만성 췌장염은 췌장 염증, 섬유증, 복통 및 기타 증상을 포함하는 복잡한 질병입니다. 담관 TNBS 주입 모델은 만성 췌장염 환자에서 관찰 된 신경 병증 통증을 복제합니다. 이러한 담관 TNBS 주입 프로토콜은 마우스에서 만성 췌장염 모델의 생성을 유도하도록 최적화되었다.
마우스에 있는 담관 약 융합이 기술적으로 도전적이기 때문에, 그것의 시각화는 방법에 새로운 연구원에게 도움이 될 것입니다. 수술 전후 2주 및 3주 후, 폰 프레이 모노필라멘트를 사용하여 8~10주 된 상부 복부 부위에 기름이 다른 수준의 힘을 적용하고, C57 블랙 6마우스는 10회 1~2초동안 적용한다. 긍정적 인 응답으로 복부의 철회 또는 핥는 것을 고려하십시오.
다음으로, 31 게이지 바늘을 장착한 인슐린 주사기를 적재하고 50 마이크로리터의 50 마이크로리터가 새로 준비된 0.75% TNBS 용액을 장착한다. 차량 제어로 식염수에 10%의 50 마이크로리터가 있는 두 번째 주사기를 적재하고 빛으로부터 보호되는 얼음에 주사기를 두어 놓습니다. 페달 반사에 대한 반응의 부족을 확인 한 후, 면도 또는 제모 크림을 적용하여 마취 마우스의 복부 영역에서 머리를 제거하고 해부 현미경아래 가열 수술 패드에 마우스를 배치합니다.
각 눈에 수의 연고를 적용하고, 3개의 순차적 2% 요오드와 3개의 70%에탄올 물티슈로 수술 부위를 소독하여 마이크로 가위를 사용하여 연속 동작으로 0.5~1센티미터 절개를 하고 면 면봉을 사용하여 십이지장을 부드럽게 노출시키고 일반적인 담관을 찾습니다. 간 및 담낭으로 처리의 흐름을 방지하기 위하여는, 현미경을 사용하여 근위 일반적인 덕트 위에 직선 마이크로 혈우클립을 놓고, 췌장 덕트에 vater의 유두를 통해 TNBS로드 된 주사기의 바늘을 삽입합니다. 구부러진 마이크로 헤모클립을 사용하여 바늘을 고정하고 1 분 동안 췌장 덕트에 용액을 주입하십시오.
모든 솔루션이 전달되면 마이크로 클램프를 조심스럽게 제거하고 십이지극이 원래 위치로 돌아왔는지 확인합니다. 복강이 닫히기 전에, 십이지장 본래위치로 복귀하고 연골 의 회복을 돕기 위해 36 ~ 37섭씨 37도의 500 마이크로리터를 추가하십시오. 5-O 스티치로 연속 봉합사를 사용하여 근육 층의 절개를 닫고 4-O 스티치로 중단된 봉합사를 사용하여 피부를 닫습니다.
그런 다음 전체 재조정까지 모니터링과 함께 가열 패드에 복구 케이지에 마우스를 배치합니다. 발성, 구부러진 허리 자세 또는 운동을 감소시키고 격일로 체중을 측정하는 것과 같은 고민의 표시를 위해 수술 후 첫 주 동안 매일 마우스 건강과 행동을 모니터링하십시오. 관찰된 바와 같이, 50 마이크로리터의 잉크를 주입하면 전체 췌장의 침투가 발생하여 보다 균일한 질병 표현형의 유도가 가능하다.
이 대표적인 분석에서, 수술 후 처음 3 일 동안, 대조군의 마우스는 점차적으로 회복하고 21 일까지 원래 체중의 100 % 이상을 얻기 전에 원래 체중의 약 6 %를 잃었다. 대조적으로, TNBS를 수신한 마우스는 수술 후에 첫번째 5 일 도중 그들의 원래 체중의 대략 15%를 분실하고 21일까지 그들의 원래 체중의 단지 100% 밑에 회복했습니다. 대조군 마우스에 비해, TNBS 주입 동물은 수술 후 두 번째와 세 번째 주 동안 증가 복부 기계적 과민반응을 보였다.
췌장의 체중당 크기와 무게는, 대조군 동물에서 수확한 췌장에 비해 TNBS 마우스에서 현저히 감소되었으며, 중증 및 장기 만성 췌장염을 가진 인간에서 의한 연구 결과와 일치하는 TNBS 처리 된 동물의 현저한 췌장 위축을 시사합니다. 대조군 에탄올 처리마우스에서 췌장 조직 섹션의 조직학적 분석은 정상적인 형태를 보였고 TNBS 처리된 마우스의 조직 섹션은 지방 세포 침투 및 섬유증으로 대체된 아시나르 세포의 대규모 손실로 공허한 실현을 나타냈다. 주입된 TNBS가 갈방광과 내장에 들어가는 것을 방지하는 것은 TNBS가 조직 손상 효력이 있기 때문에 중요합니다.
주입 하는 동안, 담관 펑크 작동을 피하기 위해 가능한 한 안정적으로 손을 유지. 만성 췌장염 개발을 유도하는 것 외에도, 이 담관 주입 마우스 예술은 다른 췌장 질환 모델의 발달에 사용될 수 있다. 이 TNBS 만성 췌장염 마우스 모형은 만성 췌장염의 병인 및 처리 뿐만 아니라 그밖 췌장 질병을 연구하기 위하여 이용될 수 있습니다.
