이 작품은 건강 (AR-49419, DD), 근육질 영양 장애 협회 (DD), 그리고 NIH 훈련 보조금 T90DK70105 (CH)의 국립 연구소에서 보조금에 의해 지원되었다.

1. 편집 판단리스트 근육 예를 생체의 수축성과 수동 등록 정보의 평가 편집 판단리스트 근육의 수축성 및 수동 속성은 체외 근육 테스트 시스템에 오로라 과학을 사용하여 예 생체을 측정하고 있습니다. 자료 및 장비 표 1을 참조하십시오. 1.1 장비 준비 <ol><li> 물 재킷 조직 목욕탕에 oxytube을 확보하여 조직 - 장기 욕조를 조립. 근육 장착 장치에 조립 목욕탕을 연결합니다. oxytube에 가스 라인을 연결합니다. 물 재킷 조직 목욕탕에 물 순환 라인을 고정하고 목욕 배수에 바늘 밸브를 배치합니다. </li><li> 순환 물 목욕의 전원을 켜고 30 ° C 7 온도를 조정합니다. 95 %의 5 PSI (평방 인치당 파운드) O 2 -5 %의 CO 2 oxytube을 통해 흐를 수 있도록 허용합니다. 벨소리의 버퍼와 목욕을 입력합니다. 최소한의 버퍼를 평형oxytube 밸브를 조정하여 지속적으로 가스의 흐름과 10 분. </li><li> (stimulator, 듀얼 모드 레버 시스템 및 신호 인터페이스) 악기를 켭니다. 제조업체의 지시에 따라 동적 근육 제어 (DMC) 소프트웨어를로드합니다. </li></ol> 1.2 편집 판단리스트 근육 해부 모든 동물 연구 기관 동물 케어 및 사용위원회의 승인을 받아야합니다. <ol><li> 2.5 μl / 마취 칵테일 (자료 섹션을 참조)의 g 몸무게의 intraperitoneal 주사로 마우스를 마취. 수술 동안, 진정 작용의 깊이는 발가락 핀치를 수행하여 확인되었다. 마취에서 동물을 유지하기 위해 필요한 경우 초기 마취 선량의 10 %의 추가 요금이 부과가 administrated입니다. 뒷다리 다리를 면도. 가열 패드에 마우스를 배치하여 분해 절차 ° C 전에 37 번 몸 코어 온도를 유지하고 있습니다. 몸의 온도는 지속적으로 직장 temperat를 측정하여 감시하고 있습니다열 프로브를 사용하여 우레. </li><li> 해부 보드 (그림 1)에서 마우스 부정사를 배치합니다. 다리 피부 보지 뒷다리의 근육을 노출합니다. 이 양장점 핀, gracilis 근육의 발에 하나 다른을 사용하여 sylgard 블록에 다리를 고정합니다. 37 핵심 체온을 유지하기 위해 마우스 본체 위에 열 램프를 배치 ° C. 지속적으로 벨소리의 버퍼와 모든 노출 된 근육을 superfuse. 진공 라인을 통해 과도한 버퍼를 배수한다. </li><li> 말초 TA의 힘줄과 발을 향해 피부를 박리하여 stereomicroscope 아래의 신근 인대를 쉽게받을 수 있습니다. 부드럽게 TA 근육을 덮고있는 근막을 제거합니다. 말초 TA의 힘줄을 공개 할 수있는 신근 인대를 잘라. </li><li> 말초 TA의 힘줄을 잘라과 TA 근육 해제 껍질로 사용합니다. 조심스럽게 그 근위 첨부 파일에있는 TA 근육을 제거합니다. TA의 근육 vasculature의 파열로 인한 출혈이 흡수 할 수있는 편집 판단리스트 근육 옆에 벨소리의 버퍼 불린면의 얇은 조각을 놓으십시오. 초과 버퍼와 피를 제거하는 진공 라인을 사용합니다. </li><li> 말초 편집 판단리스트 근육의 근육 힘줄의 접합 (MTJ) (그림 2)에서 빵 실크 봉합사를 사용하여 루프 매듭에 이어 두 사각형 매듭 묶는. 근위 편집 판단리스트 근육을 노출 할 수있는 팔뚝 femoris 근육의 말초 부분에 절개를합니다. 근위 편집 판단리스트 힘줄의 MTJ에 노트의 동일한 세트 (그림 2)를 반복합니다. 같은 봉합 라인을 사용하여 두 사각형 매듭과 근위 나 원위 노트 하나에 레버 팔 후크를 연결합니다. 나머지 봉합 라인을 잘라. </li><li> 근위 봉합 매듭에 뛰어난 근위 편집 판단리스트 힘줄을 잘라. 후크와 편집 판단리스트 근육를 들어서 근육 아래에있는 vasculature을 잘라. 뒷다리에서 편집 판단리스트 근육을 제거하는 말초 봉합 매듭에 열등 말초 편집 판단리스트 힘줄을 잘라. 벨소리의 버퍼 불린면의 한 부분으로 노출 뒷다리을 다룹니다. </li><li> 레버 암에 후크를 연결합니다. 수직으로 근육을 정렬2 개의 전극 사이에 있습니다. 고정 포스트에 말초 봉합 라인을 고정합니다. 잠수함 벨소리의 버퍼에있는 근육에 조직 목욕을 올려요. 이중 고급 / 굵은 번역 단계를 사용하여 1.0 g에 휴식 긴장을 조절하고 근육은 적어도 10 분 동안 평형을 할 수 있습니다. </li></ol> 1.3 편집 판단리스트 근육의 수축성 및 수동 속성을 측정 다음 측정의 각각에 대한 DMC 소프트웨어의 매개 변수를 설정 표 2를 사용하십시오. 동적 근육 분석 (DMA) 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석 할 수 있습니다. 1.3.1은 편집 판단리스트 근육의 수축 특성을 측정 <ol><li> 근육 8 안정화 떨어져 60 초와 150 Hz에서 편집 판단리스트 근육을 세 번을 자극한다. </li><li> 최적의 길이 (소호)를 결정하기 위해 다른 휴식 긴장에서 편집 판단리스트 근육을 자극한다. 최적의 길이는 근육이 최대 트 장력을 개발되는 길이입니다. 로 근육을 허용2 분에 휴식을 취하실 수 있습니다. </li><li> Lo라고 할 수있는 휴식 긴장을 조정합니다. 단일 트의 자극에 근육 힘을 측정합니다. 절대 트 포스 (PT), 최대 인장 (TPT)와 PT의 반 휴식 시간 (½ RT)에 시간을 확인합니다. 근육은 2 분 동안 휴식을 취 할 수 있습니다. </li><li> Lo라고 할 수있는 휴식 긴장을 조정합니다. 다른 자극 주파수 (50, 80, 100, 120, 150 및 200 Hz에서)에서 생성 파상풍의 근육 힘을 측정합니다. 근육 힘이 최대에 도달 절대 최대 파상풍의 근육 힘 (PO)를 확인합니다. TPT와 ½ 포 9 RT를 측정합니다. </li><li> 근육이 5 분을 위해 휴식을 취 할 수 있습니다. Lo라고 할 수있는 휴식 긴장을 조정합니다. 사이클 사이의 2 분 나머지 편심 수축의 10 사이클을 적용합니다. 편심 수축의 각 사이클 후 포의 상대적인 힘의 손실을 계산합니다. </li><li> 장치에서 편집 판단리스트 근육을 분리하고 봉합 사이트에서 힘줄을 잘라. 근육 서부 유럽 표준시 무게를 결정하고 근육 단면적 (CSA)를 계산6,10. </li></ol> 1.3.2은 편집 판단리스트 근육의 수동적 인 속성을 측정 <ol><li> contralateral 편집 판단리스트 근육을 해부하고 1.2 항에 설명 된대로 장치에 첨부​​ 2 ~ 7 단계를 반복합니다. </li><li> 근육은 10 % 로페즈의 증가 160 %의 소호에 긴장하는 여섯 단계 스트레칭 프로토콜에 따라 편집 판단리스트 근육합니다. 응력 - 변형의 프로필 6 분석합니다. </li><li> 10% 소호에서 스트레칭과 근육을 들고 한 후 다음 시간 프레임에서 응력 완화 속도 (SRR)를 측정하여 편집 판단리스트 근육의 점성 재산을 평가 : 정상에서 0.1s 후 피크 (PP)에, 0.1에서 0.2s로 0.2 0.5s PP에서 0.5에서 1 초 PP와 1 1.5s pp.에 PP, </li><li> 마우스가 마취에서있는 동안 연구의 끝에서 자궁 경부 전위 및 / 또는 목 베기 마우스를 안락사시켜야. 장치에서 편집 판단리스트 근육을 분리하고 봉합 사이트에서 힘줄을 잘라. 근육 서부 유럽 표준시 무게를 결정하고 근육 간 SE를 계산ctional 지역 (CSA) 6, 10. </li></ol> 2. 현장에서는 TA 근육의 수축성 등록 정보의 평가 TA 근육의 수축 특성 시츄 근육 테스트 시스템에 오로라 과학을 사용하여 측정하고 있습니다. 자료 및 장비 표 1을 참조하십시오. 2.1 장비 준비 <ol><li> 37 열 제어 동물 단계를 가열 ° C 순환 물 목욕을 사용합니다. </li><li> (stimulator, 듀얼 모드 레버 시스템 및 신호 인터페이스) 악기를 켭니다. 제조업체의 지시에 따라 DMC 소프트웨어를로드합니다. </li></ol> 현장 힘 측정에 대한 TA 근육의 2.2 준비 <ol><li> 마우스를 마취, 뒷다리 다리를 면도하고 1.2 항에서 3 단계에서 설명 된대로 TA 근육을 쉽게받을 수 있습니다. </li><li> 슬개골 인대 usi 주위에 두 사각형 매듭을 묶게NG 빵 실크 봉합사. 말초 TA 근육의 MTJ (그림 2)에서 루프 매듭에 이어 두 사각형 매듭을 묶게되는 순간, 같은 봉합 라인을 사용하여 말초 TA의 힘줄의 중심에서 ~ 10mm 루프를두고 또 다른 이중 사각형 매듭을 묶게. 루프의 측면에 두 번째 더블 광장 매듭를 놓습니다. </li><li> 뒷다리에서 핀을 제거하고 동물이 발생하기 쉬운 위치. 팔뚝 femoris 근육을 쉽게받을 수 있습니다. 좌골 신경을 표시하는 방법으로 중간 선에 절개를합니다. 좌골 신경의 근위 끝 주위에 두 사각형 매듭을 묶게. 봉합 라인의 한쪽 트림과 매듭에 뛰어난 신경을 잘라. 부드럽게, 봉합 라인을 사용하여 무릎쪽으로 좌골 신경을 뽑아 무료로 주변 결합 조직 ~의 길이의 5mm 선택을 취소합니다. 이 절차를 수행하는 동안 신경을 확장하고 지속적으로 벨소리 버퍼로 신경을 superfuse하지 마십시오. </li><li> 등의 3 단계 1에서 설명하는 contralateral TA 근육을 준비합니다. 리의 한 부분으로 노출 된 뒷다리 중 하나를 커버nger의 버퍼면을 흡수 했죠. 지속적으로 사전 예열 (37 ° C) 벨소리의 버퍼와 함께 두 다리를 모두 superfuse. 진공 라인을 통해 과도한 버퍼를 제거합니다. </li><li> 동물 플랫폼에서 발생하기 쉬운 동물을 배치합니다. 동물 플랫폼에 무릎 클램프 홀더를 첨부하여 슬개골 인대 봉합 라인을 사용하여 두 사각형 매듭과 금속 핀에 두 무릎을 확보. 양장점 핀을 사용하여 sylgard 블록에 모두 발을 핀. 열 제어 단계에 동물 플랫폼을 고정합니다. 37 ° C.에있는 동물 코어 체온을 유지하기 위해 열 램프를 배치 </li><li> 동물 플랫폼에 전극 홀더를 고정하고 봉합 라인을 사용하여 전극의 좌골 신경을 마련. 거리에 뒷다리 근육의 전극세요. MTJ의 봉합 사이트에서 발견 뒷다리의 말초 TA의 힘줄을 잘라. 레버 팔 후크에 말초 TA의 힘줄의 봉합 루프를 연결합니다. 따뜻한 벨소리의 버퍼 불린면에 노출 된 뒷다리의 근육을 다룹니다. </li></ol><ol><li> DMC 소프트웨어의 매개 변수를 설정하기 위해 표 2를 사용하십시오. TA 근육의 수축성 속성을 결정하는 섹션 1.3.1에 ​​설명 된 동일한 프로토콜을 따르십시오. DMA 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석 할 수 있습니다. </li><li> 수축성 재산 측정 후, 레벨러 암 후크에서 말초 TA의 힘줄의 봉합 루프를 분리합니다. TA 근육을 제거합니다. 근육 서부 유럽 표준시 무게를 결정하고 CSA 10 계산합니다. </li><li> 1-3 위에서 설명한 단계에 따라 contralateral TA 근육의 수축 특성을 측정합니다. 연구의 끝에서 제도적 지침에 따라 마우스를 안락사시켜야. </li></ol>

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관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

이 프로토콜에서는, 우리는 수축성 및 수동 등록에게 편집 판단리스트 근육과 TA 근육의 수축 특성을 측정하기위한 생리 assays을 설명했습니다. 근육 생리학 연구의 주요 관심사는 대상 근육의 산소입니다. 벨소리의 버퍼에서 산소 확산이 시험 관내 분석에서의 근육의 중심에 도달 할 수 있기 때문에 큰 근육 (예 : TA 근육 등)의 경우, 현장 접근을 사용하는 것이 좋습니다. 현장 접근에 정상적인 혈액 공급 및 hypoxia - 관련을 방해하지 않도록 인공 효과는 피할 수 있습니다. 편집 판단리스트 근육 생리학 연구에서 가장 일반적으로 사용되는 근육 중 하나입니다. 전체 근육의 적절한 산소로 인해 근육의 작은 크기 체외 시스템에 달성 할 수 있습니다. 또한, 체외 시스템에서이 동봉 된 이온의 농도 (CA 2 +, NA +와 K +)을 조작하는 환경과 chemi을 제공합니다최적의 근육 힘 생성에 필요한 CAL을 (ATP과 포도당). 이 힘 생산에서 이러한 변수의 영향을 연구 할 수있는 좋은 기회를 제공합니다. 사지 근육의 수축성 및 수동 속성의 정확한 측정은 골격근 기능을 연구하는 것이 중요합니다. 이러한 속성 중 특성 변화는 종종 다양한 근육 질병의 특징으로 간주됩니다. 이러한 매개 변수의 변화는 실험 치료가 효과적인지 여부를 결정하는 중요한 지표입니다.

<table border="1"><tbody><tr><td> 자료 </td><td> 제조업 자 </td><td></td><td> 사양 및 의견 </td></tr><tr><td> 조직 - 장기 목욕 </td><td> Radnoti LLC, CA, USA </td><td></td><td> 물 재킷 조직 목욕탕 (고양이 # 158351-LL), 산소 disperser 관 (고양이 # 160192), Luer 밸브 (고양이 # 120722) </td></tr><tr><td> 물 목욕을 순환 </td><td> 피셔 과학, Waltham, MA, USA </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 가스 혼합 </td><td> Airgas 국가, 샬롯, NC, USA </td><td></td><td> 95% O 2 5 % CO 2 </td></tr><tr><td> 체외 근육 기능 분석 장치에 </td><td> 오로라 과학, 오로라, ON, 캐나다 </td><td></td><td> 이 시스템은 stimulator (모델 # 701A), 듀얼 모드 레버 시스템 (모델 # 300C 또는 305C), 신호 인터페이스 (모델 # 604B) 및 시험 AP의 구성paratus (모델 # 800A)은 수직 조직 장기 목욕을 마운트 할 수 </td></tr><tr><td> 체외 근육 기능 분석 소프트웨어 </td><td></td><td></td><td> 동적 근육 제어 (DMC) 소프트웨어 및 동적 힘이 데이터 분석 (DMA)는 소프트웨어 </td></tr><tr><td> 0.9 % NaCl에 혼합 마우스 마취 칵테일 </td><td> 기관 가이드 라인을 참조 </td><td></td><td> 케타민 (25 MG / ML), xylazine (2.5 MG / ML)와 acepromazine (0.5 MG / ML). 수술 동안, 초기 용량의 10 %의 추가 요금이 부과가 마취에서 동물을 유지하는 데 필요한 될 수 있습니다. </td></tr><tr><td> Sylgard </td><td> 세계 정밀 악기 </td><td> 고양이 # SYLG184 </td><td></td></tr><tr><td> 맞춤 제작 Plexiglas의 분해 보드 </td><td> 디자인 하우스에서 </td><td></td><td> 1 그림 참조 </td></tr><tr><td> 가열 램프 </td><td> 텐서 조명 회사,보스턴, MA, USA </td><td></td><td> 해부하는 동안 마우스 따뜻하게 유지하는 15 와트 램프 </td></tr><tr><td> 벨소리의 버퍼 </td><td> 화학 물질은 피셔 과학, Waltham, MA, USA에서 구입 </td><td></td><td> MM의 구성 : 1.2 아뇨 2 PO 4 (고양이 # S369), 1 MgSO 4 (고양이 # M63), 4.83 KCl (CAT # P217), 137 NaCl (CAT # 217), 24 NaHCO 3 (고양이 # S233), 2 CaCl 2 (고양이 # C79)와 10 포도당 (CAT # D16). 개별적으로 화학 물질을 분해하고 위에서 열거 한 순서로 섞는다. 4 ° C.에 저장 </td></tr><tr><td> 스테레오 해부 현미경 </td><td> 니콘, 멜빌, NY, USA </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 해부 도구 </td><td> 정밀 과학 도구, 포스터 시티, CA, USA </td><td></td><td> 거친 포셉, 굵은 가위, 고급 집게 (직선 및 45 ° 각도) </td></tr><tr><td> # 4-0 합 사형의 실크 봉합 </td><td> SofSilk USSC 쓰tures, 노르 워크, CT, USA </td><td> 고양이 # SP116 </td><td></td></tr><tr><td> 맞춤 제작 스테인리스 스틸 훅 </td><td> 작은 부품 주식회사 </td><td></td><td> 이 &#39;힘 변환기 305C 또는 2.5 오래 S / S 304V (0.18 &#39;&#39; 직경)&#39;변환기 300C 오래 S / S 304V (0.012 &#39;&#39; 직경) (고양이 # ASTM A313) </td></tr><tr><td> 현장 근육 기능 분석 시스템 </td><td> 오로라 과학, 오로라, ON, 캐나다 </td><td></td><td> 시스템 (809B, 현장 마우스 장치에서)는 stimulator (모델 # 701B), 듀얼 모드 레버 시스템 (모델 # 305C), 신호 인터페이스 (모델 # 604A) 및 온도 제어 footplate 장치 (모델 # 809A로 구성 ) </td></tr><tr><td> 체외 근육 기능 분석 소프트웨어 </td><td> 오로라 과학, 오로라, ON, 캐나다 </td><td></td><td> 동적 근육 제어 (DMC) 소프트웨어 및 동적 힘이 데이터 분석 (DMA)는 소프트웨어 </td></tr><tr><td> 맞춤 제작 TA 분석 동물 플랫폼 </td><td> 디자인 하우스에서 </td><td></td><td> 2 그림 참조 </td></tr><tr><td> 맞춤 제작 스테인리스 스틸 훅 </td><td> 작은 부품 주식회사 </td><td> 고양이 # ASTM A313 </td><td> 0.5 &#39;긴 S / S 304V (0.18 &#39;&#39; 직경) </td></tr><tr><td> 맞춤 제작 25g까지 백금 전극 </td><td> Chalgren 기업, 길로이, CA </td><td></td><td> 이 24G 전기 전선에 납땜이 0.016 &#39;두꺼운 백금 와이어 </td></tr></tbody></table> 표 1. 재료 및 장비.

evaluation of muscle function of the extensor digitorum longus muscle ex vivo and tibialis anterior muscle in situ in mice

몸의 움직임은 주로 골격근의 기계적 기능에 의해 제공됩니다. 골격근은 근육 결합 조직에 의해 끼 우고 아르 myofibers 수많은 번들로 구성되어 있습니다. 각 myofiber는 myofiber의 길이를 따라 길이 방향으로 실행 많은 myofibrils이 포함되어 있습니다. Myofibrils 근육의 수축성 장치이며, 그들은 sarcomeres으로 알려진 반복적으로 수축 단위로 구성되어 있습니다. sarcomere 단위는 Z 디스크와 titin 단백질에 의해 이격된다 고를와 마이 오신 필라멘트가 포함되어 있습니다. 골격근의 기계적 기능은 근육의 수축 및 수동 특성에 의해 정의됩니다. 수축성 속성은 근육 수축, 근육 휴식의 힘 생성 및 시간의 기간 동안 생성 된 힘의 양을 특징하는 데 사용됩니다. 근육 수축 (예 고를와 마이 오신 필라멘트의, 칼슘의 항상성, ATP / ADP 비율 등 간의 상호 작용 등)에 영향을 미치는 요인은 수축성 prope에 영향을 미칩니다rties. 수동적 인 속성이 수축의 부재에있는 근육의 탄성과 점성 특성 (강성 및 점도)을 참조하십시오. 이 속성이 1-2 (주로 콜라겐) 세포와 세포 구조 구성 요소 (예 : titin 등)와 결합 조직에 의해 결정됩니다. 수축성 및 수동 속성은 근육 기능의 두 분리 측면입니다. 예를 들어, 팔꿈치 굴곡은 팔 위쪽의 뒤쪽 칸의 상부 팔과 근육의 수동적 스트레칭의 앞 칸에 근육의 수축에 의해 달성된다. 진정한 근육 기능을 이해하려면 두 수축성 및 수동 속성은 공부를해야합니다. 근육의 수축 및 / 또는 수동적 인 기계적 성질은 종종 근육 질환에 손상됩니다. 좋은 예 Duchenne 근육질 영양 장애 (DMD), dystrophin 결핍증 세에 의해 발생 질병을 낭비 심한 근육입니다. Dystrophin은 cytoskeletal prote입니다그런 근육 수축 (4) 동안 근육 세포막 (sarcolemma)가 안정화. dystrophin의 부재에서 sarcolemma는 힘 전송 중에 발생하는 전단 힘에 의해 손상되었습니다. 찢어이 막 근육 세포의 죽음과 수축성 기계의 손실로 연결 연쇄 반응을 시작합니다. 결과적으로, 근육의 힘이 감소되어 죽은 myofibers는 fibrotic 조직 (5)에 의해 대체됩니다. 이 후 변경 사항은 근육 강성 6 증가시킵니다. 이러한 변화의 정확한 측정은 질병의 진행을 평가하고 새로운 유전자 / 세포 / 약리 개입의 치료 효능을 결정하는 것이 중요 가이드를 제공합니다. 여기, 우리는 신근 digitorum longus의 (편집 판단리스트) 근육과 tibialis 앞쪽 (TA) 근육의 수축 특성의 두 수축성 및 수동 기계적 특성을 평가하는 두 가지 방법을 제시한다.

다음 결과는 이전 보고서 6,9에서 표현됩니다. 데이터가 평균의 평균 ± 표준 오차로 표시됩니다. 표 3은 정상 BL10, 연령 4 ~ 6 개월 dystrophin - 결함 (MDX) 마우스의 편집 판단리스트 근육의 morphometric 속성을 보여줍니다. 그림 4는 대표 수축성 및 수동 속성을 보여줍니다 BL10과 MDX 마우스에서 편집 판단리스트 근육. 편집 판단리스트 근육의 수축성 속성은 특정 (절대 CSA로 나누어 힘) 트 포스 (그림 4A), 특정 최대 파상풍의 힘 (그림 4B), TPT와 ½ 절대 최대 파상풍의 힘 RT를 포함하여 다음과 같은 조건이 설명되어 있습니다 (그림 4C와 D). TPT과 ½ RT도 절대 트 포스에서 계산 할 수 있습니다. 응력 - 변형 프로파일 (그림 4E)과 SRR (그림 4 층)편집 판단리스트 근육의 수동적 인 속성을 설명하는 데 사용되는 재. dystrophin의 부재는 편집 판단리스트 근육 6,9의 수축성 및 수동 특성에 큰 영향을 미치고 있습니다. 특정 트와 파상풍의 힘이 크게 MDX 편집 판단리스트 근육에 감소된다. ½ RT는 MDX 편집 판단리스트 근육에 상당히 느린 반면 TPT는 상당히 빨라집니다. 응력 - 변형 프로파일은 강성이 크게 MDX 편집 판단리스트 근육에 증가 제안합니다. 포스트 피크 응력이 더 빠르게 감소하면서 MDX 편집 판단리스트 근육도 정상 응력에 도달하기 전에 훨씬 훨씬 더 높은 저항 힘 (수동 스트레스)를 산출. 또한, SRR은 BL10 편집 판단리스트 근육의 비교 MDX 편집 판단리스트 근육에 상당히 높은했습니다. 통계 분석 두 그룹 사이에 통계적 유의미성은 학생 t-테스트에 의해 분석된다. s에 대한여러 그룹 간의 tatistical 중요성, 편도 또는 Bonferroni 게시물 임시 분석에 이어 양방향 ANOVA 분석은 SAS 소프트웨어 (SAS 연구소 주식회사 캐리, NC)를 사용하여 권장합니다. 차이는 때 P는 &lt;0.05 중요한 간주됩니다. 표 1. 재료 및 장비. <table border="1"><tbody><tr><td class="jove_content_small"> 실험 </td><td class="jove_content_small"> 휴식 긴장 (g) </td><td class="jove_content_small"> 펄스 주파수 (Hz) </td><td class="jove_content_small"> 펄스 폭 (밀리 초) </td><td class="jove_content_small"> 자극 기간 (밀리 초) </td><td class="jove_content_small"> 스트레치 길이 </td><td class="jove_content_small"> 스트레치 기간 (밀리 초) </td><td class="jove_content_small"> 스트레치 속도 </td><td class="jove_content_small"> 코멘트 </td></tr><tr><td colspan="9"> 1. 편집 판단리스트 근육 예를 생체의 수축성 및 수동 특성 평가 </td></tr><tr><td colspan="9"> 1.3.1은 편집 판단리스트 근육의 수축 특성을 측정 </td></tr><tr><td> 1. 데우다 </td><td> 1.0 </td><td> 150 </td><td> 0.2 </td><td> 300 </td><td></td><td></td><td></td><td> 각 자극 사이에 60 초 동안 근육을​​ 휴식. 이 예비 파상풍의 수축이 이후의 측정을 위해 근육을 안정. </td></tr><tr><td> 2. 최적 근육 길이 (소호) </td><td> 0.5, 1.0, 1.5 및 2.0 </td><td> 1 </td><td> 0.2 </td><td> 300 </td><td></td><td></td><td></td><td> 근육은 각 자극 사이에 30 초에 휴식을 할 수 있습니다. 디지털 캘리퍼스를 사용하여 근육 최적의 길이를 측정합니다. </td></tr><tr><td> 3. 싱글 트위어tch 힘 (PT) </td><td> Lo라고하는 휴식 긴장을 조정 </td><td> 1 </td><td> 0.2 </td><td> 300 </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 4. 파상풍의 근육 힘 </td><td> Lo라고하는 휴식 긴장을 조정 </td><td> 50, 80, 100, 120, 150 및 200 </td><td> 0.2 </td><td> 300 </td><td></td><td></td><td></td><td> 근육이 각각의 자극 사이에 1 분을 위해 휴식을 취 할 수 있습니다. 최대 절대 파상풍의 힘 (PO)를 생성 빈도를 결정합니다. </td></tr><tr><td> 5. 편심 수축 </td><td> Lo라고하는 휴식 긴장을 조정 </td><td> 최대 파상풍의 힘 (PO)를 생성 주파수를 사용 </td><td> 0.2 </td><td> 700 </td><td> 10 % 로페즈 </td><td> 자극 기간의 마지막 200 밀리 초 </td><td> 0.5 소호 / 초 </td><td> 사이클 사이의 2 분 나머지 10 개 사이클에 대한 편심 수축을 반복합니다. </td></tr><tr><td> 6. 편집 판단리스트 근육의 CSA </TD&gt; <td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td> CSA = (근육 질량 (g) / [1.06 g / cm 3 개 (소호 X 0.44)]. 1.06 g / cm 3 근육 밀도이며, 0.44는 비율을 Lo라고 할 수있는 편집 판단리스트 근육 섬유의 길이입니다. </td></tr><tr><td colspan="9"> 1.3.2은 편집 판단리스트 근육의 수동적 인 속성을 측정 </td></tr><tr><td> 1. 여섯 단계는 프로토콜을 스트레칭 </td><td> Lo라고하는 휴식 긴장을 조정 </td><td></td><td></td><td></td><td> 10 % 로페즈 </td><td></td><td> 2cm / 초 </td><td> 160%의 소호에 도달 때까지 Lo라고 10 %의 증가와 스트레칭 프로토콜을 반복합니다. 신축성주기 사이의 Alow 1.5 초. </td></tr><tr><td> 2. SRR </td><td> Lo라고하는 휴식 긴장을 조정 </td><td></td><td></td><td></td><td> 10 % 로페즈 </td><td></td><td> 2cm / 초 </td><td> SSR은 t과 스트레스의 차이를 나누어 계산합니다IME는 한 번 프레임에 두 개의 시간 사이에 경과 된 점. </td></tr><tr><td colspan="9"> 2.3 TA 근육의 수축 특성을 측정 </td></tr><tr><td> 1. 데우다 </td><td> 4.0 </td><td> 150 </td><td> 0.2 </td><td> 300 </td><td></td><td></td><td></td><td> 각 자극 사이에 60 초 동안 근육을​​ 휴식. </td></tr><tr><td> 2. 최적 근육 길이 (소호) </td><td> 3.0, 4.0, 5.0, 6.0 및 7.0 </td><td> 1 </td><td> 0.2 </td><td> 300 </td><td></td><td></td><td></td><td> 근육은 각 자극 사이에 30 초에 휴식을 할 수 있습니다. 디지털 캘리퍼스를 사용하여 근육 최적의 길이를 측정합니다. </td></tr><tr><td> 3. TA 근육의 CSA </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td> CSA = (근육 질량 (g) / [1.06 g / cm 3 개 (소호 X 0.6)]. 0.6은 소호 RA에 TA 근육 섬유 길이티오. </td></tr></tbody></table> 표 2. 편집 판단리스트와 TA 근육의 기계적 성질의 평가에 대한 매개 변수. <table border="1"><tbody><tr><td> 변형 </td><td> 연령 (월) </td><td> 바디 무게 (g) </td><td> 편집 판단리스트 중량 (MG) </td><td> 편집 판단리스트 소호 (mm) </td><td> 편집 판단리스트 CSA (mm 2) </td></tr><tr><td> BL10 </td><td> 6 </td><td> 32.03 ± 0.57 </td><td> 13.90 ± 0.77 </td><td> 14.09 ± 0.04 </td><td> 2.12 ± 0.12 </td></tr><tr><td> MDX </td><td> 6 </td><td> 35.44 ± 0.42 * </td><td> 16.73 ± 0.42 * </td><td> 13.93 ± 0.05 * </td><td> 2.57 ± 0.07 * </td></tr></tbody></table> 표 3. MD의 편집 판단리스트 근육의 Morphometric 속성. * 값X 마우스는 그런 BL10 쥐를 나이에 일치에서 크게 다릅니다. <img src="/files/ftp_upload/50183/50183fig1.jpg" alt="그림 1" fo:src="/files/ftp_upload/50183/50183fig1highres.jpg" fo:content-width="5.5in"/> 1 그림. 맞춤 제작 마우스 분해 보드의 개략도. 분해 보드가 ½ 인치 두께의 플렉시 글라스로 만든되며, 기관 가게에서 가짜가. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50183/50183fig1large.jpg" target="_blank">큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> . <img src="/files/ftp_upload/50183/50183fig2.jpg" alt="그림 2" fo:src="/files/ftp_upload/50183/50183fig2highres.jpg" fo:content-width="4in"/> /&gt; 그림 2. MTJ의 루프 매듭에 이어 두 사각형 매듭을 묶는 단계를 보여주는 디지털 이미지의 시리즈. 리스크,편집 판단리스트 근육, 화살표, 편집 판단리스트 근육의 말초 힘줄. <img src="/files/ftp_upload/50183/50183fig3.jpg" alt="그림 3" fo:src="/files/ftp_upload/50183/50183fig3highres.jpg" fo:content-width="6in"/> /&gt; 그림 3. 현장 TA 근육 기능 분석에 대한 맞춤 제작 플랫폼의 개략도. 플렉시 글라스 동물 플랫폼 및 스테인레스 스틸 무릎 홀더는 현장 마우스 장치의 809B에 탑재되도록 설계되었다. * 스테인리스 막대는 (CAT # MPR-2.0 , Siskiyou, 보조금 패스, OR), #, 유니버설 전극 홀더 (고양이 # MXB, Siskiyou, 보조금 패스, OR), §, 전극 부착로드 (고양이 # MPR-3.0, Siskiyou, 보조금 패스, OR) ** Sylgard 블록. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50183/50183fig3large.jpg" target="_blank">큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> . <p class="jove_content" fo:keep-together.within-paGE = &quot;항상&quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/50183/50183fig4.jpg" alt="그림 4" fo:src="/files/ftp_upload/50183/50183fig4highres.jpg" fo:content-width="4in"/> /&gt; 4 그림. 편집 판단리스트 근육의 수축성 및 수동 속성에 대한 대표 결과입니다. 편집 판단리스트 근육의 수축 특성 특정 트 포스 (A), 특정 파상풍의 힘 (B), 최대 인장 (C)와 반 휴식 시간 (D)에 시간을 특징으로하고 있습니다. 편집 판단리스트 근육의 수동적 인 속성은 스트레스 변형 프로파일 (E) 및 SSR에 의해 평가됩니다. * MDX 마우스는 BL10에서 쥐를 나이와 일치 크게 다릅니다.

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Evaluation of Muscle Function of the Extensor Digitorum Longus Muscle Ex vivo and Tibialis Anterior Muscle In situ in Mice

사지 근육 수축성 및 수동 기계적 성질의 변화는 근육 질환에 중요한 생체 있습니다. 이 원고는 손쥐 신근의 digitorum longus의와 tibialis 앞쪽에 근육에서 이러한 속성을 측정하는 생리 assays에 대해 설명합니다.

신근 Digitorum의 Longus 근육의 근육 기능의 평가<em&gt; 예 생체</em&gt;와 Tibialis 앞쪽에 근육<em&gt; 현장에서</em&gt; 마우스에

Body  movements are mainly provided by mechanical function of skeletal muscle. Skeletal  muscle is composed of numerous bundles of myofibers that are ...

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Research

JoVE Journal

Biology

Evaluation of Muscle Function of the Extensor Digitorum Longus Muscle Ex vivo and Tibialis Anterior Muscle In situ in Mice

41.8K 조회수.  University of Missouri. 사지 근육 수축성 및 수동 기계적 성질의 변화는 근육 질환에 중요한 생체 있습니다. 이 원고는 손쥐 신근의 digitorum longus의와 tibialis 앞쪽에 근육에서 이러한 속성을 측정하는 생리 assays에 대해 설명합니다.

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In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy

BACKGROUND: Regulatory factors and detailed physiology of in vivo microcirculation have remained not fully clarified after many different modalities of imaging had invented. While many macroscopic parameters of blood flow reflect flow velocity, changes in blood flow velocity and red blood cell (RBC) flux does not hold linear relationship in the microscopic observations. There are reports of discrepancy between RBC velocity and RBC flux, RBC flux and plasma flow volume, and of spatial and temporal heterogeneity of flow regulation in the peripheral tissues in microscopic observations, a scientific basis for the requirement of more detailed studies in microcirculatory regulation using intravital microscopy. METHODS: We modified Jeff Lichtman's method of in vivo microscopic observation of mouse sternomastoid muscles. Mice are anesthetized,
ventilated, and injected with PKH26L-fluorescently labeled RBCs for microscopic observation.RESULT &amp; CONCLUSIONS: Fluorescently labeled RBCs are detected and distinguished well by a wide-field microscope. Muscle contraction evoked by electrical stimulation induced increase in RBC flux. Quantification of other parameters including RBC velocity and capillary density were feasible. Mice tolerated well the surgery, injection of stained RBCs, microscopic observation, and electrical stimulation. No muscle or blood vessel damage was observed, suggesting that our method is relatively less invasive and suited for long-term observations.

A new versatile method for observation of microcirculation is presented. It is considered suitable for long-term observation, and for combination with pharmacophysiological or molecular biological interventions.

내부 핵심 현미경에 의해 골격근의 생체내 미세 순환 측정

BACKGROUND: Regulatory factors and detailed physiology of in vivo microcirculation have remained not fully clarified after many different modalities of ...

연구

생물학

Procedures for Rat in situ Skeletal Muscle Contractile Properties

There are many circumstances where it is desirable to obtain the contractile response of skeletal muscle under physiological circumstances: normal circulation, intact whole muscle, at body temperature. This includes the study of contractile responses like posttetanic potentiation, staircase and fatigue. Furthermore, the consequences of disease, disuse, injury, training and drug treatment can be of interest. This video demonstrates appropriate procedures to set up and use this valuable muscle preparation.
To set up this preparation, the animal must be anesthetized, and the medial gastrocnemius muscle is surgically isolated, with the origin intact. Care must be taken to maintain the blood and nerve supplies. A long section of the sciatic nerve is cleared of connective tissue, and severed proximally. All branches of the distal stump that do not innervate the medial gastrocnemius muscle are severed. The distal nerve stump is inserted into a cuff lined with stainless steel stimulating wires. The calcaneus is severed, leaving a small piece of bone still attached to the Achilles tendon. Sonometric crystals and/or electrodes for electromyography can be inserted. Immobilization by metal probes in the femur and tibia prevents movement of the muscle origin. The Achilles tendon is attached to the force transducer and the loosened skin is pulled up at the sides to form a container that is filled with warmed paraffin oil. The oil distributes heat evenly and minimizes evaporative heat loss. A heat lamp is directed on the muscle, and the muscle and rat are allowed to warm up to 37&deg;C. While it is warming, maximal voltage and optimal length can be determined. These are important initial conditions for any experiment on intact whole muscle. The experiment may include determination of standard contractile properties, like the force-frequency relationship, force-length relationship, and force-velocity relationship.
With care in surgical isolation, immobilization of the origin of the muscle and alignment of the muscle-tendon unit with the force transducer, and proper data analysis, high quality measurements can be obtained with this muscle preparation.

Procedures for Rat in situ Skeletal Muscle Contractile Properties

This video demonstrates the surgical preparation and procedures needed to study the contractile responses of the rat medial gastrocnemius muscle preparation in situ. This preparation allows measurement of skeletal muscle contractile properties under physiological conditions. The animal is anesthetized and the muscle is separated from surrounding tissue at its distal end. The Achilles tendon is attached to a force transducer, allowing measurement of the muscle&#x2019;s contractile response at 37 degrees C with an intact circulation.

쥐 절차<em&gt; 현장에서</em&gt; 골격근 수축 등록

There are many circumstances where it is desirable to obtain the contractile response of skeletal muscle under physiological circumstances: normal ...

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Described here is a method to measure contractility of isolated skeletal muscles. Parameters such as muscle force, muscle power, contractile kinetics, fatigability, and recovery after fatigue can be obtained to assess specific aspects of the excitation-contraction coupling (ECC) process such as excitability, contractile machinery and Ca2+ handling ability. This method removes the nerve and blood supply and focuses on the isolated skeletal muscle itself. We routinely use this method to identify genetic components that alter the contractile property of skeletal muscle though modulating Ca2+ signaling pathways. Here, we describe a newly identified skeletal muscle phenotype, i.e., mechanic alternans, as an example of the various and rich information that can be obtained using the in vitro muscle contractility assay. Combination of this assay with single cell assays, genetic approaches and biochemistry assays can provide important insights into the mechanisms of ECC in skeletal muscle.

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

We describe a method to directly measure muscle force, muscle power, contractile kinetics and fatigability of isolated skeletal muscles in an in vitro system using field stimulation. Valuable information on Ca2+ handling properties and contractile machinery of the muscle can be obtained using different stimulating protocols.

절연 골격근의 수축성, Fatigability 및 Alternans의 예 VIVO 평가

 
Described here is a method to measure contractility of isolated skeletal muscles. Parameters such as muscle force, muscle power, contractile kinetics, ...

Assessment of Calcium Sparks in Intact Skeletal Muscle Fibers

Maintaining homeostatic Ca2+ signaling is a fundamental physiological process in living cells. Ca2+ sparks are the elementary units of Ca2+ signaling in the striated muscle fibers that appear as highly localized Ca2+ release events mediated by ryanodine receptor (RyR) Ca2+ release channels on the sarcoplasmic reticulum (SR) membrane. Proper assessment of muscle Ca2+ sparks could provide information on the intracellular Ca2+&#160;handling properties of healthy and diseased striated muscles. Although Ca2+ sparks events are commonly seen in resting cardiomyocytes, they are rarely observed in resting skeletal muscle fibers; thus there is a need for methods to generate and analyze sparks in skeletal muscle fibers.
Detailed here is an experimental protocol for measuring Ca2+ sparks in isolated flexor digitorm brevis (FDB) muscle fibers using fluorescent Ca2+ indictors and laser scanning confocal microscopy. In this approach, isolated FDB fibers are exposed to transient hypoosmotic stress followed by a return to isotonic physiological solution. Under these conditions, a robust Ca2+ sparks response is detected adjacent to the sarcolemmal membrane in young healthy FDB muscle fibers. Altered Ca2+ sparks response is detected in dystrophic or aged skeletal muscle fibers. This approach has recently demonstrated that membrane-delimited signaling involving cross-talk between inositol (1,4,5)-triphosphate receptor (IP3R) and RyR contributes to Ca2+ spark activation in skeletal muscle. In summary, our studies using osmotic stress induced Ca2+ sparks showed that this intracellular response reflects a muscle signaling mechanism in physiology and aging/disease states, including mouse models of muscle dystrophy (mdx mice) or amyotrophic lateral sclerosis (ALS model).

Described here is a method to directly measure calcium sparks, the elementary units of Ca2+ release from sarcoplasmic reticulum&#160;in intact skeletal muscle fibers. This method utilizes osmotic-stress-mediated triggering of Ca2+ release from ryanodine receptor in isolated muscle fibers. The dynamics and homeostatic capacity of intracellular Ca2+ signaling can be employed to assess muscle function in health and disease.

칼슘의 평가는 그대로 골격 근육 섬유에서 불꽃

Maintaining homeostatic Ca2+ signaling is a fundamental physiological process in living cells. Ca2+ sparks are the elementary units of Ca2+ signaling in ...

Generation of Myospheres From hESCs by Epigenetic Reprogramming

Generation of a homogeneous and abundant population of skeletal muscle cells from human embryonic stem cells (hESCs) is a requirement for cell-based therapies and for a "disease in a dish" model of human neuromuscular diseases. Major hurdles, such as low abundance and heterogeneity of the population of interest, as well as a lack of protocols for the formation of three-dimensional contractile structures, have limited the applications of stem cells for neuromuscular disorders. We have designed a protocol that overcomes these limits by ectopic introduction of defined factors in hESCs - the muscle determination factor MyoD and SWI/SNF chromatin remodeling complex component BAF60C - that are able to reprogram hESCs into skeletal muscle cells. Here we describe the protocol established to generate hESC-derived myoblasts and promote their clustering into tridimensional miniaturized structures (myospheres) that functionally mimic miniaturized skeletal muscles7.

Here, we describe a protocol based on epigenetic reprogramming of human embryonic stem cells (hESCs) toward generating a homogeneous population of skeletal muscle progenitors that under permissive culture conditions form three-dimensional clusters of contractile myofibers (myospheres), which recapitulate biological features of human skeletal muscles.

성적인 프로그램을 다시 만들에 의해 인간 배아 줄기 세포에서 Myospheres의 생성

Generation of a homogeneous and abundant population of skeletal muscle cells from human embryonic stem cells (hESCs) is a requirement for cell-based ...

Detection and Analysis of DNA Damage in Mouse Skeletal Muscle In Situ Using the TUNEL Method

Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) deoxyuridine triphosphate (dUTP) nick end labeling (TUNEL) is the method of using the TdT enzyme to covalently attach a tagged form of dUTP to 3&#8217; ends of double- and single-stranded DNA breaks in cells. It is a reliable and useful method to detect DNA damage and cell death in situ. This video describes dissection, tissue processing, sectioning, and fluorescence-based TUNEL labeling of mouse skeletal muscle. It also describes a method of semi-automated TUNEL signal quantitation. Inherent normal tissue features and tissue processing conditions affect the ability of the TdT enzyme to efficiently label DNA. Tissue processing may also add undesirable autofluorescence that will interfere with TUNEL signal detection. Therefore, it is important to empirically determine tissue processing and TUNEL labeling methods that will yield the optimal signal-to-noise ratio for subsequent quantitation. The fluorescence-based assay described here provides a way to exclude autofluorescent signal by digital channel subtraction. The TUNEL assay, used with appropriate tissue processing techniques and controls, is a relatively fast, reproducible, quantitative method for detecting apoptosis in tissue. It can be used to confirm DNA damage and apoptosis as pathological mechanisms, to identify affected cell types, and to assess the efficacy of therapeutic treatments in vivo.

Detection and Analysis of DNA Damage in Mouse Skeletal Muscle In Situ Using the TUNEL Method

This video describes dissection, tissue processing, sectioning, and fluorescence-based TUNEL labeling of mouse skeletal muscle. It also describes a method for semi-automated analysis of TUNEL labeling.

마우스 골격근에있는 검색, 탐지 DNA 손상 분석<em&gt; 현장에서</em&gt; TUNEL 방법을 사용하여

Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) deoxyuridine triphosphate (dUTP) nick end labeling (TUNEL) is the method of using the TdT enzyme to covalently ...

Measurement of Smooth Muscle Function in the Isolated Tissue Bath-applications to Pharmacology Research

Isolated tissue bath assays are a classical pharmacological tool for evaluating concentration-response relationships in a myriad of contractile tissues. While this technique has been implemented for over 100 years, the versatility, simplicity and reproducibility of this assay helps it to remain an indispensable tool for pharmacologists and physiologists alike. Tissue bath systems are available in a wide array of shapes and sizes, allowing a scientist to evaluate samples as small as murine mesenteric arteries and as large as porcine ileum &#8211; if not larger. Central to the isolated tissue bath assay is the ability to measure concentration-dependent changes to isometric contraction, and how the efficacy and potency of contractile agonists can be manipulated by increasing concentrations of antagonists or inhibitors. Even though the general principles remain relatively similar, recent technological advances allow even more versatility to the tissue bath assay by incorporating computer-based data recording and analysis software. This video will demonstrate the function of the isolated tissue bath to measure the isometric contraction of an isolated smooth muscle (in this case rat thoracic aorta rings), and share the types of knowledge that can be created with this technique. Included are detailed descriptions of aortic tissue dissection and preparation, placement of aortic rings in the tissue bath and proper tissue equilibration prior to experimentation, tests of tissue viability, experimental design and implementation, and data quantitation. Aorta will be connected to isometric force transducers, the data from which will be captured using a commercially available analog-to-digital converter and bridge amplifier specifically designed for use in these experiments. The accompanying software to this system will be used to visualize the experiment and analyze captured data.

This protocol describes the measurement of isometric contraction in an isolated smooth muscle preparation, using an isolated tissue bath system and computer-based data acquisition.

약리학 연구에 고립 된 조직 목욕-애플리케이션에서 부드러운 근육 기능의 측정

Isolated tissue bath assays are a classical pharmacological tool for evaluating concentration-response relationships in a myriad of contractile tissues.  ...

Murine Aortic Crush Injury: An Efficient In Vivo Model of Smooth Muscle Cell Proliferation and Endothelial Function

Arterial reconstruction, whether angioplasty or bypass surgery, involves iatrogenic trauma causing endothelial disruption and vascular smooth muscle cell (VSMC) proliferation. Common murine models study small vessels such as the carotid and femoral arteries. Herein we describe an in vivo system in which both VSMC proliferation and endothelial barrier function can be simultaneously assessed in a large vessel. We studied the infrarenal aortic response to injury in C57BL/6 mice. The aorta was injured from the left renal vein to the aortic bifurcation by 30 transmural crushes of 5-seconds duration with a cotton-tipped applicator. Morphological changes were assessed with conventional histology. Aorta wall thickness was measured from the luminal surface to the adventitia. EdU integration and counter staining with DAPI and alpha-actin was used to demonstrate VSMC proliferation. Activation of ERK1/2, a known moderator of intimal hyperplasia formation, was determined by Western Blot analysis. The effect of inflammation was determined by immunohistochemistry for B-cells, T-cells, and macrophages. En face sections of endothelium were visualized with scanning electron microscopy (SEM). Endothelial barrier function was determined with Evans Blue staining. Transmural injury resulted in aortic wall thickening. This injury induced VSMC proliferation, most prominently at 3 days after injury, and early activation of ERK1/2 and decreased p27kip1 expression. Injury did not result in increased B-cells, T-cells, or macrophages infiltration in the vessel wall. Injury caused partial endothelial cell denudation and loss of cell-cell contact. Injury resulted in a significant loss of endothelial barrier function, which returned to baseline after seven days. The murine transmural blunt aortic injury model provides an efficient system to simultaneously study both VSMC proliferation and endothelial barrier function in a large vessel.

Murine Aortic Crush Injury: An Efficient In Vivo Model of Smooth Muscle Cell Proliferation and Endothelial Function

Restenosis following cardiovascular procedures (bypass surgery, angioplasty, or stenting) is a significant problem reducing the durability of these procedures. An ideal therapy would inhibit smooth muscle cell (VSMC) proliferation while promoting regeneration of the endothelium. We describe a model for simultaneous assessment of VSMC proliferation and endothelial function in vivo.

소뇌 대동맥 파열 상해 : 효율적<em&gt; In Vivo</em&gt; 평활근 세포 증식과 내피 기능 모델

Arterial reconstruction, whether angioplasty or bypass surgery, involves iatrogenic trauma causing endothelial disruption and vascular smooth muscle cell ...

A Rapid Automated Protocol for Muscle Fiber Population Analysis in Rat Muscle Cross Sections Using Myosin Heavy Chain Immunohistochemistry

Quantification of muscle fiber populations provides a deeper insight into the effects of disease, trauma, and various other influences on skeletal muscle composition. Various time-consuming methods have traditionally been used to study fiber populations in many fields of research. However, recently developed immunohistochemical methods based on myosin heavy chain protein expression provide a quick alternative to identify multiple fiber types in a single section. Here, we present a rapid, reliable and reproducible protocol for improved staining quality, allowing automatic acquisition of whole cross sections and automatic quantification of fiber populations with ImageJ. For this purpose, embedded skeletal muscles are cut in cross sections, stained using myosin heavy chains antibodies with secondary fluorescent antibodies and DAPI for cell nuclei staining. Whole cross sections are then scanned automatically using a slide scanner to obtain high-resolution composite pictures of the entire specimen. Fiber population analyses are subsequently performed to quantify slow, intermediate and fast fibers using an automated macro for ImageJ. We have previously shown that this method can identify fiber populations reliably to a degree of &#177;4%. In addition, this method reduces inter-user variability and time per analyses significantly using the open source platform ImageJ.

Here, we present a protocol for rapid muscle fiber analyses, which allows improved staining quality, and thereby automatic acquisition and quantification of fiber populations using the freely available software ImageJ.

마이 오신 중쇄 면역를 사용하여 쥐의 근육 크로스 섹션에서 근육 섬유 인구 분석을위한 신속한 자동화 프로토콜

Quantification of muscle fiber populations provides a deeper insight into the effects of disease, trauma, and various other influences on skeletal muscle ...

In Situ Immunofluorescent Staining of Autophagy in Muscle Stem Cells

Increasing evidence points to autophagy as a crucial regulatory process to preserve tissue homeostasis. It is known that autophagy is involved in skeletal muscle development and regeneration, and the autophagic process has been described in several muscular pathologies and age-related muscle disorders. A recently described block of the autophagic process that correlates with the functional exhaustion of satellite cells during muscle repair supports the notion that active autophagy is coupled with productive muscle regeneration. These data uncover the crucial role of autophagy in satellite cell activation during muscle regeneration in both normal and pathological conditions, such as muscular dystrophies. Here, we provide a protocol to monitor the autophagic process in the adult Muscle Stem Cell (MuSC) compartment during muscle regenerative conditions. This protocol describes the setup methodology to perform in situ immunofluorescence imaging of LC3, an autophagy marker, and MyoD, a myogenic lineage marker, in muscle tissue sections from control and injured mice. The methodology reported allows for monitoring the autophagic process in one specific cell compartment, the MuSC compartment, which plays a central role in orchestrating muscle regeneration.

In Situ Immunofluorescent Staining of Autophagy in Muscle Stem Cells

Active autophagy is associated with productive muscle regeneration, which is essential for Muscle Stem Cell (MuSC) activation. Here, we provide a protocol for the in situ detection of LC3, an autophagy marker in MyoD-positive MuSCs of muscle tissue sections from control and injured mice.

근육 줄기 세포에서 Autophagy의 원위치 Immunofluorescent 얼룩

Increasing evidence points to autophagy as a crucial regulatory process to preserve tissue homeostasis. It is known that autophagy is involved in skeletal ...