이 작품은 F Yull와 재향 군인의 담당 부서 (TS 블랙웰)에게 수여 NIH 보조금 CA113734로 운영되었습니다.

모든 동물 실험은 밴더빌트 대학 기관 동물 케어 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 1. 트렌스 제닉 마우스 준비 <ol><li> NGL (N F-κB-G FP-L uciferase) 기자 transgene (이전 1 설명)에 대한 긍정적 인 여성 생쥐는이 절차에 사용됩니다. 여성의 나이가 최소한 육주 때, FVB 야생 형 남성과 그들을 친구. 번식 (1 남자와 새장에서 최대 4 여성) 사용할 수 있습니다 하렘. (참고 :. FVB 변형 마우스는 같은 C57Bl6과 같은 어두운 변형 마우스도 사용할 수 있습니다 본 연구에 사용되었지만,이 마우스는 이전 이미지로 면도해야합니다.) </li><li> 15일 후 결합에서 시작하여, 임신의 징후 (대형 돌출 둘레)에 대해 정기적으로 여성을 선택합니다. 각각의 여성은 임신 한 분리 지난 여성이 임신을 먼저하게되면 수컷은 번식 케이지에서 제거해야합니다. </li><li> 분리 여성보기D 쓰레기가 나타납니다 출생의 날짜를 확인합니다. 최소 6 새끼의 쓰레기는 충분한 젖 분비가 필요합니다. 쓰레기의 출생 후 8 일이 프로토콜 (타임 라인 도식에 대한 그림 1 참조)와 함께 진행합니다. </li></ol> 2. 사출을위한 준비 <ol><li> E.를 해산 0.1 μg / μl의 최종 농도로 PBS에서 대장균의 LPS. 이 솔루션, 또는 5 μg의 총 50 μl은 유선에 주입 될 것입니다. 제어 분사에 사용되는 PBS 혼자의 두 번째 튜브를 준비합니다. </li><li> 박리 범위와 isoflurane 마취 장비를 설정합니다. 코 - 콘 장치는 마우스가 배치 될 해부 범위의 무대에 고정해야합니다. 좋은 광원은 범위 자체에서 또는 추가 스포트라이트에서 여부도 준비해야합니다. </li><li> 설정이 완료되면, isoflurane 기계 및 공기 흐름을 시작합니다. </li></ol> 3. LPS의 Intraductal 주입 <ol><li> LPS 솔루션 50 μl로 짧은 바늘 주사기를로드합니다. 옆을 설정하십시오. </li><li> 첫째 번 호흡이 둔화되어 후 isoflurane 가득 상자에 여성을 배치하고하여 주입 할 마우스를 마취, 무대에 그녀를 이동하고 코 - 콘에서 그녀의 코를 넣습니다. 마우스가 완전히 anesthetized이 확인 발가락 핀치를 사용하십시오. 절차를 통해 마우스의 호흡을 모니터하고 그에 따라 isoflurane 수준을 조정할 수 있습니다. 댐이 절차 후 반환 할 수있을 때까지 여성이에서 촬영되었는지 새끼의 쓰레기를 포함하는 케이지는 신중하게 옆 설정해야합니다. </li><li> 코트는 평면 얘긴 못 나오게하고 마우스의 낮은 복부의 오른쪽 # 4 사타구니 유선에 부착 젖꼭지를 시각화하기 위해 70 % 에탄올의 작은 방울을 사용합니다. </li><li> 유두의 최적의보기에 대한 해부 범위를 집중하십시오. 조심스럽게 멀리 피부에서 젖꼭지를 잡아 들일 고급 집게 세트를 사용하지만 소중히하지 않거나 어떤 방식으로 젖꼭지를 손상.포셉은 단단히 조직을 조작 할 때 함께 고정 없지만, 유두에 스트레스의 최소한의 금액을 요구하는 빛을 보류와 함께 사용해서는 안됩니다. </li><li> 부드럽게 제자리에 젖꼭지를 잡고 왼쪽 손에 포셉을 사용합니다. 천천히 오른손을 사용하여보기의 입력란에 사전로드 된 주사기를 가지고. 주사기는 더 재배치는 내용을 삽입하기 위해 발생이 없습니다 있도록 실시해야합니다. </li><li> 일단 주사기가보기에, 젖꼭지의 중심에서 작은 ductal 개구에 신중하게 목표로하고 주사기를 삽입합니다. </li><li> 손을 변경하지 않고, 주사기의 내용을 삽입하고 유두에서 바늘을 제거합니다. </li><li> 제어 분사에 대한 PBS의 50 μl로 두 번째 주사기를로드합니다. 무대와 마우스의 낮은 복부의 다른 측면에 왼쪽 # 4 사타구니 유선의 유두를 가장 잘 볼 수있는 방법은 마우스를 변경할 수 있습니다. PBS-로드 주사기를 사용하여 단계 3.4-3.7를 반복합니다. </li><li> 두 주사는 compl이되면, 어서! 마취를 중지하고 복구 케이지에 마우스를 이동합니다. 그녀는 5​​ 분 내에 이동이된다고 보장 할 수있는 여성을 모니터링 할 수 있습니다. 마우스가 1 시간에 복구 케이지에 남아 있도록 허용합니다. 복구 1 시간 후, 새끼 그녀의 쓰레기와 함께 케이지에 여자를 다시 넣습니다. 이미지로 이동하기 전에 마우스는 정기적으로 6 시간의 포스트 분사에 대한 모니터링해야합니다. 우리의 경험에서 더 불리한 결과가 주입 및 이미징 사이의 기간 동안 여성이나 새끼 하나에 언급되지 않았습니다. 고민의 흔적이 (물고 또는 분사 사이트, 일반 혼수를 지키고, 예를 들어 hunched 자세) 또는 새끼 (NO 운동, 피부의 푸른 색) 여성에서 관찰하는 경우 그러나, 실험은 중단되어야한다. </li></ol> 4. 발광 생물 이미징은 NF-κB 활동을 시각화하는 방법 <ol><li> 일단 마우스가 이미지 시설로 이송되었으며, 소프트웨어를 열고 기계를 초기화하여 이미징 절차를 시작합니다. 이 켜십시오마취가 상자 및 이미징 챔버 모두 흐르는 있도록 oflurane 기계 및 공기 흐름. </li><li> 맑은 마취 상자에 isoflurane 마취에서 마우스를 놓습니다. 호흡이 둔화되면 마우스를 완전히 anesthetized이 확인 발가락 핀치를 사용합니다. 그런 다음, 멸균 주사기를 사용하여 복고풍 궤도 분사 (5)에 의해 마우스에 luciferin 기판의 100 μl를 삽입. </li><li> 즉시 이미징 챔버에 마우스를 전송하고이 자리 잡고 코 - 콘 isoflurane에서 그녀의 코를 넣습니다. 마우스가 위로 향한해야합니다. 테이프와 함께 무대에 각각 발을 고정합니다. </li><li> IVIS 소프트웨어에 입력 적절한 설정을 하얀 빛 사진 이미지와 발광 생물 활동의 이미지를 모두 취할 수. 노출 시간은 10 초 있어야합니다. 이미지를 취득. </li><li> 일단 이미지가 획득 한, 마우스가 복구 할 수 있도록하고 그녀의 새끼와 함께 우리에 그녀를 배치하고 주기적으로 모니터링 할 수 있습니다. </li><li> 사진 및 발광이미지는 자동으로 중첩과 그림 2에서와 같이 화면에 표시됩니다. 마우스의 낮은 복부의 각 측면 (PBS 주입 된 선 이상 하나 LPS 주입 된 선에 하나)를 통해 관심 지역 또는 동일한 크기의 &quot;ROI&quot;원을 배치하여 획득 한 이미지를 분석합니다. 광자로 읽기 시작했다. 번호는 (그림 2B 참조) 각 투자 수익 (ROI) 이내에 감지 발광을 나타내는 표시됩니다. 통계 분석에서이 번호를 사용합니다. </li><li> 최적의 이미지를 표시하려면 추가로 표시 신호의 임계 값을 조정합니다. 이 전체 발광을 읽어 아웃 변경되지 않습니다하지만, 제어 및 LPS-처리 선 사이의 차이를 배경 신호를 제거하고 시각화 할 수 있습니다. PBS 주입 된 글 랜드 배경 신호의 무료 될 때까지 표시 발광의 양을 줄이십시오. 이 그림 2에서 볼 수있는 이미지에서 아직 뚜렷한 LPS-처리 선에서 증가 신호 상태를 유지해야합니다. </li><li> Additiona단백질과 RNA의 assays를 포함한 리터 분석은, 6 사후 여성에서 수집 한 유방 조직을 완료 할 수 있습니다. </li></ol> 5. 대표 결과 이러한 방법의 interpretable 결과를 얻으려면, LPS (또는 PBS) 인접 조직은 그대로두고, 단지 유방 덕트에 주입해야합니다. 젖꼭지를 둘러싼 피하 조직에 주입 오히려 시뮬레이션 감염보다 부상으로 인해 염증이 발생할 수 있습니다. 기술을 배우고 PBS에 희석 trypan 파랑 염료의 주입은. 도움이 될 것입니다 그림 3A는 PBS에 trypan 파랑의 100 μl를 주입 성공적으로 주입 선을 보여줍니다. 도시 된 바와 같이, 만 ductal 나무 주입 솔루션으로 가득해야하고, 사출 사이트에서 더 bolus이 없어야합니다. 이런 상황에서는 A &quot;bolus&quot;는이 유두에서 또는 ductal 나무에 주입하지 않고 젖꼭지를 주변 조직에 주입 액체의 구축이다. 이 쉬입니다그림 3B에서 자신의. 그림 3에 표시된 연습 주사는 젖 분비의 날 21시 여성에 완성 된 되오니, 이용에 참고하여주십시오. 젖 분비의 높이 (일 8-10, LPS는 현재 프로토콜을 사용하여 분사되는 단계) 동안, 우유 풍부한이며 관을 시각화 및 분사가 제대로 완료되었는지 확인하기 어렵습니다. 따라서, 젖 분비에 나중에 점은 연습 주사를위한보다 나은입니다. 의 유방 덕트 결과에 LPS의 성공적인 주입은 선 (腺)에서 NF-κB의 활동을 증가했다. 이 IVIS 이미징시 기자 마우스에 분명해야하고, LPS 주입 된 선이 (평균도 2에 도시 된 바와 같이, PBS 주입 된 선보다 실질적으로 더 높은 루시 페라 제 활동을 (광자 수에 의해 측정)이해야 LPS의 선은 읽 PBS 제어 신호 200 %). 빌려와 LPS-처리 분비 내 발광에 통계적으로 의미있는 증가contralateral 제어 ared은 4 마우스 4 그룹의 완성 불구하고 달성했다. 또 다른 연구는 또한 E. 하나의 intraductal 유방 주사를 활용 한 NF-κB 기자 트렌스 제닉에 대장균 또는 LPS. 우리 자신의 작품과 마찬가지로,이 저자는 E. 후 기자 활동을 6 시간에서 크게 증가했다 대장균 주입 2. 이전의 조작에도 기준에서 이미징 때 뇌 및 기타 복부 장기의 제정 NF-κB 활동으로 인해주의를하시기 바랍니다, 우리의 기자 마우스의 머리와 abdomens 지속적으로 신호를 보여줍니다. 따라서이 신호는이 실험에 관한 무시해야합니다. 명백한 신호는 이미지 읽기 아웃은 PBS의 선에 배경 발광을 최소화하기 위해 조정 한 후 LPS 주입 된 유선 내에 유지됩니다. 그림 2는 배경이 감소하여 이미지를 보여줍니다. 선에 실패한 주입 거예요유두에 손상 가능성이 가장 높은 결과를 가져올 수도 있습니다. 이 영상에 분명합니다 지적, 피부 수준의 염증의 원인이됩니다. 남긴 상처 신호의 이러한 유형의 관에 성공적으로 LPS 주입 후 본 바와 같이, 선 전역에서 나오는 아니라 매우 강하고 피해가 발생한 유두 영역에 국한 될 것입니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/4030/4030fig1.jpg" /> 1 그림. 절차의 개략적. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/4030/4030fig2.jpg" /> 그림 2. 배경이 감소하면서 IVIS 발광 생물 이미징.의 대표 결과는 (A) LPS 주입 된 선으로 증가 루시 페라 제 활동을 공개, 이미지 획득. (B)에서 이미지이자 quantifications의 지역이 추가로. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4030/4030fig2large.jpg" target="_blank">큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> . <img alt는 = &quot;그림 3&quot;SRC = &quot;/ files/ftp_upload/4030/4030fig3.jpg&quot;/&gt; 그림 3 사례 분사 :.. 유선은 intraductal 주입을 통해 색소를 주입 유두를 통해 전달의 정확성을 테스트하려면, 젖 분비의 날 21에서 마우스가 PBS에 희석 trypan 푸른 염료의 100 μl를 주입했다. 희생 후, 선은 시각화를 위해 노출되었다. (A) 성공 분사와 유두에서 염료의 (B) bolus.

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관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

다음은 유전자 변형 NF-κB의 기자 마우스 및 모델 유선염에 최적화 된 사출 기술을 활용, 유방 조직의 염증이 가장 일반적으로 세균 감염에 의해 발생. 이 절차에서 가장 중요한 단계는 intraductal 주사 자체입니다. 실제로, intraductal 주입이 성공했는지 여부를 보통 명백합니다. 대리인의 주입 (LPS 또는 PBS)는 유체 생각해야하며 주사기가납니다으로 저항 거의가 있어야합니다. 가...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 </td></tr><tr><td> 대장균에서 Lipopolysaccharide (LPS) </td><td> 시그마 </td><td> L 2880 </td><td> 혈청 형 055 : B5 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> Mediatech 주식회사 </td><td> 46-013-CM </td><td></td></tr><tr><td> 31 게이지 인슐린 주사기 </td><td> Becton 디킨슨 </td><td> 328438 </td><td> 짧은 바늘 </td></tr><tr><td> 집게 </td><td> 세계 정밀 계측기 </td><td> 15,908 </td><td></td></tr><tr><td> 범위를 해부 </td><td> Leica </td><td> M3Z </td><td></td></tr><tr><td> 테럴 Isoflurane, USP </td><td> RX 엘리트에 대한 MINRAD (주) </td><td> NDC 66794-011-25 </td><td></td></tr><tr><td> IVIS 200 이미징 시스템 &lt;/ TD&gt; <td> 캘리퍼스 (이전 Xenogen) </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> luciferin 주입을위한 주사기 </td><td> Becton 디킨슨 </td><td> 309597 </td><td> 1cc, 26G5 / 8 </td></tr><tr><td> D-Luciferin 반딧불, 나트륨 염 일 수화물 (Luciferin 기판) </td><td> Biosynth 화학 및 생물학 </td><td> L-8240 </td><td> 10 MG / ML에 희석 </td></tr></tbody></table>

intraductal injection of lps as a mouse model of mastitis: signaling visualized via an nf-&kappa;b reporter transgenic

인간의 질병의 동물 모델은 사전 임상 모델은 개입을 테스트로 엄격하게, 궁극적으로 질병의 진행 및 관련 메커니즘의 단계를 공부하고하기 위해 필요합니다. 이러한 방법으로, 우리는 lipopolysaccharide가 (LPS) 선의 유두 효과적으로 모델링 유선염, 또는 염증을 통해 lactating 마우스를 유선에 주입되는 기술을 설명합니다. 증가 핵 요소 카파 B (NF-κB) 신호에이 시뮬레이션 감염 결과는 NF-κB 루시 페라 제 리포터 마우스 1 발광 생물 이미징을 통해 시각화. 이러한 방법을 개발에 우리의 궁극적 인 목표는 lactating 자주 빨갛게이 포함되어 선, 붓기, 그리고 면역 세포 침투 2,3에서 유선염과 관련된 염증을 연구하는 것이 었습니다. 따라서 절개 또는 위해 피부, 젖꼭지, 또는 선에 남긴 상처의 유형은 수 LPS을 소개하는 것을 절실히 알고 있었다그 접근 방식이 가능성 염증의 읽기 아웃 먹이고 있기 때문에 우리의 방법으로 이용 될 수 없습니다. 우리는 또한 특별히 만든 손으로 그린​​ 피펫 또는 장소에서 이러한 전문 도구를 개최 마이크로의 사용을 필요로하지 스트레이트 포워드 방법을 원하는. 따라서, 우리는 상업적으로 이용 가능한 인슐린 주사기를 사용하고 그대로 유두의 유방 덕트에 에이전트를 주입하기로 결정. 이 방법은 성공하고 우리는 분사의 과정에서 중첩 추가 효과없이 LPS 주입과 관련된 염증을 공부 할 수있었습니다. 또한이 방법은 또한 시각 및 양적 NF-κB는 LPS 주입 된 선 4에서 신호를 증가 보여 NF-κB 루시 페라 제 리포터 유전자 변형 마우스와 발광 생물 이미징 기술을 활용. 이러한 방법은 궁극적으로 lactating 유선에서 모델 질병에 기술을하고자하는 다양한 분야의 연구자의 관심을 끌 수있는여기에 설명이 물질의 수의 주입에 활용 될 수 있으며, 만 LPS에 한정되지 않습니다.

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Intraductal Injection of LPS as a Mouse Model of Mastitis: Signaling Visualized via an NF-&amp;kappa;B Reporter Transgenic

여기에 설명하는 것은 lipopolysaccharide가 유선염을 시뮬레이션 할 수있는 유두, 일반적으로 세균 감염에 의한 조건을 통해 lactating 마우스를 유선에 주입되는 기술입니다. 증가 핵 요소 카파 B (NF-κB) 신호에 Lipopolysaccharide 사출 결과는 NF-κB 루시 페라 제 리포터 마우스의 발광 생물 이미징을 통해 시각화.

유선염의 마우스 모델로 LPS의 Intraductal 주입 : 신호는 NF-κB 리포터 트렌스 제닉을 통해 시각화

Animal models of human disease are necessary in order to rigorously study stages of disease progression and associated mechanisms, and ultimately, as ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

Intraductal Injection of LPS as a Mouse Model of Mastitis: Signaling Visualized via an NF-&kappa;B Reporter Transgenic

19.1K 조회수.  Vanderbilt University Medical Center. 여기에 설명하는 것은 lipopolysaccharide가 유선염을 시뮬레이션 할 수있는 유두, 일반적으로 세균 감염에 의한 조건을 통해 lactating 마우스를 유선에 주입되는 기술입니다. 증가 핵 요소 카파 B (NF-κB) 신호에 Lipopolysaccharide 사출 결과는 NF-κB 루시 페라 제 리포터 마우스의 발광 생물 이미징을 통해 시각화.

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Mouse Bladder Wall Injection

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. Before starting injections, the surgical area must be cleaned with soap and water and antiseptic solution. Surgical equipment must be sterilized before use and between each animal. Each mouse is placed under inhaled isoflurane anesthesia (2-5% for induction, 1-3% for maintenance) and its bladder exposed by making a midline abdominal incision with scissors. If the bladder is full, it is partially decompressed by gentle squeezing between two fingers. The cell suspension of interest is intramurally injected into the wall of the bladder dome using a 29 or 30 gauge needle and 1 cc or smaller syringe. The wound is then closed using wound clips and the mouse allowed to recover on a warming pad. Bladder wall injection is a delicate microsurgical technique that can be mastered with practice.

Mouse bladder wall injection is a useful approach to orthotopically study bladder stem cell and cancer biology. This delicate microsurgical method can be mastered with careful technique and practice.

마우스 블레더 월 주입

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. ...

연구

의학

Initiation of Metastatic Breast Carcinoma by Targeting of the Ductal Epithelium with Adenovirus-Cre: A Novel Transgenic Mouse Model of Breast Cancer

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in exponential tumor growth and metastasis to distal tissues and the collapse of anti-tumor immunity. Many useful animal models exist to study breast cancer, but none completely recapitulate the disease progression that occurs in humans. In order to gain a better understanding of the cellular interactions that result in the formation of latent metastasis and decreased survival, we have generated an inducible transgenic mouse model of YFP-expressing ductal carcinoma that develops after sexual maturity in immune-competent mice and is driven by consistent, endocrine-independent oncogene expression. Activation of YFP, ablation of p53, and expression of an oncogenic form of K-ras was achieved by the delivery of an adenovirus expressing Cre-recombinase into the mammary duct of sexually mature, virgin female mice. Tumors begin to appear 6 weeks after the initiation of oncogenic events. After tumors become apparent, they progress slowly for approximately two weeks before they begin to grow exponentially. After 7-8 weeks post-adenovirus injection, vasculature is observed connecting the tumor mass to distal lymph nodes, with eventual lymphovascular invasion of YFP+ tumor cells to the distal axillary lymph nodes. Infiltrating leukocyte populations are similar to those found in human breast carcinomas, including the presence of &#945;&#946; and &#947;&#948; T cells, macrophages and MDSCs. This unique model will facilitate the study of cellular and immunological mechanisms involved in latent metastasis and dormancy in addition to being useful for designing novel immunotherapeutic interventions to treat invasive breast cancer.

Activation of latent mutations with adenovirus-Cre into the mammary ductal system results in a clinically relevant metastatic breast cancer. Incorporation of a YFP promoter allows tracking of distal metastatic tumor cells. This model is useful to study latent metastasis, anti-tumor immunity, and for designing novel immunotherapies to treat breast cancer.

유방암의 소설 형질 전환 마우스 모델 : 아데노 바이러스 크레와 유관 상피의 대상으로 전이성 유방암의 개시

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As such, primary or &#39;neuronal-like&#39; cell culture systems are commonly utilized. While&#160;these systems are relatively easy to work with, and are useful model systems in which various functional outcomes (such as cell death) can be readily quantified, the examined outcomes and pathways in cultured immature neurons (such as excitotoxicity-mediated cell death pathways) are not necessarily the same as those observed in mature brain, or in intact tissue. Therefore, there is the need to develop models in which cellular mechanisms in mature neural tissue can be examined. We have developed an in vitro technique that can be used to investigate a variety of molecular pathways in intact nervous tissue. The technique described herein utilizes rat cortical tissue, but this technique can be adapted to use tissue from a variety of species (such as mouse, rabbit, guinea pig, and chicken) or brain regions (for example, hippocampus, striatum, etc.). Additionally, a variety of stimulations/treatments can be used (for example, excitotoxic, administration of inhibitors, etc.). In conclusion, the brain slice model described herein can be used to examine a variety of molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

We have developed a brain slice model which can be used to examine molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.&#160;This technique generates viable mature brain tissue and reduces animal numbers required for experimentation, whilst keeping the neuronal circuitry, cellular interactions, and postsynaptic compartments partly intact.

같은 뇌 Microslices의 흥분 독성 자극<em&gt; 체외</em&gt; 스트로크의 모델

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Development of an Alpha-synuclein Based Rat Model for Parkinson's Disease via Stereotactic Injection of a Recombinant Adeno-associated Viral Vector

In order to study the molecular pathways of Parkinson&#39;s disease (PD) and to develop novel therapeutic strategies, scientific investigators rely on animal models. The identification of PD-associated genes has led to the development of genetic PD models. Most transgenic &#945;-SYN mouse models develop gradual &#945;-SYN pathology but fail to display clear dopaminergic cell loss and dopamine-dependent behavioral deficits. This hurdle was overcome by direct targeting of the substantia nigra with viral vectors overexpressing PD-associated genes. Local gene delivery using viral vectors provides an attractive way to express transgenes in the central nervous system. Specific brain regions can be targeted (e.g. the substantia nigra), expression can be induced in the adult setting and high expression levels can be achieved. Further, different vector systems based on various viruses can be used. The protocol outlines all crucial steps to perform a viral vector injection in the substantia nigra of the rat to develop a viral vector-based alpha-synuclein animal model for Parkinson&#39;s disease.

Development of an Alpha-synuclein Based Rat Model for Parkinson&#039;s Disease via Stereotactic Injection of a Recombinant Adeno-associated Viral Vector

This manuscript describes how viral vector-mediated local gene delivery provides an attractive way to express transgenes in the central nervous system. The protocol outlines all crucial steps to perform a viral vector injection in the substantia nigra of the rat to develop a viral vector-based animal model for Parkinson's disease.

재조합 아데노 - 관련 바이러스 성 벡터의 정위 주사를 통해 파킨슨 병에 대한 알파 - 시누 클레인 기반 쥐 모델 개발

In order to study the molecular pathways of Parkinson&#39;s disease (PD) and to develop novel therapeutic strategies, scientific investigators rely on ...

Induction and Micro-CT Imaging of Cerebral Cavernous Malformations in Mouse Model

Mutations in the CCM1 (aka KRIT1), CCM2, or CCM3 (aka PDCD10) gene cause cerebral cavernous malformation (CCM) in humans. Mouse models of CCM disease have been established by tamoxifen induced deletion of Ccm genes in postnatal animals. These mouse models provide invaluable tools to investigate molecular mechanism and therapeutic approaches for CCM disease. An accurate and quantitative method to assess lesion burden and progression is essential to harness the full value of these animal models. Here, we demonstrate the induction of CCM disease in a mouse model and the use of the contrast enhanced X-ray micro computed tomography (micro-CT) method to measure CCM lesion burden in mouse brains. At postnatal day 1 (P1), we used 4-hydroxytamoxifen (4HT) to activate Cre recombinase activity from the Cdh5-CreErt2 transgene to cleave the floxed allele of Ccm2. CCM lesions in mouse brains were analyzed at P8. For micro-CT, iodine based Lugol&#39;s solution was used to enhance contrast in brain tissue. We have optimized the scan parameters and utilized a voxel dimension of 9.5 &#181;m, which lead to a minimum feature size of approximately 25 &#181;m. This resolution is sufficient to measure CCM lesion volume and number globally and accurately, and provide high-quality 3-D mapping of CCM lesions in mouse brains. This method enhances the value of the established mouse models to study the molecular basis and potential therapies for CCM and other cerebrovascular diseases.

This protocol demonstrates the induction of cerebral cavernous malformation disease in a mouse model and uses contrast enhanced micro computed tomography to measure lesion burden. This method enhances the value of established mouse models to study the molecular basis and potential therapies for cerebral cavernous malformation and other cerebrovascular diseases.

유도 및 마우스 모델에서 대뇌 동굴 같은 기형의 마이크로-CT 영상

Mutations in the CCM1 (aka KRIT1), CCM2, or CCM3 (aka PDCD10) gene cause cerebral cavernous malformation (CCM) in humans. Mouse models of CCM disease have ...

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant for targeting neovascular glaucoma, a sight-threatening complication of diabetic retinopathy. This method is based on the induction of iris vascular response by a series of self-sealing uveal punctures on BALB/c mice and takes advantage of the postpartum maturation of mouse ocular vasculature. Mouse pups undergo uveal punctures from postnatal day 12.5, when the pups naturally open their eyes, until postnatal day 24.5. Due to the transparency of the cornea, iris vasculature can be analyzed easily through time by noninvasive in vivo methods. Furthermore, the semitransparent iris of BALB/c mice can be flatmounted for detailed immunohistologic analysis with minimal non-specific background staining. In this model, angiogenesis is mainly driven by the inflammatory and plasminogen activating systems. The puncture-induced model is the first to induce iris neovascularization in small rodents, and has the advantage of allowing direct noninvasive in vivo analysis of the angiogenic process. Moreover, the model can be combined with angiogenic modulating substances, which highlights its potential in the study of angiogenesis with an in vivo perspective.

Iris neovascularization, a common complication of ischemic retinal disease, may lead to sight-threatening neovascular glaucoma. Here, we describe a murine protocol for inducing experimental iris neovascularization that may be used for noninvasive evaluation of angiogenesis-modulating substances.

마우스 모델 Rubeosis Iridis의 아이리스 Neovascularization 펑크 유발

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

Oleic Acid-Injection in Pigs As a Model for Acute Respiratory Distress Syndrome

The acute respiratory distress syndrome is a relevant intensive care disease with an incidence ranging between 2.2% and 19% of intensive care unit patients. Despite treatment advances over the last decades, ARDS patients still suffer mortality rates between 35 and 40%. There is still a need for further research to improve the outcome of patients suffering from ARDS. One problem is that no single animal model can mimic the complex pathomechanism of the acute respiratory distress syndrome, but several models exist to study different parts of it. Oleic acid injection (OAI)-induced lung injury is a well-established model for studying ventilation strategies, lung mechanics and ventilation/perfusion distribution in animals. OAI leads to severely impaired gas exchange, deterioration of lung mechanics and disruption of the alveolo-capillary barrier. The disadvantage of this model is the controversial mechanistic relevance of this model and the necessity for central venous access, which is challenging especially in smaller animal models. In summary, OAI-induced lung injury leads to reproducible results in small and large animals and hence represents a well-suited model for studying ARDS. Nevertheless, further research is necessary to find a model that mimics all parts of ARDS and lacks the problems associated with the different models existing today.

In this article, we present a protocol to induce acute lung injury in pigs by central-venous injection of oleic acid. This is an established animal model for studying the acute respiratory distress syndrome (ARDS).

올레산 급성 호흡 곤란 증후군에 대 한 모델로 돼지에 주입

The acute respiratory distress syndrome is a relevant intensive care disease with an incidence ranging between 2.2% and 19% of intensive care unit ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic fatty liver disease, metabolic liver disease, and liver cancer) requires experimental manipulation of animal models and in vitro cell cultures. Both techniques have limitations, such as the requirement of large numbers of animals for in vivo manipulation. However, in vitro cell cultures do not reproduce the structure and function of the multicellular hepatic environment. The use of precision-cut liver slices is a technique in which uniform slices of viable mouse liver are maintained in laboratory tissue culture for experimental manipulation. This technique occupies an experimental niche that exists between animal studies and in vitro cell culture methods. The presented protocol describes a straightforward and reliable method to isolate and culture precision-cut liver slices from mice. As an application of this technique, ex vivo liver slices are treated with bile acids to simulate cholestatic liver injury and ultimately assess the mechanisms of hepatic fibrogenesis.

This protocol provides a simple and reliable method for the production of viable precision-cut liver slices from mice. The ex vivo tissue samples can be maintained under laboratory tissue culture conditions for multiple days, providing a flexible model to examine liver pathobiology.

뮤린 정밀 절단 간 슬라이스 간 생물학의 Ex Vivo 모델로

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...

A Mouse Model for Chronic Pancreatitis via Bile Duct TNBS Infusion

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. Several rodent models have been developed to study CP, of which the bile duct 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS) infusion model replicates the features of neuropathic pain seen in CP. However, bile duct drug infusion in mice is technically challenging. This protocol demonstrates the procedure of bile duct TNBS infusion for generation of a CP mouse model. TNBS was infused into the pancreas through the ampulla of Vater in the duodenum. This protocol optimized drug volume, surgical techniques, and drug handling during the procedure. TNBS-treated mice showed features of CP as reflected by bodyweight and pancreas weight reductions, changes in pain-associated behaviors, and abnormal pancreatic morphology. With these improvements, mortality associated with TNBS injection was minimal. This procedure is not only critical in generating pancreatic disease models but is also useful in local pancreatic drug delivery.

Chronic pancreatitis (CP) is a disease characterized by inflammation and fibrosis of the pancreas, often associated with intractable abdominal pain. This article focuses on refining the technique to generate a mouse model of CP via bile duct infusion with 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS).

담즙 덕트 TNBS 주입을 통한 만성 췌장염을 위한 마우스 모델

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. ...