우리는 피드백을 박사 에반, 뉴웰 박사 숀 Bendall 감사드립니다. 우리는 또한 멀티 란탄 족 함유 폴리스티렌 구슬의 샘플에 대한 DVS 과학 박사 숀 Bendall 감사드립니다. 우리는 NIH 보조금이 U19 AI057229에서 자금에 감사합니다.

CyTOF의 모든 세포 샘플은 고정 per​​meabilized해야합니다. 이 이리듐 함유 DNA의 intercalator의 큰 항목을 가능하게하고, 또한 대량 cytometer에 주입하기 전에 즉시 MilliQ 물 세척 및 resuspension 단계 동안 세포 용해를 방지 할 수 있습니다. 1. 시작 - 최대 질량 Cytometer의 <ol><li> CyTOF 소프트웨어 프로그램을 엽니 다. 악기 설정을 선택합니다. 카드 케이지 탭에서 오른쪽 하단 모서리로 이동하고 버​​튼을 &quot;ON&quot;히터를 클릭합니다. 200 ° C.에 도달하는 스프레이 챔버 맨틀에 대한 충분한 시간을 허용하도록 히터에 원하는 시간 전에 적어도 15 분을 돌려 </li><li> MilliQ 물로 가득 찬 신선한 주사기와 주사기 펌프에 흰색 규격-Ject 3 ML의 주사기를 교체합니다. </li><li> 천식 환자용 호흡 보조기를 두시 라고요 청소. 작은 액체 소개 포트와 큰 가스​​ 도입 포트 모두를 통해 5% citranox 2 ~ 3 배를 끌어 주사기와 튜브를 사용하여 천식 환자용 호흡 보조기를 두시 라고요을 Backflush. MilliQ 물 t으로 backflushing 반복잔여 citranox를 제거 O. </li><li> CyTOF의 전면 패널에있는 표시등은 그림 1에서와 같이 불이되어 있는지 확인하십시오. </li></ol><img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/4398/4398fig1.jpg" /> 시작하기 전에 그림 1. CyTOF 패널 등. <ol start="5"><li> 아르곤 가스 탱크 밸브를 엽니 다. 이 켜하기 위해 전면에있는 &#39;아르곤&#39;빛의 원인이됩니다. </li><li> 가스 유입을 업 할 수있는 천식 환자용 호흡 보조기를 두시 라고요을 연결합니다. 나사가 빠지다 가스 튜브 커넥터를 메이크업과 검은 색 고무 O-링과 흰색 원뿔 플라스틱 조각을 제거합니다. 천식 환자용 호흡 보조기를 두시 라고요의 가스 도입 포트 줄기에있는 넓은 &quot;마디&quot;를합니다. 가스 도입 포트에 커넥터를 배치합니다. 가스 포트의 끝 부분 위에 검은 색 O-링을 배치하고, 포트 줄기의 넓은 부분을 통과 O-링을 강제로. 화장 가스 튜브로 하얀 원뿔 플라스틱 지적 좁은 끝으로 상단에 작품과 나사를 배치합니다. </li><li&gt; 액체 소개 관에 천식 환자용 호흡 보조기를 두시 라고요을 첨부합니다. 조심스럽게 천식 환자용 호흡 보조기를 두시 라고요의 끝에 개통에 작은 튜브를 삽입합니다. micropipettor에 정류장에 느끼는 유사한 두 정거장이 될 것입니다. 당신은 가벼운 저항을 만날 때까지 첫째, 키를 눌러, 작은 튜브의 끝은 유리의 직선 섹션의 끝 부분에 있어야합니다. 둘째, 피팅에 더욱 유리의 직선 부분의 끝을 강제하기 위해 더 열심히 눌러 밀봉 할 나사 피팅 조입니다. 가열 망태에있는 하얀 개방에 천식 환자용 호흡 보조기를 두시 라고요의 끝을 삽입합니다. </li><li> 악기 설정 창 RFG 컨트롤러 탭에서 &quot;시작 플라즈마&quot;를 누르십시오. 천식 환자용 호흡 보조기를 두시 라고요이 이미 삽입되어 있기 때문에, &quot;OK&quot;를 누릅니다. 이 소프트웨어는, 냉각기를 켜 가스의 흐름을 시작하고 플라즈마에 불을 지필 것입니다. 검출기 전압 두는 것입니다. 완료되면 &quot;플라즈마 시동 순서가 성공적으로 완료되었습니다&quot;라는 팝업 창이있을 것이다; 보도 &quot;OK&quot;. 새로운 불빛 (그림 2 전면 패널에에 있어야합니다 </strong<html> &gt;). </li></ol><img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/4398/4398fig2.jpg" /> 그림 2. 플라즈마 점화 및 시동 성공적으로 완료 CyTOF 패널 등 후. <ol start="9"><li> 주사기 펌프 켜기. 오른쪽 상단에서 주사기 펌프를 시작하고 튜브를 통해 액체를 흐르는과 천식 환자용 호흡 보조기를 두시 라고요에서 분사를 시작 녹색 &#39;재생&#39;버튼을 누릅니다. 기본 주사기 설정 물 3 ML위한 것입니다. 이 물 부족하면 샘플 샘플 루프를 통해 흐르는 될 위해서는, 주사기 펌프는 주기적으로 변경해야합니다. 화면의 상단에 액체가 주사기 펌프 밖으로 흘러이 얼마나 나타내는 카운터가 있습니다. 주사기 펌프이 카운터가 주사기의 끝을 도달 &quot;3.000&quot;또는 플런저에 도달 할 때 중단됩니다. 주사기를 충진 할 때, &quot;그만하세요&quot;가 아닌 카운터를 재설정 할 수있는 파란색 &#39;일시 중지&#39;버튼을 누르해야합니다. </li></ol>대량 Cytometer의 전자 &quot;&gt; 2. 매일 보정 <ol><li> 대량 cytometer는 보정 전에 뜨거운 안정적인 플라즈마를 달성하기 위해 약 20 분 필요합니다. 높은 가치의 3 % 이하 신호, 조정 단계의 목적은 &quot;Gd155&quot;을 (La139 + O16 산화) 유지하면서 Tm169 또는 Tb159의 원하는 신호를 극대화하는 것입니다. 데이터 수집 설정 창을 엽니 다 수집 설정 버튼을 클릭합니다. Analytes 탭에서 동위 원소 선택 패널을 열려면 주기적으로 테이블을 클릭합니다. 설명서에 나와있는 DVS 과학 튜닝 솔루션에서 동위 원소를 선택한 다음, &#39;저장&#39;을 클릭합니다. </li><li> 읽기 창 당 질량을 (ES) 열 버튼을 읽기 당 동위 원소를 클릭합니다. 새 번호를 입력하고 &quot;입력&quot;키를 눌러 &quot;펄스 카운트&quot;, 그리고 rescale y 축을 선택합니다. </li><li> 튜닝 솔루션을 그린 한 ML 규격 - Ject의 주사기를 채우십시오. &quot;로드&quot;를 샘플 포트 선택기를 돌려, 튜닝 솔루션 450 μl를 삽입 한 다음 &#39;삽입&#39;할 수있는 선택기를 켜십시오. 데이터 Acquisit의 질량 보정 탭에서<html> 이온 설정 창은 군중에 의해 흐르는되는 모니터링하기 위해 &#39;실행&#39;을 누르십시오. 오른쪽은 높은 질량 상태에서 창 왼쪽은 낮은 질량입니다. 참고 : 이미 아르곤 가스의 크세논의 동위 원소 (그림 3)에 의한 TOF 9400-9800 지역에서 신호가있을 것입니다. 튜닝 솔루션 동위 원소가 디스플레이에 줄무늬 (그림 4)로 표시되기 시작 때까지 기다리십시오. </li></ol><img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/4398/4398fig3.jpg" /> 세탁 솔루션과 물 헹굼 후 다양한 동위 원소에 대한 배경 수준을 보여주는 그림 3. 질량 보정 탭 창. TOF 9400-9800 주변 지역은 아르곤 가스의 크세논의 동위 원소에 해당하는, 항상 존재해야합니다. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/4398/4398fig3large.jpg" target="_blank">큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> . 4 &quot;SRC =&quot;/ files/ftp_upload/4398/4398fig4.jpg &quot;/&gt; 그림 4. 질량 보정 탭 창, DVS 튜닝 솔루션의 다양한 동위 원소에 대한 수직 줄무늬를 보여주는이 있습니다. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/4398/4398fig4large.jpg" target="_blank">큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> . <ol start="4"><li> 창을 읽기 당 질량 (ES)로 돌아가서 왼쪽 상단 모서리에있는 녹색 &quot;재생&quot;버튼을 누르십시오. 단계 2.1에서 선택한 각 동위 원소는 다른 색 선으로 표시됩니다. 기본 x 축은 초에 &quot;시간&quot;입니다. 사람들이 안정된 때까지 서로 다른 동위 원소의 양을 모니터링 할 수 있습니다. </li><li> 현재의 조정. 데이터 수집 설정 윈도우의 매개 변수 탭에서 드롭 다운 메뉴에서 &#39;현재&#39;를 선택합니다. = 0, 마무리 = 10, 단계 값 = 0.5, 정착 시간 = 200을 시작하자,하고 &#39;저장&#39;을 누릅니다. 읽기 창 히트 플레이 당 질량 (ES)에 돌아 가기를 클릭합니다. x 축은 이제 &quot;현재&quot;입니다. 참고 곳 동위 원소 피크 (그림 5), 그리고 R의 신호<html> ecord. 악기 설정 창 DAC 채널 설정 탭에서 &#39;현재&#39;아래로 스크롤하고 새 값을 입력합니다. 보도는 &quot;실제 현재 값을 설정&quot;을 선택한 다음 &quot;저장&quot;을 클릭하십시오. </li></ol><img alt="그림 5" src="/files/ftp_upload/4398/4398fig5.jpg" /> 그림 5. 현재 튜닝 프로필. <ol start="6"><li> 화장 가스의 조정. 드롭 다운 메뉴 변경 &#39;메이크업 가스를. &quot; = 0.95, 단계 값 = 0.05, 정착 시간 = 200 = 0.55, 최종을 시작하자. 저장을 누릅니다. 읽기 창 히트 플레이 당 질량 (ES)로 돌아 가기. x 축은 이제 &quot;메이크업 가스&quot;유량입니다. 기록 곳 동위 원소 피크의 신호. 끝 부분의 &quot;Gd155&quot;신호 (그림 6)의 급속한 증가를 관찰. DAC 채널 설정 탭으로 돌아 가기로 &quot;메이크업 가스&quot;를 아래로 스크롤하고 새 값을 입력합니다. 보도는 &quot;실제 현재 값을 설정&quot;을 선택한 다음 &quot;저장&quot;을 클릭하십시오. </li></ol>igure 6 &quot;SRC =&quot;/ files/ftp_upload/4398/4398fig6.jpg &quot;/&gt; 그림 6. 메이크업 가스 조정 프로필. <ol start="7"><li> 의 녹화 비율은 동위 원소 대 산화물을 원하는. 튜닝 솔루션의 두 번째 450 μl 주사를합니다. 매개 변수 탭에서 드롭 다운 메뉴에서 &quot;시간&quot;을 선택, 시간 = 200 정착, = 0, 최종에게 = 10, 단계 값 = 1을 시작해보세요. &quot;저장&quot;을 누르십시오. 창을 읽기에 따라 대용량의 &#39;재생&#39;(ES)를 누르십시오. 라인 (그림 7) 안정화 한 후 Tm169 또는 Tb159 (높은 값)에 대한 왼쪽 상단 상자에 값을 읽어 커서를 사용하고 또한 &quot;Gd155&quot;값 (높은 값의 &lt;3 %). 이 값은 나중에 참조 할 수 있도록 조정 파일에 저장할 수 있습니다. </li></ol><img alt="그림 7" src="/files/ftp_upload/4398/4398fig7.jpg" /> 그림 7. 현재 및 메이크업 가스를 최적화 한 후 튜닝 솔루션 신호 강도의 측정. <ol start="8"><li> 샘 청소ple 루프. DVS 워시 솔루션 500 μl 다음, 샘플 루프를 통해 MilliQ 물 3 ML를 삽입. 질량 보정 탭에서 &quot;실행&quot;을 눌러 청소의 진행 상황을 모니터링 할 수 있습니다. 줄무늬의 강도는 (그림 4) 배경 수준 (그림 3)으로까지 MilliQ 물 및 모니터 3 ML에 따라 다음 감소하기 시작 때까지 씻는다. </li></ol> 3. 실행 샘플 <ol><li> 취득 창을 엽니 다. 기본 설정 : 즉석에서 분석 = 수행 = 듀얼, 듀얼 카운트 보정 = 데이터를 분석하는 신호. 노이즈 감소가 선택됩니다. 원하는 경우 다음의이 변경 될 수 있습니다. 파일 이름을 입력합니다. 모든 파일은 E의 :/ / 드라이브에 저장해야합니다. </li><li> 인수 지연을 설정합니다. 샘플 루프와 천식 환자용 호흡 보조기를 두시 라고요 사이의 튜브의 길이에 따라 약 30 초의 전지 이벤트를 등록에 다소 시간이 지연 될 수 있습니다. 따라서, 합 &quot;취득 지연&quot;총과 &quot;감지기 세인트능력 지연은 &quot;최소 30 초이어야합니다. 탐지기 안정성 지연은 적어도 20 초이어야합니다. </li><li> 데이터 수집 시간을 설정합니다. &quot;취득 시간은&quot;당신이 샘플을 실행하려면 시간 (초)입니다. 전체 450 μl 샘플 루프를 작성하면 600 초 완료 할 필요합니다. 그것은 50-100 초는 샘플을 수행 오버 최소화하기 위해 런타임의 마지막에 추가하는 것이 좋습니다. </li><li> 시료의 Resuspension. 기계에 염분의 빌드 업 최소화하기 위해, 그것은 MilliQ 물에서 최종 resuspension 다음, 세포 염색의 끝에서 MilliQ 물에서 적어도 두 개의 세차가 완료하는 것이 좋습니다. MilliQ 물의 볼륨 펠릿은 당신이 시작 셀 및 전체 염색 절차 후 세포 회복의 수에 따라 달라집니다 셀을 resuspend하는 데 사용됩니다. 좋은 시작 장소는 10 6 (시작) 셀 / ML입니다. resuspension 후, 응집체를 제거 할 셀 스트레이너를 통해 필터링합니다. </li><li> 시작 샘플 실행합니다. 현재 샘플에 대한 새 파일 이름을 입력합니다.<html> , &quot;로드&quot;샘플을 삽입, 취득 창에서 다음 누르 &quot;실행&quot;을 &quot;주입&quot;로 전환하려면 샘플 루프 밸브를 전환합니다. </li><li> 셀 이벤트를 등록. 셀은 각 수직 동위 원소 / 마커 채널 (그림 8)에서 마르크의 수평 모음으로 스냅 샷 창에 표시됩니다. 대량 cytometer 1,000 세포 / 초를 등록 할 수 있지만, 셀 이벤트 사이의 더 나은 해상도는 일반적으로 300-500 셀 / 초에서 얻어진다. 이 ~ 1 셀 / 화면 재생의 평균에 해당합니다. 셀 이벤트 카운터가 뜨기 시작하기 전에 30 초까지 걸릴 수 있습니다. 이것은 &quot;에 On-The-Fly&quot;데이터 처리로 인해, 더 셀 이벤트 정보가 손실되지 않습니다. </li></ol><img alt="그림 8" src="/files/ftp_upload/4398/4398fig8.jpg" /> 8 그림. 샘플 동안 수집 창에 별도의 세 가지 세포 사건과 관련된 요소에 해당하는 장소의 수평 행을 보여 실행할 수 있습니다.ww.jove.com/files/ftp_upload/4398/4398fig8large.jpg &quot;대상 =&quot;_blank &quot;&gt; 큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오. <ol start="7"><li> 세포 사건의 품질. 각 동위 원소 채널뿐만 아니라 셀 이벤트 요금 좋겠어 어떤 배경을 확인할 수 있습니다. 대량 cytometer는 배경 위에 신호의 특정 증가로 &quot;셀 이벤트&quot;, 이렇게 무료로 금속 또는 언 바운드 항체는 &quot;셀 이벤트&quot;수를 변경할 수에서 배경 신호를 인식합니다. 또한, 너무 높은 농도에서 세포를 실행하는 것은 쌍으로 된 것 이벤트의 증가 된 수의 원인이 될 수 있습니다. 배경은 추가 세차 이상 세포 희석가 감소 할 수 있습니다. Doublets이 증가 런타임의 비용에서 큰 세포 희석하여 최소화 할 수 있습니다. </li><li> 샘플 데이터 수집을 완료. 수집 시간에 도달하면 데이터 수집이 완료된다. 있는 팝업 창이하기 전에 약간의가있을 것 &quot;OK&quot;버튼이 나타납니다, 다시이 &#39;에 On-The-Fly &quot;데이터 처리 때문입니다. 샘플 획득도 premat 중지 할 수 있습니다urely &quot;중지&quot;버튼을 눌러. 이 경우 이미 등록 모든 셀 이벤트는 출력 파일에 포함하여 처리됩니다. </li><li> 각 샘플 사이의 MilliQ 물을 적어도 500 μl의 주입은 또한 샘플 carryover를 최소화하는 데 도움이됩니다. </li></ol> 4. 사용 후 기계 청소 <ol><li> 솔루션을 씻으십시오. 최종 샘플을 실행하고 물 플러시 샘플 루프, 샘플 루프로 세척 솔루션의 450 μl를 삽입 한 후. 단계 2.8에서와 같이 데이터 수집 설정 창 (그림 9)의 질량 보정 탭에서 무료로 금속의 릴리스를 모니터링 할 수 있습니다. 무료 금속 신호가 감소하기 시작하면, MilliQ 물 3 ML로 플러시하고 배경 수준이 달성 될 때까지 모니터링 할 수 있습니다. </li></ol><img alt="그림 9" src="/files/ftp_upload/4398/4398fig9.jpg" /> DVS 워시 솔루션과 사후 운영 청소하는 동안 그림 9. 질량 보정 탭 창,. TOF 지역 9800-11000의 수직 줄무늬는 기계 청소하는 항체 - 라벨 동위 원소입니다. TOF 11,500 주변의 수직 줄무늬가 두 적외선 intercalator의 동위 원소에 해당합니다. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/4398/4398fig9large.jpg" target="_blank">큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> . 5. 컴퓨터를 종료 <ol><li> 악기 설정 창 RFG 컨트롤러 탭에서 &quot;플라즈마를 중지&quot;를 선택합니다. 절차가 완료되면 천식 환자용 호흡 보조기를 두시 라고요을 제거하라는 팝업 창이있을 것입니다. &quot;OK&quot;를 누릅니다. 카드 케이지 탭에서 히터를 끄십시오. 아르곤 공급 장치의 밸브를 닫습니다. </li><li> 천식 환자용 호흡 보조기를 두시 라고요의 제거. 조심스럽게 뒤로 당겨 스프레이 챔버에서 천식 환자용 호흡 보조기를 두시 라고요을 제거합니다. 나사가 빠지다 샘플 소개 단계 1.6에서 관 그리고 옆 넣습니다. 약간 느슨하게하기 위해 돌려서 메이크업 가스 도입 연결 한 다음, 천식 환자용 호흡 보조기를 두시 라고요을 당긴다. 함께 망 피팅으로 남겨두면 리터의 가능성을 줄일 수 있습니다검은 색 고무 O-링과 흰색 원뿔 플라스틱 조각을 osing. </li><li> 천식 환자용 호흡 보조기를 두시 라고요 청소. 단계 1.3에서와 같이 주사기와 튜브를 사용하여 5 %의 citranox과 천식 환자용 호흡 보조기를 두시 라고요의 두 포트를 Backflush. 스토어, 다음 사용 때까지 5 % citranox에 덮여. </li></ol>

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	<li>Bandura, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+cytometry:+Technique+for+real+time+single+cell+multitarget+immunoassay+based+on+inductively+coupled+plasma+Time-of-Flight+mass+spectrometry.">Mass cytometry: Technique for real time single cell multitarget immunoassay based on inductively coupled plasma Time-of-Flight mass spectrometry.</a> Anal. Chem. 81, 6813-6822 (2009).</li><li>Lou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymer-based+elemental+tags+for+sensitive+bioassays.">Polymer-based elemental tags for sensitive bioassays.</a> Angew. Chem., Int. Ed. 46, 6111-6114 (2007).</li><li>Majonis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Curious+results+with+palladium-+and+platinum-carrying+polymers+in+mass+cytometry+bioassays+and+an+unexpected+application+as+a+dead+cell+stain.">Curious results with palladium- and platinum-carrying polymers in mass cytometry bioassays and an unexpected application as a dead cell stain.</a> Biomacromolecules. 12, 3997-4010 (2011).</li><li>Leipold, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+mass+cytometry+methods+for+bacterial+discrimination.">Development of mass cytometry methods for bacterial discrimination.</a> Anal. Biochem. 419, 1-8 (2011).</li><li>Bendall, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+mass+cytometry+of+differential+immune+and+drug+responses+across+a+human+hematopoietic+continuum.">Single-cell mass cytometry of differential immune and drug responses across a human hematopoietic continuum.</a> Science. 332, 687-696 (2011).</li><li>Newell, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytometry+by+Time-of-Flight+shows+combinatorial+cytokine+expression+and+virus-specific+cell+niches+within+a+continuum+of+CD8++T+cell+phenotypes.">Cytometry by Time-of-Flight shows combinatorial cytokine expression and virus-specific cell niches within a continuum of CD8+ T cell phenotypes.</a> Immunity. 36, 142-152 (2012).</li></ol>

인간 면역 감시 센터, 대량 세포 계측법을 포함한 assays의 비용을 복구 전적으로 사용자의 비용을 청구 스탠포드 대학에서 서비스 센터에서 저자는 일 모두.

지난 몇 수십 년 동안 형광 유동 세포 계측법은 표면 표현의 측면과 기능 assays에서 모두 단일 세포를 분석 주력 방법이었습니다. 그러나, 형광 염료의 스펙트럼 중복의 문제가 동시에 마커의 수를 제한하고 있습니다. 12 개 이상의 동시 마커를 사용하여 실험이보고 된 반면, 필요한 보상의 양이 기술적으로 어려워집니다. 대신 fluorophores의, 대량 세포 계측법은 항체에 대한 라?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 </td></tr><tr><td> CyTOF TM 대량 cytometer </td><td> DVS 과학 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 솔루션을 씻으십시오 </td><td> DVS 과학 </td><td> 201071 </td><td> 물에 0.05 % 불화 수소산 산 </td></tr><tr><td> 솔루션을 튜닝 </td><td> DVS 과학 </td><td> 201072 </td><td> 0.5 ppm으로 라, CS, TB, TM, IR, 추적 질산 </td></tr><tr><td> 유럽​​ 연합 (EU) 함유 폴리스티렌 구슬 </td><td> DVS 과학 </td><td> 201073 </td><td> 약 1,000,000 / ML에서 제공 구슬, 자연 풍부한 유럽 연합 (EU) 동위 원소를 포함 </td></tr><tr><td> 멀티 란탄 족 함유 (라 / 홍보 / TB / TM / 루) - 폴리스티렌 구슬 </td><td> DVS 과학 </td><td> 아직 상업적으로에 사용할 수 </td><td> 등록 된 란탄 계열 원소의 자연 풍부한 동위 원소를 포함 </td></tr><tr><td> 질산 (집중) </td><td> 피셔 과학 </td><td> A467-500 </td><td> Optima 추적 메탈 순수 ICP-MS 학년 </td></tr><tr><td> 폴리스티렌 내내 아래로 튜브 셀 스트레이너 캡-5mL로 </td><td> BD </td><td> 352235 </td><td> 주입하기 전에 세포 샘플을 필터링하는 데 사용 </td></tr><tr><td> 규격 - Ject tuberkulin 주사기-1mL </td><td> 헨케 말대꾸 늑대 </td><td> 4010-200V0 </td><td> 실리콘 무료, 라텍스 무료 </td></tr><tr><td> 규격 - Ject의 주사기-3 ML </td><td> 헨케 말대꾸 늑대 </td><td> 4010.000V0 </td><td> 실리콘 무료, 라텍스 무료 </td></tr><tr><td> MilliQ 물 </td><td></td><td></td><td> 18 MΩ 순수한 물, 유리 또는 상업적 세제 (바륨 현재의 높은 수준으로 인해)으로 세척 한 플라스틱 병에 저장해서는 안됩니다. </td></tr><tr><td> Citranox </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> Z273236 </td><td> 산성 세제 </td></tr><tr><td> 아르곤 가스 </td><td> Praxair </td><td> AR 5.0UH-T </td><td> 99.999 % 초 고순도 </td></tr></tbody></table>

mass cytometry: protocol for daily tuning and running cell samples on a cytof mass cytometer

최근 몇 년 동안, 단일 세포의 급속한 분석은 일반적으로 유동 세포 계측법과 휘황-라벨 항체를 사용하여 수행되었습니다. 그러나, 형광 방출의 스펙트럼 중복의 문제는 동시 프로브의 수를 제한하고 있습니다. 반면, 오히려 fluorophores보다 ICP-MS. 1 액체 단일 셀 도입 시스템 DVS 과학 커플의 새로운 CyTOF 질량 cytometer는 매우 강화 금속 동위 원소를 포함하는 킬레이트 화 고분자는 항체 또는 기타 특정 프로브에 연결된다. 2-5가 때문에 금속 순도와 질량 cytometer의 대량 해상도, 인근 동위 원소로부터 &quot;스펙트럼 중복&quot;은 없습니다, 따라서 보상 매트릭스 필요. 또한, 란탄 족 금속의 사용으로 인해, autofluorescence 대한 동등한 따라서 거기에는 생물학적 배경이 없습니다합니다. 원자 질량 103-203, 이론적으로 최대 100 레이블이 동시에 구별 할 수에 걸쳐 대량 창을 갖추고 있습니다. 현재, 35 개 이상의 채널 샘플 면역 프로파일의 전례 절개를 허용 DVS 과학에서 사용할 수있는 킬레이트 시약을 사용하여 사용할 수 있습니다. 6-7 대량 세포 계측법에 단점은 프로브 당 별도의 금속 동위 원소 (앞으로 또는 측면 분산 가능성이 이에 상응하는 금액),하고 파괴적인 기술 (복구를 정렬의 어떠한 가능성)이라는 사실에 대한 엄격한 요구 사항이 포함되어 있습니다. 대량 cytometer의 현재 구성도 만의 셀 전송 속도 ~ 25 %, 따라서 세포의 높은 입력 번호를 필요가 있습니다. 대량 cytometer의 최적의 일일 실적은 몇 가지 단계가 필요합니다. 최적화의 기본 목표는 M 신호 강도를 줄이고 M 16에서 원하는 신호를 방해한다는 산화물 (M 16)의 형성을 최소화하면서 원하는 금속 동위 원소 (M)의 측정 신호 강도를 극대화하는 것입니다. 첫 번째 단계는 시스템 때문에 고온, 안정적 I을 따뜻하게하는 것입니다CP 플라즈마가 설립되었습니다. 둘째, 현재와 메이크업 가스 유량에 대한 설정은 매일 최적화해야합니다. 샘플 수집하는 동안, 최대 셀 이벤트 요금은 검출기 효율과 처리 속도 1,000 세포 / 초에 의해 제한됩니다. 그러나, 느린 셀 이벤트 속도 (300-500 셀 / 초)은 샘플의 품질에 따라 보통 셀 이벤트 사이하므로 더 나은 해상도가 doublets와 파편을 통해 그대로 singlets을 극대화 할 수 있도록하는 것이 바람직하다. 마지막으로 하루의 끝에 기계의 적절한 청소는 무료 금속에 의한 배경 신호를 최소화하는 데 도움이됩니다.

위의 프로토콜을 따르면 네 가지를 달성해야합니다. 첫째, 대량 cytometer를위한 충분한 워밍업 시간을 허용하는 것은 최적의 신호와 최소한의 산화물 형성에 필요한 뜨거운, 안정적 플라즈마를 생성합니다. MilliQ 물과 DVS 워시 솔루션 (그림 9)와 대량 cytometer의 두 번째, 적절한 세척은 (그림 8) 샘플 수집하는 동안 배경을 감소하는 데 도움이, 금속 흡착의 수준 튜브와 기계의...

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Mass Cytometry: Protocol for Daily Tuning and Running Cell Samples on a CyTOF Mass Cytometer

CyTOF 질량 cytometer의 성능의 일상 튜닝 및 최적화에 필요한 단계에 설명되어 있습니다. 최적의 샘플 준비와 유량의 댓글이 논의

대량 세포 계측법 : CyTOF 질량 Cytometer에 매일 조정하고 실행 세포 샘플에 대한 프로토콜

In recent years, the rapid analysis of single cells has commonly been performed using flow cytometry and fluorescently-labeled antibodies. However, the ...

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22.7K 조회수.  Stanford University. CyTOF 질량 cytometer의 성능의 일상 튜닝 및 최적화에 필요한 단계에 설명되어 있습니다. 최적의 샘플 준비와 유량의 댓글이 논의