Name: orthotopic implantation and peripheral immune cell monitoring in the ii-45 syngeneic rat mesothelioma model
Uploaded: 2015-10-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 31 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Implantation and Peripheral Immune Cell Monitoring in the II-45 Syngeneic Rat Mesothelioma Model at JoVE.com

The syngeneic rat mesothelioma II-45 cell line was a kind gift from A/Prof. Emanuela Felley-Bosco, Zurich University.

동물과 관련된 모든 절차는 과학적인 목적을위한 동물의 관리 및 사용을위한 연습의 호주 코드의 권장 사항에 따라 수행되었다. 본 연구의 프로토콜은 로얄 노스 쇼어 병원 동물 관리 및 윤리위원회에 의해 승인되었다. 여성 피셔 344 쥐 (F344, 1백50-2백그램)가 컨즈 시설 유지하고, 표준 조건 (12 시간 빛 / 어둠 사이클과 음식과 물을 무료로 이용할 수)에서 Kolling 연구소. 참고 : 모든 실험 절차에 대한 흐름도는 그림 1에 제시되어있다. 이식 용 세포의 1. 준비 <ol><li> (또한 IL-45로 알려진; 청석면 석면 복막 도입에 의해 유래) 배양 래트 중피종 II-45 세포주에 RPMI 1640는 (RPMI) 매체 (37 °를 10 % 소 태아 혈청 (FBS) 보충 된 표준 조건에서 성장 5 % CO 2)와 C 가습 인큐베이터. 터 유지 보수75cm 2 플라스크에 계대 두 번 하위 배양 약 1시 50분 주일로한다. </li><li> 37 ° C에서 세포 배양과 따뜻한 분취 시약을 준비합니다. 필요한 시약은 10 % FBS, 인산염 완충 식염수 (PBS)와 0.5 % 트립신 EDTA와 혈청 무료 RPMI 미디어 (SFM), RPMI을 포함한다. </li><li> 약 70-80% 합류에 주입 문화 세포. 이것은 그들이 선형 증식기에 보장한다. </li><li> 미디어를 폐기 멸균 PBS의 5 ㎖로 한 번 세척 한 후 3 ㎖ 0.5 %의 트립신 EDTA를 추가하여 수확 세포. </li><li> 모든 세포는 비 부착 될 때까지 약 5 분 동안 인큐베이터에 플라스크를 돌려줍니다. </li><li> 세포를 비 - 부착되면, 트립신을 불 활성화하고, 10 % FBS RPMI에 3 ㎖를 추가한다. 수집하고 원심 분리기 세포 3 분 300 XG에. </li><li> 3 분 동안 300 XG에 다시 SFM 원심 분리기 10ml에 세포 펠렛을 씻으십시오. </li><li> 10 SFM ㎖의 원심 분리기 위와 같이 다시 세척 세포 펠렛. </li><li> SFM 10ml에 세포를 재현 탁 및 혈구 또는 유사한 장비를 이용하여 세포 수를 수행한다. </li><li> 100 μL를 주입 할 수있는 세포의 양을 함유하도록 세포를 희석. 주 : 종양 성장 100 100 μL 셀이지만 표준 투여 량은 100 μL 500,000 세포만큼 낮은 용량으로 입증되었다. </li><li> 쥐의 수 (즉, 100 μL / 쥐)를 이식하는 미디어에 충분한 세포를 준비 플러스 프라이밍과 바늘의 죽은 볼륨에서 손실을 보상하기 위해 적어도 0.5 ml를 추가. </li><li> 준비 (전지 제외) 충분한 SFM은 대조군 (즉, 100 μL / 쥐)에 이식 할, 플러스 적어도 0.5 ml를 추가. 세포 및 SFM은 이제 주입 준비 :합니다. 그들은 37 O C로 유지하고 생존을 유지하기 위해 수확의 2 시간 내에 이식해야합니다. </li></ol> 세포의 2. 생체 주입<ol><li> 유도 챔버로 F344 래트 (&gt; 13 세 주) 놓고 1.4 % 이소 플루 란 흡입 (또는 설비에 사용 방법)을 사용하여 마취. 쥐 (흐르는 1.4 %의 이소 플루 란) 코 콘에 실에서 잠 움직임을 것으로 나타나면, (복부보기)을 위로 향하게 가슴의 뒷면에 배치합니다. 이 내부 장기 멀리 흉강에서 해결 할 수 있습니다. 쥐를 보장하기 위해 기관 프로토콜에 따라 반사 신경을 확인하는 것은 완전히 마취됩니다. </li><li> 모피를 제거 할 권리 레지오의 costalis (가슴) 영역을 면도. </li><li> 80 % v / V를 에탄올로 면도 영역을 청소합니다. </li><li> 주사 부위를 확인 : 오른쪽에, 2 선이 두개 시작 찾을 수 있습니다. 주사 부위는 흉곽의 꼬리 끝에서 3 번째와 4 번째 늑골 사이에있는이 0.5 cm 근위입니다. (도 2A). </li><li> 부드럽게 재현 탁하는 II-45 세포를 섞는다. 천천히 1 ml의에 세포 현탁액 (또는 대조군에 대한 SFM)을 그릴 &amp;# 160; 부착 된 바늘없는 주사기. 바늘 세포의 드로잉 처리를 위해 연결되어 있다면, 세포가 바늘 주입 라인을 따라 증가 할 가능성이있다. 23G X 1¼ 바늘을 연결합니다. 프라임 바늘과 모든 공기 방울을 제거한다. </li><li> 주사기 및 바늘 프라이밍되면, 바늘 축 위에 20mm 길고 직경 5mm 스페이서 배치. 이것은 주입하는 동안 흉강으로 너무 깊게 침투하는 바늘을 방지하기 위해 사용된다. 노출 바늘 약 5mm-12mm 어떤 장기를 손상시키지 않고 리브를 통해 관통하기에 충분하다. </li><li> 천천히, 갈비뼈 사이에 바늘을 삽입 혈관 (더 혈액이 주사기에 표시되지 않아야합니다)을 100 ㎕의 세포 또는 SFM을 주입 구멍되지 않은 보장하기 위해 주사기에 다시 그립니다. (그림 2B). </li><li> 바늘을 제거하고 부드럽게 흉강에서 셀을 확산 좌우로 쥐를 굴립니다. </li><li> 케이지에 쥐를 넣고 복구를 확인합니다. 목전자의 쥐가 1 분 이내에 깨어 주위를 이동하기 시작해야한다. </li><li> 새 바늘을 사용하여 각 쥐에 대해 반복합니다. 동일한 바늘을 재사용 바늘의 주사 라인을 따라 세포 성장을 초래할 것이다. </li><li> 매일 동물의 복지를 모니터링합니다. </li><li> 기관 동물 윤리위원회에 의해 지배으로 윤리적으로 정의 된 엔드 포인트에서 동물을 안락사. 이 실험에서 쥐에 대한 윤리적 끝점은 ​​10 % 이상 또는 호흡 곤란의 체중 감소 하였다. </li></ol> 3. 꼬리 정맥 혈액 채취 <ol><li> 혈액을 사후 즉시 세포 주입 수집 할 경우, 마취 랫트를 유지한다. 또 다른 시점에서 혈액을 채취하는 경우, 1.4 %의 이소 플루 란을 흡입하여 쥐를 마취. 쥐를 보장하기 위해 기관 프로토콜에 따라 반사 신경을 확인하는 것은 완전히 마취됩니다. </li><li> 옆에 쥐를 놓고 측면 꼬리 정맥을 찾습니다. </li><li> 80 % 에탄올로 소독하고 꼬리를 0.5 ml의 EDTA의 C 레이블ollection 관. </li><li> 혈액을 수집하려면, 항상 (따라 방법의 약 삼분의) 꼬리의 꼬리 끝에서 시작합니다. 이는 첫 번째 시도가 실패한 경우의 꼬리 끝 뇌 더 가깝게 시도 허용한다. 이 혈전을 일으킬 수있는 꼬리 쪽 재 샘플링하지 마십시오. </li><li> 측면 정맥에 23G X 1 ¼ 바늘 평행하게 배치하고 약 10mm (그림 3A)을 관통하도록 얕은 각도로 정맥에 밀어 넣습니다. </li><li> 참고 : 정맥이 성공적으로 구멍이 된 경우 혈액이 바늘 (그림 3B)의 부착 결국 볼 수 있습니다. </li><li> 혈액의 방울은 바늘 구멍의 꼬리 부위에 형성 할 것이다. 레이블 0.5 ㎖ (이하) EDTA 수집 튜브에 피펫 및 전송을 사용하여이 피를 수집합니다. 면역 세포 분석 25 μL 충분하다. 출혈이 멈출 때까지 사이트를 천공하도록 압력 거즈를 적용합니다. </li><li> 홍보하기 위해 혈액과 EDTA를 혼합 혈액 튜브를 쓸어 넘기이벤트 응고. 혈액 수집 및 응고를 방지하기 위해 가능한 한 짧은 EDTA와 혼합 사이의 시간을 유지한다. </li><li> 분석 할 때까지 실온에서 랙에 여러 쥐 저장소 EDTA 혈액 샘플에서 혈액을 수집합니다. 컬렉션의 2 시간 내에 프로세스 혈액. </li></ol> 비드 기반 방법을 사용하여 면역 세포 프로파일 4. 샘플 준비 참고 :이 단일 플랫폼 방법은 각 샘플에 대한 구슬 알려진 번호가 상업적으로 이용 가능한 절대 계수 튜브를 사용하여 사용합니다. 이 튜브는 구슬을 해제 샘플 준비 중에 용해 동결 건조 된 펠릿을 포함하고있다. 비드 형광 표지되고 모집단 비드에 의해 게이팅 절대 카운트가 계산 될 수있다. <ol><li> EDTA 전체 혈액 샘플이 몇 분 동안 느린 회전 믹서를 배치하여 잘 혼합해야합니다. 각 샘플에 대해 하나의 절대 계수 튜브 레이블. 구슬을 포함하는 펠렛 T 아래에 표시되어야합니다상기 튜브의 하단에 그 금속 비드 홀더. </li><li> 레이블이 절대 계수 튜브에 EDTA 전체 혈액의 25 μl를 전송합니다. 비드 펠렛은 혈액의 추가에 용해됩니다. </li><li> 각각의 튜브에 방지 쥐 T / B / 자연 킬러 (NK) 세포 칵테일 20 μL, 안티 쥐 CD8a PE 10 μL, 안티 - 쥐 CD4 (도메인 1) FITC의 10 μL 및 안티 쥐의 10 μl를 추가 CD45 PE / Cy7 (그림 4A). 형광 표 1에 정의되어 있습니다. </li><li> 항체 및 세포가 튜브의 바닥에있는 관의 측면에 붙어 가지 않도록 간단히 튜브 (300 XG)를 원심 분리기. 소용돌이는 혼합하고 실온에서 15 분 동안 품어합니다. </li><li> 적혈구가 10 mM 트리스의 400 μl를 추가 용균하려면 0.15 M 염화 암모늄 완충액 (pH 7.5) 및 와류 믹스합니다. 샘플은 반투명과 흐린하지 (도 4B 및 C)를 나타날 때 용해가 완료됩니다. 시료가 완전히 증가로 이어질 것입니다 용균 실패개발 배경 및 유동 세포 계측법에 의해 분석 할 때 거짓으로 수를 증가. </li></ol> 샘플 5. 유세포 처리 참고 : 흐름 cytometer 4 색에 수행합니다. <ol><li> 그림 5에 도시 된 바와 같이 획득 모드, 8 플롯와 새 템플릿에서 소프트웨어를 엽니 다. </li><li> 표 1 및 게이트 (R1)을 설정에게 장비 설정을 조정합니다 (FITC [FL-1] APC는 [FL-4] 대), 그림 5Ai)는 형광 구슬을 계산합니다. 다른 문이 취득 단계에서 중요하지 않지만 분석을 위해 필요합니다. 이 프로토콜에서 사용되는 절대 카운팅 구슬 형광 염료를 함유하고 청색 채널에 약한 비록 모든 채널을 검출 할 수있다. </li><li> 제어 준비된 혈액 샘플, 소용돌이를 사용하고 세포 계측기에로드하고 데이터 수집 게이트들이 조절 될 수 있도록 설정 모드에 저속 (12 μL / 분)에서 실행. </li><li> 인수에 설정R1 비드 게이트 10,000 이벤트를 수집합니다. </li><li> 데이터를 기록 및 수집 메뉴에서 파일 번호와 레이블 샘플 파일을 설정하는 폴더를 설정합니다. </li><li> 샘플 사이토 상 분석 될로드 및 매체 (35 μL / 분)로 유량을 설정한다. 같은 유량으로 각 샘플을 실행합니다. 유속은 (12 μL / 분) 또는 로우 (60 μL / 분) 하이로 변화 될 필요가있을 수 있지만, 일반적으로는 적절한 매체이다. 이 속도는 각 샘플에 대한 10,000 비드 이벤트를 취득하는 데 약 90-120 초 걸립니다. </li><li> 샘플 확인 이벤트가 R1 비드 게이트에 나타나는되어 있는지 확인하기 위해 산포도를 볼로드되면. 초기 산포도에서 드리프트를 일으키는 샘플 압력 약간 불안정이있을 수있다. 이 안정 될 때까지 기다립니다. </li><li> 안정화되면, 획득을 클릭하고 샘플을 실행할 수 있습니다. 사이토는 R1 10,000 비드 이벤트를 취득 완료되면 사이토는 취득을 중지하고 모든 데이터를 저장합니다. </li><li> 샘플을 제거하고 TU 흐름 폐기수. 사이토는 이제 다음 샘플에 대한 준비가되어 있습니다. 모든 샘플을 실행 한 후 분석 모드로 진행합니다. </li></ol> 6. 면역 세포 분석 참고 : 게이팅 전략과 부울 대수는 각각의 세포 인구를 정​​의하는 데 사용됩니다. 부울 대수는 하나의 정의에서 여러 작업을 위해 할 수있는 논리 기반의 분석 방법이다. (예를 들어, BD CELLQuest) 유동 세포 계수기의 분석 소프트웨어 부울 대수의 사용을 허용한다. 방정식 구체적으로 각각의 세포 집단을 식별하는 셀을 정의하는데 도움을 위해 상당한 부정적인 반응을 적극적으로 설명하기 위해 사용된다. &#39;지역&#39;은 &#39;게이트&#39;를 정의하는 데 사용됩니다. (-, 표 2에 정의 +, *)가 게이트 대수 연산자로 연결된 다수의 영역들로 구성 될 수있는 반면, 영역은 2 차원 공간을 정의한다. <ol><li> 분석 모드로 소프트웨어를 전환합니다. 분석 템플릿에 맞게 생성되어야 <str옹&gt; 나타낸 그래프 및 게이트 그림 5. </li><li> 개별적으로 각각의 파일 (즉, 각각의 시료를) 분석 할 수 있습니다. 표 2에 정의 된 설정 게이트 R1 내지 R9로하고 (또한,도 5에 도시) 각각의 세포 유형에 대한 알고리즘을 설정. </li><li> 게이트들과 알고리즘 (표 2 및도 5)에 의해 정의 된 각각의 세포 집단을 계산하는 셀의 통계 카운터를 사용한다. 알고리즘은 셀 통계 카운터에 자동으로 세포 수를 조정합니다. </li><li> 다음 식을 사용하여 세포 서브 세트를 계산한다 : <img alt="식 (1)" src="/files/ftp_upload/53019/53019eq1.jpg" /> 주 : 카운트 셀 이벤트 수 (예를 들면, CD4 T 세포의 이벤트) 피 μL 당 세포 수를주고 상기 식을 이용하여 열거된다. 예를 그림 5에 표시됩니다. </li></ol>

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	<li>Kao, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+mesothelioma.">Malignant mesothelioma.</a> Intern Med J. 40 (11), 742-7450 (2010).</li><li>Zucali, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+biology+of+malignant+pleural+mesothelioma.">Advances in the biology of malignant pleural mesothelioma.</a> Cancer Treat Rev. 37 (7), 543-558 (2011).</li><li>Olsen, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increasing+incidence+of+malignant+mesothelioma+after+exposure+to+asbestos+during+home+maintenance+and+renovation.">Increasing incidence of malignant mesothelioma after exposure to asbestos during home maintenance and renovation.</a> Med J Aust. 195 (5), 271-274 (2011).</li><li>Zucali, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymidylate+synthase+and+excision+repair+cross-complementing+group-1+as+predictors+of+responsiveness+in+mesothelioma+patients+treated+with+pemetrexed/carboplatin.">Thymidylate synthase and excision repair cross-complementing group-1 as predictors of responsiveness in mesothelioma patients treated with pemetrexed/carboplatin.</a> Clin Cancer Res. 17 (8), 2581-2590 (2011).</li><li>Vogelzang, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phase+III+study+of+pemetrexed+in+combination+with+cisplatin+versus+cisplatin+alone+in+patients+with+malignant+pleural+mesothelioma.">Phase III study of pemetrexed in combination with cisplatin versus cisplatin alone in patients with malignant pleural mesothelioma.</a> J Clin Oncol. 21 (14), 2636-2644 (2003).</li><li>Lowenstein, P. R., Castro, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncertainty+in+the+translation+of+preclinical+experiments+to+clinical+trials.+Why+do+most+phase+III+clinical+trials+fail?.">Uncertainty in the translation of preclinical experiments to clinical trials. Why do most phase III clinical trials fail?.</a> Curr Gene Ther. 9 (5), 368-374 (2009).</li><li>Kamb, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What's+wrong+with+our+cancer+models.">What's wrong with our cancer models.</a> Nat Rev Drug Discov. 4 (2), 161-165 (2005).</li><li>Yakisich, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Algorithm+for+the+Preclinical+Screening+of+Anticancer+Drugs+Effective+against+Brain+Tumors.">An Algorithm for the Preclinical Screening of Anticancer Drugs Effective against Brain Tumors.</a> ISRN Pharmacol. 2012, 513580 (2012).</li><li>Basu, D., Herlyn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+microenvironments+within+mouse+models+that+enhance+tumor+aggressiveness.">Defining microenvironments within mouse models that enhance tumor aggressiveness.</a> Cancer Biol Ther. 8 (4), 380-381 (2009).</li><li>Abolhassani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+well-established+drugs+targeting+cancer+metabolism:+reproducibility+of+the+efficacy+of+a+highly+effective+drug+combination+in+mice.">Screening of well-established drugs targeting cancer metabolism: reproducibility of the efficacy of a highly effective drug combination in mice.</a> Invest New Drugs. 4 (4), 1331-1342 (2011).</li><li>Hudson, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+a+panel+of+chemo-resistant+mesothelioma+models+for+investigating+chemo-resistance+and+identifying+new+treatments+for+mesothelioma.">Establishing a panel of chemo-resistant mesothelioma models for investigating chemo-resistance and identifying new treatments for mesothelioma.</a> Sci Rep. 4, 6152 (2014).</li><li>Iannaccone, P. M., Jacob, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rats!.">Rats!.</a> Dis Model Mech. 2 (5-6), 206-210 (2009).</li><li>Craighead, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+tumors+and+tumor+cells+cultured+from+experimental+asbestos-induced+mesotheliomas+in+rats.">Characteristics of tumors and tumor cells cultured from experimental asbestos-induced mesotheliomas in rats.</a> Am J Pathol. 129 (3), 448-462 (1987).</li><li>Hunter, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphocyte+subset+analysis+by+Boolean+algebra:+a+phenotypic+approach+using+a+cocktail+of+5+antibodies+and+3+color+immunofluorescence.">Lymphocyte subset analysis by Boolean algebra: a phenotypic approach using a cocktail of 5 antibodies and 3 color immunofluorescence.</a> Cytometry. 15 (3), 258-266 (1994).</li><li>Brando, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytofluorometric+methods+for+assessing+absolute+numbers+of+cell+subsets+in+blood.+European+Working+Group+on+Clinical+Cell+Analysis.">Cytofluorometric methods for assessing absolute numbers of cell subsets in blood. European Working Group on Clinical Cell Analysis.</a> Cytometry. 42 (6), 327-346 (2000).</li><li>Schnizlein-Bick, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+TruCount+absolute-count+tubes+for+determining+CD4+and+CD8+cell+numbers+in+human+immunodeficiency+virus-positive+adults.">Evaluation of TruCount absolute-count tubes for determining CD4 and CD8 cell numbers in human immunodeficiency virus-positive adults.</a> Clin Diagn Lab Immunol. 7 (3), 336-343 (2000).</li><li>Gajkowska, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+enumeration+of+CD34++hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+in+leukapheresis+product+and+bone+marrow+for+clinical+transplantation:+a+comparison+of+three+methods.">Flow cytometric enumeration of CD34+ hematopoietic stem and progenitor cells in leukapheresis product and bone marrow for clinical transplantation: a comparison of three methods.</a> Folia Histochem Cytobiol. 44 (1), 53-60 (2006).</li><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+the+next+generation.">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144 (5), 646-674 (2011).</li><li>Kao, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+blood+neutrophil-to-lymphocyte+ratio+is+an+indicator+of+poor+prognosis+in+malignant+mesothelioma+patients+undergoing+systemic+therapy.">High blood neutrophil-to-lymphocyte ratio is an indicator of poor prognosis in malignant mesothelioma patients undergoing systemic therapy.</a> Clin Cancer Res. 16 (23), 5805-5813 (2010).</li><li>Kao, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+prognostic+factors+in+malignant+pleural+mesothelioma:+a+retrospective+analysis+of+data+from+patients+seeking+compensation+from+the+New+South+Wales+dust+diseases+board.">Validation of prognostic factors in malignant pleural mesothelioma: a retrospective analysis of data from patients seeking compensation from the New South Wales dust diseases board.</a> Clin Lung Cancer. 14 (1), 70-77 (2013).</li><li>Burt, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+and+tumor-infiltrating+myeloid+cells+predict+survival+in+human+pleural+mesothelioma.">Circulating and tumor-infiltrating myeloid cells predict survival in human pleural mesothelioma.</a> Cancer. 117 (22), 5234-5244 (2011).</li><li>Weir, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Streptavidin:+a+novel+immunostimulant+for+the+selection+and+delivery+of+autologous+and+syngeneic+tumor+vaccines.">Streptavidin: a novel immunostimulant for the selection and delivery of autologous and syngeneic tumor vaccines.</a> Cancer Immunol Res. 2 (5), 469-479 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

이 논문은 흉막 중피종의 쥐 동계 동 소성 모델과 종 채혈을 통해 질병의 진행을 모니터링하기위한 간단한 방법의 생성하는 방법을 자세히 설명합니다. II-45 모델은 석면 섬유 (13)에 피셔 344 래트를 노광에 의해 개발되었다. 이 노출 중피종의 발병 기전에 대한 호스트 석면 면역 체계의 상호 작용의 진정한 역학을 나타내고 있지만, 긴 지연 시간 (생성하는 년을 복용)?...

악성 중피종 (MM)은 멤브레인 (mesothelium)로 형질 전환 된 세포에서 발생 공격적인 악성하다 라인 복강 폐, 심장 및 내부 생식 기관 및 폐 공동 또는 늑막 1,2- 가장 일반적인 차 종양은 . 석면 섬유에 노출되면 모든 MM의 80 %를 차지하고, 석면 사용에 대한 금지는 대부분의 서방 국가에서 수십 년 전에 도입 된 반면, 지역 사회에서의 광범위한 사용은 치명적인 유산을 남겼습니다. 세계 보건기구 (WHO)는 10만7천명은 전 세계적으로 계속 증가 사망률, 석면 관련 질병으로 매년 죽는 것으로 추정하고있다. 새로운 비 직업 입사 파도 대두되고이 3 피크 때, 어떤 수준에서의 작은 이해가있다. 전신 화학 요법이 유일한 실행 가능한 옵션 4 중 하나를 나타냅니다 때 MM를 가진 사람들의 대부분은 늦은 진단. 가장 effecti화학 요법과 (시스플라틴 (5)과 함께와 pemetrexed) 현재의 &#39;주의 기준&#39;을했습니다 10 년 전에 확인되었다. 이 치료의 그러나 실패는 불가피 만 12개월 2의 냉혹 한 예후 및 평균 생존 환자를 떠나 더 검증 된 제 2 라인 옵션은 존재하지 않는다. 따라서, 더 효과적인 치료법이 절실히 아직은 충족되지 않은 필요성이 존재한다. 임상 시험에서 새로운 치료의 다수의 시험에도 불구하고 아무도 실제로 변화를 초래하지 않았다. 이는 임상 6-8를 설정하는, 일반적으로 이종 이식 마우스 모델에서 수행 전임상 결과 낮은 (5 %) 전입에 부분적으로 기인하는 것으로 여겨진다. 이러한 모델은 충실히 자주 작동 면역계 9의 부재 하에서, 비 - 생리적 인 위치에서 발생하는 종양 미세 환경의 복잡한 양상 요점을 되풀이하지 않는다. 동계 동 소성 모델 C보다 훨씬 더 현실적인 종양 환경을 만들종양이 그대로 면역 시스템 10, 11과 올바른 생리 학적 위치에 발생하는 ommonly 피하 이종 이식의 모델을 사용했다. 쥐의 대형화, 특히 직렬 혈액 치료 반응 및 독성 (12)을 평가하기 위해 요구되는 무 약물 연구에서, 설치류 질병 모델로서 사용을 향상시킨다. 또한, 모델되는 질병 진행 모니터링 순환 인자에서 발견 매우 매력적이다를 사용 질병의 진행을 모니터 할 수있는 능력으로 인해 (예컨대 흉강 에서처럼) 종양의 위치가 어렵다. 면역 능력 쥐를 사용 흉막 중피종의 동계 동 소성 모델의 생성을 설명한다. 또한, 순환하는 면역 세포를 측정하여 흉막 질환 진행을 모니터링하기위한 간단하고 비교적 비 침습적 방법도 설명한다.

<table><tbody><tr><td>EDTA Collection tube (0.5 ml)</td><td>Greiner Bio One GmbH</td><td>450480</td><td></td></tr><tr><td>Rat T/B/NK Cell cocktail</td><td>BD Pharmingen</td><td>558509</td><td>anti-Rat CD3&amp;nbsp; APC (IgM clone 1F4), anti-Rat CD45RA Fitc (IgG1 clone OX-33), anti-Rat CD161a PE (IgG1 Clone 10/78)</td></tr><tr><td>anti-RAT CD8a PE&amp;nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>200608</td><td>(IgG1vClone G28)</td></tr><tr><td>anti-Rat CD4 FITC (Domain 1)&amp;nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>203406</td><td>(IgG&lt;sub&gt;1&lt;/sub&gt; Clone OX-38)</td></tr><tr><td>anti-Rat CD45 PE/Cy7&amp;nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>202214</td><td>(IgG&lt;sub&gt;1 &lt;/sub&gt;Clone OX-1)</td></tr><tr><td>TruCount Tubes</td><td>Becton Dickinson</td><td>340334</td><td>Box of 50 absolute counting tubes</td></tr><tr><td>RPMI 1640 media</td><td>Life Technologies</td><td>11875-119</td><td></td></tr><tr><td>foetal bovine serum (FBS)</td><td>Scientifix</td><td>FBS500-S (lot# 010101-1)</td><td></td></tr><tr><td>trypsin-EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>15400-054</td><td></td></tr><tr><td>PBS tablets</td><td>Medicago AB</td><td>09-9400-100</td><td></td></tr><tr><td>23Gx1&amp;frac14; Needle</td><td>Becton Dickinson</td><td>302008</td><td></td></tr><tr><td>1 ml Syringe</td><td>Becton Dickinson</td><td>302 100</td><td></td></tr><tr><td>Fischer 344 Rat</td><td>Animal Resources Centre, Perth Australia</td><td>F344</td><td></td></tr><tr><td>I.S.O (Isoflurane USP)</td><td>Veterinary Companys Australia (VCA)&amp;nbsp;</td><td>B7058</td><td></td></tr><tr><td>II-45 Rat Mesothelioma line</td><td>Zurich University</td><td></td><td>Note: The cell line was given as a gift and is not commercially available at the ATCC</td></tr><tr><td>FACSCalibur 4 color</td><td>Becton Dickinson</td><td>342975</td><td></td></tr><tr><td>TRIS-HCL</td><td>SIGMA</td><td>T3253</td><td></td></tr><tr><td>Ammonium Chloride</td><td>SIGMA</td><td>9718</td><td></td></tr><tr><td>Anaesthetic Machine (The stinger)</td><td>Advanced Anaesthesia specialists</td><td>#00449</td><td></td></tr></tbody></table>

orthotopic implantation and peripheral immune cell monitoring in the ii-45 syngeneic rat mesothelioma model

백신 및 면역 검사 점 억제제, 및 치료 반응에 종양 미세 환경의 역할의 증가 이해 등의 암에 대한 면역 기반 치료에 대한 관심의 거대한 급증, 공동으로 전임상 시험에 대한 면역 능력이 동 소성 모델의 필요성을 가리 이 새로운 치료법. 이 논문은 흉막 악성 중피종의 소성을 면역 능력이 쥐 모델을 수립하는 방법을 보여줍니다. 동 소성 모델 모니터링 질병 진행은 종양의 내부 위치에 의해 혼동된다. 길이 방향으로 질병의 진행이 암의 다른 쥐 모델에서 면역 세포를 순환에 미치는 영향을 모니터링하기 위해 하나의 튜브 25 μL 전혈은 설명을 필요로 분석 유동 세포 계측법. 총 림프구, 단핵구 및 호중구뿐만 아니라, T 세포 서브 세트 CD4 및 CD8, B 세포 및 자연 살해 세포 : 이것은 정확한 일곱 면역 매개 변수의 정량화를 제공한다. 다른 서브 우퍼이러한 매개 변수는 중피종 ETS 모델에서 질병의 진행을 모니터링하기위한 큰 유틸리티를 갖는 림프구 비율 호중구와 다른 상황 및 모델에 유용하다. 또한 면역 - 기반 치료법​​에 대한 응답을 모니터링하고 치료의 성공 또는 실패로 이어지는 근본적인 메커니즘을 이해하는데 도움이 될 하나의 관이 방법을 사용하여 면역 세포 수준을 순환 분석.

II-45 세포를 이용한 흉막 중피종의 소성을, 모델 생성을 위해이 문서에서 사용하는 방법은 쥐 주입법에 의한 사망하지으로, 재현성 및 빠른 시간 내에 중피종에 굴복 동물 결과. 이식 된 세포의 수의 적정 1X 10 3 세포는 완전히 침투 모델 (100 % 생착)에 필요한 최소 수 있다고 판단했다. 쥐에 이식 세포의 수는 다른 질환의 중증도에 영향을 미치는 것으로 나타나없이 질병의 시간 코스를 변경...

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Orthotopic Implantation and Peripheral Immune Cell Monitoring in the II-45 Syngeneic Rat Mesothelioma Model

면역 능력이 쥐의 흉강에 II-45 악성 세포의 이식에 의한 흉막 악성 중피종의 소성을 쥐 모델의 생성이 제공됩니다. 유세포 방법도 기재되어 25 ㎕의 혈액 샘플로부터이 동물 일곱 면역 세포 서브 세트를 분석한다.

II-45 동계 쥐의 Mesothelioma 모델에서 소성을 주입 및 주변 면역 세포 모니터링

The enormous upsurge of interest in immune-based treatments for cancer such as vaccines and immune checkpoint inhibitors, and increased understanding of ...

orthotopic-implantation-peripheral-immune-cell-monitoring-ii-45

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9.1K 조회수.  Royal North Shore Hospital, University of Sydney.  면역 능력이 쥐의 흉강에 II-45 악성 세포의 이식에 의한 흉막 악성 중피종의 소성을 쥐 모델의 생성이 제공됩니다. 유세포 방법도 기재되어 25 ㎕의 혈액 샘플로부터이 동물 일곱 면역 세포 서브 세트를 분석한다. 

비디오: Orthotopic Implantation and Peripheral Immune Cell Monitoring in the II-45 Syngeneic Rat Mesothelioma Model

Bioluminescence Imaging for Assessment of Immune Responses Following Implantation of Engineered Heart Tissue (EHT)

Various techniques of cardiac tissue engineering have been pursued in the past decades including scaffolding strategies using either native or bioartificial scaffold materials, entrapment of cardiac myocytes in hydrogels such as fibrin or collagen and stacking of myocyte monolayers 1. These concepts aim at restoration of compromised cardiac function (e.g. after myocardial infarction) or as experimental models (e.g. predictive toxicology and substance screening or disease modelling). Precise monitoring of cell survival after implantation of engineered heart tissue (EHT) has now become possible using in-vivo bioluminescence imaging (BLI) techniques 2. Here we describe the generation of fibrin-based EHT from a transgenic rat strain with ubiquitous expression of firefly luciferase (ROSA/luciferase-LEW Tg; 3). Implantation is performed into the greater omentum of different rat strains to assess immune responses of the recipient organism following EHT implantation. Comparison of results generated by BLI and the Enzyme Linked Immuno Spot Technique (ELISPOT) confirm the usability of BLI for the assessment of immune responses.

Bioluminescence Imaging for Assessment of Immune Responses Following Implantation of Engineered Heart Tissue EHT

This video demonstrates the use of in vivo bioluminescence imaging to study immune responses after implantation of Engineered Heart Tissue (EHT) in rats.

엔지니어링된 심장 조직 이식 다음과 같은 면역 반응의 평가 (EHT)에 대한 Bioluminescence 이미징

Various techniques of cardiac tissue engineering have been pursued in the past decades including scaffolding strategies using either native or ...

연구

생체공학

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all gynecologic malignancies among US women 1,2,3. Serous tumors are the most widespread forms of ovarian cancer and 4,5 the Tg-MISIIR-TAg transgenic represents the only mouse model that spontaneously develops this type of tumors. Tg-MISIIR-TAg mice express SV40 transforming region under control of the Mullerian Inhibitory Substance type II Receptor (MISIIR) gene promoter 6. Additional transgenic lines have been identified that express the SV40 TAg transgene, but do not develop ovarian tumors. Non-tumor prone mice exhibit typical lifespan for C57Bl/6 mice and are fertile. These mice can be used as syngeneic allograft recipients for tumor cells isolated from Tg-MISIIR-TAg-DR26 mice.
Objective: Although tumor imaging is possible 7, early detection of deep tumors is challenging in small living animals. To enable preclinical studies in an immunologically intact animal model for serous ovarian cancer, we describe a syngeneic mouse model for this type of ovarian cancer that permits in vivo imaging, studies of the tumor microenvironment and tumor immune responses.
Methods: We first derived a TAg+ mouse cancer cell line (MOV1) from a spontaneous ovarian tumor harvested in a 26 week-old DR26 Tg-MISIIR-TAg female. Then, we stably transduced MOV1 cells with TurboFP635 Lentivirus mammalian vector that encodes Katushka, a far-red mutant of the red fluorescent protein from sea anemone Entacmaea quadricolor with excitation/emission maxima at 588/635 nm 8,9,10. We orthotopically implanted MOV1Kat in the ovary 11,12,13,14 of non-tumor prone Tg-MISIIR-TAg female mice. Tumor progression was followed by in vivo optical imaging and tumor microenvironment was analyzed by immunohistochemistry.
Results: Orthotopically implanted MOV1Kat cells developed serous ovarian tumors. MOV1Kat tumors could be visualized by in vivo imaging up to three weeks after implantation (fig. 1) and were infiltrated with leukocytes, as observed in human ovarian cancers 15 (fig. 2).
Conclusions: We describe an orthotopic model of ovarian cancer suitable for in vivo imaging of early tumors due to the high pH-stability and photostability of Katushka in deep tissues. We propose the use of this novel syngeneic model of serous ovarian cancer for in vivo imaging studies and monitoring of tumor immune responses and immunotherapies.

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

To study in vivo tumor growth and tumor microenvironment, we used a syngeneic and orthotopic mouse model of ovarian cancer in immunocompetent animals. We transduced a mouse tumor cell line (MOV1) with Katushka fluorescent protein (MOV1KAT) and here we show its orthotopic implantation in ovary and in vivo imaging.

에 대한 면역 적격 마우스에 묽은 난소암의 Orthotopic 모델 생체내에</em종양 면역 응답> 종양 이미징 및 모니터링

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

면역학 및 감염병학

PET and MRI Guided Irradiation of a Glioblastoma Rat Model Using a Micro-irradiator

For decades, small animal radiation research was mostly performed using fairly crude experimental setups applying simple single-beam techniques without the ability to target a specific or well-delineated tumor volume. The delivery of radiation was achieved using fixed radiation sources or linear accelerators producing megavoltage (MV) X-rays. These devices are unable to achieve sub-millimeter precision required for small animals. Furthermore, the high doses delivered to healthy surrounding tissue hamper response assessment. To increase the translation between small animal studies and humans, our goal was to mimic the treatment of human glioblastoma in a rat model. To enable a more accurate irradiation in a preclinical setting, recently, precision image-guided small animal radiation research platforms were developed. Similar to human planning systems, treatment planning on these micro-irradiators is based on computed tomography (CT). However, low soft-tissue contrast on CT makes it very challenging to localize targets in certain tissues, such as the brain. Therefore, incorporating magnetic resonance imaging (MRI), which has excellent soft-tissue contrast compared to CT, would enable a more precise delineation of the target for irradiation. In the last decade also biological imaging techniques, such as positron emission tomography (PET) gained interest for radiation therapy treatment guidance. PET enables the visualization of e.g., glucose consumption, amino-acid transport, or hypoxia, present in the tumor. Targeting those highly proliferative or radio-resistant parts of the tumor with a higher dose could give a survival benefit. This hypothesis led to the introduction of the biological tumor volume (BTV), besides the conventional gross target volume (GTV), clinical target volume (CTV), and planned target volume (PTV).
At the preclinical imaging lab of Ghent University, a micro-irradiator, a small animal PET, and a 7 T small animal MRI are available. The goal was to incorporate MRI-guided irradiation and PET-guided sub-volume boosting in a glioblastoma rat model.

In the past, small animal irradiation was usually performed without the ability to target a well-delineated tumor volume. The goal was to mimic the treatment of human glioblastoma in rats. Using a small animal irradiation platform, we performed MRI-guided 3D conformal irradiation with PET-based sub-volume boosting in a preclinical setting.

애완 동물 및 MRI 유도 세포종 쥐 모델의 방사선 마이크로 irradiator를 사용 하 여

For decades, small animal radiation research was mostly performed using fairly crude experimental setups applying simple single-beam techniques without ...

암 연구학

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, including genetically engineered models as well as transplantation models. However, genetically engineered mouse models are time-consuming and expensive, whereas some orthotopic transplantation models are difficult to reproduce. Here, a non-invasive intratracheal delivery method of lung tumor cells as an alternative orthotopic transplantation model is described. The use of mouse lung adenocarcinoma cells and syngeneic graft recipients allows studying tumorigenesis under the presence of a fully active immune system. Furthermore, genetic manipulations of tumor cells before transplantation makes this model an attractive time-saving approach to study the impact of genetic factors on tumor growth and tumor cell gene expression profiles under physiological conditions. Using this model, we show that lung adenocarcinoma cells express increased levels of the T-cell suppressor programmed death-ligand 1 (PD-L1) when grown in their natural environment as compared to cultivation in vitro.

Here we describe a minimally invasive syngeneic orthotopic transplantation model of mouse lung adenocarcinoma cells as a time- and cost-reducing model to study non-small cell lung cancer.

Orthotopic PD L1 식 공부 Syngeneic 폐 선 암 세포의 이식

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop better therapeutic strategies, understanding tumor microenvironmental factors that contribute to the treatment resistance is important. A major impediment to understanding disease mechanisms and improving therapy has been a lack of murine cell lines that resemble the aggressive and metastatic nature of human HNSCCs. Furthermore, a majority of murine models employ subcutaneous implantations of tumors which lack important physiological features of the head and neck region, including high vascular density, extensive lymphatic vasculature, and resident mucosal flora. The purpose of this study is to develop and characterize an orthotopic model of HNSCC. We employ two genetically distinct murine cell lines and established tumors in the buccal mucosa of mice. We optimize collagenase-based tumor digestion methods for the optimal recovery of single cells from established tumors. The data presented here show that mice develop highly vascularized tumors that metastasize to regional lymph nodes. Single-cell multiparametric mass cytometry analysis shows the presence of diverse immune populations with myeloid cells representing the majority of all immune cells. The model proposed in this study has applications in cancer biology, tumor immunology, and preclinical development of novel therapeutics. The resemblance of the orthotopic model to clinical features of human disease will provide a tool for enhanced translation and improved patient outcomes.

Here we present a reproducible method for developing an orthotopic murine model of head and neck squamous cell carcinoma. Tumors demonstrate clinically relevant histopathological features of the disease, including necrosis, poor differentiation, nodal metastases, and immune infiltration. Tumor-bearing mice develop clinically relevant symptoms including dysphagia, jaw displacement, and weight loss.

종양 면역 프로 파일링에 대 한 쥐 및 치료 반응 평가에 편평 세포 암 종 세포의 intramucosal 접종

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate

The most recent advance in the treatment of osteosarcoma (OS) occurred in the 1980s when multi-agent chemotherapy was shown to improve overall survival compared to surgery alone. To address this problem, the aim of the study is to refine a lesser-known model of OS in rats with a comprehensive histologic, imaging, biologic, implantation, and amputation surgical approach that prolongs survival. We used an immunocompetent, outbred Sprague-Dawley (SD), syngeneic rat model with implanted UMR106 OS cell line (originating from a SD rat) with orthotopic tibial tumor implants into 3-week-old male and female rats to model pediatric OS. We found that rats develop reproducible primary and metastatic pulmonary tumors, and that limb amputations at 3 weeks post implantation significantly reduce the incidence of pulmonary metastasis and prevent unexpected deaths. Histologically, the primary and metastatic OSs in rats were very similar to human OS. Using immunohistochemistry methods, the study shows that rat OS are infiltrated with macrophages and T cells. A protein expression survey of OS cells reveals that these tumors express ErbB family kinases. Since these kinases are also highly expressed in most human OSs, this rat model could be used to test ErbB pathway inhibitors for therapy.

Here, a syngeneic orthotopic implantation followed by an amputation procedure of the osteosarcoma with spontaneous pulmonary metastasis that can be used for preclinical investigation of metastasis biology and development of novel therapeutics is described.

전이율을 제어하는 절단을 가진 신제닉 직소 성 골육종 스프라그 Dawley 쥐 모델

The most recent advance in the treatment of osteosarcoma (OS) occurred in the 1980s when multi-agent chemotherapy was shown to improve overall survival ...

An Immunocompetent Murine Model for Laser Interstitial Thermal Therapy of Glioblastoma

Glioblastoma (GB), the most aggressive form of primary brain cancer, accounts for approximately half of all high-grade primary brain tumors in adults and has no cure. Laser interstitial thermal therapy (LITT) is a Food and Drug Administration (FDA)-approved treatment for GB and is used in patients who may not be candidates for conventional surgical resection. While the clinical efficacy of LITT has been established, research beyond clinical case studies and case series is limited and hindered by the lack of an established animal model. This protocol uses C57BL/6 mice and syngeneic CT2A glioma cancer cell line to closely recapitulate human GB&#160;while also using a 1064 nm Neodymium-doped Yttrium Aluminum Garnet (Nd:YAG) laser, such as is used in one of the two FDA-approved LITT systems, providing excellent pre-clinical relevance. The successful establishment of this LITT murine model will provide a valuable platform for investigating the unique features of LITT ablation and its effects on the tumor microenvironment, potentially leading to improved therapeutic strategies.

Glioblastoma is a devastating form of primary brain cancer, and laser interstitial thermal therapy is emerging as a promising alternative to conventional surgical resection for inoperable glioblastoma. This protocol describes an optimized pre-clinical mouse model that can be used to study treatment effects or adjuvant and combinatorial treatments.

Glioblastoma (GB), the most aggressive form of primary brain cancer, accounts for approximately half of all high-grade primary brain tumors in adults and ...

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

The main concern in transplantation is to achieve specific tolerance through induction of regulatory cells. The understanding of tolerance mechanisms requires reliable models. Here, we describe models of tolerance to cardiac allograft in rat, induced by blockade of costimulation signals or by upregulation of immunoregulatory molecules through gene transfer. Each of these models allowed in vivo generation of regulatory cells such as regulatory T cells (Tregs), regulatory B cells (Bregs) or regulatory myeloid cells (RegMCs). In this manuscript, we describe two complementary protocols that have been used to identify and define in vitro and in vivo regulatory cell activity to determine their responsibility in tolerance induction and maintenance. First, an in vitro suppressive assay allowed rapid identification of cells with suppressive capacity on effector immune responses in a dose dependent manner, and can be used for further analysis such as cytokine measurement or cytotoxicity. Second, the adoptive transfer of cells from a tolerant treated recipient to a newly irradiated grafted recipient, highlighted the tolerogenic properties of these cells in controlling graft directed immune responses and/or converting new regulatory cells (termed infectious tolerance). These methods are not restricted to cells with known phenotypic markers and can be extended to any cell population. Furthermore, donor directed allospecificity of regulatory cells (an important goal in the field) can be assessed by using third party donor cells or graft either in vitro or in vivo. Finally, to determine the specific tolerogenic capacity of these regulatory cells, we provide protocols to assess the humoral anti-donor antibody responses and the capacity of the recipient to develop humoral responses against new or former known antigens. The models of tolerance described can be used to further characterize regulatory cells, to identify new biomarkers, and immunoregulatory molecules, and are adaptable to other transplantation models or autoimmune diseases in rodent or human.

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

Here, we present a protocol to induce tolerance in transplantation, and assess in vitro and in vivo the suppressive capacity of distinct cell subsets from the recipient and the immune status of the recipient toward donor or exogenous antigens.

생체 외에서 그리고 Vivo에서 T, B 및 골수성 세포 진압 활동 및 이식 받는 체액 응답의 평가

The main concern in transplantation is to achieve specific tolerance through induction of regulatory cells. The understanding of tolerance mechanisms ...

Rat Mesentery Angiogenesis Assay

The adult rat mesentery window angiogenesis assay is biologically appropriate and is exceptionally well suited to the 
study of sprouting angiogenesis in vivo [see review papers], which is the dominating form of angiogenesis in human tumors and non-tumor 
tissues, as discussed in invited review papers1,2. Angiogenesis induced in the membranous mesenteric parts by intraperitoneal (i.p.) injection of a pro-angiogenic factor can be modulated
by subcutaneous (s.c.), intravenous (i.v.) or oral (p.o.) treatment with modifying agents of choice. Each membranous part of the mesentery is 
translucent and framed by fatty tissue, giving it a window-like appearance.
The assay has the following advantageous features: (i) the test tissue is natively vascularized, albeit 
sparsely, and since it is extremely thin, the microvessel network is virtually two-dimensional, which allows the entire network 
to be assessed microscopically in situ; (ii) in adult rats the test tissue lacks significant physiologic angiogenesis, which characterizes
 most normal adult mammalian tissues; the degree of native vascularization is, however, correlated with age, as discussed in1; 
(iii) the negligible level of trauma-induced angiogenesis ensures high sensitivity; (iv) the 
assay replicates the clinical situation, as the angiogenesis-modulating test drugs are administered systemically and the responses 
observed reflect the net effect of all the metabolic, cellular, and molecular alterations induced by the treatment; (v) the assay 
allows assessments of objective, quantitative, unbiased variables of microvascular spatial extension, density, and network pattern 
formation, as well as of capillary sprouting, thereby enabling robust statistical analyses of the dose-effect and molecular 
structure-activity relationships; and (vi) the assay reveals with high sensitivity the toxic or harmful effects of treatments in 
terms of decreased rate of physiologic body-weight gain, as adult rats grow robustly.
Mast-cell-mediated angiogenesis was first demonstrated using this assay3,4. The model demonstrates a high level of 
discrimination regarding dosage-effect relationships and the measured effects of systemically administered chemically or functionally closely related drugs and proteins, 
including: (i) low-dosage, metronomically administered standard chemotherapeutics that yield diverse, drug-specific effects (i.e., 
angiogenesis-suppressive, neutral or angiogenesis-stimulating activities5); (ii) natural iron-unsaturated human lactoferrin, which stimulates 
VEGF-A-mediated angiogenesis6, and natural iron-unsaturated bovine lactoferrin, which inhibits VEGF-A-mediated angiogenesis7; and (iii) 
low-molecular-weight heparin fractions produced by various means8,9. Moreover, the assay is highly suited to studies of the combined 
effects on angiogenesis of agents that are administered systemically in a concurrent or sequential fashion.
The idea of making this video originated from the late Dr. Judah Folkman when he visited our laboratory and witnessed the methodology being demonstrated.
Review papers (invited) discussing and appraising the assay
Norrby, K. In vivo models of angiogenesis. J. Cell. Mol. Med. 10, 588-612 (2006).
Norrby, K. Drug testing with angiogenesis models. Expert Opin. Drug. Discov. 3, 533-549 (2008).

Normal adult vascularized mammalian tissue that lacks physiologic angiogenesis and that has not been exposed to surgical intervention is used to study: (i) the initiation and development of angiogenesis following intraperitoneal administration of test agents; and (ii) modification of angiogenesis following systemic administration of selected test agents.

쥐 장간막의 Angiogenesis 분석

The adult rat mesentery window angiogenesis assay is biologically appropriate and is exceptionally well suited to the 
study of sprouting angiogenesis in ...

생물학

Implantation and Monitoring by PET/CT of an Orthotopic Model of Human Pleural Mesothelioma in Athymic Mice

Malignant pleural mesothelioma (MPM) is a rare and aggressive tumor arising in the mesothelium that covers the lungs, the heart, and the thoracic cavity. MPM development is mainly associated with asbestos. Treatments provide only modest survival since the median survival average is 9&#8211;18 months from the time of diagnosis. Therefore, more effective treatments must be identified. Most data describing new therapeutic targets were obtained from in vitro experiments and need to be validated in reliable in vivo preclinical models. This article describes one such reliable MPM orthotopic model obtained after injection of a human MPM cell line H2052/484 into the pleural cavity of immunodeficient athymic mice. Transplantation in the orthotopic site allows studying the progression of tumor in the natural in vivo environment. Positron emission tomography/computed tomography (PET/CT) molecular imaging using the clinical [18F]-2-fluoro-2-deoxy-D-glucose ([18F]FDG) radiotracer is the diagnosis method of choice for examining patients with MPM. Accordingly, [18F]FDG-PET/CT was used to longitudinally monitor the disease progression of the H2052/484 orthotopic model. This technique has a high 3R potential (Reduce the number of animals, Refine to lessen pain and discomfort, and Replace animal experimentation with alternatives) since the tumor development can be monitored non-invasively and the number of animals required could be significantly reduced.
This model displays a high development rate, a rapid tumor growth, is cost-efficient and allows for rapid clinical translation. By using this orthotopic xenograft MPM model, researchers can assess biological responses of a reliable MPM model following therapeutic interventions.

This article describes the generation of an orthotopic mouse model of human pleural mesothelioma by implantation of H2052/484 mesothelioma cells into the pleural cavity of immunocompromised athymic mice. The longitudinal monitoring of the development of intrapleural tumors was assessed by non-invasive multimodal [18F]-2-fluoro-2-deoxy-D-glucose positron emission tomography and computed tomography imaging.

심질 마우스에 있는 인간 흉막 중피종의 정형외 모형의 PET/CT에 의한 이식 및 모니터링

Malignant pleural mesothelioma (MPM) is a rare and aggressive tumor arising in the mesothelium that covers the lungs, the heart, and the thoracic cavity. ...