저자는 기술 지원을 Anke Rüttgeroth와 카리나 Zimmermann 감사드립니다. 이 작품은 독일 Forschungsgemeinschaft (폰에 부여 NI 1301/1-1)와 괴팅겐 의료 센터의 대학 (폰에 &#39;프로 futura &quot;보조금)에 의해 지원되었다.

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	<li>Zaccolo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+chimeric+fluorescent+proteins+and+fluorescence+resonance+energy+transfer+to+monitor+cellular+responses.">Use of chimeric fluorescent proteins and fluorescence resonance energy transfer to monitor cellular responses.</a> Circ. Res. 94, 866-873 (2004).</li><li>Mehta, S., Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reporting+from+the+field:+genetically+encoded+fluorescent+reporters+uncover+signaling+dynamics+in+living+biological+systems.">Reporting from the field: genetically encoded fluorescent reporters uncover signaling dynamics in living biological systems.</a> Annu. Rev. Biochem. 80, 375-401 (2011).</li><li>Zhang, J., Campbell, R. E., Ting, A. Y., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Creating+new+fluorescent+probes+for+cell+biology.">Creating new fluorescent probes for cell biology.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 3, 906-918 (2002).</li><li>Miyawaki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+the+spatial+and+temporal+dynamics+of+intracellular+signaling.">Visualization of the spatial and temporal dynamics of intracellular signaling.</a> Dev. Cell. 4, 295-305 (2003).</li><li>Bunemann, M., Frank, M., Lohse, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gi+protein+activation+in+intact+cells+involves+subunit+rearrangement+rather+than+dissociation.">Gi protein activation in intact cells involves subunit rearrangement rather than dissociation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 16077-16082 (2003).</li><li>Kotlikoff, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+encoded+Ca2++indicators:+using+genetics+and+molecular+design+to+understand+complex+physiology.">Genetically encoded Ca2+ indicators: using genetics and molecular design to understand complex physiology.</a> J. Physiol. 578, 55-67 (2007).</li><li>Willoughby, D., Cooper, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+imaging+of+cAMP+dynamics.">Live-cell imaging of cAMP dynamics.</a> Nat. Methods. 5, 29-36 (2008).</li><li>Nikolaev, V. O., Lohse, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+of+cAMP+synthesis+and+degradation+in+living+cells.">Monitoring of cAMP synthesis and degradation in living cells.</a> Physiology (Bethesda). 21, 86-92 (2006).</li><li>Tanimura, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Fluorescence+Resonance+Energy+Transfer-based+Biosensors+for+the+Quantitative+Analysis+of+Inositol+1,4,5-Trisphosphate+Dynamics+in+Calcium+Oscillations.">Use of Fluorescence Resonance Energy Transfer-based Biosensors for the Quantitative Analysis of Inositol 1,4,5-Trisphosphate Dynamics in Calcium Oscillations.</a> J. Biol. Chem. 284, 8910-8917 (2009).</li><li>Nikolaev, V. O., Lohse, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+techniques+for+real-time+monitoring+of+cGMP+in+living+cells.">Novel techniques for real-time monitoring of cGMP in living cells.</a> Handb. Exp. Pharmacol. , 229-243 (2009).</li><li>Nausch, L. W., Ledoux, J., Bonev, A. D., Nelson, M. T., Dostmann, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+patterning+of+cGMP+in+vascular+smooth+muscle+cells+revealed+by+single+GFP-linked+biosensors.">Differential patterning of cGMP in vascular smooth muscle cells revealed by single GFP-linked biosensors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 365-370 (2008).</li><li>Borner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FRET+measurements+of+intracellular+cAMP+concentrations+and+cAMP+analog+permeability+in+intact+cells.">FRET measurements of intracellular cAMP concentrations and cAMP analog permeability in intact cells.</a> Nat. Protoc. 6, 427-438 (2011).</li><li>Nikolaev, V. O., Bunemann, M., Hein, L., Hannawacker, A., Lohse, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+single+chain+cAMP+sensors+for+receptor-induced+signal+propagation.">Novel single chain cAMP sensors for receptor-induced signal propagation.</a> J. Biol. Chem. 279, 37215-37218 (2004).</li><li>Hong, K. P., Spitzer, N. C., Nicol, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+molecular+toolkit+for+cAMP+studies+in+live+cells.">Improved molecular toolkit for cAMP studies in live cells.</a> BMC Res. Notes. 4, 241-24 (2011).</li><li>Niino, Y., Hotta, K., Oka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+live+cell+imaging+using+dual+FRET+sensors+with+a+single+excitation+light.">Simultaneous live cell imaging using dual FRET sensors with a single excitation light.</a> PLoS One. 4, e6036 (2009).</li><li>Palmer, A. E., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+calcium+signaling+using+genetically+targetable+fluorescent+indicators.">Measuring calcium signaling using genetically targetable fluorescent indicators.</a> Nat. Protoc. 1, 1057-1065 (2006).</li><li>Brumbaugh, J., Schleifenbaum, A., Stier, G., Sattler, M., Schultz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-+and+dual-parameter+FRET+kinase+probes+based+on+pleckstrin.">Single- and dual-parameter FRET kinase probes based on pleckstrin.</a> Nat. Protoc. 1, 1044-1055 (2006).</li><li>Aoki, K., Matsuda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+small+GTPase+activity+with+fluorescence+resonance+energy+transfer-based+biosensors.">Visualization of small GTPase activity with fluorescence resonance energy transfer-based biosensors.</a> Nat. Protoc. 4, 1623-1631 (2009).</li></ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

이 프로토콜에서, 우리는 가능한 바이오 센서의 다양한 일상 응용 프로그램에 대한 간단한 저렴한 비용으로하지만 강력한 걱정 이미징 시스템을 구축하는 방법을 보여줍니다. 여기에 제시된 시스템은 기증자 - 수용체 쌍으로 CFP와 YFP, 또는 형광 단백질의 유사한 유형을 위해 설계되었습니다. 한편, 다른 개인의 바이오 센서는 예를 들어 녹색과 적색 형광 단백질에게 14 사용하는 사용할 ?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 / 장비의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 </td></tr><tr><td> BES 버퍼 학년 </td><td> AppliChem </td><td> A1062 </td><td></td></tr><tr><td> CaCl 2 이수화 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> C5010 </td><td></td></tr><tr><td> 유리 coverslides </td><td> 열 과학 </td><td> 004710781 </td><td> 직경 24mm </td></tr><tr><td> 바닥이 유리로 세포 배양 요리 </td><td> 세계 정밀 계측기 </td><td> FD3510-100 </td><td></td></tr><tr><td> D-가상 매체 </td><td> Biochrom AG </td><td> F0445 </td><td></td></tr><tr><td> 태아 송아지 혈청 (FCS) </td><td> 열 과학 </td><td> SH30073.02 </td><td></td></tr><tr><td> L-글루타민 </td><td> Biochrom AG </td><td> K0283 </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 시그마 </td><td> H4034 </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td> 시그마 </td><td> P5405 </td><td></td></tr><tr><td> MgCl 2 hexahydrate </td><td> AppliChem </td><td> A4425 </td><td></td></tr><tr><td> NaCl </td><td> AppliChem </td><td> A1149 </td><td></td></tr><tr><td> NA 2 HPO 4 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> S9707 </td><td></td></tr><tr><td> 페니실린 / 스트렙토 마이신 </td><td> Biochrom AG </td><td> A2213 </td><td></td></tr><tr><td> 역 형광 현미경 </td><td> 예를 들어 니콘 </td><td> 니콘의 요청 </td><td></td></tr><tr><td> CoolLED </td><td> CoolLED </td><td> P E-100 </td><td> 440 nm의 </td></tr><tr><td> DualView </td><td> Photometrics </tD&gt; <td> DV2-SYS </td><td></td></tr><tr><td> DualView 필터 슬라이더 </td><td> Photometrics </td><td> 05-EM </td><td></td></tr><tr><td> CFP / YFP 필터 세트 </td><td> 크로마 기술 </td><td> 49,052 </td><td> 방출 필터없이 </td></tr><tr><td> ORCA-03G 카메라 </td><td> 하마 마츠 포토닉스 </td><td> C8484-03G02 </td><td></td></tr><tr><td> I / O 보드를 아두 이노 </td><td> Sparkfun 전자 </td><td> DEV-00666 </td><td></td></tr><tr><td> Attofluor 셀 챔버 </td><td> Invitrogen </td><td> A-7816 </td><td></td></tr><tr><td> WindowsXP 또는 Windows7 시스템과 개인용 컴퓨터 </td><td> 모든 공급 업체 </td><td></td><td> 높은 용량의 하드 드라이브를 포함 </td></tr></tbody></table>

fret microscopy for real-time monitoring of signaling events in live cells using unimolecular biosensors

포스터 공명 에너지 전달은 (걱정) 현미경 라이브 세포와 조직의 생화학 및 신호 이벤트의 실시간 모니터링을위한 기법으로 증가 관심을 얻기 위해 계속합니다. 클래식 생화학 방법에 비해,이 소설 기술은 높은 시간적 공간적 해상도가 특징입니다. 실험 표현하고 원위치 또는 생체 1-2에 시간이 지남에 따라 이미징 될 수있는 다양한 유전자 인코딩 바이오 센서를 사용 초조해. 일반적인 바이오 센서 중 하나 단백질의 형광 태그 쌍 또는 기증자와 3-4 관심 분자에 대한 구속력있는 잔기와 상호 수용체 fluorophores을 비호하는 단일 단백질의 conformational 변화 사이에 걱정 측정하여 단백질 단백질 상호 작용을 신고 할 수 있습니다. 단백질 단백질 상호 작용에 대한 Bimolecular 바이오 센서 포함, 예를 들어, 동안 unimolecular 센서 MEA, 세포 5 G-단백질 활성화를 모니터링하기위한 구성합니다suring conformational 변화 널리 칼슘 6, 캠프 7-8, 이노시톨 인산염 9 cGMP 10-11과 같은 이미지 초 메신저로 사용됩니다. 여기 어떻게 사용자 정의 epifluorescence를 구축하는 것이 하나의 상업적으로 이용 가능한 구성 요소와 방법 마이크로 관리자 프리웨어를 사용하여 전체 설정을 제어하는​​ 방법에서 영상 시스템을 초조해 설명합니다. 이 간단하지만 강력한 계기는 라이브 셀에 걱정 일상이나보다 정교한 측정을 위해 설계되었습니다. 획득 이미지는 그래픽 형식으로 저장되기 전에 모든 실험을하는 동안 실시간으로 초조해 비율의 변화를 시각적으로 자기 작성된 플러그인을 사용하여 처리됩니다와 호환 빌드 된 다음 데이터 분석에 사용 ImageJ 프리웨어. 이 저렴한 비용으로 시스템이 높은 유연성을 특징으로하며 성공적으로 사용할 수의 과다에 의해 다양한 생화학 행사 및 신호 분자를 모니터링하는 데 사용할 수있는 것은 라이브 세포와 조직에 바이오 센서를 안달. 예를 들어, 우리는 H를 보여β-아드레날린 수용체 작용제 및 차단기가있는 자극시 라이브 293A 세포에서 캠프의 실시간 모니터링을 수행하려면이 이미징 시스템을 사용하는 아야.

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FRET Microscopy for Real-time Monitoring of Signaling Events in Live Cells Using Unimolecular Biosensors

포스터 공명 에너지 전달은 (걱정) 현미경 기자 등 다양한 바이오 센서를 사용하여 라이브 세포에서 이벤트를 신호의 실시간 모니터링을위한 강력한 기술이다. 여기 어떻게 사용자 정의 epifluorescence를 구축하는 것은 상업적으로 이용 가능한 구성 요소와 방법을 실험을 안달을 위해 사용하는 방법에서 영상 시스템을 초조해 설명합니다.

Unimolecular 바이오 센서를 사용하여 라이브 세포에서 이벤트를 신호의 실시간 모니터링을위한 현미경을 안달

F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET) microscopy  continues to gain increasing interest as a technique for real-time monitoring  of biochemical ...

fret-microscopy-for-real-time-monitoring-signaling-events-live-cells

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Biology

23.0K 조회수.  Georg August University Medical Center, Göttingen, Germany. 포스터 공명 에너지 전달은 (걱정) 현미경 기자 등 다양한 바이오 센서를 사용하여 라이브 세포에서 이벤트를 신호의 실시간 모니터링을위한 강력한 기술이다. 여기 어떻게 사용자 정의 epifluorescence를 구축하는 것은 상업적으로 이용 가능한 구성 요소와 방법을 실험을 안달을 위해 사용하는 방법에서 영상 시스템을 초조해 설명합니다.