Maximal Acute Nonlethal Lung Injury

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute respiratory distress syndrome (ARDS), characterized by neutrophilic alveolitis, and injury to both alveolar epithelium and vascular endothelium. Clinically, ARDS is defined by acute onset of hypoxemia, bilateral patchy pulmonary infiltrates and non-cardiogenic pulmonary edema. Human studies have provided us with valuable information about the physiological and inflammatory changes in the lung caused by ARDS, which has led to various hypotheses about the underling mechanisms. Unfortunately, difficulties determining the etiology of ARDS, as well as a wide range of pathophysiology have resulted in a lack of critical information that could be useful in developing therapeutic strategies.
Translational animal models are valuable when their pathogenesis and pathophysiology accurately reproduce a concept proven in both in vitro and clinical settings. Although large animal models (e.g., sheep) share characteristics of the anatomy of human trachea-bronchial tree, murine models provide a host of other advantages including: low cost; short reproductive cycle lending itself to greater data acquisition; a well understood immunologic system; and a well characterized genome leading to the availability of a variety of gene deletion and transgenic strains. A robust model of low pH induced ARDS requires a murine ALI that targets mainly the alveolar epithelium, secondarily the vascular endothelium, as well as the small airways leading to the alveoli. Furthermore, a reproducible injury with wide differences between different injurious and non-injurious insults is important.
The murine gastric acid aspiration model presented here using hydrochloric acid employs an open tracheostomy and recreates a pathogenic scenario that reproduces the low pH pneumonitis injury in humans. Additionally, this model can be used to examine interaction of a low pH insult with other pulmonary injurious entities (e.g., food particles, pathogenic bacteria).

This protocol induces acute lung injury in a mouse that has close fidelity to the pathogenesis of acid pneumonitis observed in humans. We generate a maximal acute nonlethal low pH lung injury and account for differences in rodent-human anatomic respiratory structure using an open tracheostomy coupled with circumferential pressure release.

급성 폐 손상의 열기 기관 절개 위산 흡인 쥐 모델은 최대한 급성 치명적 폐 손상의 결과

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cell Subsets within the Murine Spleen, Bone Marrow, Lymph Nodes and Synovial Tissue in an Osteoarthritis Model

Osteoarthritis (OA) is one of the most prevalent musculoskeletal diseases, affecting patients suffering from pain and physical limitations. Recent evidence indicates a potential inflammatory component of the disease, with both T-cells and monocytes/macrophages potentially associated with the pathogenesis of OA. Further studies postulated an important role for subsets of both inflammatory cell lineages, such as Th1, Th2, Th17, and T-regulatory lymphocytes, and M1, M2, and synovium-tissue-resident macrophages. However, the interaction between the local synovial and systemic inflammatory cellular response and the structural changes in the joint is unknown. To fully understand how T-cells and monocytes/macrophages contribute towards OA, it is important to be able to quantitively identify these cells and their subsets simultaneously in synovial tissue, secondary lymphatic organs and systemically (the spleen and bone marrow). Nowadays, the different inflammatory cell subsets can be identified by a combination of cell-surface markers making multi-color flow cytometry a powerful technique in investigating these cellular processes. In this protocol, we describe detailed steps regarding the harvest of synovial tissue and secondary lymphatic organs as well as generation of single cell suspensions. Furthermore, we present both an extracellular staining assay to identify monocytes/macrophages and their subsets as well as an extra- and intra-cellular staining assay to identify T-cells and their subsets within the murine spleen, bone marrow, lymph nodes and synovial tissue. Each step of this protocol was optimized and tested, resulting in a highly reproducible assay that can be utilized for other surgical and non-surgical OA mouse models.

Here, we describe a detailed and reproducible flow cytometry protocol to identify monocyte/macrophage and T-cell subsets using both extra- and intracellular staining assays within the murine spleen, bone marrow, lymph nodes and synovial tissue, utilizing an established surgical model of murine osteoarthritis.

Osteoarthritis (OA) is one of the most prevalent musculoskeletal diseases, affecting patients suffering from pain and physical limitations. Recent ...

Halogenated Agent Delivery in Porcine Model of Acute Respiratory Distress Syndrome via an Intensive Care Unit Type Device

Acute respiratory distress syndrome (ARDS) is a common cause of hypoxemic respiratory failure and death in critically ill patients, and there is an urgent need to find effective therapies. Preclinical studies have shown that inhaled halogenated agents may have beneficial effects in animal models of ARDS. The development of new devices to administer halogenated agents using modern intensive care unit (ICU) ventilators has significantly simplified the dispensing of halogenated agents to ICU patients. Because previous experimental and clinical research suggested potential benefits of halogenated volatiles, such as sevoflurane or isoflurane, for lung alveolar epithelial injury and inflammation, two pathophysiologic landmarks of diffuse alveolar damage during ARDS, we designed an animal model to understand the mechanisms of the effects of halogenated agents on lung injury and repair. After general anesthesia, tracheal intubation, and the initiation of mechanical ventilation, ARDS was induced in piglets via the intratracheal instillation of hydrochloric acid. Then, the piglets were sedated with inhaled sevoflurane or isoflurane using an ICU-type device, and the animals were ventilated with lung-protective mechanical ventilation during a 4 h period. During the study period, blood and alveolar samples were collected to evaluate arterial oxygenation, the permeability of the alveolar-capillary membrane, alveolar fluid clearance, and lung inflammation. Mechanical ventilation parameters were also collected throughout the experiment. Although this model induced a marked decrease in arterial oxygenation with altered alveolar-capillary permeability, it is reproducible and is characterized by a rapid onset, good stability over time, and no fatal complications.
We have developed a piglet model of acid aspiration that reproduces most of the physiological, biological, and pathological features of clinical ARDS, and it will be helpful to further our understanding of the potential lung-protective effects of halogenated agents delivered through devices used for inhaled ICU sedation.

We describe a model of hydrochloric acid-induced acute respiratory distress syndrome (ARDS) in piglets receiving sedation with halogenated agents, isoflurane and sevoflurane, through a device used for inhaled intensive care sedation. This model can be used to investigate the biological mechanisms of halogenated agents on lung injury and repair.

Acute respiratory distress syndrome (ARDS) is a common cause of hypoxemic respiratory failure and death in critically ill patients, and there is an urgent ...