기금은 &quot;PROGETTO concorso 폰다 치오 IRCCS 오스 페달 마조 레 Policlinico 2009년부터 2010년까지&quot;MD, 그리고 Associazione 밤비노 Nefropatico ABN Onlus, 밀라노에 의해 제공되었다

모든 동물 실험은 국립 과학적인 목적을 위해 사용하고 검토와 밀라노 대학의 윤리위원회에 의해 승인 된 동물의 보호에 관한 유럽의 현재의 규정에 따라 수행되었다. 차 조골 세포의 1. 격리 상기 방법은, 사소한 수정으로, Dodig 등 (14)에 의해 기술 된 절차를 따른다. <ol><li> 0.1 % 콜라게나 제 P와 0.05 %를 추가하여, 매체를 소화 준비 HBSS 매체 (행크스 균형 소금 솔루션, 아니 칼슘, 마그네슘, 또는 페놀 레드)에 (2.5 % 트립신 10 배, 아니 페놀 레드에서 시작) 트립신. </li><li> 3~4일 이전 마우스를 사용하여 (절차 1 마우스 적은에 적용될 수있다.) </li><li> 잘린 희생. 70 % 에탄올로 머리를 살포하고 얼음에 보관. 핀셋과 해부 / 외과 가위로 피부와 근육 층을 제거합니다. </li><li> 부드럽게 정수리 뼈를 제거하고두 반쪽의 시상 봉합에 따라 구분합니다. 반드시 뼈를 봉합하고 자기편 조직 무료입니다 확인하고 절차가 완료 될 때까지 HBSS 매체를 포함하는 잘 접시에 개별 뼈 조각을 배치합니다. </li><li> HBSS를 취소하고 각 웰에 추가 37 ℃에서 15 분 동안 소화 매체 </li><li> 상층 액을 버린다. </li><li> 다시 37 ℃에서 15 분 동안 소화 매체를 추가 </li><li> 이 시간은 상등액을 저장하고 10 % FBS (태아 혈청)과 1 % 스트렙토 마이신 / 페니실린과 보충 α-MEM (최소 필수 중간)에 배치합니다. </li><li> 반복은 1.7 및 1.8 배 단계를 반복합니다. </li><li> 5 분 425g에 원심 분리하여 세 수집 분수, 스핀 세포 해변, 상층 액을 버린다 세포 펠렛을 재현 탁하는 보충 알파-MEM 3 ㎖를 추가하고, 전송 25cm 2 플라스크. </li><li> 파편과 죽은 세포를 제거하는 24 시간 후에 매체를 변경합니다. </li><li> 50 ㎍ / ㎖의 아스 코르 빈산 (AA)과 글리 3 밀리미터 추가cerol 2 - 인산이 나트륨 염 α-MEM 배지로 하이드레이트 (GP). </li><li> 그 후, 매일 (α-MEM 플러스 AA / GP) 매체를 변경합니다. </li></ol> 2. ATRA 프로토콜 <ol><li> 불 활성화를 방지하기 위해 어두운 방에 ATRA (모든 - 트랜스 레티노 산) 모든 실험을 실시한다. </li><li> HBSS 매체 1X 트립신 용액을 제조하고 사용할 때까지 37 ° C로 유지한다. </li><li> subconfluent 세포에서 매체를 제거하고 조심스럽게 HBSS로 세척. </li><li> 1 ML 트립신을 추가, 부드럽게 모든 세포는 트립신에 의해 보호 될 수 있도록 플라스크를 회전하고, 37 ℃에서 3 분 동안 품어 </li><li> 거꾸로 현미경으로 세포의 실제 분리를 확인합니다. </li><li> 트립신을 불 활성화하는 α-MEM 배지 3 ㎖를 추가합니다. </li><li> 세포를 복구하고 425g에서 15 분 동안 원심 분리. </li><li> 신선한 배지에서 세포 펠렛을 재현 탁. </li><li> 혈구 계산 챔버의 하락을 놓고, 몇 분 동안 정착 할 수 있도록하고 CE를 계산LL 번호. </li><li> 10,000 세포 / α-MEM 플러스 AA / GP와 cm 2의 밀도로 25cm 2 플라스크에 넣고 세포. 세포 밀도 세포 프로세스와 세포 간 접촉의 최적의 개발에 관련된주의하십시오. 초기 밀도 이상 10,000 세포 / cm 2가 세포 프로세스의 적절한 발달을 저해하지만, 낮은 세포 수로 인해 세포 간 접촉의 부재로, 조기 ​​세포 사멸의 원인. </li><li> 매 24 시간 매체에 5 μm의 ATRA를 추가합니다. </li><li> 형태 학적 변화는 일반적으로 48 시간 후에 관찰 : 형태를 평가하기 위해 매일 세포를 모니터링합니다. 제 24-48 시간 후에, 세포 증식이 정지되어있는 경우, 상기 밀도 replate. 성숙한 골 세포의 균일 한 인구 4 ~ 5 일 후에 존재합니다. 필요에 따라 12 ~ 15 일까지의 임의의 시점에서 전지를 사용한다. </li><li> 세포 (예 : 커버 슬립이나 잘 플레이트와 같은) 다른 지원에 도금하는 경우, 위의 밀도가 유지되어 있는지 확인하고사용할 때까지 ATRA마다 24 시간을 추가로 진행합니다. 실험하기 전에 적어도 24 시간에 대한 새로운 지원을 준수 세포를 둡니다. </li></ol> 3. 면역 염색 <ol><li> 면역 염색의 경우, 커버 슬립에 세포를 플레이트 (버리 (15) 예를 들어 참조) 설치 방법을 따르십시오. </li><li> 예를 들어, 간접 면역 형광에 대해, 30 분 동안 RT에서 어두운 이차 형광 표지 된 항체와 그 후, 가습 챔버 내에서 1 시간 동안 RT에서 일차 항체로 순차 부화, 4 % 파라 포름 알데히드 또는 차가운 아세톤으로 고정 가습 실에서. </li><li> 핵 counterstaining에 DAPI 또는 유사체를 사용하고 중간 안티 페이딩에 탑재합니다. </li></ol> 4. 알리자린 레드 염색 및 추출 <ol><li> 커버 슬립에 세포를 접시. </li><li> 10 분 동안 70 % 에탄올에 coverslip에 침지하여 세포를 고정합니다. </li><li> 알리자린 레드 염색 액의 일부 방울 (1 ㎎ / ㎖, pH를 5.5)와 함께 세포를 커버30 분. </li><li> 수돗물로 커버 슬립을 씻으십시오. 유리 슬라이드에 글리세롤의 드롭으로 장착하고 수직 배의 현미경 20X 배율을 사용하여 이미지를 가지고. </li><li> 위의 과정 후, 수돗물에 슬라이드를 담가 커버 슬립을 복구 할 수 있습니다. </li><li> 웰 플레이트의 각 coverslip에 넣습니다. </li><li> 60 % 과염소산 (양 완전히 세포를 커버 할 수있을 정도로 충분히 커야합니다)를 추가하고 교반과 함께 4 ° C에서 O / N 두십시오. </li><li> 450 nm 파장에서 분광 광도법에 의해 상층의 광학 밀도를 참조하십시오. </li><li> 세포 수에 대한 값을 정규화하기 위해, 10 분 동안 세포 제제 다루 야누스 그린 (PBS에 0.​​2 % 용액)를 추가한다. </li><li> 초순수로 조심스럽게 세척 할 것. </li><li> 0.5 N 염산을 (양 모든 세포를 커버 할 수있을 정도로 충분히 커야합니다)를 추가하고 몇 초 동안 손으로 가볍게 흔들어. </li><li> 분광 광도계로 615 nm에서 흡광도를 참조하십시오. </li></ol>

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	<li>Schneider, P., Meier, M., Wepf, R., M&#252;ller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+quantitative+3D+imaging+of+the+osteocyte+lacuno-canalicular+network.">Towards quantitative 3D imaging of the osteocyte lacuno-canalicular network.</a> Bone. 47 (5), 848-858 (2010).</li><li>Cheng, F., Hulley, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+osteocyte--a+novel+endocrine+regulator+of+body+phosphate+homeostasis.">The osteocyte--a novel endocrine regulator of body phosphate homeostasis.</a> Maturitas. 67 (4), 327-338 (2010).</li><li>Paic, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+differentially+expressed+genes+between+osteoblasts+and+osteocytes.">Identification of differentially expressed genes between osteoblasts and osteocytes.</a> 45 (4), 682-692 (2009).</li><li>Dallas, S. L., Bonewald, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+the+transition+from+osteoblast+to+osteocyte.">Dynamics of the transition from osteoblast to osteocyte.</a> Ann N Y Acad Sci. 1192, 437-443 (2010).</li><li>van der Plas, A., Nijweide, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+purification+of+osteocytes.">Isolation and purification of osteocytes.</a> J Bone Miner Res. 7 (4), 389-396 (1992).</li><li>Nijweide, P. J., van der Plas, A., Alblas, M. J., Klein-Nulend, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteocyte+isolation+and+culture.">Osteocyte isolation and culture.</a> Methods Mol Med. 80, 41-50 (2003).</li><li>Stern, A. R., Stern, M. M., Van Dyke, M. E., J&#228;hn, K., Prideaux, M., Bonewald, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+primary+osteocytes+from+the+long+bones+of+skeletally+mature+and+aged+mice.">Isolation and culture of primary osteocytes from the long bones of skeletally mature and aged mice.</a> Biotechniques. 52 (6), 361-373 .</li><li>Kalajzic, I., Matthews, B. G., Torreggiani, E., Harris, M. A., Divieti Pajevic, P., Harris, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+approaches+to+study+osteocyte.">In vitro and in vivo approaches to study osteocyte.</a> Bone. 54 (2), 296-206 .</li><li>Bonewald, L. 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R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATRA+induces+podocyte+differentiation+and+alters+nephrin+and+podocin+expression+in+vitro+and+in+vivo.">ATRA induces podocyte differentiation and alters nephrin and podocin expression in vitro and in vivo.</a> Kidney Int. 68 (1), 133-144 (2005).</li><li>Dodig, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+TAAT-containing+motif+required+for+high+level+expression+of+the+COL1A1+promoter+in+differentiated+osteoblasts+of+transgenic+mice.">Identification of a TAAT-containing motif required for high level expression of the COL1A1 promoter in differentiated osteoblasts of transgenic mice.</a> J Biol Chem. 271 (27), 16422-16429 (1996).</li><li>Burry, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunocytochemistry.">Immunocytochemistry.</a> A practical guide for biomedical research. , (2010).</li><li>Woo, S. M., Rosse, r. J., Dusevich, V., Kalajzic, I., Bonewald, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+line+IDG-SW3+replicates+osteoblast-to-late-osteocyte+differentiation+in+vitro+and+accelerates+bone+formation+in+vivo.">Cell line IDG-SW3 replicates osteoblast-to-late-osteocyte differentiation in vitro and accelerates bone formation in vivo.</a> J Bone Miner Res. 26 (11), 2634-2646 (2011).</li><li>Gu, G., Nars, M., Hentune, n. T. A., Metsikk&#246;, K., V&#228;&#228;n&#228;nen, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolated+primary+osteocytes+express+functional+gap+junctions+in+vitro.">Isolated primary osteocytes express functional gap junctions in vitro.</a> Cell Tissue Res. 323 (2), 263-271 (2006).</li><li>Boukhechba, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+primary+osteocyte+differentiation+in+a+3D+culture+system.">Human primary osteocyte differentiation in a 3D culture system.</a> J Bone Miner Res. 24 (11), 1927-1935 (2009).</li><li>Krishnan, V., Dhurjati, R., Vogler, E. A., Mastro, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteogenesis+in+vitro:+from+pre-osteoblasts+to+osteocytes:+a+contribution+from+the+Osteobiology+Research+Group,+The+Pennsylvania+State+University.">Osteogenesis in vitro: from pre-osteoblasts to osteocytes: a contribution from the Osteobiology Research Group, The Pennsylvania State University.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 46 (1), 28-35 .</li><li>Irie, K., Ejiri, S., Sakakura, Y., Shibui, T., Yajima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+mineralization+as+a+trigger+for+osteocyte+maturation.">Matrix mineralization as a trigger for osteocyte maturation.</a> J Histochem Cytochem. 56 (6), 561-567 .</li><li>Hirao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxygen+tension+is+an+important+mediator+of+the+transformation+of+osteoblasts+to+osteocytes.">Oxygen tension is an important mediator of the transformation of osteoblasts to osteocytes.</a> J Bone Miner Metab. 25 (5), 266-276 (2007).</li><li>Brounais, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+term+oncostatin+M+treatment+induces+an+osteocyte-like+differentiation+on+osteosarcoma+and+calvaria.">Long term oncostatin M treatment induces an osteocyte-like differentiation on osteosarcoma and calvaria.</a> Bone. 44 (5), 830-839 (2009).</li><li>Gupta, R. R., Yoo, D. J., Hebert, C., Niger, C., Stains, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+an+osteocyte-like+phenotype+by+fibroblast+growth+factor-2.">Induction of an osteocyte-like phenotype by fibroblast growth factor-2.</a> Biochem Biophys Res Commun. 402 (2), 258-264 (2010).</li><li>Poole, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sclerostin+is+a+delayed+secreted+product+of+osteocytes+that+inhibits+bone+formation.">Sclerostin is a delayed secreted product of osteocytes that inhibits bone formation.</a> FASEB J. 19 (13), 1842-1844 (2005).</li><li>Dallas, S. L., Prideaux, M., Bonewald, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Osteocyte:+An+Endocrine+Cell+and+More.">The Osteocyte: An Endocrine Cell and More.</a> Endocr Rev. 34 (5), 658-690 (2013).</li></ol>

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지난 몇 년 동안 골 세포가 뼈에서 가장 중앙 세포로 떠오르고있다. 연구의 발전은 점진적으로 뼈 질환의 다양한 소설과 더 나은 치료를 디자인하는 엄청난 가치가 이전에 의심받지 검증되지 않은 골 세포의 속성의 수를 공개하고 있습니다. 그러나, 골 세포 생물학의 연구는 골 세포와 같은 세포 라인 MLO-Y4가 제공되기 전에 조골 세포가 오랜 기간 동안 대리 세포로 사용되어왔다있을 정도로 체...

골 세포, 가장 풍부한 뼈 세포 유형은 깊게 골격 내에있는 고도로 분지의 말단 분화 세포이다. 성숙한 골 세포의 세포체는 뼈 lacunae에 포함되는 다양한 형태를 가지고있다; 둥근 골 세포가 뼈 소주 1에서 더 자주 반면 신장 세포 기관과 골 세포는 대뇌 피질의 뼈에서 발견된다. 분지 수상 돌기는 다른 골 세포와, 또한 다른 뼈 세포 유형, 골수, 혈관과 관련된 혈관 주위 세포와뿐만 아니라 여러 연락처를 만드는 복잡한 웹을 형성, 눈물 소관이라는 작은 채널에서 세포체에서 연장 상주합니다. lacunae 및 소관에 함유 간질 유체를 통해, 골 세포는 그러므로 지역뿐만 아니라 전신적인 이벤트 및 그 반대의 동작은 로컬 및 전신의 변화 (2)에 의해 조절 될 수뿐만 아니라 영향을 미칠 수있다, 또한 궁극적으로 순환 시스템에 연결된다. 골 세포의 연구는 최근, 이러한 조직과 세포 고유의 형질 전환 동물의 발생, 강력한 현미경 기술과 높은 처리량 분자 스크리닝 3,4의 사용과 같은 몇 가지 기술적 진보, 덕분에 힘을 얻고있다. 그러나, 이들 세포의 기술은 주로 시험 관내 모델에서의 적절한 상대적 부족에 여전히 불완전하다. 사실, 골 세포로 인해 깊은 위치의 획득과 문화에 유지하는 것이 곤란하고, 이러한 분화 된 세포 유형을 특징 짓는 확산의 낮은 수준했습니다. 그들은 일반적으로 낮은 세포 수율을 생산하고 심지어 몇 오염 아세포 급속 골 세포 8 자라다 할 위험을 가지고 있지만 년 함께, 다수의 방법은, 일차 5-7 골 세포를 분리하기 위해 개발되었다. 이러한 이유로, 체외 작업에 대부분의 실험은 잘 확립 된 골 세포의 세포 L에 지금까지 실시 된오프라인 MLO-Y4 9. 추가 시험 관내 방법이 세포 연구의 가능성을 향상시킬 수와 골 세포 생물학 및 병태 생리의 분석을 향상시킬 수 있습니다. 주로 채택 될 것으로, 이러한 방법은 쉽게 재현해야하며, 세포 성숙에 도달하기 위해 특수 장비 또는 매우 긴 시간이 필요하지 않을 것입니다. 일차 전지에 적용 할 경우 중요한 것은, 그들은 그것이 가능한 형질 전환 동물을 활용하도록 만들 것입니다. 우리는 최근 조골 세포주 MC3T3-E1 지점 레티노 산과 차 조골 세포의 치료는 골 세포 (10)의 형태 및 분자의 특징을 담 분지 셀 균질 집단의 발전을 선도 급속한 표현형의 변화를 유도하는 것을 설명했다. 모든 - 트랜스 레티노 산 (ATRA)는 핵 레티노 산 수용체 (RAR들)을 결합하여 유전자 전사를 조절하는 비타민 A의 활성 대사 제품입니다. RAR의궁극적으로 레티노 산 (RA) 응답 표적 유전자 (11)의 변조로 이어지는, 레티노이드 X 수용체 (RXRS)와 이종로 DNA에 결합. ATRA는 신경 세포 (12)와 족 세포 (13)와 같은 다른 분지의 세포가 그 (것)들의 사이에서, 여러 종류의 세포 분화와 성숙을 조절하는 것으로 알려져있다. 여기서 설명한 방법은 일차 골아 세포에 ATRA의 첨가에 기초한다. 효과적이기 위하여, ATRA는 정의 된 밀도에서 도금 셀에 정확한 성숙 단계에서 첨가 할 수있다; 우리의 경험에서 이러한 조건은 조골 세포의 골 세포로 표현형의 스위치를 얻을 중요합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:923px;" width="923">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:283px;">Name</td>
			<td style="width:239px;">Company</td>
			<td style="width:219px;">Cat #</td>
			<td style="width:183px;">comments</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Collagenase P</td>
			<td>Roche Applied Science</td>
			<td>11213857001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Trypsin</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>15400054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">HBSS</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>14175129</td>
			<td>Pre-warm at 37&#176;C before use</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Alpha-MEM</td>
			<td>Invitrogen, Life Technologies</td>
			<td>22571038</td>
			<td>Pre-warm at 37&#176;C before use</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">FBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Streptomycin/Penicillin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ascorbic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">glycerol 2-phosphate disodium salt hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G9422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">ATRA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R2625</td>
			<td>Protect ATRA from light</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td>Dissolve in PBS and filter before use. Work always under a chemical hood.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>32670</td>
			<td>Can be added to the secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Alizarin red</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Janus Green</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>201677</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Perchloric acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>176745</td>
			<td>Use with caution (skin and eye protection are recommended)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">HCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>320331</td>
			<td>Use with caution (skin and eye protection are recommended)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G5516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">fluorsave</td>
			<td>Calbiochem - Merck</td>
			<td>345789</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Economy Tweezers #7, 0.40 x 0.5mm tips</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501981</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Economy Tweezers #4, 0.40 x 0.45mm tips</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501978</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dissecting Scissors, straight,10cm curved</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>14394</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical Scissors, 14 cm, straight, S/S</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501218</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Culture flasks</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430168</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Well-plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3335</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Thermanox coverslips</td>
			<td>Thermo Scientific Nunc</td>
			<td>12-565-27</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">microscope</td>
			<td>Zeiss Apotome</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">spectrometer</td>
			<td>Safas Xenius</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

application of retinoic acid to obtain osteocytes cultures from primary mouse osteoblasts

<html> 골 세포 배양의 필요성은 잘 뼈 연구원의 지역 사회에 알려져있다; 기본 골 세포의 분리가 어렵고, 낮은 세포 수를 생산하고 있습니다. 따라서, 가장 광범위하게 사용되는 셀룰러 시스템은 골 세포 조의 MLO-Y4 세포주이다. 여기에서 설명하는 방법은 형태 학적 및 분자 골 세포의 기능과 분지 세포의 균일 한 인구를 생성하는 레티노 산의 사용을 말합니다. 쥐의 두개골로부터 골아 세포의 분리 후, 모든 - 트랜스 레티노 산 (ATRA)이 세포 배지에 첨가하고, 셀 모니터링 도립 현미경으로 매일 수행된다. 첫 번째 형태 학적 치료와 차별화 2 일 후에 탐지 가능하면 수상 돌기 세포 외 기질을 생산하는 능력의 손실, 조골 세포 마커의 다운 규제의 점진적 발전과 함께 5 일에서 일반적으로 완료까지 규제 골 세포 특정 분자의. 콘텐츠는 &quot;&gt; 일일 셀 모니터링 때문에 일차 세포의 고유 변동의 필요, 및 프로토콜은 상이한 마우스 균주로부터 얻어진 형질 전환 모델에 적용된 셀에 최소 변화에 적응 될 수있다. 방법은 수행하기 쉽고, 특수 장비를 필요로하지 않으며, 이는 높은 재현성으로, 급속 무제한 생물학적 응용을위한 이들 세포의 사용을 허용하는, 세포 외 기질의 완전한 부재 하에서 성숙한 골 세포 집단을 생성한다.

결과는 5 개의 독립적 인 실험 10을 얻었다. 세포 형태 AA / GP는 일차 전지는 대부분 조약돌 같은 기능, 성숙한 조골 세포의 특성을 가지고 처리. 산재 분지 세포 (그림 1A에서 빨간색 화살표로 표시된)을 가능성이 골 세포를 대표하는 찾을 수 있습니다. ATRA 치료로, 세포는 빠르게 일반적으로 이일 후 관찰되는 파급 효과를 표?...

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Application of Retinoic Acid to Obtain Osteocytes Cultures from Primary Mouse Osteoblasts

레티노 산으로 기본 마우스 조골 세포의 치료는 골 세포의 형태 학적 및 분자 기능 베어링 분지 세포의 균일 한 인구를 생산하고 있습니다. 방법은 획득 및 배양 주 골 세포를 유지의 어려움을 극복하고, 형질 전환 모델 유래 세포를 연구하는 것이 유리할 수있다.

기본 마우스 조골 세포에서 골 세포 배양을 구하는 레티노 산의 적용

The need for osteocyte cultures is well known to the community of bone researchers; isolation of primary osteocytes is difficult and produces low cell ...

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Biology

13.3K 조회수.  Fondazione IRCCS Ca' Granda Ospedale Maggiore Policlinico.  레티노 산으로 기본 마우스 조골 세포의 치료는 골 세포의 형태 학적 및 분자 기능 베어링 분지 세포의 균일 한 인구를 생산하고 있습니다. 방법은 획득 및 배양 주 골 세포를 유지의 어려움을 극복하고, 형질 전환 모델 유래 세포를 연구하는 것이 유리할 수있다. 