이 작품은 Microsearch 호주의 재단, 및 Myee 코드 링턴 의학 연구 재단에 의해, 호주 프로젝트 그랜트 1,029,205의 국립 보건 의학 연구위원회 (NHMRC)에 의해 지원되었다.

이전 실험의 시작에, 계획 한 실험에 대한 관련 기관의 동물 관리 윤리위원회의 승인을 얻을 수 있습니다. 교육 기관의 요구 사항에 따라 쥐를 유지한다. 다음 프로토콜은 시드니 대학과 로얄 프린스 알프레드 병원위원회에 의해 승인되었습니다. 이전에 수술을 시작으로, 모든 장비는 철저하게 청소해야하고 80 % 에탄올에 담가 살균. 일부 기관은 그러나이 장기간에 걸쳐 미세 미세 수술 장비를 손상시킬 수있는 고압 증기 멸균을 규정. 가능하면 사용 멸균 일회용 장비. 1. 마취 <ol><li> 밀폐 된 용기에 이소 플루 란으로 마우스를 마취 한 후 신속하게 마취 코 콘을 연결, 운영 칠판에 부정사 배치합니다. 더 반사가 없도록하기 위해 뒷발을 곤란하게하여 마취의 시험 적정성. </li><li> 수술 칼날로 피부를 면도80 % 에탄올로 소독. 또, 70 % 이소 프로필 알코올 2 % 클로르헥시딘 피부 소독을 위해 사용될 수있다. 마취 유도시 이소 플루 란 농도는 3 %이지만, 유지 보수를 위해 1.5 %에이를 줄일 수 있습니다. 일반 호흡과 심장 박동을 유지하기 위해이 농도에 약간의 조정을합니다. 가열 패드에 동물의 온도를 유지한다. </li></ol> 2. 기부자 운영 <ol><li> 가슴 벽의 플랩을 형성하는 흉부의 검상 부부의 수준에서 가로 컷 다음에 겨드랑이에 리브의 가장자리에서 흉곽의 양쪽을 통해 가슴을 절단하여 심장과 혈관을 노출하는 개흉술을 확인합니다. 머리 옆이 플랩을 올리고 운영 보드에 핀. 심장과 혈관을 노출 심낭을 벗겨. </li><li> 한 손과 IVC를 통해 마음에 다른 주사 1 ㎖ 차가운 헤파린 식염수 근위부와 집게로 하대 정맥을 들어 올린 다음 예방과하는 IVC에 작은 동맥 클램프를 넣어다시 바늘 구멍을 통해 관류 액의 T 흐름. </li><li> 거즈와 면봉을 사용하여, 상행 대동맥과 폐동맥을 노출 아래로 마음을 철회. 대동맥과 폐동맥의 번들 채널 (가로 동) 후부를 통해 microscissors 한 쌍 중 하나 블레이드를 전달하고 문합에 충분한 길이를 확보하기까지 원심 가능한 한 함께 대동맥과 폐동맥을 절단. </li><li> 넥타이와 IVC 오른쪽 우수한 대정 맥 (SVC)에 나누어은 6-0 실크 실을 사용하여 SVC 및 폐 혈관을 떠났다. 별도로 IVC 오른쪽 SVC를 연결 한 후 폐 혈관과 함께 왼쪽 SVC를 둘러싸고을 묶어 심장에 단일 스레드의 후방 배치합니다. 이식 될 때까지 4 ° C에서 저온 멸균 식염수에 보관 한 후, 관계에 말초 혈관을 절단하여 기증자 사이트에서 마음을 수확. 이 일어난 과다 출혈로 기증자의 사망을 초래한다. </li></ol> 3.받는 작업 <ol><li> 마취(섹션 1) 상기와받는 사람. 조심스럽게 견인기를 형성하기 위해 절곡 흉부의 검상 부부와 종이 클립을 사용하여 철회 치골의 중간 선 절개 개복술을 한 후, 자극을 방지하기 위해 복부를 면도. 따뜻한 멸균 식염수 적신 거즈로 장을 감싸고 복부의 오른쪽 상단에 철회. </li><li> 인프라 신장 대동맥과 IVC를 노출하려면 소작 장치를 사용하여 허리 혈관에서 그들을 나누어 장골 분기에 왼쪽 신장 동맥과 정맥에서 대동맥과 IVC의 번들 세그먼트를 무료. 소작 정확한 온도와 용기의 끝을 분할하고 밀봉 할 수있는 충분한 시간을 사용하는 것을주의하십시오. </li><li> 대동맥 및 원심과 근위 IVC 세그먼트에 작은 atraumatic 혈관 클램프를 적용합니다. 제 30 G 바늘 구멍을 천공하여 대동맥의 전방 벽에 절개를; 다음 기증자의 대동맥의 크기에 맞게 microscissors 수직으로 절개를 잘라. 모든 BL을 제거하기 위해 헤파린 식염수로 대동맥 루멘을 세척짐 우드 혈전. </li><li> 차가운 식염수에 적신 거즈로 덮여받는 사이트에 기증자의 심장을 가지고 복부의 오른쪽에 놓습니다. 기증자의 대동맥이받는 사람의 대동맥과 다음받는 사람 IVC에 위치 기증자의 폐 동맥에 다음 절개 부위에 위치되어 있는지 확인합니다. </li><li> 동물이 180 °를 회전 무대되는 말단 구석을 도달 할 때까지 첫 번째 왼쪽에 인접 코너와 봉합부터 10-0 나일론 봉합사를 실행하여받는 사람의 대동맥에 기증자의 대동맥 엔드 - 투 - 측면을 Anastomose. 부드럽게 대동맥 우측을 노출하고 기단부에 말단에서 대동맥 벽의 우측을 통해 봉합을 계속 복부 좌측 공여체 심장을 이동. 대동맥 문합을 닫기 전에, 온화하게 어떤 응고 및 공기를 제거하기 위해 헤파린 식염수로 루멘을 세척하십시오. </li><li> 받는 사람 IVC와 기증자 폐동맥 (PA) 엔드 - 투 - 측면을 Anastomose. 절개 버전을학적으로 동맥 문합에 따라 사이트의 IVC의 전면 벽에 microscissors와. IVC의 루멘 내에서 좌측 벽의 선단부터 10-0 나일론 봉합사를 실행하여 수신자 IVC에 도너 PA를 Anastomose. 근위 끝에 도달 한 후 문합을 완료 말단부까지 전면 오른쪽 벽을 따라 봉합을 계속합니다. 문합을 닫기 전에, 온화하게 어떤 혈전과 공기를 제거하기 위해 루멘을 세척하십시오. </li><li> 지혈이 될 때까지면 주걱 혈관 클램프, 문합 사이트의 주위에 Gelfoam 대신 조각 및 적용 부드러운 압력을 해제하기 전에. 재관류시에, 근위 클램프이어서 제 원위 클램프를 해제. </li><li> 재관류 후에는 복구를 지원하기 위해 외부에서 이식에 37 ° C에서 따뜻한 식염수를 적용합니다. 이식은 일반적으로 즉시 세동을 시작하고 몇 분 이내에 동 율동에 자발적으로 되돌아갑니다. 따뜻한 0.6 ㎖를 주입받는 사람의 수분을 유지하기 위해 생리 식염수를 피하. 수술 전에 완료에 진통제에 부 프레 노르 핀의 피하 주사 </li><li> 두 층을위한 하나의 5-0 흡수 실행 봉합과 복부 상처를 닫습니다. 내부 층을 작성하여 시작하고 피부를 따라 계속합니다. </li></ol> 4. 복구 및 이식 모니터링 <ol><li> 감염의 예방을 위해 암피실린을 주입 및 복구를 위해 37 ° C에서 가열 패드에받는 사람을 배치합니다. 대부분의 동물은 신속하게 복구하고 일반적으로 마시는 종종 3 시간 이내에 먹고있다. 마우스가 고통의 흔적이있는 경우, 원인을 파악하기 위해 긴밀하게 검사합니다. 명백한 원인이있는 경우, 부 프레 노르 핀과 치료와 밀접하게 모니터링 할 수 있습니다. 증상이 심한 또는 8 시간 이상 지속되면 수의사를 상담하고 안락사를 고려하십시오. 필요한 경우, 증상이 해결 될 때까지 부 프레 노르 핀의 12 시간마다 주사를 계속 제공합니다. 마우스가 고통의 흔적이있는 경우 8 시간 후, 계속 12 줄부 프레 노르 핀의 시간당 주사가 해결 될 때까지. 증상이 더 이상 48 시간 동안 계속하고 필요한 경우 안락사 경우 수의사에게 문의하십시오. </li><li> 직접 복부 촉진으로 이식 심장 박동을 모니터 + + + + 등의 건강한 발달에 의한 거절에 약한 비트에 대한 +에 이식하고 이길의 강도를 기록 - 이식의 거부 반응을 완료 할 예정이 아닌 구타로. 실험 기간 동안 일주일 후 배 처음 10 일 동안 매일 마우스를 모니터링합니다. </li></ol>

<ol>
	<li>Aramaki, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-10+but+not+transforming+growth+factor-beta+is+essential+for+generation+and+suppressor+function+of+regulatory+cells+induced+by+intratracheal+delivery+of+alloantigen.">Interleukin-10 but not transforming growth factor-beta is essential for generation and suppressor function of regulatory cells induced by intratracheal delivery of alloantigen.</a> Transplantation. 79, 568-576 (2005).</li><li>Chen, R. H., Bushell, A., Fuggle, S. V., Wood, K. J., Morris, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+granzyme+A+and+perforin+in+mouse+heart+transplants+immunosuppressed+with+donor-specific+transfusion+and+anti-CD4+monoclonal+antibody.">Expression of granzyme A and perforin in mouse heart transplants immunosuppressed with donor-specific transfusion and anti-CD4 monoclonal antibody.</a> Transplantation. 61, 625-629 (1996).</li><li>Poulin, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-9+promotes+eosinophilic+rejection+of+mouse+heart+allografts.">Interleukin-9 promotes eosinophilic rejection of mouse heart allografts.</a> Transplantation. 76, 572-577 (2003).</li><li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats.">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 57, 225-229 (1969).</li><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primarily+vascularized+allografts+of+heart+in+mice.">Primarily vascularized allografts of heart in mice.</a> Transplantation. 16, 343-350 (1973).</li><li>Larsen, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-gp39+interactions+play+a+critical+role+during+allograft+rejection.+Suppression+of+allograft+rejection+by+blockade+of+the+CD40-gp39+pathway.">CD40-gp39 interactions play a critical role during allograft rejection. Suppression of allograft rejection by blockade of the CD40-gp39 pathway.</a> Transplantation. 61, 4-9 (1996).</li><li>Saitovitch, D., Bushell, A., Mabbs, D. W., Morris, P. J., Wood, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+induction+of+transplantation+tolerance+with+a+nondepleting+anti-Cd4+monoclonal+antibody+and+donor-specific+transfusion+before+transplantation.+A+critical+period+of+time+is+required+for+development+of+immunological+unresponsiveness.">Kinetics of induction of transplantation tolerance with a nondepleting anti-Cd4 monoclonal antibody and donor-specific transfusion before transplantation. A critical period of time is required for development of immunological unresponsiveness.</a> Transplantation. 61, 1642-1647 (1996).</li><li>Callaghan, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+allograft+survival+by+inhibitory+FcgammaRIIb+signaling.">Regulation of allograft survival by inhibitory FcgammaRIIb signaling.</a> J. Immunol. 189, 5694-5702 (2012).</li><li>Qian, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+donor+MHC+Class+I+or+Class+II+antigen+deficiency+on+first-+and+second-set+rejection+of+mouse+heart+or+liver+allografts.">Impact of donor MHC Class I or Class II antigen deficiency on first- and second-set rejection of mouse heart or liver allografts.</a> Immunology. 88, 124-129 (1996).</li><li>Wang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+acceptance+of+mouse+kidney+allografts+is+associated+with+increased+Foxp3+expression+and+differences+in+the+B+and+T+cell+compartments.">Spontaneous acceptance of mouse kidney allografts is associated with increased Foxp3 expression and differences in the B and T cell compartments.</a> Transpl. Immunol. 24, 149-156 (2011).</li><li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+Heart+Transplantation+in+Mice.">Heterotopic Heart Transplantation in Mice.</a> J. Vis. Exp. , (2007).</li><li>Mottram, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrocardiographic+monitoring+of+cardiac+transplants+in+mice.">Electrocardiographic monitoring of cardiac transplants in mice.</a> Cardiovasc. Res. 22, 315-321 (1988).</li></ol>

저자가 공개하는 게 없다.

마우스 심장 이식 마스터에 상당한 수술 기술을 필요로하는 어려운 미세 수술 방법입니다. 가장 어려운 부분은 혈관의 작은 직경이다. 또, 수신자 동작 시간 및 출혈을 제한하는 것이 필요하다. 마우스의 심장 이식에 대한 기술은 첫 번째 코리 등으로 설명했다. 1973 년 이후에 모트 람 등 (12)에 의해. 우리의 수정은 다음 사항을 포함한다. 첫째, 곧 관류 후 대동맥과 폐동맥 번?...

장기 이식 동물 모델은 임상 이식 환자의 치료를 개선하기위한 가치있는 정보를 제공 할 수있다. 마우스 모델에 의한 유전자 변형 쥐와 다른 동물 모델 1-3을 사용할 수 없습니다 생쥐의 특정 시약의 넓은 범위에 장기 이식 거부 나 수용의 면역 메커니즘을 연구하는데 특히 유용하다. 이식 마우스 모델 도전은 만족스러운 결과를 달성하기 위해 상당한 전문적인 기술을 필요로하는 기증자와받는 사람의 작은 크기입니다. 기술은 첫 번째 이후 코리 등 (5)에 의해 마우스의 심장 이식을 위해 적응 된 쥐 4 마음의 이소성 이식에 대해 설명했다. 이 기술은 전에 기증자의 작업에 대한받는 사람과 이식 된 심장 또는 t의 생존을 손상 할 가능성이 둘 중 기증자의 심장, 전혀 살포를 준비하고 참여그가받는 사람. 원래 이식 거부와 관용 6-8의 메커니즘을 조사하는 바와 같은 절차는 널리 사용되어왔다. 기타 마우스 9,10 심장 이식 오노와 린지의 원래 쥐의 심장 이식 절차를 적용했다. 최근 기술은 코리 등 11의 방법과 관련된 몇 가지 문제를 극복 마우스 심장 이식 출판되었다. 프로토콜은 여기에 설명 포함 모트 람 등 (12)의 방법에 따라 트립 변형, 통합 : 시츄 관류 차가운 헤파린 식염수로 즉시 개흉술 후 수신자 동작 시간을 최소화하기 위해받는 운전 이전 도너 동작을 수행한다. 또한, 우리는 작은 atraumatic 혈관 클램프 대신 6-0 실크 넥타이를 사용합니다. 혈관 클램프가 더 많은 공간을 복용의 단점이 있지만 그들은 너무 빡빡하거나 느슨하게해서는 안되는, 넥타이보다 제어하기가 쉽습니다및 클램프보다 제거 덜 간단합니다. 초기 학습에 대한 대안이 봉합의 균일 성을 보장하고, 따라서 문 합의 개통하는 근위 및 원위 모서리에 숙박 봉합사를 사용하는 스테이지 있지만, 우리의 방법은, 혈관 문합을위한 실행중인 하나의 봉합사를 사용합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="831">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Operating microscope&#160;</td>
			<td style="width:247px;">Leica, Heerbrugg, Switzerland</td>
			<td style="width:124px;">M651</td>
			<td style="width:167px;">10x - 25x magnification</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anesthetic machine&#160;</td>
			<td>Vet Quip Pty Ltd, Sydney, Australia</td>
			<td style="width:124px;">Vett3</td>
			<td>Capable of delivering a mixture of isoflurane and oxygen in air&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Operating board&#160;</td>
			<td style="width:247px;">Hardware store or office supplier</td>
			<td style="width:124px;"></td>
			<td>Dense cork or synthetic capable of taking pins</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:293px;">Heparinised saline (5 U/ml, 4oC)</td>
			<td>Pfizer, USA</td>
			<td style="width:124px;">FW25</td>
			<td>In 1ml syringe with 23 gauge needle on ice</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:293px;">Normal saline (37oC)</td>
			<td style="width:247px;">AstraZeneca Pty Ltd, Australia</td>
			<td style="width:124px;">4538</td>
			<td>In 1ml syringe with 23 gauge needle on warm pad</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Sutures 10- nylon, 5-0 Vicryl</td>
			<td>Ethicon, Inc. NJ, USA</td>
			<td style="width:124px;">2870G/J421H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Buprenorphine (0.05mg/kg in 0.1ml saline)</td>
			<td>Reckitt Benckiser, Sydney, Australia</td>
			<td style="width:124px;"></td>
			<td>In 1ml syringe with 23 gauge needle on ice</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ampcillin (5mg/kg in 0.1 ml saline)&#160;</td>
			<td>Aspen, Sydney, Australia</td>
			<td style="width:124px;"></td>
			<td>In 1ml syringe with 23 gauge needle on ice</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gel Foam&#160;</td>
			<td>Pharmacia &#38; Upjohn Co. USA</td>
			<td style="width:124px;">801289304</td>
			<td>Cut into small pieces</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">High temperature cautery device&#160;</td>
			<td>Medtronic, USA</td>
			<td style="width:124px;">8444000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microsurgery instruments:</td>
			<td colspan="2">Shanghai Medical Instruments Co. Ltd.,&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; micro-needleholders</td>
			<td style="width:247px;">Shanghai, China</td>
			<td style="width:124px;">WT2020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; micro scissors</td>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160; &#34;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; &#34;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; &#34;</td>
			<td style="width:124px;">WT1020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; micro-forceps (straight tip)</td>
			<td style="width:247px;">&#160;&#160;&#160;&#160; &#34;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; &#34;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; &#34;</td>
			<td style="width:124px;">WA3010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; micro-forceps (curved tip)</td>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160; &#34;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; &#34;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; &#34;</td>
			<td style="width:124px;">WA3020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; micro-mosquito clamps (1 pair)</td>
			<td style="width:247px;">&#160;&#160;&#160;&#160; &#34;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; &#34;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; &#34;</td>
			<td style="width:124px;">W40350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; micro-vessel atraumatic clamps (1 pair)</td>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160; &#34;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; &#34;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; &#34;</td>
			<td style="width:124px;">W40130/W40150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:293px;">Heating Pad/Right Temp</td>
			<td style="width:247px;">Kent Scientific Corporation, Turrington, CT 06790</td>
			<td style="width:124px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a modified method for heterotopic mouse heart transplantion

마우스는 종종 때문에 가능한 형질 전환 마우스 및 시약의 넓은 범위에 이식 면역학의 연구에서 심장 이식 기증자와받는 사람으로 사용됩니다. 어려움으로 인해 동물의 작은 크기와 심장 이식에 포함 된 미세의 상당한 기술적 과제로 제시된다. 특히, 초기 이식 후 기술적 인 실패의 높은 비율은받는 사람의 죽음과 같은 뒷다리 마비 또는 비 심장 박동 같은 수술 후 합병증이 발생할 수 있습니다. 여기에, 이소성 마우스 심장 이식을위한 완전한 기술은받는 사람 마우스로 기증자의 마음과 그 이후의 주입을 수확 포함, 보여줍니다. 기증자의 심장은 바로 상행 대동맥과 폐동맥의 차가운 헤파린 식염수와 절개와 현장 관류에 다음 수확한다. 받는 사람의 동작은 다음에, 복부 대동맥과 하대 정맥 (IVC)의 준비를 포함단일 실행 10-0 microsuture 사람과받는 사람 IVC와 기증자 폐동맥 비슷한 문합을 사용하여받는 사람의 대동맥을 가진 기증자의 대동맥의 엔드 - 투 - 측 문합. 수술 후 동물은 0.6 ㎖의 생리 식염수를 피하 주사하고 37 ° C에서 가열 패드에 복구 할 수 있습니다. 227 마우스의 심장 이식의 결과는 86.8 %의 48 시간에서 성공률 요약되어있다. 15 (6.6 %)이 48 시간 이내에 사망하는 동안 48 시간 내에 13.2 %의 실패, 5 (2.2 %), 허혈성 손상 및 / 또는 혈전증 접목에 의한 비 심장 박동을했다 뒷다리 마비, 10 (4.4 %)을 경험 .

초기 훈련 기간 후에, 우리 그룹의 마우스 이소성 심장 이식 227 케이스를 분석 하였다. 제 24 시간 이내 성공률은 90.3 %이었고, 48 시간에서 그것은 86.8 %였다. 48 시간 내에서 30 (13.2 %), 실패, 5 (2.2 %), 뒷다리 마비를 경험하고 안락사했다, 10 (4.4 %)이 동안 15 인해 이식 허혈 손상 및 / 또는 혈전증에 비 심장 박동을했다 (6.6 %)은 48 시간 이내에 사망. 일부 실험 그래프트 생존율은 스트레인 다양한 조합으?...

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A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

A technique is demonstrated for the microsurgical procedure for heterotopic transplantation of hearts in mice, including simplified methods for donor harvesting and recipient vessel anastomosis.

이소성 마우스 심장 장기 이식에 대한 수정 방법

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

11.9K 조회수.  University of Sydney. A technique is demonstrated for the microsurgical procedure for heterotopic transplantation of hearts in mice, including simplified methods for donor harvesting and recipient vessel anastomosis.

비디오: A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) Research

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma and devastating tissue loss. Despite favorable and highly encouraging early and intermediate functional outcomes, rejection of the highly immunogenic skin component of a VCA and potential adverse effects of chronic multi-drug immunosuppression continue to hamper widespread clinical application of VCA. Therefore, research in this novel field needs to focus on translational studies related to unique immunologic features of VCA and to develop novel immunomodulatory strategies for immunomodulation and tolerance induction following VCA without the need for long term immunosuppression.
This article describes a reliable and reproducible translational large animal model of VCA that is comprised of an osteomyocutaneous flap in a MHC-defined swine heterotopic hind limb allotransplantation. Briefly, a well-vascularized skin paddle is identified in the anteromedial thigh region using near infrared laser angiography. The underlying muscles, knee joint, distal femur, and proximal tibia are harvested on a femoral vascular pedicle. This allograft can be considered both a VCA and a vascularized bone marrow transplant with its unique immune privileged features. The graft is transplanted to a subcutaneous abdominal pocket in the recipient animal with a skin component exteriorized to the dorsolateral region for immune monitoring.
Three surgical teams work simultaneously in a well-coordinated manner to reduce anesthesia and ischemia times, thereby improving efficiency of this model and reducing potential confounders in experimental protocols. This model serves as the groundwork for future therapeutic strategies aimed at reducing and potentially eliminating the need for chronic multi-drug immunosuppression in VCA.

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation VCA Research

Vascularized Composite Allotransplantations (VCA) have become a clinical reality. However, broad clinical application of VCA is limited by chronic multi-drug immunosuppression. The authors present a reliable and reproducible large animal model to translate novel immunomodulatory strategies that can minimize or potentially eliminate the need of immunosuppression in VCA.

번역 상 혈관을 조성한 복합 동종 이식 (VCA) 연구를위한 수정 된 이소성 돼지 뒷다리 이식 모델

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma ...

연구

의학

Murine Cervical Heart Transplantation Model Using a Modified Cuff Technique

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are available to perform mechanistic in vivo studies. While heart transplantation models using a suture technique were first successfully developed in rats, the translation into an equally widespread used murine equivalent was never achieved due the technical complexity of the microsurgical procedure. In contrast, non-suture cuff techniques, also developed initially in rats, were successfully adapted for use in mice1-3. This technique for revascularization involves two major steps I) everting the recipient vessel over a polyethylene cuff; II) pulling the donor vessel over the formerly everted recipient vessel and holding it in place with a circumferential tie. This ensures a continuity of the endothelial layer, short operating time and very high patency rates4.
Using this technique for vascular anastomosis we performed more than 1,000 cervical heart transplants with an overall success rate of 95%. For arterial inflow the common carotid artery and the proximal aortic arch were anastomosed resulting in a retrograde perfusion of the transplanted heart. For venous drainage the pulmonary artery of the graft was anastomosed with the external jugular vein of the recipient5.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

The murine cervical heart transplantation model is well suited for immunological as well as ischemia reperfusion injury studies. We modified the procedure using a non-suture cuff technique and performed more than 1,000 successful transplants with this approach.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

수정 커프 기술을 사용하여 쥐의 자궁 심장 이식 모델

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are ...

Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become proficient in and utilize this technique, it is now widely used by many laboratories around the world. A significant refinement to the original technique was developed and reported in 2001 by Niimi. Described here are the techniques that have evolved over more than a decade in the hands of three surgeons (Plenter, Grazia, Pietra) in our center. These techniques are now being passed on to a younger generation of surgeons and researchers.
Based largely on the Niimi experience, the procedures used have evolved in the fine details - details which we will endeavor to relate here in such a way that others may be able to use this very useful model. Like Niimi, we have found that a video aid to learning is a priceless resource for the beginner.

The manuscript describes the steps required to perform the heterotopic heart transplant in the mouse.

쥐 이소성 심장 이식 기술

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed results. However, the cellular and molecular mechanisms of the neotissue development, valve thickening, and stenosis development are not researched extensively. To answer the above questions, we developed a murine heterotopic heart valve transplantation model. A heart valve was harvested from a valve donor mouse and transplanted to a heart donor mouse. The heart with a new valve was transplanted heterotopically to a recipient mouse. The transplanted heart showed its own heartbeat, independent of the recipient&#8217;s heartbeat. The blood flow was quantified using a high frequency ultrasound system with a pulsed wave Doppler. The flow through the implanted pulmonary valve showed forward flow with minimal regurgitation and the peak flow was close to 100 mm/sec. This murine model of heart valve transplantation is highly versatile, so it can be modified and adapted to provide different hemodynamic environments and/or can be used with various transgenic mice to study neotissue development in a tissue engineered heart valve.

In order to understand the cellular and molecular mechanisms underlying neotissue formation and stenosis development in tissue engineered heart valves, a murine model of heterotopic heart valve transplantation was developed. A pulmonary heart valve was transplanted to recipient using the heterotopic heart transplantation technique.

이소성 심장 이식 마우스 모델을 사용하여 폐동맥 판막 이식

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Rat Heterotopic Abdominal Heart/Single-lung Transplantation in a Volume-loaded Configuration

Herein, we describe a novel technique for heterotopic abdominal heart-lung transplantation (HAHLT) in rats. The configuration of the transplant graft involves anastomosis of donor inferior vena cava (IVC) to recipient IVC, and donor ascending aorta (Ao) to recipient abdominal Ao. The right upper and middle lung lobes are preserved and function as conduits for blood flow from right heart to left heart.
There are several advantages to using this technique, and it lends itself to a broad range of applications. Because the graft is transplanted in a configuration that allows for dyamic volume-loading, cardiac function may be directly assessed in vivo. The use of pressure-volume conductance catheters permits characterization of load-dependent and load-independent hemodynamic parameters. The graft may be converted to a loaded configuration by applying a clamp to the recipient&#8217;s infra-hepatic IVC. We describe modified surgical techniques for both donor and recipient operations, and an ideal myocardial protection strategy. Depending on the experimental aim, this model may be adapted for use in both acute and chronic studies of graft function, immunologic status, and variable ventricular loading conditions. The conducting airways to the transplanted lung are preserved, and allow for acute lung re-ventilation. This facilitates analysis of the effects of the mixed venous and arterial blood providing coronary perfusion to the graft.
A limitation of this model is its technical complexity. There is a significant learning curve for new operators, who should ideally be mentored in the technique. A surgical training background is advantageous for those wishing to apply this model. Despite its complexity, we aim to present the model in a clear and easily applicable format. Because of the physiologic similarity of this model to orthotopic transplantation, and its broad range of study applications, the effort invested in learning the technique is likely to be worthwhile.

We describe a novel technique for heterotopic abdominal heart-lung transplantation (HAHLT) in rats. The transplant configuration results in a partially loaded graft circulation, allowing direct functional assessment. This model may be employed for acute or chronic studies of function and immunologic status of the transplanted graft.

쥐 이소성 복부 심장 / 볼륨로드 구성에서 단일 폐 이식

Herein, we describe a novel technique for heterotopic abdominal heart-lung transplantation (HAHLT) in rats. The configuration of the transplant graft ...

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies this model by avoiding challenging suture anastomoses of small vessels thereby reducing warm ischemia time. In comparison to abdominal graft implantation the cervical model is less invasive and the implanted graft is easily accessible for further follow-up examinations. Anastomoses are performed by pulling the ascending aorta of the graft over the cuff with the recipient&#8217;s common carotid artery and by pulling the main pulmonary artery over the cuff with the external jugular vein. Selection of appropriate cuff size and complete mobilization of the vessels are important for successful revascularization. Ischemia-reperfusion (I/R) injury can be minimized by perfusing the graft with a cardioplegic solution and by hypothermia. In this article, we provide technical details for a simplified and improved cuff technique, which should allow surgeons with basic microsurgical skills to perform the procedure with a high success rate.

The cuff technique shortens and facilitates the model of heterotopic cervical heart transplantation in mice by avoiding technically challenging suture anastomoses of small vessels. The technical details shown in this video paper should allow researches to establish this model in their laboratories.

마우스의 이소성 자궁 심장 이식

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies ...

A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression must be pursued. Employing vascularized bone marrow transplantation and co-transplantation of the thymus have shown promise in this regard in various animal models.1-11 Vascularized bone marrow transplantation allows for the uninterrupted transfer of donor bone marrow cells within the preserved donor microenvironment, and the incorporation of thymus tissue with vascularized bone marrow transplantation has shown to increase T-cell chimerism ultimately playing a supportive role in the induction of immune regulation. The combination of solid organ and vascularized composite allotransplantation can uniquely combine these strategies in the form of a novel transplant model. Murine models serve as an excellent paradigm to explore the mechanisms of acute and chronic rejection, chimerism, and tolerance induction, thus providing the foundation to propagate superior allograft survival strategies for larger animal models and future clinical application. Herein, we developed a novel heterotopic en bloc chest wall, thymus, and heart transplant model in mice using a cervical non-suture cuff technique. The experience in syngeneic and allogeneic transplant settings is described for future broader immunological investigations via an instructional manuscript and video supplement.

To study combined solid organ and vascularized composite allotransplantation, we describe a novel heterotopic en bloc chest wall, thymus, and heart transplant model in mice using a cervical non-suture cuff technique.

마우스의 소설 미세 수술 이소성 모델, 욕실 공산권 가슴 벽, 흉선, 및 심장 이식

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression ...

A Simplified Model for Heterotopic Heart Valve Transplantation in Rodents

There is an urgent clinical need for heart valve replacements that can grow in children. Heart valve transplantation is proposed as a new type of transplant with the potential to deliver durable heart valves capable of somatic growth with no requirement for anticoagulation. However, the immunobiology of heart valve transplants remains unexplored, highlighting the need for animal models to study this new type of transplant. Previous rat models for heterotopic aortic valve transplantation into the abdominal aorta have been described, though they are technically challenging and costly. For addressing this challenge, a renal subcapsular transplant model was developed in rodents as a practical and more straightforward method for studying heart valve transplant immunobiology. In this model, a single aortic valve leaflet is harvested and inserted into the renal subcapsular space. The kidney is easily accessible, and the transplanted tissue is securely contained in a subcapsular space that is well vascularized and can accommodate a variety of tissue sizes. Furthermore, because a single rat can provide three donor aortic leaflets and a single kidney can provide multiple sites for transplanted tissue, fewer rats are required for a given study. Here, the transplantation technique is described, providing a significant step forward in studying the transplant immunology of heart valve transplantation.

This protocol describes a simple and efficient method for the transplantation of aortic valve leaflets under the renal capsule to allow for the study of alloreactivity of heart valves.

설치류의 이종 주제 심장 판막 이식을위한 단순화 된 모델

There is an urgent clinical need for heart valve replacements that can grow in children. Heart valve transplantation is proposed as a new type of ...

A Porcine Heterotopic Heart Transplantation Protocol for Delivery of Therapeutics to a Cardiac Allograft

Cardiac transplantation is the gold standard treatment for end-stage heart failure. However, it remains limited by the number of available donor hearts and complications such as primary graft dysfunction and graft rejection. The recent clinical use of an ex vivo perfusion device in cardiac transplantation introduces a unique opportunity for treating cardiac allografts with therapeutic interventions to improve function and avoid deleterious recipient responses. Establishing a translational, large-animal model for therapeutic delivery to the entire allograft is essential for testing novel therapeutic approaches in cardiac transplantation. The porcine, heterotopic heart transplantation model in the intraabdominal position serves as an excellent model for assessing the effects of novel interventions and the immunopathology of graft rejection. This model additionally offers long-term survival for the pig, given that the graft is not required to maintain the recipient's circulation. The aim of this protocol is to provide a reproducible and robust approach for achieving ex vivo delivery of a therapeutic to the entire cardiac allograft prior to transplantation and provide technical details to perform a survival heterotopic transplant of the ex vivo perfused heart.

We present a protocol for utilizing a normothermic ex vivo sanguinous perfusion system for the delivery of therapeutics to an entire cardiac allograft in a porcine heterotopic heart transplant model.

심장 동종이식편에 치료제를 전달하기 위한 돼지 이질성 심장 이식 프로토콜

Cardiac transplantation is the gold standard treatment for end-stage heart failure. However, it remains limited by the number of available donor hearts ...

A Modified Cuff Technique for Mouse Cervical Heterotopic Heart Transplantation Model

Cardiac allograft rejection limits the long-term survival of patients after heart transplantation. A mouse heart transplantation model is ideal for investigating the mechanism of cardiac allograft rejection in preclinical studies because of their high homology with human genes. This understanding would help develop unique approaches to improving patients&#39; long-term survival treated with cardiac allografts. In a mouse model, abdominal donor heart implantation is commonly performed with an end-to-end&#160;anastomosis to the recipient&#39;s aorta and inferior vena cava using stitches. In this model, the donor&#39;s heart is implanted by end-to-end anastomosis to the recipient&#39;s carotid artery and jugular vein by the modified-Cuff technique. The transplantation surgery is performed without stitching and thus may increase the survival of the recipient since there is no interference with the blood supply and venous reflux of the lower body. This mouse model would help investigate the mechanisms underlying the immunological and pathological (acute/chronic) rejection of cardiac allografts.

In the present protocol, a mouse heart transplantation model is used for investigating the mechanism of cardiac allograft rejection. In this heterotopic heart transplantation model, operation efficiency is improved, and the survival of cardiac grafts is ensured by a cervical end-to-end anastomosis of heart implantation using a modified Cuff technique.

마우스 자궁경부 이종 심장 이식 모델을 위한 수정된 커프 기술

Cardiac allograft rejection limits the long-term survival of patients after heart transplantation. A mouse heart transplantation model is ideal for ...