세 가지 임상 실험은 분변 미생물 이식이 여러 인간 질병에 대한 치료 잠재력을 가지고 있음을 시사했습니다. 추가 기계 연구는 FMT를 벤치에서 침대 옆으로 가져 오는 데 도움이 될 것입니다. 이 방법은 전달 경로에 경구 위관을 채택하여보다 정확한 부피 전달과 빠른 흡수를 가능하게합니다.
적당한 기술력 만 있으면됩니다. 절차를 시연하는 것은 우리 실험실의 선임 연구원 인 Xioying Zhong이 될 것입니다. 멸균 종이 타월, 뭉툭한 끝 집게, 50 밀리리터 원추형 튜브를 준비하는 것으로 시작하십시오.
종이 타월과 집게를 별도의 오토클레이브 백에 넣고 섭씨 180도에서 30분 동안 건조한 열로 오토클레이브합니다. 멸균 원추형 튜브의 무게를 측정하고 튜브에 무게를 기록하십시오. 동물 실에서 생물 안전 캐비닛을 켭니다.
침구없이 오토 클레이브 된 깨끗한 마우스 케이지를 가져 와서 생물 안전 캐비닛에 넣으십시오. 덮개와 식품 선반을 제거하고 캐비닛 안에 넣습니다. 케이지 바닥에 멸균 종이 타월을 놓고 금속 랙을 케이지 위에 다시 놓습니다.
연령이 일치하는 대변 기증자를 식별하고 마우스 케이지를 생물 안전 캐비닛에 넣습니다. 케이지를 열고 기증자 마우스의 꼬리를 부드럽게 잡고 깨끗한 케이지 상단의 금속 랙에 놓습니다. 케이지 덮개를 랙 위에 놓고 동물이 배변 할 때까지 기다리십시오.
배설물 알갱이를 모아서 멸균 된 50 밀리리터 원추형 튜브에 넣으십시오. 섹스로 펠릿을 당깁니다. 튜브의 무게를 다시 측정하고 배설물 알갱이의 무게를 계산하십시오.
일반 식염수에 10 % 글리세롤 용액을 첨가하여 멸균 용액을 준비하십시오. 이 용액 10 밀리리터를 분변 펠릿 1g 당 원추형 튜브에 첨가하십시오. 이 혼합물을 흄 후드 내부의 벤치탑 균질화기를 사용하여 30초 동안 저속으로 3회 균질화하여 대변을 다시 부유시킵니다.
멸균면 거즈의 두 층을 통해 배설물 현탁액을 걸러냅니다. 여과액을 냉장고에 최대 6시간 동안 임시로 보관하거나 멸균 극저온 바이알에 포장하여 영하 80도 냉동고에 보관하십시오. 표준 절차에 따라 균질화기 또는 블렌더를 철저히 청소하십시오.
냉동 샘플을 사용하는 경우 얼린 분변 현탁액을 얼음에서 해동하십시오. 해동 된 분변 현탁액을 와동하여 혼합하십시오. 신선하거나 해동 된 분변 현탁액을 1 밀리리터 주사기로 옮깁니다.
마우스의 무게를 측정하고 올바른 위관 영양 바늘 크기와 최대 복용량을 선택하십시오. 쥐의 코 끝에서 흉골 바닥까지의 길이를 측정하여 위관 영양 바늘을 테스트합니다. 주사기에 식염수 또는 대변 현탁액에 10 % 글리세롤을 채우고 주사기와 바늘 내부의 기포를 제거하십시오.
하나의 마우스 케이지를 생물 안전 캐비닛에 놓습니다. 플라스틱 케이지 덮개를 제거하고 금속 랙을 제자리에 두십시오. 한 손으로 금속 랙을 엽니다.
꼬리로 마우스 한 마리를 잡고 금속 선반에 놓습니다. 한 손으로 꼬리로 마우스를 잡고 다른 손의 엄지와 중지를 사용하여 어깨 너머의 피부를 잡고 동물을 제지하십시오. 동물의 머리를 부드럽게 뒤로 뻗고 한 손으로 머리를 제자리에 고정하십시오.
입안의 혀 위에 위관 바늘을 놓습니다. 바늘이 식도에 도달 할 때까지 상부 팔레트를 따라 부드럽게 전진하십시오. 바늘을 한 번에 부드럽게 통과시킵니다.
바늘이 제대로 배치되고 확인되면 바늘에 부착 된 주사기를 밀어 재료를 천천히 투여하십시오. 투약 후 바늘을 부드럽게 잡아 당깁니다. 마우스를 표시하고 홈 케이지로 되돌립니다.
호흡 곤란이나 고통의 징후를 찾아 5-10 분 동안 동물을 모니터링하십시오. 분변 미생물 이식 후 12 시간에서 24 시간 사이에 마우스를 다시 모니터링하십시오. 효소 면역 측정법은 B 형 나트륨 이뇨 펩티드가 인터루킨 결핍 마우스 10 마리의 혈장에서 현저하게 상승 된 것으로 나타났다.
건강한 기증자 분변 미생물 이식은 B 형 나트륨 이뇨 펩타이드 수준의 증가를 크게 완화했습니다. 심 초음파는 야생형 마우스에 비해 인터루킨 10 결핍 마우스에서 좌심실 박출률의 현저한 감소를 검출했다. 감소는 분변 미생물 이식에 의해 크게 폐지되었습니다.
이러한 결과는 건강한 기증자 분변 미생물 이식이 대장염을 완화시켜 심장 손상을 유발했음을 시사합니다. 프로토콜을 시도할 때 올바른 위관 바늘을 선택하는 것이 필수적입니다. 유연한 플라스틱 공급 튜브는 초보자에게 더 나은 선택이 될 수 있습니다.
위관 영양 전에 동물 취급을 연습하는 것도 중요합니다.
