DJC로 검안의 건강 과학 대학의 웨스턴 대학에서 제공하는 자금 지원. 그래픽 디자인을위한 Irisa 탐 특별 감사.

모든 동물의 사육 및 실험 승인 및 각 기관이나 기타 법적 요구 사항의 기관 애니멀 케어 및 사용위원회에 의해 명시된 지침에 따라 수행되어야한다. 1. 제브라 피쉬 케어 <ol><li> 10 시간 어두운-14의 시간 빛 사이클 16에 28.5 ° C에서 표준 조건에서 제브라 피쉬를 유지한다. </li><li> 약 3 물고기 / L의 탱크 밀도 성인 zebrafish의 유지 </li></ol> 2. Optokinetic 응답 (OKR) <ol><li> 드럼을 회전 14.5 cm 직경, 조정 가능한 빛의 강도 설정 (300-8,000 럭스)와 스테레오 현미경과 컴퓨터 (그림 1A)를 사용하여 사용자 정의 OKR 기록 장치를 구축 할 수 있습니다. <ol><li> 인접한 모니터에 라이브 피드를 제공하고 이미지 캡처와 녹화를 위해 수 현미경에 카메라를 연결합니다. </li><li> 숙소의 것이다 컴퓨터에 연결된 마이크로 컨트롤러를 사용하는 회전 드럼을 제어날짜 다양한 속도와 방향을 선택. </li></ol></li><li> 2 ~ 3 분 동안 0.016 %의 tricaine에서 물고기를 마취 한 다음 가장자리에 일시 중단 된 눈과 아가미 작은 플랫폼에서 물고기를 놓습니다. </li><li> 물고기의 몸에 얇은 스폰지 / 수건을 배치하고 고정 유지하는 고기와 생선을 수용하기 위해 모양의 거품의 2 ~ 3 조각, 핀. 물고기의 꼬리의 움직임을 제한은 물고기에게 상해를주지 않고 고정화를위한 중요한 측면 것으로 판명되었고, 유용한 발포체의 평평한 조각을 사용하여 달성 하였다. (그림 1b) </li><li> OKR 기록 장치의 회전 드럼 내부에 맞 원통형 물이 채워진 탱크에서 물고기를 놓습니다. 약 7.3 cm 드럼의 가장자리에서 눈으로 똑바로 물고기의 위치를​​ 플랫폼에 자석을 사용합니다. 물고기는 몇 분 이내에 마취에서 회복한다 - 정상적인 호흡이 다시 시작됩니다 무작위 안구의 움직임을 관찰해야한다. </li><li> BAS를 배치전자 회전 드럼에 정도 (CPD) 당 0.07 사이클의 격자와 회전 및 비디오 캡처를 시작하기 위해 컴퓨터 제어 장치를 작동 (12 rpm의 속도는이 문서에 사용 된,하지만 8 ~ 16 회전의 속도는 비슷한 결과를 제공해야합니다). </li><li> 초기 OKR는 격자 자료에 의해 유도되면, 간단하게 회전을 일시 중지하고, 작은 격자 (높은 공간 주파수)와 격자를 교체합니다. </li><li> OKR이 더 이상 유발 할 수 없습니다 때까지이 과정을 반복합니다. 변성 계단 접근법 다음 OKR을 야기하고 OKR의 손실을 검증하는 반응을 유도하는 데 실패 격자를 이용한 반복 작은 격자로 재시험. 최종 격자가 제 멸종 사건에 대하여 변경된 경우이 프로세스는 최소 검출 격자에 진정한 응답을 확인하기 위해 반복 될 수있다. </li><li> 반대 눈에 인접한 줄무늬에 검은 색 플라스틱의 occluder 배치하여 단안 시력 측정을 얻습니다. (2.6-2.7 단계) 위의 절차를 반복합니다. </li><li>의 occluder 위치를 변경하고 다시 단계 2.6-2.7를 반복하여 반대 눈의 시력을 얻을 수 있습니다. </li><li> 각각의 눈은 정확한 시력 측정은 다음과 같이 계산 될 수 있도록 수조 아래 기준 측정 스트립을 사용하여 테스트 절차 중에 줄무늬에서 인 거리를 참고. </li></ol> 3. 시력 계산 <ol><li> CPD를 계산하여 시력을 얻을 : <img alt="식 (1)" fo:content-width="0.7in" src="/files/ftp_upload/50832/50832eq1.jpg" width="70px" /> 이 회절 격자에, 렌즈의 중심으로부터의 거리이고, H는 OKR는 (도 1C)를 관찰되는 작은 격자의 한주기의 길이이다. </li><li> 결합 시력 측정의 평균 좌측 및 우측 눈 모두의 값이 사용된다. </li></ol>

<ol>
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경우에 따라 물고기는 물 탱크에 빠져있다. 그것은 꼬리를 고정화하는 것이 중요합니다. 물고기의 몸에 얇은 스폰지 / 수건의 추가 사용은 장시간 동안 정지 물고기를 유지하는 데 매우 중요한 것으로 밝혀졌다. 우리는 물고기를 해치지 않고이 절차를 사용하여 30 분 동안 고정 된 물고기를 유지할 수 있었다. 이 시간은 양안 모두 단안 예민를 수행하기에 충분 이상입니다. 물리적으로 회전하는 드럼 또는 디지털 디스플레이를 제시하여 18-22를 사용하고 여기에 다른 곳에서 설명 된 격자의 프레젠테이션 역시 행해질 수있다. 두 가지 유형의 특정 장점과 단점이 있습니다. 우리는 모두 비용 이유 및 기술 사양에 대한 물리적 인 회전을 사용하기로 결정했습니다. 컴퓨터와 영상 장비를 제외하고, 여기에 설명 된 OKR 장치는 약 150 달러 구축 할 수 있습니다. OKR는 힘을 결정하는 객관적인 방법이다성인 제브라 피쉬의 연간 시력. 비전에 대한 몇 가지 다른 시각 운동의 분석은 이전의 실험에서 사용 된 그것은 크게 활용되지 불구하고도 전위도 성공적으로 성인 zebrafish의 눈에서 수행되었지만, 성인 제브라 피쉬의 OKR 많은 새로운 실험 조건 (22)에 문을 엽니 다. 이 연구 결과는 안과 질환 모델에서 시력의 차이를 식별, 시간이 지남에 따라 시력의 변화를 측정의 OKR의 유틸리티를 시연하고, 단안 시력을 결정했다. 흥미롭게도, 성인 zebrafish의 비전은 인간의 시각 (20 / 19)에 비해 약 20 / 1, 000 (0.60 CPD는 -0.3 비해 logMAR로 변환 할 때)입니다. 이 가난한 보일 수 있지만, 제브라 피쉬의 눈은 아주 잘 그 환경에 적합합니다. 6.5 물 cm, 폴리 카보네이트 (polycarbonate)의 몇 밀리미터, 공기의 또 다른 센티미터를 통해보고의 시각적 작업에도 불구하고, 물고기는 아주 잘 수행! 우리는 성인 zebrafish의 시력은 ABO 것을 발견유타. 23 대조 자신의 광 수용체 간격 주어진 예측 될 것입니다 무슨의 70 %가 최적의 인간 성능을 ~ 12분의 20, 어느 쪽의 약 80 % 10분의 20 예측, 성인 zebrafish의 시각적 능력을 측정하기위한 OKR 기술이 인상적입니다 (24) 25. 독립적 눈 시력 측정 기술은 하나의 눈이 치료 될 수 있고, 다른 하나는 대조군으로 사용하는 연구를 허용한다. 또한 백내장을 개발 lrp2/bugeye 생선 비대칭 눈 개발 물고기보다 정확하게 모니터링 할 수 있습니다. 개호 정확하게 줄무늬로 눈으로부터의 거리를 측정하기 위해 비전의 전체 필드를 흡장주의 할 필요가 있음을 주목해야한다. 이 기술은 zebrafish의 시각 기능의보다 정확하고 구체적인 조치에 문을 열어야합니다.

제브라 피쉬 (다니오 rerio)는 인해 다른 척추 동물, 자신의 짧은 수명주기, 그리고 유전자 조작 돌연변이 1,2의 가용성에 대한 그들의 망막의 유사성에 시각 생리학을 연구하는 좋은 모델입니다. optokinetic 반사 / 응답 / 안진 (OKR)은 부드러운 추구하고 빠른 단속적 안구 운동의 조합이다. 60 년 이상 임상 OKR 객관적으로 환자의 시력을 측정하는 데 사용과 유아 시각적 기능 3-5 결정에 특히 유용 할 수 있다는 것을 증명하고있다. 동물의 OKR의 첫 번째 기록 사용은 1950 년 6 비둘기를 사용했다. 최근 OKR는 애벌레 제브라 피쉬의 시각 기능을 평가하고 종종 시각 장애 1,2가 유전자 돌연변이에 대한 화면으로 사용하기위한 중요한 도구가되고있다. OKR 폭넓게 유생 지브라 피쉬의 카메라 기능을 결정하기 위해 사용되었지만, 최근에는 성인 얼룩말 증명되었다7-10 물고기. Tappeiner의 최근 논문 등. 전통적으로 마우스에 사용되는 상용 optomotor 시스템을 사용, OptoMotry는 성인 제브라 피쉬의 시력도 다양한 각속도 7 걸쳐도 0.59 회 (CPD) ~ 매우 일정하게 유지되는 것을 입증하는 . OKR이 애벌레 zebrafish의 연구에 매우 유용한 것으로 입증되었지만, 시각적 동작을위한 다른 방법은 성공의 학위를 변화와 제브라 피쉬 성인에 사용되었습니다. 탈출 응답 분석은 모두 색소 돌연변이, 밝은 조명 조건 (11, 12)에 시각적 인 반응을 감소, 그 흰둥이와 루비 제브라 피쉬를 보여 주었다. 이 같은 탈출 응답 분석은 성공적으로 13 세의 나이에 2 년에이기는하지만, 야맹증 D 돌연변이를 확인했습니다. 그러나, 이탈 반응 분석은 결함이없는 것은 아니다. 그것은 정확한 시각 기능에 돌리는 것은 어렵다에만 총 approximatio입니다시각적 인 변화의 N - 변화가 확인되기 전에 큰 변화를 의미합니다. 시각 장애가있는 성인 제브라 피쉬를 식별하기 위해 개발 된 또 다른 방법은 optomotor 응답 (OMR) 11입니다. 이 분석에서, 물고기는 중심에 불투명 한 열이있는 원형 탱크에 배치됩니다. 검은 색과 흰색 줄무늬 탱크 주위를 회​​전하고 물고기 스트라이프 운동의 방향으로 수영하는 임무를한다. 탈출 응답과 마찬가지로, OMR는 성인 제브라 피쉬의 시각 운동 기능에 초점을 맞추고 있습니다. 그것은 그러나 이러한 lrp2/bugeye 돌연변이 (14) 등의 시각 장애, 생선을 식별하는 데 성공적으로 사용되어왔다. lrp2/bugeye 제브라 피쉬 전시 buphthalmos, 안압 상승은 OMR을 감소하고, 진보적 인 망막 변성 (14, 15). 많은 연구들은 주관적 및 정량 할 수 없습니다 성인 제브라 피쉬의 시각 운동 기능을 사용하고 있습니다itatively 분석했다. OKR를 사용하여, 하나는 객관적으로 성인 물고기의 시력을 공부할 수 있습니다. 우리는 처음에 애벌레 연구 1에 사용되는 하나의 모델로 우리 자신의 OKR 장치를 구축했다. 본 연구에서 우리는 OKR가 단안 및 지브라 피쉬의 양안 시력 모두를 계산하는 데 사용될 수 있음을 보여준다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="593">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:209px;">Super Low Light Black White Video Security Camera</td>
			<td style="width:143px;">Super Circuits</td>
			<td style="width:119px;">PC164CEX-2</td>
			<td style="width:124px;"> Any low light camera may be used</td>
		</tr>
		<tr height="106">
			<td height="106" style="height:106px;width:209px;">Arduino Duemilanove microcontroller</td>
			<td style="width:143px;">Adafruit Industries</td>
			<td style="width:119px;"> </td>
			<td style="width:124px;"> The Arduino Uno is also compatible with the speed control software.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Tricaine Methanesulfonate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>101107-950</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the optokinetic response as a quantitative measure of visual acuity in zebrafish

제브라 피쉬는 일반적으로 애벌레 물고기에 초점을 맞춘 또는 간단한 응답을 보여 이전 방법 그러나 많은 비전 연구를위한 입증 된 모델이다. 최근에 제브라 피쉬의 성인 시각적 동작이 관심이되고있다,하지만 특정 반응을 측정하는 방법은 앞으로의 새로운 기능입니다. 이러한 격차를 해결하기 위해, 우리는 반복하고 정확하게 성인 제브라 피쉬의 시력을 측정하기 위해 optokinetic 응답 (OKR)를 활용하는 방법을 개발하기 위해 밖으로 설정합니다. 여기에서 우리는 성인 제브라 피쉬의 시력은 양안 및 단안 예민 모두 포함하여 측정 할 수 있음을 보여준다. 물고기는 절차 중에 해쳐되지 않으므로 시력 시간이 짧거나 긴 기간에 걸쳐 측정되고 비교 될 수있다. 여기에 설명 된 시력 측정은 원하는 경우 신속 높은 처리량 및 추가 비주얼 절차를 허용도 행해질 수있다. 이러한 유형의 분석은 약물 개입 연구 또는 질병 진행의 조사에 공헌.

OKR 장치 기능 위의 설명과 그림에 최소한의 유지 보수 1 기능을 같이 OKR 장치. 꼬리를 고정화 단계 2.3에서 언급 한 바와 같이 녹음하는 동안 억제 물고기를 유지하는 데 매우 중요합니다. 충분히 고정, 물고기를 장시간 OKR 장치에 보관하실 수 있습니다. 더 많은 데이터가 각각의 물고기를 수집 할 수 있도록 따라서, 치료는 초기 고정화 단계에서주의해야한다. 시력 측정 양안 OKR은 쉽게 정상 성인 물고기에 유도된다. 위의 절차에 따라 하나는 많은 나이의 제브라 피쉬 (그림 2)에 대한 시력을 찾을 수 있습니다. 우리가 기록 된 가장 양안 공간 시력은 0.74 CPD했다. 그림 2에서 언급 한 바와 같이, 양안 시력은 일반적으로 연령이 증가 (N = 46, P = SPSS의 V14을 사용하여 0.002 ANOVA), 만 레벨 해제나이 약 12​​ 개월 이후. 야생형, 우리는 나이 일치 lrp2/bugeye 물고기 5 개월 된 야생형 물고기에서 측정 된 시력을 비교했을 때, 우리는 lrp2/bugeye 물고기는 크게 시력 (p &lt;0.001 감소 된 것을 발견했다 : 0.49 ± 0.05 CPD를, N = 8; lrp2/bugeye : 0.35 ± 0.06, N = 10, Excel을 사용하여 학생의 T-테스트). 오른쪽 눈을 폐색에 의해 왼쪽 눈의 시력은 그 반대의 경우도 마찬가지 결정 할 수 있습니다. 양안 시력과 비교했을 때, 양안 합계는 인간의 시각 (17) (그림 3)와 유사하게 관찰된다. 양안 시력은 일반적으로 권리 (OD) 또는 왼쪽 독립적으로 측정 (OS) 예민하거나 5 ~ 10 % 향상되었다. 일부 개별 물고기의 차이는 25 % 개선했다. <img alt="그림 1" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/50832/50832fig1.jpg" width="500px" /> 그림 1. OKR의 RECO에 rding.) OKR 장치는 광도 조절 설정 (300-8,000 럭스)와 드럼과 현미경을 회전 14.5 cm 직경으로 구성되어 있습니다. 카메라는 인접한 모니터의 라이브 피드를 제공합니다. 도 (CPD) 당 필요에 따라 회전 드럼이 시계 방향과 반 시계 방향으로 교환 할 수있는 공간 주파수 격자 모두에서 다양한 속도 설정이 삽입 및 제거됩니다. B) 생선을 확보하고 회전 드럼의 중앙에 배치됩니다. C)주기가 계산된다 CPD =를 사용하여 <img alt="" src="img2.png" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50832/50832fig1highres.jpg" target="_blank">큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오</a> . <img alt="그림 2" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/50832/50832fig2.jpg" width="500px" /> 그림 2. 시력은 나이로 변경합니다. 그래프는 5를 측정 독립적 인 시력을 보여줍니다 -<html> 연령 15 개월입니다. 시력은 일반적으로 개발의 첫 해에 걸쳐 증가하고 만 15 개월 (P = SPSS의 V14을 사용하여 0.002 ANOVA)에 약간 끝납니다. 각 점은 1 또는 여러 물고기를 나타낼 수있다. 시력은 사이클 /도 (CPD)로 측정됩니다. (N = 총 46, 5 개월 8, 6 개월에 4, 8 개월 7, 9 개월에 6, 10 개월에 11; 11개월에서 2, 12 개월에 2, 15 개월 6). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50832/50832fig2highres.jpg" target="_blank">여기를 클릭하십시오 더 큰 이미지를 볼 수</a> . <img alt="그림 3" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/50832/50832fig3.jpg" width="500px" /> 그림 3. 양안 시력 합계 효과. 양안 (OU) 시력은 오른쪽 (OD) 또는 왼쪽 (OS) 눈 예민에 비해 일반적으로 더 높다. 이 특정 그룹의 OS 예민이 유의하게 낮았다. (* P = 0.006, N = 8)jove.com/files/ftp_upload/50832/50832fig3highres.jpg &quot;대상 =&quot;_blank &quot;&gt; 큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오.

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The Optokinetic Response as a Quantitative Measure of Visual Acuity in Zebrafish

제브라 피쉬는 많은 연구 분야를위한 유용한 도구가되고있다. 여기서 우리는 시각적 인 반응을 유도하고 성인 제브라 피쉬의 기능 시력을 계산하는 방법을 보여줍니다.

Zebrafish의 시력의 정량적 측정과 Optokinetic 응답

Zebrafish are a proven model for vision research, however many of the  earlier methods generally focused on larval fish or demonstrated a simple  ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

20.4K 조회수.  Western University of Health Sciences.  제브라 피쉬는 많은 연구 분야를위한 유용한 도구가되고있다. 여기서 우리는 시각적 인 반응을 유도하고 성인 제브라 피쉬의 기능 시력을 계산하는 방법을 보여줍니다. 

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Double Fluorescence in situ Hybridization in Fresh Brain Sections

Here we describe a modified version of a double fluorescence in situ hybridization (dFISH) method optimized for detecting two mRNAs of interest in fresh frozen brain sections. Our group has successfully used this approach to study gene co-regulation. More specifically, we have used this dFISH method to explore the anatomical organization, neurochemical properties, and the impact of sensory experience in central sensory circuits, at single cell resolution. This protocol has been validated in brain tissue from mice, rats and songbirds but is expected to be easily adaptable to other vertebrate species, as well as to an array of non-neural tissues. In this film we provide a detailed demonstration of the main steps of this procedure.

Double Fluorescence in situ Hybridization in Fresh Brain Sections

This protocol involves a non-radioactive in-situ hybridization procedure that enables the simultaneous identification of two transcript species, at a single cell resolution, in thin sections of the vertebrate brain.

더블 형광 현장에서</em신선한 두뇌 섹션> 하이브 리다이 제이션

Here we describe a modified version of a double fluorescence in situ hybridization (dFISH) method optimized for detecting two mRNAs of interest in fresh ...

연구

신경과학

Hyponeophagia: A Measure of Anxiety in the Mouse

Before the present day, when fast-acting and potent rodenticides such as alpha-chloralose were not yet in use, the work of pest controllers was often hampered by a phenomenon known as "bait shyness". Mice and rats cannot vomit, due to the tightness of the cardiac sphincter of the stomach, so to overcome the problem of potential food toxicity they have evolved a strategy of first ingesting only very small amounts of novel substances. The amounts ingested then gradually increase until the animal has determined whether the substance is safe and nutritious. So the old rat-catchers would first put a palatable substance such as oatmeal, which was to be the vehicle for the toxin, in the infested area. Only when large amounts were being readily consumed would they then add the poison, in amounts calculated not to affect the taste of the vehicle. The poisoned bait, which the animals were now readily eating in large amounts, would then swiftly perform its function.
Bait shyness is now used in the behavioural laboratory as a way of measuring anxiety. A highly palatable but novel substance, such as sweet corn, nuts or sweetened condensed milk, is offered to the mice (or rats) in a novel situation, such as a new cage. The latency to consume a defined amount of the new food is then measured.
Robert M.J. Deacon can be reach at <a href="mailto:robert.deacon@psy.ox.ac.uk">robert.deacon@psy.ox.ac.uk</a>

Mice and rats, due to their innate cautiousness, are initially slow in consuming a novel food, particularly in a novel place. This hyponeophagia can readily be measured in the laboratory, even though laboratory animals are much less anxious than their wild counterparts

Hyponeophagia : 마우스에서 불안의 측정

Before the present day, when fast-acting and potent rodenticides such as alpha-chloralose were not yet in use, the work of pest controllers was often ...

A Dual Tracer PET-MRI Protocol for the Quantitative Measure of Regional Brain Energy Substrates Uptake in the Rat

We present a method for comparing the uptake of the brain&#39;s two key energy substrates: glucose and ketones (acetoacetate [AcAc] in this case) in the rat. The developed method is a small-animal positron emission tomography (PET) protocol, in which&#160;11C-AcAc and 18F-fluorodeoxyglucose (18F-FDG) are injected sequentially in each animal. This dual tracer PET acquisition is possible because of the short half-life of 11C (20.4 min). The rats also undergo a magnetic resonance imaging (MRI) acquisition seven days before the PET protocol. Prior to image analysis, PET and MRI images are coregistered to allow the measurement of regional cerebral uptake (cortex, hippocampus, striatum, and cerebellum). A quantitative measure of 11C-AcAc and 18F-FDG brain uptake (cerebral metabolic rate; &#956;mol/100 g/min) is determined by kinetic modeling using the image-derived input function (IDIF) method. Our new dual tracer PET protocol is robust and flexible; the two tracers used can be replaced by different radiotracers to evaluate other processes in the brain. Moreover, our protocol is applicable to the study of brain fuel supply in multiple conditions such as normal aging and neurodegenerative pathologies such as Alzheimer&#39;s and Parkinson&#39;s diseases.

Small-animal positron emission tomography enables the assessment of the brain&#39;s two main energy substrates:&#160;glucose and ketones. In the present method, 11C-acetoacetate and 18F-fluorodeoxyglucose are injected sequentially in each animal, and their uptake is measured quantitatively in specific brain regions determined from the magnetic resonance images.

We present a method for comparing the uptake of the brain&#39;s two key energy substrates: glucose and ketones (acetoacetate [AcAc] in this case) in the ...

Electroretinogram Analysis of the Visual Response in Zebrafish Larvae

The electroretinogram (ERG) is a noninvasive electrophysiological method for determining retinal function. Through the placement of an electrode on the surface of the cornea, electrical activity generated in response to light can be measured and used to assess the activity of retinal cells in vivo. This manuscript describes the use of the ERG to measure visual function in zebrafish. Zebrafish have long been utilized as a model for vertebrate development due to the ease of gene suppression by morpholino oligonucleotides and pharmacological manipulation. At 5-10 dpf, only cones are functional in the larval retina. Therefore, the zebrafish, unlike other animals, is a powerful model system for the study of cone visual function in vivo. This protocol uses standard anesthesia, micromanipulation and stereomicroscopy protocols that are common in laboratories that perform zebrafish research. The outlined methods make use of standard electrophysiology equipment and a low light camera to guide the placement of the recording microelectrode onto the larval cornea. Finally, we demonstrate how a commercially available ERG stimulator/recorder originally designed for use with mice can easily be adapted for use with zebrafish. ERG of larval zebrafish provides an excellent method of assaying cone visual function in animals that have been modified by morpholino oligonucleotide injection as well as newer genome engineering techniques such as Zinc Finger Nucleases (ZFNs), Transcription Activator-Like Effector Nucleases (TALENs), and Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR)/Cas9, all of which have greatly increased the efficiency and efficacy of gene targeting in zebrafish. In addition, we take advantage of the ability of pharmacological agents to penetrate zebrafish larvae to evaluate the molecular components that contribute to the photoresponse. This protocol outlines a setup that can be modified and used by researchers with various experimental goals.

We present a method for the electroretinographic (ERG) analysis of zebrafish larvae utilizing micromanipulation and electroretinography techniques. This is a simple and straightforward method for assaying visual function of zebrafish larvae in vivo.

Zebrafish의 애벌레에서 비주얼 응답의 전위도 분석

The electroretinogram (ERG) is a noninvasive electrophysiological method for determining retinal function. Through the placement of an electrode on the ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise from extra-retinal sources. Ex vivo ERG provides an efficient method to dissect the function of retinal cells directly from an intact isolated retina of animals or donor eyes. In addition, ex vivo ERG can be used to test the efficacy and safety of potential therapeutic agents on retina tissue from animals or humans. We show here how commercially available in vivo ERG systems can be used to conduct ex vivo ERG recordings from isolated mouse retinas. We combine the light stimulation, electronic and heating units of a standard in vivo system with custom-designed specimen holder, gravity-controlled perfusion system and electromagnetic noise shielding to record low-noise ex vivo ERG signals simultaneously from two retinas with the acquisition software included in commercial in vivo systems. Further, we demonstrate how to use this method in combination with pharmacological treatments that remove specific ERG components in order to dissect the function of certain retinal cell types.

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Ex vivo ERG can be used to record electrical activity of retinal cells directly from isolated intact retinas of animals or humans. We demonstrate here how common in vivo ERG systems can be adapted for ex vivo ERG recordings in order to dissect the electrical activity of retinal cells.

동시<em&gt; 생체</em두 망막의&gt; 기능 테스트로<em&gt; 생체</em&gt; 전위도 시스템

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to monitor the disease course in the follow-up period. Changes in the VEP parameters closely correlate with pathological damage in the optic nerve. This protocol provides a detailed description about the rodent model of optic nerve microinjection, in which a partial demyelination lesion is produced in the optic nerve. VEP recording techniques are also discussed. Using skull implanted electrodes, we are able to acquire reproducible intra-session and between-session VEP traces. VEPs can be recorded on individual animals over a period of time to assess the functional changes in the optic nerve longitudinally. The optic nerve demyelination model, in conjunction with the VEP recording protocol, provides a tool to investigate the disease processes associated with demyelination and remyelination, and can potentially be employed to evaluate the effects of new remyelinating drugs or neuroprotective therapies.

Focal demyelination is induced in the optic nerve using lysolecithin microinjection. Visual evoked potentials are recorded via skull electrodes implanted over the visual cortex to examine the signal conduction along the visual pathway in vivo. This protocol details the surgical procedures underlying electrode implantation and optic nerve microinjection.

실험 시신경의 탈수 초화의 쥐 모델에서 시각 유발 전위 기록

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to ...

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous system. SC-selective genetic manipulation in living animals is a powerful technique for studying the molecular and cellular mechanisms of SC myelination and demyelination in vivo. While knockout/knockin and transgenic mice are powerful tools for studying SC biology, these methods are costly and time consuming. Viral vector-mediated transgene introduction into the sciatic nerve is a simpler and less laborious method. However, viral methods have limitations, such as toxicity, transgene size constraints, and infectivity restricted to certain developmental stages. Here, we describe a new method that allows selective transfection of myelinating SCs in the rodent sciatic nerve using electroporation. By applying electric pulses to the sciatic nerve at the site of plasmid DNA injection, genes of interest can be easily silenced or overexpressed in SCs in both neonatal and more mature animals. Furthermore, this in vivo electroporation method allows for highly efficient simultaneous expression of multiple transgenes. Our novel technique should enable researchers to efficiently manipulate SC gene expression, and facilitate studies on SC development and function.

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

Here, we present an in vivo technique for gene transfer to Schwann cells (SCs) in the rodent sciatic nerve. This simple technique is useful for investigating signaling mechanisms involved in the development and maintenance of myelinating SCs.

Electroporation에 의해 쥐 좌골 신경의 슈반 세포로 생체 내 유전자 전달에

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous ...

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model organisms such as the fruit fly, Drosophila melanogaster. Drosophila is useful for understanding the basic neurobiology underlying cognitive deficits resulting from mutations in genes associated with human cognitive disorders, such as intellectual disability (ID) and autism. This work describes a methodology for testing learning and memory using a classic paradigm in Drosophila known as courtship conditioning. Male flies court females using a distinct pattern of easily recognizable behaviors. Premated females are not receptive to mating and will reject the male&#39;s copulation attempts. In response to this rejection, male flies reduce their courtship behavior. This learned reduction in courtship behavior is measured over time, serving as an indicator of learning and memory. The basic numerical output of this assay is the courtship index (CI), which is defined as the percentage of time that a male spends courting during a 10 min interval. The learning index (LI) is the relative reduction of CI in flies that have been exposed to a premated female compared to na&#239;ve flies with no previous social encounters. For the statistical comparison of LIs between genotypes, a randomization test with bootstrapping is used. To illustrate how the assay can be used to address the role of a gene relating to learning and memory, the pan-neuronal knockdown of Dihydroxyacetone phosphate acyltransferase (Dhap-at) was characterized here. The human ortholog of Dhap-at, glyceronephosphate O-acyltransferase (GNPT), is involved in rhizomelic chondrodysplasia punctata type 2, an autosomal-recessive syndrome characterized by severe ID. Using the courtship conditioning assay, it was determined that Dhap-at is required for long-term memory, but not for short-term memory. This result serves as a basis for further investigation of the underlying molecular mechanisms.

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

This protocol describes a Drosophila learning and memory assay called courtship conditioning. This classic assay is based on a reduction of male courtship behavior after sexual rejection by a non-receptive premated female. This natural form of behavioral plasticity can be used to test learning, short-term memory, and long-term memory.

학습과 기억의 척도 로서의 Drosophila Courtship 컨디셔닝

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model ...

Using Optical Coherence Tomography and Optokinetic Response As Structural and Functional Visual System Readouts in Mice and Rats

Optical coherence tomography (OCT) is a fast, non-invasive, interferometric technique allowing high-resolution retinal imaging. It is an ideal tool for the investigation of processes of neurodegeneration, neuroprotection and neuro-repair involving the visual system, as these often correlate well with retinal changes. As a functional readout, visually evoked compensatory eye and head movements are commonly used in experimental models involving the visual function. Combining both techniques allows a quantitative in vivo investigation of structure and function, which can be used to investigate the pathological conditions or to evaluate the potential of novel therapeutics. A great benefit of the presented techniques is the possibility to perform longitudinal analyses allowing the investigation of dynamic processes, reducing variability and cuts down the number of animals needed for the experiments. The protocol described aims to provide a manual for acquisition and analysis of high quality retinal scans of mice and rats using a low cost customized holder with an option to deliver inhalational anesthesia. Additionally, the proposed guide is intended as an instructional manual for researchers using optokinetic response (OKR) analysis in rodents, which can be adapted to their specific needs and interests.

A detailed protocol for the assessment of structural and visual readouts in rodents by optical coherence tomography and optokinetic response is presented. The results provide valuable insights for ophthalmologic as well as neurologic research.

쥐와 쥐에 구조와 기능적 시각 시스템 판독으로 광학 일관성 단층 촬영 및 Optokinetic 응답을 사용 하 여

Optical coherence tomography (OCT) is a fast, non-invasive, interferometric technique allowing high-resolution retinal imaging. It is an ideal tool for ...

Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% of the total stroke-related mortality with an important morbidity in terms of neurological outcome. A delayed cerebral vasospasm (CVS) may occur most often in association with a delayed cerebral ischemia. Different animal models of SAH are now being used including endovascular perforation and direct injection of blood into the cisterna magna or even the prechiasmatic cistern, each exhibiting distinct advantages and disadvantages. In this article, a standardized mouse model of SAH by double direct injection of determined volumes of autologous whole blood into the cisterna magna is presented. Briefly, mice were weighed and then anesthetized by isoflurane inhalation. Then, the animal was placed in a reclining position on a heated blanket maintaining a rectal temperature of 37 &#176;C and positioned in a stereotactic frame with a cervical bend of about 30&#176;. Once in place, the tip of an elongated glass micropipette filled with the homologous arterial blood taken from carotid artery of another mouse of the same age and gender (C57Bl/6J) was positioned at a right angle in contact with the atlanto-occipital membrane by means of a micromanipulator. Then 60 &#181;L of blood was injected in the cisterna magna followed by a 30&#176; downward tilt of the animal for 2 minutes. The second infusion of 30 &#181;L of blood into the cisterna magna was performed 24 h after the first one. The individual follow-up of each animal is carried out daily (careful evaluation of weight and well-being). This procedure allows a predictable and highly reproducible distribution of blood, likely accompanied by intracranial pressure elevation that can be mimicked by an equivalent injection of an artificial cerebral spinal fluid (CSF), and represents an acute to mild-model of SAH inducing low mortality.

We described in this protocol a standardized subarachnoid hemorrhage (SAH) mouse model by a double injection of autologous whole-blood into the cisterna magna. The high degree of standardization of the double-injection procedure represents a middle-to-acute model of SAH with relative safety regarding mortality.

수브라크누드 출혈의 모델로 시스테나 마그나에 혈액을 이중 직접 주입

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% ...