우리는 비디오에서 그녀의 친절한 협조에 파비 Benatti으로 감사드립니다. 우리는 또한이 지역에 우리의 연구에 대한 지원을 FAPESP (# 2007/51228-0)와 CNPq를 (# 300133/2008-1) 감사합니다.

소개 호기성 및 혐기성 물질 대사 : 물리적인 노력을 유지하는데 필요한 에너지는 두 대사 소스로부터 온다. 호기성 물질 대사가 무산소 신진 대사를보다 더 효율적이지만 아주 짧은 기간 동안 에너지의 높은 용량을 제공할 수 무산소 대사를 통해 에너지를 생산하는 (즉, 그것은 기판의 몰 당 ATP의 높은 금액을 생산). 이것은 매우 빠른 움직임을 필요로하는 상황에 결정적인 수 있습니다. 각 스포츠는 특정 스포츠에 대한 고유 physiologic 및 신진 대사 요구를 부여 모터 기술의 관점에서 구체적인 특징을 가지고 있습니다. 신진 대사 수요의 가장 중요한 양상은 활동에 필요한 총 에너지로 에너지 시스템의 상대적인 기여하고 있습니다. 각 스포츠의 구체적인 수요를 결정하기 위해서는 최적의 교육 모델, 전략과 영양을 극대화할 수 있습니다 ergogenic 에이즈를 개발하는 데 중요thletic 성능을 제공합니다. 일부 스포츠 실험실 환경에서 재현되어야하는 비교적 쉽습니다, 따라서 그것은 선수를 평가할 수있는 통제된 환경을 만들 수 있습니다. 이것은 실행 예를 들어, 사이클링의 경우입니다. 예측 움직임이 스포츠를 작성하고, 그러므로, 그들은 공부를해야하기 쉽습니다. 간단한 장비를 사용하면, 그것은 매우 정확 선수 등의 훈련 및 대회 등 실제 상황에서 수행하는 동일한 움직임을 모방하는 것이 가능합니다. 실제로,이 스포츠가보다 광범위하게 운동 과학자들이 연구하고보다 완전하고 신뢰할 수있는 과학적 문헌과 이익되었습니다. 한편, 스포츠의 숫자가 실험실에서 재현되는 것이 훨씬 더 어렵습니다. 이러한 스포츠를 예측할와 파트너 (들)과 상대 (들)의 행동에 좌우됩니다. 이것은 정확하게 실험실에서 경쟁 조건과 asse하는 무능력을 재현해 못할 리드훈련 또는 경쟁 중시 분야에서 SS 이러한 선수. 아마 때문에 이러한 문제들은 과학자에서 훨씬 덜 주목을 받았습니다. 이것은 팀 스포츠 및 다양한 개인 스포츠 1 대다수의 경우입니다. 이러한 측면을 고려, 우리는 통제된 실험실 조건에서 재현하기 어려운 스포츠의 에너지 시스템의 차등 기여를 평가하는 방법을 설명하는 데 목적. 유도는 매우 복잡하고 예측할 수없는 스포츠이기 때문에, 우리는 예제로 유도를 사용합니다. 그러나, 여기에 표시된 개념은 다른 스포츠의 수에 적응하실 수 있습니다. 1. 레스트에서 생리적 측정 <ol><li> 그 전에 선수의 신체 질량을 측정 / 그녀가 운동을 시작합니다. </li><li> 운동을 시작하기 전에 귓불이나 손가락의 작은 휴식 혈액 샘플을 수집하고 전체 실험 절차가 완료되기 전까지 얼음에 보관하십시오. </li><li> 이어 칼 배치선수들이 수행하는 운동, 그리고 오분 기록 휴식이나 기준 산소 소비량에 따라 가장 편리한 위치에 휴대용 가스 분석기를 ibrated. 기준 측정하는 동안 선수는 그 / 그녀의 다리에 조용히 서 있기로이 (훈련은 서있는 위치에 수행되는 경우) 또는 운동이 cycloergometer이나에서 이루어집니다 경우 (사용됩니다 장비에 앉아서 이와 유사한 장비). </li></ol> 2. 운동 중 생리적 측정 <ol><li> 휴식 혈액 샘플을 수집하고 산소 소비를 휴식 후, 당신은 공부하는 특정 운동을 시작하는 선수를 요청할 수 있습니다. 휴대용 가스 분석기는없고 운동과 그 운동 장비를 손상하지 않습니다 방해할 수있는 위치에 배치되어야한다. 운동 기간 동안 산소 소비량을 측정하는 계속합니다. </li></ol> 3. 운동 후 생리적 측정 </P&gt; <ol><li> 운동 산소 소비량 데이터를 수집 후 장비를 종료하기 전에 10 분 동안 녹화 산소 소비를 유지. 하나 이상의 선수가 같은 날 평가되고 있는지 항상 가스 분석기를 재조정. </li><li> 운동 후 최고 혈장 락테이트를 식별하기 위해서, 즉시 운동 후에 운동, 셋, 다섯 일곱 분 후에 작은 혈액 샘플을 수집합니다. 분석까지 얼음 위에 보관하십시오. </li></ol> 4. 혈액 샘플 처리 및 피크 플라즈마 락테이트 결정 <ol><li> 모든 혈액 샘플은 2 % NaF 솔루션의 유사 볼륨 (즉, 당신은 혈액의 25 μL를 수집하는 경우 2퍼센트 NaF의 25 μL에 배치)를 포함하는 microtubes에 배치해야합니다. </li><li> 4 ° C.에 2,000g에서 5 분 샘플을 회전하여 적혈구의 데이터 수집이 완료되면, 별도의 플라즈마 </li><li> 플라즈마 락트 산은 methods2, 3 다양한 통해 확인할 수 있습니다. 우리 연구실에서는 전기 메스를 사용하여automatized 락테이트 분석기 (황색 스프링스 1500 스포츠, 오하이오)의 도움으로 복용. </li></ol> 5. 계산 <ol><li> 운동 산소 소비에서 휴식 산소 소비량을 빼는 방법으로 호기성 물질 대사에 의해 생성된 그물 에너지를 계산합니다. 휴식의 산소 소비량은 전체 운동 기간 시간에 의해 기준 산소 소비의 30 초 평균을 곱하여 얻어진다. 다음 사다리꼴 메서드를 사용하여 운동 산소 소비 곡선 아래 영역을 계산합니다. 마지막으로, 운동 산소 소비에서 휴식 산소 소비를 뺍니다. </li><li> 무산소 alactic 대사 (즉, ATP-CP 경로)의 기여는 그림 1에서 그림, 과잉 포스트 운동 산소 소비 4-6의 빠른 구성 요소로 간주 할 수 있습니다. 피팅에 의해 alactic 시스템에 의해 생산되는 에너지를 계산 로 이중 또는 monoexponenti 포스트 운동 산소 소비의 속도론알 곡선. 이것은 수학의 소프트웨어 (예 : Microcal 유래 버전 7.0)의 도움으로 수행할 수 있습니다. 최고의 (즉, 가장 낮은 찌꺼기)를 데이터 집합에 맞는 모델을 기반으로 모노 또는 이중 지수 곡선으로 선택합니다. 그런 다음 수식 2에 따라 alactic 공헌을 계산하는 장착되어 방정식 (수식 1)에서 제공하는 약관을 사용합니다. <img src="/files/ftp_upload/3413/3413fig1.jpg" alt="Fiugre 일" /> 그림 1. 중, 그리고 운동 후 휴식을 얻은 전형적인 산소 소비량 곡선의 도식 일러스트. 등식 1 : <img src="/files/ftp_upload/3413/3413eq1.jpg" alt="등식 1" /> 수식 2 : <img src="/files/ftp_upload/3413/3413eq2.jpg" alt="등식이" /> V O2 (T)는 시간 t에서의 산소 이해이고, V O2baseline는베이스 라인에서 산소 이해이고, A는 진폭이고, δ는 시간 지연이며, τ는 상수 시간그리고 1과 2는 각각 빠르고 느린 구성 요소를 나타냅니다. </li><li> 락트 무산소 시스템의 공헌을 계산하려면, 그것은 휴식 값은 위의 락트 산의 1 밀리미터는 신체 mass7의 kg 당 소비하는 산소의 3 ML에 해당하는 것으로 추정되고있다. 따라서 델타 피크 플라즈마 락트 산을 계산 (즉, 최대 혈장 락테이트 마이너스 휴식 혈장 락테이트) 및 3과 선수의 몸 질량에 의해 그것을 곱하면됩니다. ML의 산소 얻은 값은 다음 O, 2의 각 1 L은 20.92 kJ와 동일하다고 가정하고, L과 에너지 (kJ)로 변환됩니다. </li><li> 당신은 활동 기간 동안 총 에너지 지출 및 시스템의 각 계산할 수의 상대적 기여도를 제공받을 수 있도록 마지막으로, 각 에너지 시스템에 의해 얻은 결과는 표현됩니다. </li></ol> 6. 대표 결과 그림 2는 운동 중과 운동 후 휴식시 산소 소비의 대표 곡선을 묘사. 에예를 들어 현재 사용 선수는 5 분 동안 세 가지 유도 기법 (O-uchi-gari, harai-goshi 및 seoi-nage) (하나 매 15을 던져) 8을 수행. 이것은 간헐적으로 운동에 대한 전형적인 반응이다. 계산 후, 우리는 유도 연습 (표 1) 중 에너지 시스템의 기여에 대한 최종 결과를 획득하였습니다. 추가 대표 결과는 표 2에 표시됩니다. 이 예제에서는 서로 다른 경쟁력 수준 (즉, 레크 리에이션 대 엘리트)의 실내 암벽 등반은 낮은 난이도 등반 루트 중 평가되었다. 한 엘리트 선수와 하나 레크 리에이션 운동에 대한 개별 결과는 (표 2) 표시됩니다. <table border="1"><tbody><tr><td rowspan="2"></td><td colspan="2"> Seoi-nague </td><td colspan="2"> Harai-goshi </td><td colspan="2"> O-uchi-gari </td></tr><tr><td> kJ </td><td> % </td><td> kJ </td><td> % </td><td> kJ </td><td> % </td></tr><tr><td> alactic 무산소 </td><td> 46 ± 20 </td><td> 16.3 ± 2.8 </td><td> 43 ± 21 </td><td> 16.1 ± 2.7 </td><td> 36 ± 22 </td><td> 14.6 ± 2.8 </td></tr><tr><td> 호기성의 </td><td> 223 ± 66 </td><td> 82.2 ± 2.9 </td><td> 211 ± 66 </td><td> 82.3 ± 3.8 </td><td> 196 ± 74 </td><td> 84.0 ± 3.8 </td></tr><tr><td> 무산소 락트 </td><td> 4 ± 2 </td><td> 1.5 ± 0.7 </td><td> 5 ± 5 </td><td> 1.6 ± 1.4 </td><td> 4 ± 4 </td><td> 1.5 ± 1.1 </td></tr><tr><td> 합계 </td><td> 273 ± 86 </td><td>- </td><td> 259 ± 91 </td><td> - </td><td> 237 ± 99 </td><td> - </td></tr><tr><td> 합계 (kJ / 분) </td><td> 51.9 ± 8.7 </td><td> - </td><td> 49.4 ± 8.9 </td><td> - </td><td> 45.3 ± 19.6 </td><td> - </td></tr></tbody></table> 표 1. 세 가지 유도 연습을하는 동안 총 에너지 소비와 에너지 시스템의 기여 대표 결과입니다. <table border="1"><tbody><tr><td> 경쟁력 수준 </td><td> 에어로빅 (%) </td><td> 무산소 락트 (%) </td><td> 무산소 Alactic (%) </td><td> 총 (kJ) </td><td> 합계 (kJ / s의) </td></tr&gt; <tr><td> 엘리트 </td><td> 40 </td><td> 8 </td><td> 52 </td><td> 70.4 </td><td> 1.00 </td></tr><tr><td> 휴양의 </td><td> 40 </td><td> 15 </td><td> 45 </td><td> 96.1 </td><td> 1.15 </td></tr></tbody></table> 표 2. 낮은 난이도 등반 루트 중 총 에너지 소비와 에너지 시스템의 기여 대표 개인 데이터입니다. <img src="/files/ftp_upload/3413/3413fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2. 대표적인 결과는 5 분 유도 운동하는 동안 획득하였습니다.

<ol>
	<li>Franchini, E., Del Vecchio, F. B., Matsushigue, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+profiles+of+elite+judo+athletes.">Physiological profiles of elite judo athletes.</a> Sports Med. 41, 147-166 (2011).</li><li>Bergmeyer, H. U., Bergmeyer, J., Grassl, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods of enzymatic analysis. , (1983).</li><li>Passonneau, J. V., Lowry, O. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enzymatic+Analysis.">Enzymatic Analysis.</a> A Practical Guide. , (1993).</li><li>Beneke, R., Pollmann, C., Bleif, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+anaerobic+is+the+Wingate+Anaerobic+Test+for+humans.">How anaerobic is the Wingate Anaerobic Test for humans.</a> Eur. J. Appl. Physiol. 87, 388-392 (2002).</li><li>Beneke, R., Beyer, T., Jachner, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Energetics+of+karate+kumite.">Energetics of karate kumite.</a> Eur. J. Appl. Physiol. 92, 518-523 (2004).</li><li>Bertuzzi, R. C. D., Franchini, E., Kokubun, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Energy+system+contributions+in+indoor+rock+climbing.">Energy system contributions in indoor rock climbing.</a> Eur. J. Appl. Physiol. 101, 293-300 (2007).</li><li>di Prampero, P. E., Ferretti, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+energetics+of+anaerobic+muscle+metabolism:+a+reappraisal+of+older+and+recent+concepts.">The energetics of anaerobic muscle metabolism: a reappraisal of older and recent concepts.</a> Respir. Physiol. 118, 103-115 (1999).</li><li>Franchini, E., Bertuzzi, R. C. D., Degaki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Energy+Expenditure+in+Different+Judo+Throwing+Techniques.+Proceedings+of+first+joint+international+pre-Olympic+conference+of+sports+science+and+sports+engineering,+vol+II.">Energy Expenditure in Different Judo Throwing Techniques. Proceedings of first joint international pre-Olympic conference of sports science and sports engineering, vol II.</a> Bio-mechanics and sports engineering. , 55-60 (2008).</li><li>Calmet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developing+ecological+research+in+judo.">Developing ecological research in judo.</a> Percept. Mot. Skills. 105, 646-648 (2007).</li><li>Mello, F. D., Bertuzzi, R. C., Grangeiro, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Energy+systems+contributions+in+2,000+m+race+simulation:+a+comparison+among+rowing+ergometers+and+water.">Energy systems contributions in 2,000 m race simulation: a comparison among rowing ergometers and water.</a> Eur. J. Appl. Physiol. 105, 615-619 (2009).</li><li>Bertuzzi, R. C., Franchini, E., Ugrinowitsch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predicting+MAOD+using+only+a+supramaximal+exhaustive+test.">Predicting MAOD using only a supramaximal exhaustive test.</a> Int. J. Sports Med. 31, 477-481 (2010).</li></ol>

저자들은 본 연구에 관한 관심의 갈등이 없다 선언합니다.

우리가 토끼를 보여준 방법은 지속적이고 간헐 모두 운동을 위해 사용될 수 있습니다. 방법의 큰 장점은 그것이 통제된 실험실 환경 설정에 따라 했었 수하기가 어렵습니다 운동 및 스포츠 적응 수있다는 것입니다. 또한,이 세 가지 에너지 시스템의 기여를 구별 가능한에서만 사용할 방법입니다. 따라서 방법은 연구 9 바람직한 생태 타당성을 제공하는 실제 상황에 큰 유사성과 스포츠 연구를 허용합니다. 예를 들어, 10. 물 멈춰라 경주에있는 2000의 손에 glycolytic 공헌 그 조정 성능 호기성 물질 대사에 주로 의존하고있다는 뜻은 7 %입니다 것을 Mello 외 의한 최근 연구 보여주었다. 마찬가지로, Beneke 외 의해 연구 4는 가장 많이 사용되는 무산소 시험 중 하나 윈게이트 무산소 테스트하는 동안 에너지의 주요 원천은 무산소 대사 (20 % 산소를 확인;. 30% 살라ctic 50 % glycolytic). 우리의 그룹에 의해 최근 연구 또한이 예제에서 보고된 실내 등반 6과 유도 8의 에너지 공헌을 특성화했다. 사실, 활기찬 공헌에 대한 지식은 심지어 시험 검증을위한 ergogenic 전략, 훈련 기관의 발전을 위해 중요합니다. 이 방법은 몇 가지 제약 사항들이있다. 첫째, 장비의 비용은 다소 높은 있으며, 전문 교육을받은 인력이 필요합니다. 대부분의 스포츠가이 기술을 했었 수 있지만 둘째, 그것은 휴대용 가스 분석기를 사용하여 공부 할 수있는 운동의 종류가 아닙니다. 마지막으로, 혈장 락테이트 정확하게 활동하는 동안 골격근에 의해 생산되는 총 락트 산을 대표하지 않기 때문에이 절차에 의해 얻은 결과는 오히려 활기찬 공헌의 정확한 양을 정함보다, 운동하는 동안 신진 대사 수요 estimative로 간주 할 수 있습니다. 그럼에도 불구하고,이 유일한 유효 나야thod 가능한 11 세 가지 에너지 시스템의 공헌을 구별 가능.

<table border="1"><tbody><tr><th> 시약의 이름 </th><th> 회사 </th><th> 댓글 </th></tr><tr><td> 어떡하지 1500 스포츠 </td><td> 옐로우 스프링스 </td><td> 이 장비는 빠르고 쉽게 혈장 락테이트 결정이 가능 </td></tr><tr><td> K4 B2 </td><td> Cosmed </td><td> 이 장비는 운동 전반에 걸쳐 산소 소비량을 측정을 위해 필수적이다 </td></tr><tr><td> 소프트웨어 Microcal 6.0 </td><td> 유래 </td><td> 이 소프트웨어 (또는 이와 유사한 기능을 갖춘 기타)는 계산에 유용합니다 </td></tr></tbody></table>

determining the contribution of the energy systems during exercise

신진 대사 수요의 가장 중요한 측면 중 하나는 주어진 신체 활동에 필요한 총 에너지로 에너지 시스템의 상대적인 기여하고 있습니다. 일부 스포츠 실험실 (예, 실행 및 사이클링)에 복제하는 것이 비교적 쉽기는하지만, 스포츠의 숫자가 훨씬 재현하고 통제된 상황에서 공부를 할 것이 더 어렵습니다. 이 방법은 통제된 실험실 조건에서 모방하기 어려운 스포츠의 에너지 시스템의 차등 기여를 평가하는 방법을 보여줍니다. 여기에 표시된 개념은 거의 모든 스포츠에 적응하실 수 있습니다. 다음 physiologic 변수가 필요합니다 : 휴식 산소 소비량, 운동 산소 소비, 포스트 운동 산소 소비, 휴식 플라즈마 젖산 농도 및 사후 운동 플라즈마 피크 락트 산. 호기성 물질 대사의 기여도를 계산하기 위해서는 휴식과 운동하는 동안 산소 소비량이 필요합니다. 을 사용함으로써사다리꼴 방법, 나머지 산소 소비량에 해당하는 면적을 빼서, 운동하는 동안 산소 소비량의 곡선 아래 영역을 계산합니다. alactic 무산소 대사 공헌을 계산하려면 포스트 운동 산소 소비 곡선은 모노 또는 이중 지수 모델 (가장 맞는 것을 하나 선택)으로 조정되어야한다. 그런 다음, 다음과 같이 무산소 alactic 신진 대사를 계산할 장착되어 방정식의 조건을 사용합니다 ATP-CP 대사는 = 1 (ML들 -1.) XT 1 (들). 마지막으로, 락트 무산소 시스템의 공헌을 계산하도록 3과 선수의 몸 질량 (ML의 결과가 다음 패로 변환하고 kJ로합니다)에 의해 최대 혈장 락테이트을 곱하면됩니다. 방법은 지속적이고 간헐 모두 운동을 위해 사용될 수 있습니다. 이것이 통제된 환경에서 했었 수하기가 어렵습니다 운동과 스포츠에 적응 할 수있는 매우 흥미로운 접근 방식이다. 또한,이뿐세 가지 에너지 시스템의 기여를 구별 능력이 vailable 방식입니다. 따라서 방법은 연구에 바람직한 생태 타당성을 제공하는 실제 상황에 큰 유사성과 스포츠 연구를 허용합니다.

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Determining the Contribution of the Energy Systems During Exercise

이 프로토콜은 운동과 스포츠 과학에 초점을 맞춘 연구는 연습의 많은 종류 중에 총 에너지 지출에 대한 세 가지 다른 에너지 시스템의 상대적인 기여를 확인할 수 있습니다.

운동하는 동안 에너지 시스템의 공헌을 결정

One of the most important aspects of the metabolic demand is the relative contribution of the energy systems to the total energy required for a given ...

determining-the-contribution-of-the-energy-systems-during-exercise

Research

JoVE Journal

Biology

41.1K 조회수.  University of Sao Paulo. 이 프로토콜은 운동과 스포츠 과학에 초점을 맞춘 연구는 연습의 많은 종류 중에 총 에너지 지출에 대한 세 가지 다른 에너지 시스템의 상대적인 기여를 확인할 수 있습니다.

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Counting and Determining the Viability of Cultured Cells

Determining the number of cells in culture is important in standardization of culture conditions and in performing accurate quantitation experiments. A hemacytometer is a thick glass slide with a central area designed as a counting chamber. Cell suspension is applied to a defined area and counted so cell density can be calculated. 

Determining the number of cells in culture is important in standardization of culture conditions and in performing accurate quantitation experiments. In this video, we demonstrate how cells are counted using a hemacytometer.

카운팅 및 교양 세포의 생존을 결정

Determining the number of cells in culture is important in standardization of culture conditions and in performing accurate quantitation experiments. A ...

연구

생물학

Mouse Mammary Epithelial Cells form Mammospheres During Lactogenic Differentiation

A phenotypic measure commonly used to determine the degree of lactogenic differentiation in mouse mammary epithelial cell cultures is the formation of dome shaped cell structures referred to as mammospheres 1. The HC11 cell line has been employed as a model system for the study of regulation of mammary lactogenic differentiation both in vitro and in vivo 2. The HC11 cells differentiate and synthesize milk proteins in response to treatment with lactogenic hormones. Following the growth of HC11 mouse mammary epithelial cells to confluence, lactogenic differentiation was induced by the addition of a combination of lactogenic hormones including dexamethasone, insulin, and prolactin, referred to as DIP. The HC11 cells induced to differentiate were photographed at times up to 120 hours post induction of differentiation and the number of mammospheres that appeared in each culture was enumerated. The size of the individual mammospheres correlates with the degree of differentiation and this is depicted in the images of the differentiating cells.

HC11 lactogenic differentiation can be characterized by the formation of domed structures referred to as mammospheres. The structures can be enumerated by phase contrast microscopy to aid in quantifying lactogenic differentiation.

마우스 내유 상피 세포는 Lactogenic 차별 동안 Mammospheres를 형성

A phenotypic measure commonly used to determine the degree of lactogenic differentiation in mouse mammary epithelial cell cultures is the formation of ...

Gross Dissection of the Stomach of the Lobster, Homarus Americanus

The stomach of the American lobster (Homarus americanus) is located in the cephalothorax, between the rostrum and the cervical groove. The anterior end of the stomach is defined by the mouth opening and the posterior end by the bottom of the pylorus. Along the dorsal side of the stomach lies the stomatogastric nervous system (STNS). This nervous system, which contains rhythmic networks that underlie feeding behavior, is an established model system for studying rhythm generating networks and neuromodulation 1,2. While it is possible to study this system in vivo 3, the STNS continues to produce its rhythmic activity when isolated in vitro. In order to study this system in vitro the stomach must be removed from the animal. This video article describes how the stomach can be dissected from the American lobster. In an accompanying video article4 we demonstrate how the STNS can be isolated from the stomach.

Gross Dissection of the Stomach of the Lobster, Homarus Americanus

We describe the gross dissection of the stomach of the American lobster (Homarus americanus).

랍스터의 뱃속의 총 해부, Homarus Americanus</em

The stomach of the American lobster (Homarus americanus) is located in the cephalothorax, between the rostrum and the cervical groove. The anterior end of ...

Determining Cell Number During Cell Culture using the Scepter Cell Counter

Counting cells is often a necessary but tedious step for in vitro cell culture. Consistent cell concentrations ensure experimental reproducibility and accuracy. Cell counts are important for monitoring cell health and proliferation rate, assessing immortalization or transformation, seeding cells for subsequent experiments, transfection or infection, and preparing for cell-based assays. It is important that cell counts be accurate, consistent, and fast, particularly for quantitative measurements of cellular responses.
Despite this need for speed and accuracy in cell counting, 71% of 400 researchers surveyed1 who count cells using a hemocytometer. While hemocytometry is inexpensive, it is laborious and subject to user bias and misuse, which results in inaccurate counts. Hemocytometers are made of special optical glass on which cell suspensions are loaded in specified volumes and counted under a microscope. Sources of errors in hemocytometry include: uneven cell distribution in the sample, too many or too few cells in the sample, subjective decisions as to whether a given cell falls within the defined counting area, contamination of the hemocytometer, user-to-user variation, and variation of hemocytometer filling rate2.
To alleviate the tedium associated with manual counting, 29% of researchers count cells using automated cell counting devices; these include vision-based counters, systems that detect cells using the Coulter principle, or flow cytometry1. For most researchers, the main barrier to using an automated system is the price associated with these large benchtop instruments1.
The Scepter cell counter is an automated handheld device that offers the automation and accuracy of Coulter counting at a relatively low cost. The system employs the Coulter principle of impedance-based particle detection3 in a miniaturized format using a combination of analog and digital hardware for sensing, signal processing, data storage, and graphical display. The disposable tip is engineered with a microfabricated, cell- sensing zone that enables discrimination by cell size and cell volume at sub-micron and sub-picoliter resolution. Enhanced with precision liquid-handling channels and electronics, the Scepter cell counter reports cell population statistics graphically displayed as a histogram.

The Scepter Cell Counter is a handheld automated device that can be used to count cells, monitor cell diameter and volume, and be used to check the health and quality of cellular populations from one culture to the next.

샙터 셀 카운터를 사용하여 세포 배양 동안 휴대폰 번호를 결정

Counting cells is often a necessary but tedious step for in vitro cell culture. Consistent cell concentrations ensure experimental reproducibility and ...

Blastomere Explants to Test for Cell Fate Commitment During Embryonic Development

Fate maps, constructed from lineage tracing all of the cells of an embryo, reveal which tissues descend from each cell of the embryo. Although fate maps are very useful for identifying the precursors of an organ and for elucidating the developmental path by which the descendant cells populate that organ in the normal embryo, they do not illustrate the full developmental potential of a precursor cell or identify the mechanisms by which its fate is determined. To test for cell fate commitment, one compares a cell's normal repertoire of descendants in the intact embryo (the fate map) with those expressed after an experimental manipulation. Is the cell's fate fixed (committed) regardless of the surrounding cellular environment, or is it influenced by external factors provided by its neighbors? Using the comprehensive fate maps of the Xenopus embryo, we describe how to identify, isolate and culture single cleavage stage precursors, called blastomeres. This approach allows one to assess whether these early cells are committed to the fate they acquire in their normal environment in the intact embryo, require interactions with their neighboring cells, or can be influenced to express alternate fates if exposed to other types of signals.

The fate of an individual embryonic cell can be influenced by inherited molecules and/or by signals from neighboring cells. Utilizing fate maps of the cleavage stage Xenopus embryo, single blastomeres can be identified for culture in isolation to assess the contributions of inherited molecules versus cell-cell interactions.

Blastomere Explants는 배아 개발하는 동안 세포 운명의 헌신에 대해 테스트 할

Fate maps, constructed from lineage tracing all of the cells of an embryo, reveal  which tissues descend from each cell of the embryo.  Although fate maps ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

The proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal development in all metazoan organisms. Apoptotic cell clearance is a highly dynamic process intimately associated with cell death; unengulfed apoptotic cells are barely seen in vivo under normal conditions. In order to understand the different steps of apoptotic cell clearance and to compare 'professional' phagocytes - macrophages and dendritic cells to 'non-professional' - tissue-resident neighboring cells, in vivo live imaging of the process is extremely valuable. Here we describe a protocol for studying apoptotic cell clearance in live Drosophila embryos. To follow the dynamics of different steps in phagocytosis we use specific markers for apoptotic cells and phagocytes. In addition, we can monitor two phagocyte systems in parallel: 'professional' macrophages and 'semi-professional' glia in the developing central nervous system (CNS). The method described here employs the Drosophila embryo as an excellent model for real time studies of apoptotic cell clearance.

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Here we describe an effective method for studying dynamics of apoptotic cell clearance in vivo. This method employs live Drosophila embryos as a powerful model for monitoring phagocytosis of apoptotic cells using specific labeling of apoptotic cells and phagocytes.

사멸 세포 간극의 이미지를하는 동안 라이브<em&gt; 초파리</em&gt; 배아

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

The Use of Chemostats in Microbial Systems Biology

Cells regulate their rate of growth in response to signals from the external world. As the cell grows, diverse cellular processes must be coordinated including macromolecular synthesis, metabolism and ultimately, commitment to the cell division cycle. The chemostat, a method of experimentally controlling cell growth rate, provides a powerful means of systematically studying how growth rate impacts cellular processes - including gene expression and metabolism - and the regulatory networks that control the rate of cell growth. When maintained for hundreds of generations chemostats can be used to study adaptive evolution of microbes in environmental conditions that limit cell growth. We describe the principle of chemostat cultures, demonstrate their operation and provide examples of their various applications. Following a period of disuse after their introduction in the middle of the twentieth century, the convergence of genome-scale methodologies with a renewed interest in the regulation of cell growth and the molecular basis of adaptive evolution is stimulating a renaissance in the use of chemostats in biological research.

Cell growth rate is a regulated process and a primary determinant of cell physiology. Continuous culturing using chemostats enables extrinsic control of cell growth rate by nutrient limitation facilitating the study of molecular networks that control cell growth and how those networks evolve to optimize cell growth.

미생물 시스템 생물학의 Chemostats의 사용

Cells regulate their rate of growth in response to signals from the external world. As the cell grows, diverse cellular processes must be coordinated ...

Isolation of Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High Throughput Microplate Respiratory Measurements

Dysfunctional skeletal muscle mitochondria play a role in altered metabolism observed with aging, obesity and Type II diabetes. Mitochondrial respirometric assays from isolated mitochondrial preparations allow for the assessment of mitochondrial function, as well as determination of the mechanism(s) of action of drugs and proteins that modulate metabolism. Current isolation procedures often require large quantities of tissue to yield high quality mitochondria necessary for respirometric assays. The methods presented herein describe how high quality purified mitochondria (~ 450 &#181;g) can be isolated from minimal quantities (~75-100 mg) of mouse skeletal muscle for use in high throughput respiratory measurements. We determined that our isolation method yields 92.5&#177; 2.0% intact mitochondria by measuring citrate synthase activity spectrophotometrically. In addition, Western blot analysis in isolated mitochondria resulted in the faint expression of the cytosolic protein, GAPDH, and the robust expression of the mitochondrial protein, COXIV. The absence of a prominent GAPDH band in the isolated mitochondria is indicative of little contamination from non-mitochondrial sources during the isolation procedure. Most importantly, the measurement of O2 consumption rate with micro-plate based technology and determining the respiratory control ratio (RCR) for coupled respirometric assays shows highly coupled (RCR; &#62;6 for all assays) and functional mitochondria. In conclusion, the addition of a separate mincing step and significantly reducing motor driven homogenization speed of a previously reported method has allowed the isolation of high quality and purified mitochondria from smaller quantities of mouse skeletal muscle that results in highly coupled mitochondria that respire with high function during microplate based respirometirc assays.

Here, we present a modification of a previously reported method that allows for the isolation of high quality and purified mitochondria from smaller quantities of mouse skeletal muscle. This procedure results in highly coupled mitochondria that respire with high function during microplate based respirometirc assays.

높은 처리량 마이크로 호흡 측정을위한 마우스 골격근의 최소 수량에서 미토콘드리아의 분리

Dysfunctional skeletal muscle mitochondria play a role in altered metabolism observed with aging, obesity and Type II diabetes. Mitochondrial ...

Environmental Screening of Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp., and Pseudocapillaria tomentosa in Zebrafish Systems

Health monitoring systems are developed and used in zebrafish research facilities because pathogens of Danio rerio such as Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp., and Pseudocapillaria tomentosa have the potential to impair animal welfare and research. The fish are typically analyzed post mortem to detect microbes. The use of sentinels is a suggested way to improve the sensitivity of the surveillance and to reduce the number of animals to sample. The setting of a pre-filtration sentinel tank out of a recirculating system is described. The technique is developed to prevent water pollution and to represent the fish population by a careful selection of age, gender, and strains. In order to use the minimum number of animals, techniques to screen the environment are also detailed. Polymerase Chain Reaction (PCR) on surface sump swabs is used to significantly improve the detection of some prevalent and pathogenic mycobacterial species such as Mycobacterium fortuitum, Mycobacterium haemophilum, and Mycobacterium chelonae. Another environmental method consists of processing the sludge at the bottom of a holding tank or sump to look for P. tomentosa eggs. This is a cheap and fast technique that can be applied in quarantine where a breeding device is submerged into the holding tank of imported animals. Finally, PCR is applied to the sludge sample and A. hydrophila is detected at the sump&#39;s bottom and surface. Generally, these environmental screening techniques applied to these specific pathogens have led to an increased sensitivity compared to the testing of pre-filtration sentinels.

Environmental Screening of Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp., and Pseudocapillaria tomentosa in Zebrafish Systems

This protocol describes the use of sump swabs and sludge analysis of zebrafish systems, which leads to increased detection compared to the sole use of sentinels to detect pathogens such as Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp., and Pseudocapillaria tomentosa. A system to monitor P. tomentosa eggs in quarantine is also proposed.

Aeromonas hydrophila, 진 균 종, 및 Pseudocapillaria tomentosa Zebrafish 시스템에서의 환경 심사

Health monitoring systems are developed and used in zebrafish research facilities because pathogens of Danio rerio such as Aeromonas hydrophila, ...

Establishment of an Extracellular Acidic pH Culture System

Conditions of the tumor microenvironment, such as hypoxia or nutrient starvation, play critical roles in cancer progression and malignancy. However, the role of acidic extracellular pH in tumor aggressiveness and its underlying mechanism has not been extensively studied compared to hypoxic or nutrient starvation conditions. In addition, a well-defined culture method to mimic the acidic extracellular tumor microenvironment has not been fully reported.
Here we present a simple in vitro culture method to maintain acidic extracellular pH using reduced bicarbonate and increased lactate or HCl concentrations in the culture medium. The medium pH was sustained for at least 24 h and gradually decreased by 72 h following culture of PANC-1 and AsPC-1 pancreatic cancer cells. Three distinct acidic media conditions in this study highly upregulated pH-responsive genes such as MSMO1, INSIG1, and IDI1 compared to hypoxia or nutrient starvation. The upregulation of these genes can be used as a marker of acidic pH. These simple techniques are beneficial to elucidate underlying mechanisms of tumor malignancy under acidic tumor microenvironment. Therefore, our extracellular acidic pH culture system enables discovery of cellular acidic pH responses not only in cancer cells but also in primary cells, such as renal tubular cells, in relation to the other acidic disorders including, diabetic ketoacidosis, lactic acidosis, renal tubular acidosis, and respiratory acidosis.

The acidic tumor microenvironment plays critical roles in tumor progression. To assess the effects of acidic extracellular pH on cancer cells in vitro, we established simple acidic culture systems.

Conditions of the tumor microenvironment, such as hypoxia or nutrient starvation, play critical roles in cancer progression and malignancy. However, the ...