저자는 영상 내레이션을 제공하는 기술 지원 및 지원, 제임스 바튼에 대한 알렉산드라 오피을 인정하고자하고, 첨부 된 영상에 나타나는에 대한 라모나 Flatz 및 Joellen 스위니. 이 작품은 MJ 머독 자선 신탁 (JED에 부여 번호 2012205)에 의해 지원되었다.

1 스테레오 현미경 시스템 주 :이 프로토콜은 쉽게 영상을 취득하는 기능과, 디지털 카메라에 결합 된 거의 모든 스테레오 현미경 시스템에 적용 할 수 있지만, 정보는 (재료 / 장비의 도표) 연구실에서 사용되는 시스템에 제공된다. <ol><li> 상업적 디지털 카메라에 결합 안 현미경 스테레오 현미경을 이용하여 디지털 영상을 획득. </li><li> 커플 스테레오 현미경 안 현미경 포트 상업적 디지털 카메라를 위해, 스테레오 현미경 광전관 포트 ½x C-마운트를 제거하고 1X C-마운트로 대체. </li><li> 1X C-마운트에 디지털 카메라 커플러 (43mm 스레드)를 탑재합니다. </li><li> 카메라 커플러에 실장이 스텝 다운 링 48mm까지 58mm, 43mm 및 48mm로는, 디지털 카메라를위한 렌즈 어댑터 키트에 디지털 카메라 커플러에서 연결 다리. </li><li> 렌즈 어댑터 키트에 디지털 카메라를 탑재합니다. </li><li> 약 12 배의 결합 배율 (초당 30 프레임, 640 × 480 픽셀)에 대한 현미경 배율 디지털 카메라 세트의 광학 줌과 비디오를 획득. 참고 : 스테레오 현미경의 배율은 삼안 포트의 새롭게 재구성 1X C-마운트에 따라 보상해야합니다. </li></ol> 2 이미징 초파리 셋째 유충 <ol><li> 테이프 마커 캡의 측면이 대략 차지하도록 디지털 카메라에 결합 스테레오 현미경 검정 스테이지 플레이트 영구 마커 ⅓ 카메라의 LCD 모니터에서 관찰 된 뷰의 수직 필드의 ¼한다. 그들이 색상 코드에 사용 이미지화되는 유충의 유전자형을 구별 할 수있는 색상의 구색에 와서 때문에 애벌레 이미징을 수행 할 수있는 단계로 마커 상판을 사용합니다. </li><li> 미세한 포인트 마커의 상부 표면 상에 디지털 카메라의 LCD 모니터에서 관찰 시야를 구별마커. </li><li> 이미지에 대한 제 령 유충을 선택합니다. 셋째 령 유충을 선택하기위한 기준은 몸체 길이, 생활주기의 애벌레 단계, 전방 및 후방 spiracles의 존재 중에 음식 소스로부터 출현하고, 구강 장치 (11)의 하악 후크의 구조였다. 유충은 물 속에서 철저하게 세척하여 청소합니다. </li><li> 광섬유 조명 시스템으로부터의 광 위에서 영구 마커 위쪽 단을 밝히는. 최적의 조명을 제공하는 입사광의 각도를 조정한다. </li><li> 영구 마커 상단의 가장자리에 현미경 초점을 맞 춥니 다. 디지털 영상을 획득 시작합니다. </li><li> 시야를 향 유충 (그림 1)의 전방으로 바로 시야 밖에서 약 75 ° 떨어진 수직 축에서 마커 캡의 측면에 애벌레를 놓습니다. 주 : 마커 캡의 측면에 배치 유충은 번째의 레코드에 카메라 움직임을 허용측면 관점에서 전자 유충. 그것은 그들이 마커 캡의 측면에서 떨어지지 않도록 물과 습기가 애벌레를 유지하는 데 도움이됩니다. 케어는 들판을 가로 질러 크롤 과도한 양의 유충을 준수하므로 물을 너무 많이 사용하지 않는, 그러나 운동을해야합니다. </li><li> 조심스럽게 찌르고보기의 들판을 가로 질러 크롤링을 강요하는 작은 페인트 브러시와 유충을 자극. 애벌레는 거의 협력하지 않고는 직선 들판을 가로 질러 기어 전에 자주 시작점으로 많은 시간을 반환해야 할 환자로합니다. </li><li> 기록 약 10-15 중단 디지털 비디오 영상과 작물의 분 및 디지털 비디오 편집 소프트웨어와 불필요한 영상의 취득 후 제거합니다. </li></ol> 3 이미징 성인 초파리 <ol><li> 일회용 1.5 ml의 분광 폴리스티렌 큐벳에 하나의 성인 초파리를 놓습니다. 참고 : 성인 초파리의 CO 2 진통제를 즉시 난연성 전에ioral 분석 프로토콜은 결과 (12)을 손상시킬 수 있습니다. 성인 초파리가 행동 검사 (13)에 수행하기 전에 CO 2 진통제를 복구하기 위해 24 시간의 기간을 부여하는 것이이 좋습니다. </li><li> 작은면 공을 큐벳의 끝을 연결합니다. 코튼 볼이 넓은 모자 공간을 차지할 정도로 꽉 포장되어 있는지 확인하고, 베트의 감소 된 구획으로 비행을 제한한다. </li><li> 실체 현미경의 스테이지 흰색 접시에 놓고 큐벳을 적절히 디지털 카메라 LCD 모니터에서 관찰 시야와 큐벳의 감소 된 용적 구획 정렬. </li><li> 광섬유 조명 시스템으로부터의 광 위에서 큐벳 밝히는. 최적의 조명을 제공하는 입사광의 각도를 조정한다. </li><li> 현미경 초점 및 디지털 비디오를 획득 시작합니다. </li><li> 기록 약 30-45 중단 디지털 비디오 영상과 작물의 분, 불필요한 제거디지털 비디오 편집 소프트웨어와 영상의 취득 후. </li></ol>

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	<li>Zhang, B., Freeman, M. R., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drosophila neurobiology: a laboratory manual. , (2010).</li><li>Frank, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+approaches+for+studying+synaptic+development,+function,+and+plasticity+using+Drosophila+as+a+model+system.">New approaches for studying synaptic development, function, and plasticity using Drosophila as a model system.</a> J Neurosci. 33, 17560-17568 (2013).</li><li>Mudher, A., Newman, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drosophila : a toolbox for the study of neurodegenerative disease. , (2008).</li><li>Bilen, J., Bonini, N. 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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+protein+that+interacts+with+tubulin+dimers+and+increases+the+catastrophe+rate+of+microtubules.">Identification of a protein that interacts with tubulin dimers and increases the catastrophe rate of microtubules.</a> Cell. 84, 623-631 (1996).</li><li>Cassimeris, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+oncoprotein+18/stathmin+family+of+microtubule+destabilizers.">The oncoprotein 18/stathmin family of microtubule destabilizers.</a> Curr Opin Cell Biol. 14, 18-24 (2002).</li></ol>

저자는 경쟁 이해 관계가 존재하지 않는 것을 선언했다.

신경계의 기능을 연구하기위한 모델 시스템으로 초파리 melanogaster의 강도는 크게 유전 가능한 강력한 도구 수렴 및 개발 강력한 행동 분석의 광범위한 유래한다. 여기서 우리는 측면 관점에서 초파리 성인 및 애벌레 기관차 표현형의 고품질 디지털 영상을 획득하는 간단하고 널리 접근 현미경 기술을 제시한다. 우리는 성공적으로 특성화하고 후방 마비의 정도를 정량화하기 위해이 ...

일반적인 과일 초파리 플라이는 1-3 신경계의 기능을 연구하는 실험 모델 강력한 시스템이다. 구조 진화 및 인간과 신경계의 기능의 보전,뿐만 아니라 유전자 조작의 용이성 및 유전 도구의 광대 한 배열은 초파리보기 인간 신경 퇴행성 질환 (4)를 모델링하는 초연 유기체를 만든다. 신경계의 기능 장애의 원인이 유전자 변이는 종종 장애인 운동으로 가능한 돌연변이 애벌레와 성인 초파리 초래한다. 신경계 결함이있는 돌연변이 체에서 관찰 된 표현형은 운동, 비정상적인 조정하고, 성인의 경련 운동의 속도뿐만 아니라 신체 벽 근육의 연동 수축 적자, 유충의 부분 마비를 감소 등이 있습니다. 이 표현형은 높은 처리량 유전 화면과 돌연변이 유충 5의 운동 분석의 개발에 이용 된, 운동 손상을 정량화하고 신경계의 기능에 필요한 유전자를 식별하기위한 6 성인 7 ~ 10 초파리. 이러한 접근은 유충 및 성인 기관차 동작을 정량화하는 데 매우 유용하지만, 이들은 각각 특정 비정상적인 동작에 대한 정성적인 정보를 전달하지 못한다. 돌연변이 제 령 유충 행동 분석에서 변경된 운동력 파라미터를 나타낼 수있는 반면이 크롤링주기 동안 리듬 연동 수축의 변화, 조정의 일반적인 결여 또는 후방 신체 부분 마비의 결과 인 경우, 예를 들어, 불분명 할 수있다 벽의 근육. 여기서 우리는 측면 관점에서 초파리 성인 및 애벌레 기관차 표현형의 고품질 디지털 영상을 획득하는 간단하고 널리 접근 현미경 기술을 설명합니다. 측면 관점에서 인수 한 디지털 비디오 locomotiv의 미묘한 차이의 직접 관찰 및 분석을 할 수 있습니다더 많은 정보를 사이드 뷰 방향에서 전자의 행동.

<table><tbody><tr><td>Trinocular Stereozoom Microscope</td><td>Olympus Corporation</td><td>SZ6145TR</td><td>&amp;frac12; C-mount was removed and replaced with 1X C-mount</td></tr><tr><td>1X C-mount</td><td>Leeds Precision Instruments</td><td>LSZ-1XCMT2</td><td></td></tr><tr><td>Digital Camera Coupler (43 mm thread)</td><td>Qioptiq Imaging Solutions</td><td>25-70-10-02</td><td></td></tr><tr><td>58 mm to 48 mm Step Down Ring</td><td>B&amp;amp;H Video</td><td>GBSDR5848</td><td></td></tr><tr><td>48 mm to 43 mm Step Down Ring</td><td>B&amp;amp;H Video</td><td>GBSDR4843</td><td></td></tr><tr><td>Lensmate Adapter Kit for Canon G10</td><td>LensMateOnline.com</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Canon PowerShot G10 Digital Camera</td><td>Canon U.S.A., Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml Spectroscopic Polysterene Cuvette</td><td>Denville Scientific</td><td>U8650-4</td><td></td></tr></tbody></table>

acquisition of high-quality digital video of drosophila larval and adult behaviors from a lateral perspective

초파리 melanogaster은 신경계의 기능을 연구하기위한 강력한 실험 모델 시스템이다. 신경계의 기능 장애의 원인이 유전자 변이는 종종 가능한 유충 적절하게 텍스트로 설명하거나 완전히 하나의 사진 이미지로 표현하기 어려운 운동 결함이 표현형이 성인을 생산하고 있습니다. 과학 출판사의 전류 모드는, 그러나, 원고 동행 보조 재료로서 디지털 영상 매체의 제출을​​ 지원한다. 여기에서 우리는 측면 관점에서 모두 초파리 애벌레와 성인 표현형의 고품질 디지털 영상을 획득하는 간단하고 널리 접근 현미경 기술을 설명합니다. 이 탈선 기관차 행동의 관찰과 미묘한 차이와 변화의 분석을 할 수 있기 때문에 사이드 뷰에서 애벌레와 성인 운동의 비디오는 유리하다. 우리는 성공적으로 시각화하고 aberran 정량화하는 기술을 사용했다t는 정리를 포함하여 성인 돌연변이 표현형과 행동뿐만 아니라, 셋째 령 유충의 행동을 크롤링.

우리는 성공적으로 획득하고 stathmin 유전자의 기능의 상실 (그림 2) (14)와 관련된 애벌레 행동 표현형을 정량화하기 위해이 기술을 사용하고 있습니다. stathmin 유전자는 수용성 튜 불린의 풀에서 튜 불린 이량 체를 분할 미세 소관 규제 단백질을 암호화하고, 미세 소관 결합과 해체 (15, 16)을 촉진한다. Stathmin 기능은 말초 신경 축색 돌기 (14)의 미세...

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Acquisition of High-Quality Digital Video of Drosophila Larval and Adult Behaviors from a Lateral Perspective

여기서 우리는 측면 관점에서 초파리 성인 및 애벌레 돌연변이 표현형의 고품질 디지털 영상을 획득하는 간단하고 널리 접근 현미경 기술을 설명합니다.

의 고품질의 디지털 비디오 취득<em&gt; 초파리</em&gt; 측면 관점에서 애벌레 및 성인 동작

Drosophila melanogaster is a powerful experimental model system for studying the function of the nervous system. Gene mutations that cause dysfunction of ...

acquisition-high-quality-digital-video-drosophila-larval-adult

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Acquisition of High-Quality Digital Video of Drosophila Larval and Adult Behaviors from a Lateral Perspective

8.8K 조회수.  Willamette University.  여기서 우리는 측면 관점에서 초파리 성인 및 애벌레 돌연변이 표현형의 고품질 디지털 영상을 획득하는 간단하고 널리 접근 현미경 기술을 설명합니다. 

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Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Inherent processes of Drosophila pupal development can shift and distort the eye epithelium in ways that make individual cell behavior difficult to track during live cell imaging. These processes include: retinal rotation, cell growth and organismal movement. Additionally, irregularities in the topology of the epithelium, including subtle bumps and folds often introduced as the pupa is prepared for imaging, make it challenging to acquire in-focus images of more than a few ommatidia in a single focal plane. The workflow outlined here remedies these issues, allowing easy analysis of cellular processes during Drosophila pupal eye development. Appropriately-staged pupae are arranged in an imaging rig that can be easily assembled in most laboratories. Ubiquitin-DE-Cadherin:GFP and GMR-GAL4&#8211;driven UAS-&#945;-catenin:GFP are used to visualize cell boundaries in the eye epithelium 1-3. After deconvolution is applied to fluorescent images captured at multiple focal planes, maximum projection images are generated for each time point and enhanced using image editing software. Alignment algorithms are used to quickly stabilize superfluous motion, making individual cell behavior easier to track.

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

This protocol presents an efficient method for imaging the live Drosophila pupal eye neuroepithelium. This method compensates for tissue movement and uneven topology, enhances visualization of cell boundaries through the use of multiple GFP-tagged junction proteins, and uses an easily-assembled imaging rig.

의 라이브 영상<em&gt; 초파리</em&gt; 번데기 눈

Inherent processes of Drosophila pupal development can shift and distort the eye epithelium in ways that make individual cell behavior difficult to track ...

연구

발생학

High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila Melanogaster

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field. Studying locomotor behavior in Drosophila melanogaster relies on the ability to be able to quantify changes in motion during or in response to a given task. For this reason, a high-resolution video tracking system, such as the one we describe in this paper, is a valuable tool for measuring locomotion in real-time. Our protocol involves the use of an initial air pulse to break the flies momentum, followed by a thirty second filming period in a square chamber. A tracking program is then used to calculate the instantaneous speed of each fly within the chamber in 10 msec increments. Analysis software then compiles this data, and outputs a variety of parameters such as average speed, max speed, time spent in motion, acceleration, etc. This protocol will discuss proper feeding and management of flies for behavioral tasks, handling flies without anesthetization or immobilization, setting up a controlled environment, and running the assay from start to finish.

The study of complex locomotor behavior in Drosophila melanogaster is dependent upon the ability to quantify changes in a given fly's movement. This article demonstrates how to do this using a high-resolution tracking system.

성인 Drosophila Melanogaster의 로코의 고해상도 비디오 추적

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field.  Studying ...

생물학

An Adjustable High-Definition Imaging System for Behavioral Studies of Drosophila Adults

Drosophila melanogaster is a very powerful model in biological research, but a bad model for photography or videography. This paper describes a simple but effective method to observe and document the behavior or morphology of flies. Flies were placed in a translucent observation chamber c.a. &#216;15 x 5mm (no food inside) or &#216;15 x 12 mm (with an 8 mm-high piece of food inside). After covering with an ultraviolet (UV)/clear filter with high light transmittance, the chamber was placed under a 5-50x zoom stereo microscope, and mini light-emitting diode (LED) video lights were placed on both sides of the microscope to illuminate the chamber to obtain uniform, soft, bright, and nearly shadow-free light. Then, a compact digital camera with 3-5x optical zoom, which can record 1080 P high-definition or higher resolution video (at a frame rate of &#8805;30 fps), was connected to the eyepiece of microscope through a bracket, and photographs or videos were taken through the eyepiece. By adjusting the zoom knob of the zoom stereo microscope, it was very easy to track the flies and take panoramic or detailed close-up images as needed, while the camera recorded everything under the microscope. Because the flies can stay at any position in the chamber, they can be observed and recorded from all directions. The photographs or videos taken are of good image quality. This method can be used both for scientific research and teaching.

An Adjustable High-Definition Imaging System for Behavioral Studies of Drosophila Adults

This protocol describes how to make a simple adult Drosophila behavior observation chamber, and how to take high-definition photographs/videos of the morphology or behavior of different types of fruit flies in the observation chamber through relatively simple and affordable methods.

드로소필라 성인의 행동 연구를 위한 조정 가능한 고화질 화상 진찰 시스템

Drosophila melanogaster is a very powerful model in biological research, but a bad model for photography or videography. This paper describes a simple but ...

행동분석학

Imaging and Analysis of Tissue Orientation and Growth Dynamics in the Developing Drosophila Epithelia During Pupal Stages

Within multicellular organisms, mature tissues and organs display high degrees of order in the spatial arrangements of their constituent cells. A remarkable example is given by sensory epithelia, where cells of the same or distinct identities are brought together via cell-cell adhesion showing highly organized planar patterns. Cells align to one another in the same direction and display equivalent polarity over large distances. This organization of the mature epithelia is established over the course of morphogenesis. To understand how the planar arrangement of the mature epithelia is achieved, it is crucial to track cell orientation and growth dynamics with high spatiotemporal fidelity during development in vivo. Robust analytical tools are also essential to identify and characterize local-to-global transitions. The Drosophila pupa is an ideal system to evaluate oriented cell shape changes underlying epithelial morphogenesis. The pupal developing epithelium constitutes the external surface of the immobile body, allowing long-term imaging of intact animals. The protocol described here is designed to image and analyze cell behaviors at both global and local levels in the pupal abdominal epidermis as it grows. The methodology described can be easily adapted to the imaging of cell behaviors at other developmental stages, tissues, subcellular structures, or model organisms.

Imaging and Analysis of Tissue Orientation and Growth Dynamics in the Developing Drosophila Epithelia During Pupal Stages

This protocol is designed for the imaging and analysis of the dynamics of cell orientation and tissue growth in the Drosophila abdominal epithelia as the fruit fly undergoes metamorphosis. The methodology described here can be applied to the study of different developmental stages, tissues, and subcellular structures in Drosophila or other model organisms.

푸팔 단계 동안 개발 초파리 에피텔리아에서 조직 방향 과 성장 역학의 이미징 및 분석

Within multicellular organisms, mature tissues and organs display high degrees of order in the spatial arrangements of their constituent cells. A ...

A Simple Technique to Assay Locomotor Activity in Drosophila

Drosophila melanogaster is an ideal model organism for studying various diseases due to its abundance of advanced genetic manipulation techniques and diverse behavioral features. Identifying behavioral deficiency in animal models is a crucial measure of disease severity, for example, in neurodegenerative diseases where patients often experience impairments in motor function. However, with the availability of various systems to track and assess motor deficits in fly models, such as drug-treated or transgenic individuals, an economical and user-friendly system for precise evaluation from multiple angles is still lacking. A method based on the AnimalTracker application programming interface (API) is developed here, which is compatible with the Fiji image processing program, to systematically evaluate the movement activities of both adult and larval individuals from recorded video, thus allowing for the analysis of their tracking behavior. This method requires only a high-definition camera and a computer peripheral hardware integration to record and analyze behavior, making it an affordable and effective approach for screening fly models with transgenic or environmental behavioral deficiencies. Examples of behavioral tests using pharmacologically treated flies are given to show how the techniques can detect behavioral changes in both adult flies and larvae in a highly repeatable manner.

A Simple Technique to Assay Locomotor Activity in Drosophila

The present protocol assesses the locomotor activity of Drosophila by tracking and analyzing the movement of flies in a hand-made arena using open-source software Fiji, compatible with plugins to segment pixels of each frame based on high-definition video recording to calculate parameters of speed, distance, etc.

초파리에서 운동 활동을 분석하는 간단한 기술

Drosophila melanogaster is an ideal model organism for studying various diseases due to its abundance of advanced genetic manipulation techniques and ...

In vivo Imaging of Intact Drosophila Larvae at Sub-cellular Resolution

Recent improvements in optical imaging, genetically encoded fluorophores and genetic tools allowing efficient establishment of desired transgenic animal lines have enabled biological processes to be studied in the context of a living, and in some instances even behaving, organism. In this protocol we will describe how to anesthetize intact Drosophila larvae, using the volatile anesthetic desflurane, to follow the development and plasticity of synaptic populations at sub-cellular resolution1-3. While other useful methods to anesthetize Drosophila melanogaster larvae have been previously described4,5,6,7,8, the protocol presented herein demonstrates significant improvements due to the following combined key features: (1) A very high degree of anesthetization; even the heart beat is arrested allowing for lateral resolution of up to 150 nm1, (2) a high survival rate of &gt; 90% per anesthetization cycle, permitting the recording of more than five time-points over a period of hours to days2 and (3) a high sensitivity enabling us in 2 instances to study the dynamics of proteins expressed at physiological levels. In detail, we were able to visualize the postsynaptic glutamate receptor subunit GluR-IIA expressed via the endogenous promoter1 in stable transgenic lines and the exon trap line FasII-GFP1. (4) In contrast to other methods4,7 the larvae can be imaged not only alive, but also intact (i.e. non-dissected) allowing observation to occur over a number of days1. The accompanying video details the function of individual parts of the in vivo imaging chamber2,3, the correct mounting of the larvae, the anesthetization procedure, how to re-identify specific positions within a larva and the safe removal of the larvae from the imaging chamber.

In vivo Imaging of Intact Drosophila Larvae at Sub-cellular Resolution

This protocol describes a reliable method for anesthetization and imaging of intact Drosophila melanogaster larvae. We have utilized the volatile anesthetic desflurane to allow for repetitive imaging at sub-cellular resolution and re-identification of structures for up to a few days1.

서브 세포 해상도 손상 Drosophila의 애벌레의 생체내 이미징에서

Recent improvements in optical imaging, genetically encoded fluorophores and genetic tools allowing efficient establishment of desired transgenic animal ...

<meta charset="utf8"></head><body>번데기가 없는 Drosophila Pupal Leg Morphogenesis의 확장된 라이브 이미징

Long-Term Live Imaging of Drosophila Pupal Leg Development After Puparium Removal

Over the past decades, significant progress has been made in understanding the mechanisms of cell fate determination. However, the process by which fate-determined cells form three-dimensional organismal shapes remains unclear. Recent advances in confocal microscopy have facilitated efforts to observe cell dynamics during development through live imaging. The Drosophila melanogaster pupa is ideal for live imaging due to its immobility, transparent pupal cuticle, and the availability of fluorescent reporter lines. A primary challenge for imaging is the puparium, the cuticle surrounding the pupa, which obstructs optical imaging. While previous methods involved either partial or complete removal of the puparium, maintaining pupal viability for extended periods after this procedure has remained challenging. Here, a simple method is presented for days-long live imaging of the Drosophila leg during the pupal stage, involving complete puparium removal. The method includes removing the puparium from a pupa adhered to double-sided tape, followed by assembling a small chamber on a glass-bottom dish to enclose the pupa and a drop of water. This setup is straightforward, reliable, and supports extended pupal survival by preventing desiccation. Long-term live imaging of the Drosophila pupa has significantly contributed to capturing how the adult leg undergoes dramatic three-dimensional structural changes over 2-3 days. These changes include the transient formation of an intriguing structure (the Parthenon-like structure) by epithelial cells, rapid tissue narrowing, joint formation, and bristle elongation. This method is applicable to the observation of various tissues and can potentially be combined with other techniques, such as optical gene induction, to advance the understanding of cell dynamics during the final shape formation of tissues in the pupal stage.

<meta charset="utf8"></head><body>저자 스포트라이트: 초파리 발달 중 동적 상피 구조 발견

Here, a protocol is presented for long-term live imaging of the Drosophila leg during the pupal stage, involving complete removal of the puparium. This protocol can also be applied to other tissues.

번데기 제거 후 Drosophila Pupal 다리 발달의 장기 라이브 이미징

Over the past decades, significant progress has been made in understanding the mechanisms of cell fate determination. However, the process by which ...

Time-lapse Live Imaging and Quantification of Fast Dendritic Branch Dynamics in Developing Drosophila Neurons

Highly motile dendritic filopodia are widely present in neurons at early developmental stages. These exploratory dynamic branches sample the surrounding environment and initiate contacts with potential synaptic partners. Although the connection between dendritic branch dynamics and synaptogenesis is well established, how developmental and activity-dependent processes regulate dendritic branch dynamics is not well understood. This is partly due to the technical difficulties associated with the live imaging and quantitative analyses of these fine structures using an in vivo system. We established a method to study dendrite dynamics using Drosophila larval ventral lateral neurons (LNvs), which can be individually labeled using genetic approaches and are accessible for live imaging. Taking advantage of this system, we developed protocols to capture branch dynamics of the whole dendritic arbor of a single labeled LNv through time-lapse live imaging. We then performed post-processing to improve image quality through drift correction and deconvolution, followed by analyzing branch dynamics at the single-branch level by annotating spatial positions of all branch terminals. Lastly, we developed R scripts (Supplementary File) and specific parameters to quantify branch dynamics using the coordinate information generated by the terminal tracing. Collectively, this protocol allows us to achieve a detailed quantitative description of branch dynamics of the neuronal dendritic arbor with high temporal and spatial resolution. The methods we developed are generally applicable to sparsely labeled neurons in both in vitro and in vivo conditions.

Time-lapse Live Imaging and Quantification of Fast Dendritic Branch Dynamics in Developing Drosophila Neurons

Here, we describe the method we employed to image highly motile dendritic filopodia in a live preparation of the Drosophila larval brain, and the protocol we developed to quantify time-lapse 3D imaging datasets for quantitative assessments of dendrite dynamics in developing neurons.

초파리 뉴런 개발시 빠른 수지상 분지 역학의 시간 경과 라이브 이미징 및 정량화

Highly motile dendritic filopodia are widely present in neurons at early developmental stages. These exploratory dynamic branches sample the surrounding ...

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번데기 제거 후 Drosophila Pupal 다리 발달의 장기 라이브 이미징

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