We would like to thank Rajwant Kaur for technical assistance. We would like to thank Maxwell Tom for assistance with lentivirus preparation. This work was supported by the Reza and Georgianna Khatib Endowed Chair in Skull Base Tumor Surgery at UCSF, and the Michael J. Marchese Professor and Chair at Northwestern University.

아래에 설명 된 모든 절차를 검토하고 노스 웨스턴 대학 기관 동물 사용 및 관리위원회의 승인을 멸균 조건 하에서 수행되고있다. 반딧불 루시 페라 제 표현 기자와 GL261 세포의 1. 변경 주 : HIV-1 계 렌티 바이러스 벡터는 비장 초점 형성 바이러스 (SFFV) 프로모터의 제어 하에서 반딧불 루시페라아제 (Fluc)을 표현한다. 광학 리포터 유전자는 벡터 플라스미드 pHRSIN-CSGW - dlNotI에 복제 된. <ol><li> 95을 함유하는 가습 분위기하에 37 ℃에서 10 % FBS, 1 % 페니실린 - 스트렙토 마이신이 보충 된 RPMI 배지에 10 % 소 태아 혈청 (FBS) 및 GL261 세포가 보충 된 둘 베코 변성 이글 배지 (DMEM) 293-T 세포를 유지 % 공기와 5 %의 이산화탄소 (CO 2). </li><li> 293-T 세포 배양은 T-75 플라스크에서 80 % 컨 플루 언시에 도달 할 때, pH가 번 세포를 씻어osphate 완충 식염수의 Ca2 +와는 Mg2 +가없는 (PBS)는, 주 형틀이 약간 기울어 진 채 5 ㎖ 피펫으로 5 분, 씹다 37 ℃에서, 트립신 (0.05 %) 3 mL를 가진 세포를 배양하고있는 모든 세포를 수집 플라스크의 바닥에서. 15ml의 원뿔형 튜브에 트립신 세포 현탁액의 3 ㎖를 전송하고, 육체 RPMI 배지 (세포 현탁액 10 ㎖의 전체) (7)를 가하여. </li><li> 5 ml의 피펫으로 웰 세포 현탁액을 혼합한다. 관으로부터 세포 현탁액 100 ㎕를 취하여 혈구를 이용한 세포의 수를 계산. 이렇게하려면 트리 판 블루 용액 300 μL와 세포 현탁액 100 μl를 혼합하고 혈구로 혼합물의 2 μL를 삽입합니다. 현미경 네 개의 개별 뷰에서 블루 염색하지 않고 세포의 수를 계산. 이 수가 104 세포 / ㎖를 나타내는 바와 같이, 각각의 뷰에서 세포 수의 평균. </li><li> 한편, 30의 세포 현탁액을 포함하는 튜브를 원심7 분 0 XG. 미디어 대기음 1.0 × 106 / ㎖의 밀도로 GL261 세포 현탁액을 만들기 위해 신선한 RPMI 배지로 세포 펠렛을 재현 탁. 27.5 ml의 DMEM (1 일)와 T-175 플라스크에 넣고 RPMI 미디어 2.5 mL를 종자 2.5 × 10 6 GL261 세포. </li><li> 24 시간 후, 20 ㎖ 신선한 DMEM (2 일)와 매체를 교체합니다. </li><li> 상기 렌티 바이러스 벡터를 생산하고 5 분 동안 2 ml의 무 혈청 DMEM으로 54 μL 형질 감염 시약을 혼합한다. 형질 전환 시약 DMEM에 Fluc (pSIN-Fluc)의 3 개그-POL의 μg의, 수 포성 구내염 바이러스 G 봉투 (VSV-G)의 3 μg의, 4.5 μg의를 추가하고 실온에서 20 분 동안 품어. T-293 플라스크 (T-175)로 전체 DNA 혼합물을 삭제하고 48 시간 (2 일), 95 % 공기 및 5 % CO 2를 함유하는 가습 챔버 내에서 37 ℃에서 배양한다. </li><li> (3 일) (약 30 ml를해야 293-T 세포 배양 배지의 총 부피) 형질 전환 후 24 시간 신선한 DMEM 10 ML을 추가합니다. </li><li> 로 GL261 세포를 분할하려면24 웰 플레이트, 약간 기울어 진 술병을 들고하여 5 mL를 피펫으로 5 분, 씹다 37 ℃에서 트립신 (0.05 %) 5 ㎖와 세포를 품어의 Ca2 +와는 Mg2 +없는 PBS로 한 번 세포를 씻어 플라스크의 바닥으로부터 모든 세포를 수집하고, 단계 1.2에서와 혈구 세포를 통해 카운트. 한편, 7 분 동안 300 XG에서 튜브를 원심 분리. 미디어 대기음 2.5 × 104 / ㎖의 밀도로 GL261 세포 현탁액을 만들기 위해 신선한 RPMI 배지로 세포 펠렛을 재현 탁. 시드 24 웰 플레이트에 RPMI 매체의 1 ㎖ (3 일) 2.5 × 10 4 GL261 세포. </li><li> 48 시간 다음과 같은 형질의 293-T 플라스크 (T-175) 10 mL를 피펫으로 렌티 바이러스 상층 액 30ml를 수집하고 50 ML 원뿔 튜브에 뜨는을 전송합니다. 대기음 30 ml의 렌티 바이러스 0.22 μm의 주사기 필터를 통해 50 ML의 주사기를 통해 상층 액, 1 mL를 분취 (4 일)에 바이러스 뜨는 나누어지는. </li><li> (R)의 1 mL로 교체렌티 바이러스 상층 액 1 ㎖과 함께 GL261 세포 판 (24도)에서 PMI 매체는 가습 실 (4 일)에 37 ° C에서 품어. </li><li> 렌티 바이러스 감염의 48 시간 후, 신선한 RPMI 1 ㎖ (6 일)와 매체를 교체합니다. </li><li> 24 시간 후, GL261 세포 (7 일)의 렌티 바이러스 감염을 반복한다. </li><li> 렌티 바이러스 감염의 2 차 48 시간 후, 신선한 RPMI 1 ㎖ (9 일)와 매체를 교체합니다. </li><li> (GL261.luc 셀로 언급되는) 변형 된 루시퍼 GL261 세포 성장 및 T-75 플라스크에 세포 배양을 확장하는 것을 계속한다. </li><li> GL261.luc 세포 배양은 T-75 플라스크에서 70 % 컨 플루 언시에 도달 할 때, 트립신 처리에 의해 세포를 수확하고, 단계 120에서와 같이 계산에 의해 혈구. 졸업 밀도에서 24- 웰 플레이트 GL261.luc 셀 플레이트 (1.0 × 106 5.0 × 105, 2.5 × 105, 1.0 × 105, 5.0 × 104, 2.5 × 104 세포 / 웰) 및 humidi에서 37 ° C에서 부화3 시간 동안 95 % 공기 및 5 % CO 2를 함유하는 챔버 얘기들이었다. </li><li> 셀룰러 루시퍼 라제 활성에 대하여 측정 값을 생물 발광 영상 (도 1)를 이용하여 U-87 MG (U87.luc) 세포 변성 루시페라아제한다. <ol><li> 이미지 소프트웨어를 시작합니다 (바탕 화면에 아이콘을 클릭) 이미징 시스템을 초기화 (버튼을 클릭 &quot;초기화&quot;). 초기화가 자동으로 시작되고 시스템 검진 및 -90 ℃로 냉각 할 수있는 카메라를 몇 분 정도 걸릴 수 있습니다. </li><li> 각 웰에 루시페린의 25 μL (D-루시페린 칼륨 염, 150 ㎎ / ㎏)를 추가합니다. </li><li> 10 초 동안 판을 실온에서 1 분 동안 루시페린과 이미지로 세포를 품어. 이미징 시스템을 설정하려면, &quot;발광&quot;, &quot;10 초&quot;노출 시간, &quot;중간&quot;비닝 (binning)을 선택합니다. 영상 스테이션의 24 웰 플레이트를 놓고 이미지를 시작합니다 &quot;취득&quot;버튼을 클릭합니다. </li><li> 이미지를 성공적으로 인수 한 후에는 이미지 창 및 도구 PA가 표시됩니다화면에 lette. &quot;ROI (관심 지역) 도구&quot;를 클릭하고 슬릿 아이콘에서 6 × 4를 선택합니다. 24 웰 플레이트의 이미지 신호의 영역을 커버하고 측정 탭 (연필 아이콘)을 클릭하는 6 × 4 슬릿을 만듭니다. 평방 센티미터 (광자 / 초 / / SR cm 2) 당 스테 라디안 당 초당 광자 단위로 투자 수익 (ROI) 측정의 테이블 창을 준수하십시오. </li><li> 사용 U87.luc 셀들은, 이전에 GL261.luc 형질 세포에서 루시퍼 라제 활성을 평가하기위한 대조군으로서, GL261 개질 11 여기 사용 된 것과 같은 렌티 변성. </li></ol></li></ol> 체외 증식 분석 2. <ol><li> GL261과 GL261.luc 세포 배양은 T-75 플라스크에서 70 % 컨 플루 언시에 도달 할 때, 트립신 처리하여 세포주 모두를 수확하고, 단계 120에서와 같이 계산하고, 1,500 세포의 밀도로 96- 웰 플레이트에 플레이트 세포 또한 시간과 피펫 오차를 최소화하도록 멀티 채널 피펫을 사용하여 당 RPMI 배지 80 μL. 괜찮다ED (20) 우물의 총에 각 셀 라인. 세포에 의해 채워 우물의 증발을 제한하기 위해, 신선한 RPMI 배지 100 ㎕ 빈 우물을 입력합니다. </li><li> 비색 세포 증식 분석법을 이용하여 세포 증식을 평가. 여기에서 우리는 MTS 세포 증식 분석을 사용합니다. 멀티 채널 피펫을 사용하여, 세포를 포함하는 96- 웰 플레이트의 각 웰에 MTS 시약 20 μL를 추가한다. </li><li> 3 시간 동안 95 % 공기 및 5 % CO 2를 함유하는 가습 챔버 내에서 37 ℃에서 플레이트를 배양한다. 마이크로 플레이트 리더를 사용하여 490 nm에서 흡광도를 측정한다. 이것은 도금 후, 7 일 1, 2, 4에서 반복되고. 흡광도 값을 정규화하기 위해, 매일의 값은 1 일 (도 2)에서 얻어진 대응하는 수치로 나누어진다. </li></ol> 3. 종양 세포 주입 참고 : 모든 장비를 압력솥. 살균제 (2 % 클로르헥시딘 액)을 분무하여 수술 영역을 준비하고 absorben 커버T 커튼. 멸균 상태를 유지 수술시 무균 수술 장갑을 착용하고, 색 테이프로 두 영역으로 수술 영역을 나누기 위해. 지역 1 &quot;클린&quot;이라는 살균 공급을 포함합니다; 지역 2 &quot;더러운&quot;로 표시하고, 재료를 사용 포함되어 있습니다. <ol><li> 동물 수술에 앞서, 두개 내 주입을위한 세포 현탁액을 준비합니다. 70 %의 합류 T-75 플라스크 트립신에 의해 단계 1.2에서와 같이 혈구를 통해 세포를 계산하고, 2 + 칼슘없이 행크스 &#39;균형 소금 용액에 1.0 × 10 5 세포 / μL의 농도에서 세포 현탁액을 만들어에서 수확 세포 마그네슘 2+ (HBSS). </li><li> 0.9 %의 식염수에 자일 라진의 케타민 100 ㎎ / ㎏과 10 ㎎ / ㎏을 포함하는 200 μL 혼합물의 복강 내 주사로 쥐를 마취. 적절한 마취를 확인하려면, 마우스의 발가락을 꼬집어. 마우스가 완전 마취 경우, 마우스는 자극에 반응해서는 안된다. </li><li> 0.1 미터를 관리피하 주사를 통해 G / kg의 부 프레 노르 핀은 수술 후 통증을 완화합니다. </li><li> 2 % 클로르헥시딘 용액에 침지면 팁 어플리케이터 및 가위를 사용하여 깨끗한 동물의 머리의 상단 면도. 수술 중 적절한 윤활을 유지하기 위해 눈 연고를 적용합니다. </li><li> 멸균 메스를 사용하여 두정 - 후두 뼈를 통해 약 1cm 길이 시상 절개를합니다. 브레 그마 시각화, 3 % 과산화수소 용액에 적신 솜 팁 어플리케이터 두개골의 표면을 닦아. </li><li> 브레 그마의 오른쪽 바로 뒤에 관상 봉합 3mm 작은 구멍을 만들기 위해 무균 25-G 바늘 두개골을 뚫는다. </li><li> 두개 내 주사 부위는 두개골 3 mm의 깊이에 있는지 확인하기 위해 가위를 사용하여 20 μL 피펫 팁의 끝이 뾰족 오프 3mm을 절감하고 피펫 팁에 주사기를 삽입합니다. </li><li> 이전에 만든 구멍에 수직으로 주사기를 삽입하고 천천히 종양 세포 SUS를 주입1 분 동안 3 μL HBSS에 3.0 × 105 세포를 함유 연금. 다른 분 동안 자리에 바늘을 그대로두고 천천히 바늘을 빼냅니다. </li><li> 3 % 과산화수소에 침지면 팁 어플리케이터 및 2 % 클로르헥시딘 용액 두개골을 면봉. 면 팁 어플리케이터 두개골의 표면을 건조시킵니다. 크기가 3 약 3mm 멸균 뼈 왁스를 잘라면 팁 어플리케이터의 측에 뼈 왁스를 연결합니다. 면 팁 어플리케이터 구멍을 충당하기 위해 뼈 왁스를 적용합니다. </li><li> 집게를 사용하여 두개골을 통해 함께 두피의 각면을 그리고 주식은 상처를 닫습니다. 2 % 클로르헥시딘 용액에 담근면 팁과 상처를 청소합니다. </li><li> 그들은 보행이 될 때까지 수술 후 모든 쥐를 모니터링하고 정상적인 활동을 유지합니다. 일반적으로, 회복 시간은 약 30 분이다. 그들이 완전히 마취에서 회복 될 때까지 다른 동물 케이지에 마우스를 반환하지 않습니다. </li></ol><ol><li> 깨끗한 종이 타월에 살균제의 충분한 양 (0.05 % 디메틸 암모늄 클로라이드 용액)을 스프레이. 철저하게 동물 장치와 접촉 할 것 이미징 챔버 내부의 검은 색 시트, 코 콘 및 디바이더를 닦아 살균제에 젖은 종이 타월을 사용합니다. 철저하게 깨끗하고 마른 종이 타월로 모든 표면을 닦으십시오. 이 한 번 더 반복하고 5 분을 기다립니다. </li><li> 단계 1.14.1과 촬상 국 초기화. </li><li> 복강 주사에 의해 케타민 / 자일 라진 및 200 μL의 100 μL 루시페린 (D-루시페린 칼륨 염 150 ㎎ / ㎏)을 함유 300 μL 혼합물로 마우스를 마취. </li><li> 주사 후 10 분을 기다린 후 쥐가 꼬리를 곤란하게하여 마취하에 완전히 있는지 확인합니다. 이미징 시스템을 설정하려면, &quot;발광&quot;, &quot;자동&quot;노출 시간, &quot;중간&quot;비닝 (binning)을 선택합니다. 영상 stati에 마우스를 놓고과에하면 이미지를 시작합니다 &quot;취득&quot;버튼을 클릭합니다. 주사 후 시간이 각 이미지 세션과 일관성이 있음을 확인합니다. </li><li> 이미지가 성공적으로 획득되면, 화상 창 및 도구 팔레트 나타나야. &quot;투자 수익 (ROI) 도구&quot;를 클릭하고 원 아이콘에서 &quot;자동&quot;을 선택합니다. ROI를 정의하기 위해, 이미지 신호의 영역을 둘러싸하고 SR 광자 / 초 / / ㎠의 단위로 ROI의 측정을 수행. </li><li> 영상 실에서 쥐를 가지고 그들이 보행이 될 때까지 마우스를 모니터링하고 정상적인 활동을 유지합니다. 일반적으로 복구 시간은 약 15 분이다. 그들이 완전히 마취에서 회복 될 때까지 다른 동물 케이지에 마우스를 반환하지 않습니다. </li><li> 동물은 다음과 같은 현상이 제시 될 때까지 일주일에 두 번 생물 발광 이미징에 의해 종양 성장을 모니터 : 체중 감소 (주입 전의 중량에 20 % 이상의 상대적인 손실) inappetance (24 시간 동안 완전한 거식증), 및 지속적인 purposefu ​​부족그들이 안락사해야하는 시간에 부드러운 자극 (최대 얻을 수있는 약한 시도)에 L 응답. 경추 탈구이어서 CO 2 챔버를 사용하여 이러한 증상이있는 동물을 안락사. <ol><li> 장소 안락사 챔버에 마우스 (과밀하지 챔버을) 유입은 5-6 분 동안 이산화탄소를 압축. 모든 동물은 무의식과 후 약 5 분 호흡을하지 않는 것을 관찰한다. </li><li> 챔버에서 마우스를 가져 가라. 심장이 엄지와 집게 손가락 사이의 가슴을 느낌으로 치고 있지 않은지 확인하고, 깜빡임이 없음을 확인합니다. </li><li> 평평한 표면에 발생하기 쉬운 위치에 마우스를 억제하고 엄지와 다른 손의 첫 번째 손가락으로 꼬리의 한 손으로 두개골의 기지에서 목 뒤쪽과 기지를 파악. </li><li> 머리를 제지하고 신속하게 뒤로 꼬리를 잡아 당깁니다. 그 두개골은 엄지와 첫 번째 손가락을 사용하여 첫 번째 경추에서 분리되어 있는지 확인합니다. </li></ol></li><li> 표준단계 2.3 (그림 3A)과 생물 발광 영상의 첫 번째 날에 얻은 대응하는 측정 값에 대한 매일 ALIZE 발광 값. </li><li> 통계적인 분석을 위해, 카플란 - 마이어 추정 (12)을 이용하여 생존 곡선을 생성하고, 로그 - 랭크 테스트 (13)을 이용하여 생존 곡선 사이의 차이를 비교한다. </li></ol>

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(67), (2012).</li></ol>

There are no conflicts of interest to disclose.

동계 면역 C57BL / 6 마​​우스에 두개골 내에 이식 할 때 GL261 쥐의 신경 교종 세포는 인간의 신경 교종 이종 이식 동물 모델에 비해 몇 가지 장점을 제공합니다. 이종 이식 종양의 대부분은 정확하게 침략 인간의 질병을 요점을 되풀이하지 않는 캡슐화 된 병변으로 성장. 반면, GL261 종양뿐만 아니라 인접한 뇌에 침략을 보여줍니다뿐만 아니라, 혈관 신생, 유사 분열, 그리고 깊은 괴사 7. 가장 중요한 것은 종양 면역학 또는 면역 전략 15, 16, C57BL / 6 마우스가 그대로 면역 시스템 (8)을 유지 공부를 할 때. 이전의 연구는 면역 사이토 카인 TGF-β의 강력한 표현을 보여 주었다 및 두개 내 종양은 인간 아교 모세포종 (9), (10)과 유사한 면역 억제 T-조절 세포가 포함되어 있습니다. 여기에 설명 된 간단한 기술은 GL261 세포에 의해 루시 페라 제의 안정적 발현 할 수 있습니다. 우리는 최근 미 신고되었습니다시험 관내 및 GL261 세포에 비해 GL261.luc 세포의 생체 내 성장 LAR은 유사한 종양 조직 학적 특성 및 면역 세포에 더하여 17 침투. GL261.luc 세포 안정적 따라서 광자 검출 광 화학적 에너지 변환 루시페린 기질의 산화를 촉매하는 루시퍼 라제를 발현. 루시페린 안전하게 동물에게 복강 내 투여 또는 정맥 내 주사 후 혈액 뇌 장벽을 통과 할 수있다. 이러한 생쥐 작은 동물 연구에서, 생물 발광을 비 침습적 방식으로 (11)에 외부 적으로 검출 될 수있다. 따라서, 종양의 성장은 직렬 동물의 희생 또는 비용 MRI 또는​​ CT 촬영에 대한 필요없이 평가 될 수있다. 프로토콜의 중요한 단계는 생체 내 실험을 시작하기 전에 시험 관내에서 렌티 바이러스 형질 도입, 또한 루시퍼 라제를 안정적으로 발현 대조까지도 포함한다. 전달의 손실 requi 수 있습니다반복 렌티 바이러스 감염 재. 발현 벡터에 항생제 내성 유전자의 도입은 또한 루시퍼 라제 발현을 선택하는 데 사용될 수있다. 세심한 기술 재현성 다른 처리 군의 비교를 허용하도록 정확한 해부학 적 위치에있는 세포의 수를 일치 배치 두개 내 주입을 위해 요구된다. 현재 연구 및 루시퍼 라제 발현 GL261 셀의 이전 연구 간의 주요한 차이점은 정위 프레임 (18)의 사용에 비해 세포를 주입하는 프리 핸드 기술의 사용이다. 우리는 이전에 한 손 기술 (19)과 일치 주입 결과를 보여 주었다. 자유로운 손 기술의 장점은 다른 치료제의 높은 처리량 분석을 수행 할 수있는 능력이다. 우리의 손에, 우리는 1 시간에 약 60 동물을 이식 할 수 있습니다. 기술을 습득 한 후, 미래 기술의 응용은 무한하다. GL261의 demonstr로축열 상승 유사 분열 및 인간 아교 모세포종 유사한 빠른 종양 성장은, 항 - 증식 치료제가 평가 될 수있다. GL261 종양이 침습성 및 혈관 신생이다 마찬가지로, 항 침습 및 항 - 혈관 신생 요법이 사용될 수있다. 인간 표적 겨냥 화학 치료제의 효과를 평가하는 경우에는주의가 사용되어야한다. 루시퍼 라제를 발현하는 20 인간 아교 모세포종 이종 이식편을 이용한 이전 연구에 비하여, 이것은 우리의 모델의 제한으로 간주 될 것이다. 또한, 종양 성장의 면역 요법 전략의 효과 GL261 이종 이식 모델에서 연구 될 수있다.

Malignant glioma is the most common and most lethal human brain tumor. Even when treated with maximal surgical resection, radiotherapy, and chemotherapy, median survival remains 15-20 months at major brain tumor referral centers1, 2, 3. The most aggressive form of malignant glioma, glioblastoma, is characterized by mitotic figures, neovascularization, invasion into adjacent brain, and pseudopalisading necrosis. Orthotopic brain tumor xenografts using human brain tumor cells have served an essential function in neuro-oncology research and facilitated pre-clinical translation for testing of new agents, prior to entry into human clinical trials. Whereas most of human xenograft models recapitulate many features of the human disease, a fundamental limitation with all human-based xenograft model systems is the use of immunodeficient animals4. 
The absence of an intact host response clearly modifies tumor growth both in terms of tumor morphology, and efficiency of engraftment. While certain assumptions are acceptable in the interpretation of results from xenografted models, achieving relevant conclusions in the area of therapeutic assessment is a challenge. Certain fundamental biologic features are likely to be similar in immunodeficient and immunocompetent animals, but others such as tumor associated inflammation, tissue invasion, response to injury are probably very different. In contrast, GL261 is a chemically induced murine glioma cell line that accurately recapitulates glioma when implanted into the brains of immunocompetent syngeneic C57BL/6 mice5. Similar to the human disease, intracranial tumor growth rapidly and reproducibly leads to neurologic symptoms and animal demise6-10. 
Subcutaneous tumor growth can be directly measured. Intracranial tumor growth can only be measured with animal sacrifice or with costly imaging studies. Stable expression of the enzyme luciferase allows non-invasive and cost-effective intracranial bioluminescence imaging11. Bioluminescence of luciferase transfected GL261 cells correlates well with intracranial tumor growth. We have recently directly compared GL261 to luciferase modified GL261 cells and demonstrated no difference in in vitro growth and invasion, immunologic cytokine profile, in vivo survival of intracranial tumor bearing C57BL/6 mice, or immune cell infiltrate. This technique is applicable to glioblastoma preclinical studies which involve non-invasive monitoring of tumor growth.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="818">
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">D-Luciferin, Potassium Salt</td>
			<td style="width:153px;">Gold Biotechonology</td>
			<td style="width:119px;">LUCK-100</td>
			<td style="width:167px;">Store away from light</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Living Image Software</td>
			<td style="width:153px;">Caliper Life Sciences</td>
			<td style="width:119px;">Contact for Quote</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Xenogen Lumina</td>
			<td style="width:153px;">Caliper Life Sciences</td>
			<td style="width:119px;">Contact for Quote</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">24-well; Standard tissue culture; flat-bottom</td>
			<td style="width:153px;">Falcon</td>
			<td>353047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">CellTiter 96&#174; AQueous One Solution Cell Proliferation Assay&#160;</td>
			<td style="width:153px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">G3582</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Synergy 2 Multi-Mode Reader</td>
			<td style="width:153px;">BioTek</td>
			<td style="width:119px;">Contact for Quote</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:379px;">96 well Assay Plate, Black Plate, Clear bottom with Lid, Tissue culture Tretaed</td>
			<td style="width:153px;">Coster</td>
			<td style="width:119px;">3603</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Ketaset</td>
			<td style="width:153px;">Pfizer</td>
			<td style="width:119px;">NDC 0856-2013-01</td>
			<td>Control substance</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Xylazine</td>
			<td style="width:153px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">23076-35-9</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">28G Needle (with syringe)&#160;</td>
			<td style="width:153px;">Fisher&#160;&#160;</td>
			<td style="width:119px;">22-004-270</td>
			<td>AKA Insulin Syringe</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">2% Chlorhexidine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>NC9756995</td>
			<td>AKA &#8220;Nolvasan&#8221;</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">3% Hydrogen Peroxide</td>
			<td>Fisher</td>
			<td style="width:119px;">H312P-4</td>
			<td>Store away from light</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Ophthalmic Ointment</td>
			<td style="width:153px;">Cardinal Health</td>
			<td style="width:119px;">1272830</td>
			<td style="width:167px;">AKA &#8220;Akwa Tears&#8221;</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">25G 1 1/2 needle</td>
			<td style="width:153px;">BD Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">305127</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Disposable Scalpels</td>
			<td>Feather</td>
			<td style="width:119px;">2975</td>
			<td style="width:167px;">No. 21</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Gauze</td>
			<td style="width:153px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">22028563</td>
			<td style="width:167px;">Autoclave before use</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Heating Pad</td>
			<td style="width:153px;">Dunlap</td>
			<td style="width:119px;">HP950</td>
			<td style="width:167px;">none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Skin Stapler, Staples, Remover</td>
			<td style="width:153px;">Stoelting</td>
			<td style="width:119px;">59020</td>
			<td style="width:167px;">none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">PDI Alchol Prep Pads</td>
			<td style="width:153px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">23-501-711</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Reflex 7mm Wound Clips 100 pack</td>
			<td style="width:153px;">Brain Tree Scientific, INC</td>
			<td style="width:119px;">203 1000</td>
			<td style="width:167px;">Autoclave before use</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Reflex 7mm Wound Clip Applier</td>
			<td style="width:153px;">Brain Tree Scientific, INC</td>
			<td style="width:119px;">204 1000</td>
			<td style="width:167px;">Autoclave before use</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Reflex 7mm Wound Clip Remover</td>
			<td style="width:153px;">Brain Tree Scientific, INC</td>
			<td>205 1000</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Single Ended Round Tip Swab with Wood handle</td>
			<td style="width:153px;">Qosmedix</td>
			<td style="width:119px;">10107</td>
			<td style="width:167px;">Autoclave before use</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Hanks&#39; Balanced Salt Solution without Ca2+ and Mg2+ (HBSS)</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">14170-112</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Hamilton Syringe</td>
			<td style="width:153px;">Hamilton</td>
			<td style="width:119px;">80300</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">FuGENE 6 Transfection Reagent</td>
			<td style="width:153px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">E2961</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Bone Wax</td>
			<td style="width:153px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;">599864</td>
			<td>none</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bioluminescence imaging of an immunocompetent animal model for glioblastoma

In contrast to commonly reported human glioma xenograft animal models, GL261 murine glioma xenografts recapitulate nearly all relevant clinical and histopathologic features of the human disease. When GL261 cells are implanted intracranially in syngeneic C57BL/6 mice, the model has the added advantage of maintaining an intact immune microenvironment. Stable expression of luciferase in GL261 cells allows non-invasive cost effective bioluminescence monitoring of intracranial tumor growth. We have recently demonstrated that luciferase expression in GL261 cells does not affect the tumor growth properties, tumor cell immunomodulatory cytokine expression, infiltration of immune cells into the tumor, or overall survival of animals bearing the intracranial tumor. Therefore, it appears that the GL261 luciferase glioma model can be useful in the study of novel chemotherapeutic and immunotherapeutic modalities. Here we report the technique for generating stable luciferase expression in GL261 cells and how to study the in vitro and in vivo growth of the tumor cells by bioluminescence imaging.

GL261 세포는 시험관 내 생물 발광 1. 촬상 인간 아교 모세포종 세포주 U87.luc 양성 대조군의 수준과 유사한 강력한 루시페라아제 발현 (도 1)를 보여주는 단계에서 상술 한 바와 같이 루시페라아제는 렌티 바이러스를 포함하여 감염시켰다. 예상대로, 감염되지 않은 GL261 세포는 어떤 배경 루시 페라 제 표현을 보여 없습니다. 이 단계에서는 아직 종래 안정 루시퍼 라제 발현을 확인 감염된 세포주를 사용하여 추가 연구를 수행하는 것이 중요 간단하다. 두개 내 주입 후 루시 페라 제 표현. 두개 내 주입하기 전에, 우리는 GL261 세포 (그림 2)에 비해 GL261.luc의 체외 성장 속도의 차이를 입증하지 않습니다. 두개 내 성장 및 생존 분석을 위해, 세포에 주입 하였다 BRGL261.luc 종양을 갖는 마우스에서 3 단계 종양 성장 프로토콜에 따라, C57BL / 6 마우스의 AINS 직렬 프로토콜을 사용하여 단계 4 생물 발광 영상을 분석 및 검출 종양 성장 (도 3a)을 입증 하였다. 신속하고 일관 GL261.luc 종양을 갖는 마우스는 죽어가는되었고 안락사시켰다. 중요한 GL261.luc 동물 베어링 GL261 종양 (도 3b) 사이의 전체 생존율에는 차이가 없다. 생체 내 생물 발광 촬상 따라서 실험 아교 모세포종 치료에 반응을 모니터링하는 데 사용될 수있다. 신속한 신뢰성 종양 성장 및 생존율은 짧은 상대적으로 짧은 시간에 많은 양의 데이터를 얻을 수있다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/53287/53287fig1.jpg" /> GL261.luc 세포도 1 루시페라아제 활성. U87.luc는 GL261.luc 및 GL261 (대조군) 세포의 밀도로 플레이 팅 하였다1.0 × 106, 5.0 × 105, 2.5 × 105, 1.0 × 105, 5.0 × 104, 2.5 × 104 세포 / 웰에서 좌우. 발광 (광자 / 초 / / SR CM 2) 루미나 이미징 역으로 측정 하였다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53287/53287fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/53287/53287fig2.jpg" /> 도 2 루시 페라 제 발현은 GL261 세포 증식에 영향을주지 않는다. GL261.luc 세포는 발생하지 않는다 증식의 차이는 MTS 세포 증식 분석에 의해 입증 된 바와 같이. 평균 흡광도 값을 비교함으로써 결정되는 그래프는 일 (1)에 대하여 배 증가를 나타낸다 (제 1 일 평균값 thespecified 시점에서 비교를위한 부대 t의 -test 값 (± SEM을 의미)각 셀 라인 사이 : P = 0.7796) (14). 오차 막대는 평균 값이 하루에 사통 샘플에서 (± SEM을 의미)를 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53287/53287fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/53287/53287fig3.jpg" /> 그림 3. 루시 페라 제 발현은 생체 내 종양 성장과 동물의 생존에 영향을 미치는 것이 아닙니다. (A) 생물 발광 모니터링 C57BL / 6 마우스에서 두개 내 GL261.luc 종양의 진보적 인 성장을 보여줍니다. (B) Kaplan-Meier 생존 분석은 하나 GL261 (실선) 또는 GL261.luc 세포의 두개골 이식 마우스에 대한 전체 생존율의 차이를 보여줍니다 없습니다 (점선).이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

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Bioluminescence Imaging of an Immunocompetent Animal Model for Glioblastoma

GL261 glioma cells provide a useful immunocompetent animal model of glioblastoma. The goals of this protocol are to demonstrate proper techniques for monitoring intracranial tumor growth using in vivo bioluminescence imaging, and to verify the utility of luciferase-modified GL261 cells for studying tumor immunology and immunotherapeutic approaches for treating glioblastoma.

교 모세포종에 대한 면역 적격 동물 모델의 생물 발광 영상

In contrast to commonly reported human glioma xenograft animal models, GL261 murine glioma xenografts recapitulate nearly all relevant clinical and ...

bioluminescence-imaging-an-immunocompetent-animal-model-for

Research

JoVE Journal

Medicine

14.7K 조회수.  University of California San Francisco. GL261 glioma cells provide a useful immunocompetent animal model of glioblastoma. The goals of this protocol are to demonstrate proper techniques for monitoring intracranial tumor growth using in vivo bioluminescence imaging, and to verify the utility of luciferase-modified GL261 cells for studying tumor immunology and immunotherapeutic approaches for treating glioblastoma.

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Monitoring Tumor Metastases and Osteolytic Lesions with Bioluminescence and Micro CT Imaging

Following intracardiac delivery of MDA-MB-231-luc-D3H2LN cells to Nu/Nu mice, systemic metastases developed in the injected animals. Bioluminescence imaging using IVIS Spectrum was employed to monitor the distribution and development of the tumor cells following the delivery procedure including DLIT reconstruction to measure the tumor signal and its location.
Development of metastatic lesions to the bone tissues triggers osteolytic activity and lesions to tibia and femur were evaluated longitudinally using micro CT. Imaging was performed using a Quantum FX micro CT system with fast imaging and low X-ray dose. The low radiation dose allows multiple imaging sessions to be performed with a cumulative X-ray dosage far below LD50. A mouse imaging shuttle device was used to sequentially image the mice with both IVIS Spectrum and Quantum FX achieving accurate animal positioning in both the bioluminescence and CT images. The optical and CT data sets were co-registered in 3-dimentions using the Living Image 4.1 software. This multi-mode approach allows close monitoring of tumor growth and development simultaneously with osteolytic activity.

An experimental mouse model of bone metastasis was established following intracardiac delivery of luciferase expressing mammary tumor cells. Tumor development and resulted osteolytic lesion were monitored longitudinally with bioluminescence and micro CT imaging.

Bioluminescence 및 마이크로 중부 표준시 이미징과 함께 종양의 Metastases 및 Osteolytic 조직 손상을 모니터링

Following intracardiac delivery of MDA-MB-231-luc-D3H2LN cells to Nu/Nu mice, systemic metastases developed in the injected animals. Bioluminescence ...

연구

의학

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

It is well recognized that tumor hypoxia plays an important role in promoting malignant progression and affecting therapeutic response negatively. There is little knowledge about in situ, in vivo, tumor hypoxia during intracranial development of malignant brain tumors because of lack of efficient means to monitor it in these deep-seated orthotopic tumors. Bioluminescence imaging (BLI), based on the detection of light emitted by living cells expressing a luciferase gene, has been rapidly adopted for cancer research, in particular, to evaluate tumor growth or tumor size changes in response to treatment in preclinical animal studies. Moreover, by expressing a reporter gene under the control of a promoter sequence, the specific gene expression can be monitored non-invasively by BLI. Under hypoxic stress, signaling responses are mediated mainly via the hypoxia inducible factor-1&alpha; (HIF-1&alpha;) to drive transcription of various genes. Therefore, we have used a HIF-1&alpha; reporter construct, 5HRE-ODD-luc, stably transfected into human breast cancer MDA-MB231 cells (MDA-MB231/5HRE-ODD-luc). In vitro HIF-1&alpha; bioluminescence assay is performed by incubating the transfected cells in a hypoxic chamber (0.1% O2) for 24 hr before BLI, while the cells in normoxia (21% O2) serve as a control. Significantly higher photon flux observed for the cells under hypoxia suggests an increased HIF-1&alpha; binding to its promoter (HRE elements), as compared to those in normoxia. Cells are injected directly into the mouse brain to establish a breast cancer brain metastasis model. In vivo bioluminescence imaging of tumor hypoxia dynamics is initiated 2 wks after implantation and repeated once a week. BLI reveals increasing light signals from the brain as the tumor progresses, indicating increased intracranial tumor hypoxia. Histological and immunohistochemical studies are used to confirm the in vivo imaging results. Here, we will introduce approaches of in vitro HIF-1&alpha; bioluminescence assay, surgical establishment of a breast cancer brain metastasis in a nude mouse and application of in vivo bioluminescence imaging to monitor intracranial tumor hypoxia.

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

Bioluminescence imaging of hypoxia inducible factor-1&alpha; activity is applied to monitor intracranial tumor hypoxia development in a breast cancer brain metastasis mouse model.

유방암 뇌 전이의 종양 Hypoxia 역학 생체내의 Bioluminescence 이미징에서는 마우스 모델에서

It is well recognized that tumor hypoxia plays an important role in promoting malignant progression and affecting therapeutic response negatively. There ...

Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for objective diagnosis but also for the evaluation of therapeutic efficacy and resilience to trauma. Ongoing research is directed at identifying molecular biomarkers for PTSD, including traumatic stress induced proteins, transcriptomes, genomic variances and genetic modulators, using biologic samples from subjects' blood, saliva, urine, and postmortem brain tissues. However, the correlation of these biomarker molecules in peripheral or postmortem samples to altered brain functions associated with psychiatric symptoms in PTSD remains unresolved. Here, we present an animal model of PTSD in which both peripheral blood and central brain biomarkers, as well as behavioral phenotype, can be collected and measured, thus providing the needed correlation of the central biomarkers of PTSD, which are mechanistic and pathognomonic but cannot be collected from people, with the peripheral biomarkers and behavioral phenotypes, which can.
Our animal model of PTSD employs restraint and tail shocks repeated for three continuous days - the inescapable tail-shock model (ITS) in rats. This ITS model mimics the pathophysiology of PTSD 17, 7, 4, 10. We and others have verified that the ITS model induces behavioral and neurobiological alterations similar to those found in PTSD subjects 17, 7, 10, 9. Specifically, these stressed rats exhibit (1) a delayed and exaggerated startle response appearing several days after stressor cessation, which given the compressed time scale of the rat's life compared to a humans, corresponds to the one to three months delay of symptoms in PTSD patients (DSM-IV-TR PTSD Criterian D/E 13), (2) enhanced plasma corticosterone (CORT) for several days, indicating compromise of the hypothalamopituitary axis (HPA), and (3) retarded body weight gain after stressor cessation, indicating dysfunction of metabolic regulation.
The experimental paradigms employed for this model are: (1) a learned helplessness paradigm in the rat assayed by measurement of acoustic startle response (ASR) and a charting of body mass; (2) microdissection of the rat brain into regions and nuclei; (3) enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for blood levels of CORT; (4) a gene expression microarray plus related bioinformatics tools 18. This microarray, dubbed rMNChip, focuses on mitochondrial and mitochondria-related nuclear genes in the rat so as to specifically address the neuronal bioenergetics hypothesized to be involved in PTSD.

We describe a rat model of post traumatic stress disorder (PTSD) that reveals the persistent alterations in neuroendocrine function and the delayed long-term, exaggerated fear response, characteristic of PTSD patients. The animal model and methods described here are useful for correlating biomarkers in brain nuclei, which are mechanistic but cannot be measured in patients, with biomarkers in peripheral white blood cells, which can.

PTSD의, 신경 Hematologic, 그리고 행동 상관 관계를 누설하는 행위에 대해서는 동물 모델에서 생체

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

Use of Animal Model of Sepsis to Evaluate Novel Herbal Therapies

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several techniques, including infusion of exogenous bacterial toxin (endotoxemia) or bacteria (bacteremia), as well as surgical perforation of the cecum by cecal ligation and puncture (CLP)1-3. CLP allows bacteria spillage and fecal contamination of the peritoneal cavity, mimicking the human clinical disease of perforated appendicitis or diverticulitis. The severity of sepsis, as reflected by the eventual mortality rates, can be controlled surgically by varying the size of the needle used for cecal puncture2. In animals, CLP induces similar, biphasic hemodynamic cardiovascular, metabolic, and immunological responses as observed during the clinical course of human sepsis3. Thus, the CLP model is considered as one of the most clinically relevant models for experimental sepsis1-3.
Various animal models have been used to elucidate the intricate mechanisms underlying the pathogenesis of experimental sepsis. The lethal consequence of sepsis is attributable partly to an excessive accumulation of early cytokines (such as TNF, IL-1 and IFN-&gamma;)4-6 and late proinflammatory mediators (e.g., HMGB1)7. Compared with early proinflammatory cytokines, late-acting mediators have a wider therapeutic window for clinical applications. For instance, delayed administration of HMGB1-neutralizing antibodies beginning 24 hours after CLP, still rescued mice from lethality8,9, establishing HMGB1 as a late mediator of lethal sepsis. The discovery of HMGB1 as a late-acting mediator has initiated a new field of investigation for the development of sepsis therapies using Traditional Chinese Herbal Medicine. In this paper, we describe a procedure of CLP-induced sepsis, and its usage in screening herbal medicine for HMGB1-targeting therapies.

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection, and can be simulated by a surgical technique termed cecal ligation and puncture (CLP). Here we describe a method to use CLP-induced animal model to screen medicinal herbs for therapeutic agents.

소설 허벌 요법을 평가하는 패혈증의 동물 모델의 사용

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several ...

An Orthotopic Glioblastoma Mouse Model Maintaining Brain Parenchymal Physical Constraints and Suitable for Intravital Two-photon Microscopy

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology rely on the injection of a suspension of glioma cells into the brain parenchyma following incision of the dura-mater. Whereas the cells have to be injected superficially to be accessible to intravital two-photon microscopy, superficial injections fail to recapitulate the physiopathological conditions. Indeed, escaping through the injection tract most tumor cells reach the extra-dural space where they expand abnormally fast in absence of mechanical constraints from the parenchyma.
Our improvements consist not only in focally implanting a glioma spheroid rather than injecting a suspension of glioma cells in the superficial layers of the cerebral cortex but also in clogging the injection site by a cross-linked dextran gel hemi-bead that is glued to the surrounding parenchyma and sealed to dura-mater with cyanoacrylate. Altogether these measures enforce the physiological expansion and infiltration of the tumor cells inside the brain parenchyma. Craniotomy was finally closed with a glass window cemented to the skull to allow chronic imaging over weeks in absence of scar tissue development.
Taking advantage of fluorescent transgenic animals grafted with fluorescent tumor cells we have shown that the dynamics of interactions occurring between glioma cells, neurons (e.g. Thy1-CFP mice) and vasculature (highlighted by an intravenous injection of a fluorescent dye) can be visualized by intravital two-photon microscopy during the progression of the disease.
The possibility to image a tumor at microscopic resolution in a minimally compromised cerebral environment represents an improvement of current GBM animal models which should benefit the field of neuro-oncology and drug testing.

We have established a cortical orthotopic glioblastoma model in mice for intravital two-photon microscopy that recapitulates the biophysical constraints normally at play during the growth of the tumor. A chronic glass window replacing the skull above the tumor enables the follow-up of the tumor progression over time by two-photon microscopy.

소성을 Glioblastoma의 마우스 모델은 뇌 실질 물리적 제약 조건을 유지하고의 intravital 두 광자 현미경에 적합

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology ...

An Isolated Working Heart System for Large Animal Models

Since its introduction in the late 19th century, the Langendorff isolated heart perfusion apparatus, and the subsequent development of the working heart model, have been invaluable tools for studying cardiovascular function and disease1-15. Although the Langendorff heart preparation can be used for any mammalian heart, most studies involving this apparatus use small animal models (e.g., mouse, rat, and rabbit) due to the increased complexity of systems for larger mammals1,3,11. One major difficulty is ensuring a constant coronary perfusion pressure over a range of different heart sizes &#8211; a key component of any experiment utilizing this device1,11. By replacing the classic hydrostatic afterload column with a centrifugal pump, the Langendorff working heart apparatus described below allows for easy adjustment and tight regulation of perfusion pressures, meaning the same set-up can be used for various species or heart sizes. Furthermore, this configuration can also seamlessly switch between constant pressure or constant flow during reperfusion, depending on the user&#8217;s preferences. The open nature of this setup, despite making temperature regulation more difficult than other designs, allows for easy collection of effluent and ventricular pressure-volume data.

Most studies involving the Langendorff apparatus use small animal models due to the increased complexity of systems for larger mammals. We describe a Langendorff system for large animal models that allows for use across a range of species, including humans, and relatively easy data acquisition.

큰 동물 모델에 대한 격리 된 작업 심장 시스템

Since its introduction in the late 19th century, the Langendorff isolated heart perfusion apparatus, and the subsequent development of the working heart ...

Candida albicans Biofilm Development on Medically-relevant Foreign Bodies in a Mouse Subcutaneous Model Followed by Bioluminescence Imaging

Candida albicans biofilm development on biotic and/or abiotic surfaces represents a specific threat for hospitalized patients. So far, C. albicans biofilms have been studied predominantly in vitro but there is a crucial need for better understanding of this dynamic process under in vivo conditions. We developed an in vivo subcutaneous rat model to study C. albicans biofilm formation. In our model, multiple (up to 9) Candida-infected devices are implanted to the back part of the animal. This gives us a major advantage over the central venous catheter model system as it allows us to study several independent biofilms in one animal. Recently, we adapted this model to study C. albicans biofilm development in BALB/c mice. In this model, mature C. albicans biofilms develop within 48 hr and demonstrate the typical three-dimensional biofilm architecture. The quantification of fungal biofilm is traditionally analyzed post mortem and requires host sacrifice. Because this requires the use of many animals to perform kinetic studies, we applied non-invasive bioluminescence imaging (BLI) to longitudinally follow up in vivo mature C. albicans biofilms developing in our subcutaneous model. C. albicans cells were engineered to express the Gaussia princeps luciferase gene (gLuc) attached to the cell wall. The bioluminescence signal is produced by the luciferase that converts the added substrate coelenterazine into light that can be measured. The BLI signal resembled cell counts obtained from explanted catheters. Non-invasive imaging for quantifying in vivo biofilm formation provides immediate applications for the screening and validation of antifungal drugs under in vivo conditions, as well as for studies based on host-pathogen interactions, hereby contributing to a better understanding of the pathogenesis of catheter-associated infections.

Candida albicans Biofilm Development on Medically-relevant Foreign Bodies in a Mouse Subcutaneous Model Followed by Bioluminescence Imaging

We present an experimental procedure of Candida albicans biofilm development in a mouse subcutaneous model. Fungal biofilms were quantified by determining the number of colony forming units and by a non-invasive bioluminescence imaging, where the amount of light that is produced corresponds with the number of viable cells.

생물 발광 영상에 이어 마우스 피하 모델의 의학 관련 외국 기관에 칸디다 알비 칸스 (Candida albicans)에 바이오 필름 ​​개발

Candida albicans biofilm development on biotic and/or abiotic surfaces represents a specific threat for hospitalized patients. So far, C. albicans ...

A Chronic Cardiac Ischemia Model in Swine Using an Ameroid Constrictor

Cardiovascular disease remains the number one cause of mortality in the United States. There are numerous approaches to treating these diseases, but regardless of the approach, an in vivo model is needed to test each treatment. The pig is one of the most used large animal models for cardiovascular disease. Its heart is very similar in anatomy and function to that of a human. The ameroid placement technique creates an ischemic area of the heart, which has many useful applications in studying myocardial infarction. This model has been used for surgical research, pharmaceutical studies, imaging techniques, and cell therapies.
There are several ways of inducing an ischemic area in the heart. Each has its advantages and disadvantages, but the placement of an ameroid constrictor remains the most widely used technique. The main advantages to using the ameroid are its prevalence in existing research, its availability in various sizes to accommodate the anatomy and size of the vessel to be constricted, the surgery is a relatively simple procedure, and the post-operative monitoring is minimal, since there are no external devices to maintain. This paper provides a detailed overview of the proper technique for the placement of the ameroid constrictor.

The purpose of this protocol is to demonstrate the placement of a delayed constricting device (an ameroid constrictor) around a coronary artery in a swine model. This device creates an ischemic area of the heart that is useful for studying new diagnostic imaging techniques and new methods of treatment.

Ameroid 압축을 사용 하 여 돼지에서 만성 심장 허 혈 모델

Cardiovascular disease remains the number one cause of mortality in the United States. There are numerous approaches to treating these diseases, but ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been introduced as a method to evaluate and modify organ function. NEVLP has many advantages in comparison to hypothermic and subnormothermic perfusion including reduced preservation injury, restoration of normal organ function under physiologic conditions, assessment of organ performance, and as a platform for organ repair, remodeling, and modification. Both murine and porcine NEVLP models have been described. We demonstrate a rat model of NEVLP and use this model to show one of its important applications &#8212; the use of a therapeutic molecule added to liver perfusate. Catalase is an endogenous reactive oxygen species (ROS) scavenger and has been demonstrated to decrease ischemia-reperfusion in the eye, brain, and lung. Pegylation has been shown to target catalase to the endothelium. Here, we added pegylated-catalase (PEG-CAT) to the base perfusate and demonstrated its ability to mitigate liver preservation injury. An advantage of our rodent NEVLP model is that it is inexpensive in comparison to larger animal models. A limitation of this study is that it does not currently include post-perfusion liver transplantation. Therefore, prediction of the function of the organ post-transplantation cannot be made with certainty. However, the rat liver transplant model is well established and certainly could be used in conjunction with this model. In conclusion, we have demonstrated an inexpensive, simple, easily replicable NEVLP model using rats. Applications of this model can include testing novel perfusates and perfusate additives, testing software designed for organ evaluation, and experiments designed to repair organs.

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant liver donor shortage, and criteria for liver donors have been expanded. Normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been developed to evaluate and modify organ function. This study demonstrates a rat model of NEVLP and tests the ability of pegylated-catalase, to mitigate liver preservation injury.

Ex Vivo Normothermic 간 관류의 작은 동물 모델

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...