화학요법 유도점막염의 이 모형은 마우스에 있는 소장 상해 및 보상 과잉증의 중요한 끝점 및 증식마커를 결정하기 위하여 이용될 수 있습니다. 이 방법은 시간과 비용 효율적이고 수행하기 쉽습니다. 이와 같은 표준화된 방법을 사용하면 분석 끝점을 몇 가지 변형과 비교하는 것이 더 쉽습니다.
5-Florauracil 또는 5FU 점막염 유도의 경우, 적절한 부피 5FU와 함께 27 게이지 x 19 mm 바늘을 장착 한 1 밀리리터 주사기를 적재하고 수령마우스를 수동으로 억제합니다. 마우스를 단단하지만 부드러운 그립으로 유지하면서 동물의 복부 측면을 노출하고 복부의 하부 사분면 중 하나 내에서 자궁 내의 구멍에 바늘을 삽입합니다. 그런 다음, 적절한 바늘 배치를 보장하고 5FU를 주입하는 흡인.
적절한 실험 적 종점에서, 4-Bromo-Deoxyuridine 또는 BrdU 정량화, 5FU 부상 동물 마우스의 무게와 연기 후드에 인트라 월화주입에 의해 BrdU의 킬로그램 당 5 밀리그램을 제공합니다. BrdU 가 증착 후 150분 후 발가락 핀치에 대한 반응부족을 확인하고 마취마우스의 무게를 기록하고 동물을 척추 위치에 놓는다. 복강을 발휘하여 복강을 노출시키고 가슴 구멍을 절개하여 폐렴을 유발합니다.
파일러러스보다 우수하게 자르고, 조심스럽게 추출하여 동물에서 장 조직을 철회하여 cecum에 도달할 때까지 제거합니다. 집게를 사용하여 근위 루멘을 부드럽게 고정하고 25 게이지 바늘이 장착된 10 밀리리터 주사기를 사용하여 소장을 식염수로 플러시합니다. 그런 다음 비워진 내장을 깨끗한 블로팅 용지에 놓고 과도한 소금 용액을 조심스럽게 제거합니다.
조직 수집을 위해 주입 된 동물에서 소장을 수확하고 플러시 조직의 무게를 기록하십시오. 조직학적 처리 후, 조직은 수확된 조직의 조직학적 사진을 얻기 위해 카메라에 연결된 광 현미경의 10배 목표하에서 심영상될 수 있다. BrdU 면역 반응성 세포의 영역을 측정하려면 이미지 J에 대한 관심 이미지를 열고 단계 마이크로미터 이미지를 엽니다.
직선 선택 도구를 사용하여 마이크로미터 이미지에 직선을 그리면 알려진 거리를 정의하고 분석 메뉴에서 설정된 축척을 선택합니다. 알려진 거리 상자에 값을 입력하고 길이 상자 단위의 길이 단위를 정의합니다. 관심 있는 이미지를 열어 토굴당 BrdU 면역 반응성 셀의 영역을 측정하고 이미지 유형 메뉴에서 색상 그래픽을 8비트로 설정합니다.
공정 강화 콘트라스트 하에서 이미지의 대비를 높이고 포화 픽셀을 0.4%로 설정하여 이미지에 임계값을 적용하여 면역 양성을 분할하고 이미지 조정을 선택합니다. 임계값과 빨간색을 선택하여 임계값 막대를 이동하여 약 10~20%의 임계값을 선택합니다. 그런 다음 잘 지향되는 토굴을 선택하고 프리핸드 선택 도구를 사용하여 주변 영역을 표시합니다.
임계값 영역을 측정하려면 분석 탭을 열고 분석 파티클을 선택합니다. 분석 파티클 창에서 크기를 20에서 무한대로 설정하고 상자 픽셀 단위를 클릭합니다. 순환을 0에서 1로 설정하고 표시선을 윤곽선으로 설정합니다.
그런 다음 디스플레이 결과를 클릭하고 요약하고 구멍 상자를 포함합니다. 측정 결과는 요약 창에 표시됩니다. 토굴 깊이를 측정하려면 Zen Light에서 이미지를 열고 카메라에 연결합니다.
20배 의 목표와 함께 카메라 모드에서 스냅샷을 찍고 처리 모드로 전환하여 스냅샷을 엽니다. 측정보기로 전환합니다. 줄 도구를 사용하여 잘 방향이 잘 되는 토굴의 맨 아래에서 선을 시작하여 토굴 의 맨 위에 있는 선을 마무리합니다.
그런 다음 측정값을 내보내고 토굴 깊이의 평균을 계산하고 높이로 채웁니다. 소장 체중은 2일째부터 4일째까지 감소하여 장내 질량의 손실을 시사합니다. 참고로, 5일째에는 치료된 동물의 0일차 무게와 크게 다르지 않습니다.
BrdU 통합에 의한 측정 된 증식은 거의 1 일과 2 일에 폐지되지만 4 일과 5 일에각각 약 4 배 및 5 배 의 증식이 증가합니다. 이러한 하이퍼확산은 토굴 깊이를 측정할 때도 관찰됩니다. 점막염의 재생 단계에서, 급성 단계에서 관찰되지 않는 BrdU 정착과 토굴 깊이 사이에 강한 상관관계가 있으며, 종점으로 토굴 깊이를 사용하는 것이 점막염의 급성 단계에서 적합할 수 있음을 시사한다.
형질전환마우스는 L세포 분비가 부족한 것으로, 야생형 5-FU 마우스에서 관찰된 것과 비교하여 회복 단계에서 체중의 현저한 손실과 소장 중량감소를 입증한다. 또한, 형질전환마우스는 모래가 야생형 마우스와 건강한 대조군 모두에서 보다 훨씬 짧기 때문에 보상적인 과잉 증식을 보여주지 못한다. 이 절차를 시도하는 동안, 완전히 소장을 비우고, 작은 장 무게만 얻기 위해 조직을 계량하기 전에 과잉 식염수를 제거해야합니다.
이 비디오를 시청한 후에는 소장 상해의 중요한 끝점을 수행하고 수집하며 결정하는 방법을 잘 이해해야 합니다. 그리고 재현 가능한 데이터를 효과적으로 얻을 수 있습니다. 5FU 및 BrdU와 같은 화학 화합물과 함께 작업하는 것은 위험할 수 있으며 이러한 절차를 수행 할 때 실험실 코트, 장갑 및 연기 후드를 사용하는 것과 같은 예방 조치를 취해야한다는 것을 잊지 마십시오.
