Name: bioluminescence imaging of an immunocompetent animal model for glioblastoma
Uploaded: 2016-01-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 17 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bioluminescence Imaging of an Immunocompetent Animal Model for Glioblastoma at JoVE.com

We would like to thank Rajwant Kaur for technical assistance. We would like to thank Maxwell Tom for assistance with lentivirus preparation. This work was supported by the Reza and Georgianna Khatib Endowed Chair in Skull Base Tumor Surgery at UCSF, and the Michael J. Marchese Professor and Chair at Northwestern University.

아래에 설명 된 모든 절차를 검토하고 노스 웨스턴 대학 기관 동물 사용 및 관리위원회의 승인을 멸균 조건 하에서 수행되고있다. 반딧불 루시 페라 제 표현 기자와 GL261 세포의 1. 변경 주 : HIV-1 계 렌티 바이러스 벡터는 비장 초점 형성 바이러스 (SFFV) 프로모터의 제어 하에서 반딧불 루시페라아제 (Fluc)을 표현한다. 광학 리포터 유전자는 벡터 플라스미드 pHRSIN-CSGW - dlNotI에 복제 된. <ol><li> 95을 함유하는 가습 분위기하에 37 ℃에서 10 % FBS, 1 % 페니실린 - 스트렙토 마이신이 보충 된 RPMI 배지에 10 % 소 태아 혈청 (FBS) 및 GL261 세포가 보충 된 둘 베코 변성 이글 배지 (DMEM) 293-T 세포를 유지 % 공기와 5 %의 이산화탄소 (CO 2). </li><li> 293-T 세포 배양은 T-75 플라스크에서 80 % 컨 플루 언시에 도달 할 때, pH가 번 세포를 씻어osphate 완충 식염수의 Ca2 +와는 Mg2 +가없는 (PBS)는, 주 형틀이 약간 기울어 진 채 5 ㎖ 피펫으로 5 분, 씹다 37 ℃에서, 트립신 (0.05 %) 3 mL를 가진 세포를 배양하고있는 모든 세포를 수집 플라스크의 바닥에서. 15ml의 원뿔형 튜브에 트립신 세포 현탁액의 3 ㎖를 전송하고, 육체 RPMI 배지 (세포 현탁액 10 ㎖의 전체) (7)를 가하여. </li><li> 5 ml의 피펫으로 웰 세포 현탁액을 혼합한다. 관으로부터 세포 현탁액 100 ㎕를 취하여 혈구를 이용한 세포의 수를 계산. 이렇게하려면 트리 판 블루 용액 300 μL와 세포 현탁액 100 μl를 혼합하고 혈구로 혼합물의 2 μL를 삽입합니다. 현미경 네 개의 개별 뷰에서 블루 염색하지 않고 세포의 수를 계산. 이 수가 104 세포 / ㎖를 나타내는 바와 같이, 각각의 뷰에서 세포 수의 평균. </li><li> 한편, 30의 세포 현탁액을 포함하는 튜브를 원심7 분 0 XG. 미디어 대기음 1.0 × 106 / ㎖의 밀도로 GL261 세포 현탁액을 만들기 위해 신선한 RPMI 배지로 세포 펠렛을 재현 탁. 27.5 ml의 DMEM (1 일)와 T-175 플라스크에 넣고 RPMI 미디어 2.5 mL를 종자 2.5 × 10 6 GL261 세포. </li><li> 24 시간 후, 20 ㎖ 신선한 DMEM (2 일)와 매체를 교체합니다. </li><li> 상기 렌티 바이러스 벡터를 생산하고 5 분 동안 2 ml의 무 혈청 DMEM으로 54 μL 형질 감염 시약을 혼합한다. 형질 전환 시약 DMEM에 Fluc (pSIN-Fluc)의 3 개그-POL의 μg의, 수 포성 구내염 바이러스 G 봉투 (VSV-G)의 3 μg의, 4.5 μg의를 추가하고 실온에서 20 분 동안 품어. T-293 플라스크 (T-175)로 전체 DNA 혼합물을 삭제하고 48 시간 (2 일), 95 % 공기 및 5 % CO 2를 함유하는 가습 챔버 내에서 37 ℃에서 배양한다. </li><li> (3 일) (약 30 ml를해야 293-T 세포 배양 배지의 총 부피) 형질 전환 후 24 시간 신선한 DMEM 10 ML을 추가합니다. </li><li> 로 GL261 세포를 분할하려면24 웰 플레이트, 약간 기울어 진 술병을 들고하여 5 mL를 피펫으로 5 분, 씹다 37 ℃에서 트립신 (0.05 %) 5 ㎖와 세포를 품어의 Ca2 +와는 Mg2 +없는 PBS로 한 번 세포를 씻어 플라스크의 바닥으로부터 모든 세포를 수집하고, 단계 1.2에서와 혈구 세포를 통해 카운트. 한편, 7 분 동안 300 XG에서 튜브를 원심 분리. 미디어 대기음 2.5 × 104 / ㎖의 밀도로 GL261 세포 현탁액을 만들기 위해 신선한 RPMI 배지로 세포 펠렛을 재현 탁. 시드 24 웰 플레이트에 RPMI 매체의 1 ㎖ (3 일) 2.5 × 10 4 GL261 세포. </li><li> 48 시간 다음과 같은 형질의 293-T 플라스크 (T-175) 10 mL를 피펫으로 렌티 바이러스 상층 액 30ml를 수집하고 50 ML 원뿔 튜브에 뜨는을 전송합니다. 대기음 30 ml의 렌티 바이러스 0.22 μm의 주사기 필터를 통해 50 ML의 주사기를 통해 상층 액, 1 mL를 분취 (4 일)에 바이러스 뜨는 나누어지는. </li><li> (R)의 1 mL로 교체렌티 바이러스 상층 액 1 ㎖과 함께 GL261 세포 판 (24도)에서 PMI 매체는 가습 실 (4 일)에 37 ° C에서 품어. </li><li> 렌티 바이러스 감염의 48 시간 후, 신선한 RPMI 1 ㎖ (6 일)와 매체를 교체합니다. </li><li> 24 시간 후, GL261 세포 (7 일)의 렌티 바이러스 감염을 반복한다. </li><li> 렌티 바이러스 감염의 2 차 48 시간 후, 신선한 RPMI 1 ㎖ (9 일)와 매체를 교체합니다. </li><li> (GL261.luc 셀로 언급되는) 변형 된 루시퍼 GL261 세포 성장 및 T-75 플라스크에 세포 배양을 확장하는 것을 계속한다. </li><li> GL261.luc 세포 배양은 T-75 플라스크에서 70 % 컨 플루 언시에 도달 할 때, 트립신 처리에 의해 세포를 수확하고, 단계 120에서와 같이 계산에 의해 혈구. 졸업 밀도에서 24- 웰 플레이트 GL261.luc 셀 플레이트 (1.0 × 106 5.0 × 105, 2.5 × 105, 1.0 × 105, 5.0 × 104, 2.5 × 104 세포 / 웰) 및 humidi에서 37 ° C에서 부화3 시간 동안 95 % 공기 및 5 % CO 2를 함유하는 챔버 얘기들이었다. </li><li> 셀룰러 루시퍼 라제 활성에 대하여 측정 값을 생물 발광 영상 (도 1)를 이용하여 U-87 MG (U87.luc) 세포 변성 루시페라아제한다. <ol><li> 이미지 소프트웨어를 시작합니다 (바탕 화면에 아이콘을 클릭) 이미징 시스템을 초기화 (버튼을 클릭 &quot;초기화&quot;). 초기화가 자동으로 시작되고 시스템 검진 및 -90 ℃로 냉각 할 수있는 카메라를 몇 분 정도 걸릴 수 있습니다. </li><li> 각 웰에 루시페린의 25 μL (D-루시페린 칼륨 염, 150 ㎎ / ㎏)를 추가합니다. </li><li> 10 초 동안 판을 실온에서 1 분 동안 루시페린과 이미지로 세포를 품어. 이미징 시스템을 설정하려면, &quot;발광&quot;, &quot;10 초&quot;노출 시간, &quot;중간&quot;비닝 (binning)을 선택합니다. 영상 스테이션의 24 웰 플레이트를 놓고 이미지를 시작합니다 &quot;취득&quot;버튼을 클릭합니다. </li><li> 이미지를 성공적으로 인수 한 후에는 이미지 창 및 도구 PA가 표시됩니다화면에 lette. &quot;ROI (관심 지역) 도구&quot;를 클릭하고 슬릿 아이콘에서 6 × 4를 선택합니다. 24 웰 플레이트의 이미지 신호의 영역을 커버하고 측정 탭 (연필 아이콘)을 클릭하는 6 × 4 슬릿을 만듭니다. 평방 센티미터 (광자 / 초 / / SR cm 2) 당 스테 라디안 당 초당 광자 단위로 투자 수익 (ROI) 측정의 테이블 창을 준수하십시오. </li><li> 사용 U87.luc 셀들은, 이전에 GL261.luc 형질 세포에서 루시퍼 라제 활성을 평가하기위한 대조군으로서, GL261 개질 11 여기 사용 된 것과 같은 렌티 변성. </li></ol></li></ol> 체외 증식 분석 2. <ol><li> GL261과 GL261.luc 세포 배양은 T-75 플라스크에서 70 % 컨 플루 언시에 도달 할 때, 트립신 처리하여 세포주 모두를 수확하고, 단계 120에서와 같이 계산하고, 1,500 세포의 밀도로 96- 웰 플레이트에 플레이트 세포 또한 시간과 피펫 오차를 최소화하도록 멀티 채널 피펫을 사용하여 당 RPMI 배지 80 μL. 괜찮다ED (20) 우물의 총에 각 셀 라인. 세포에 의해 채워 우물의 증발을 제한하기 위해, 신선한 RPMI 배지 100 ㎕ 빈 우물을 입력합니다. </li><li> 비색 세포 증식 분석법을 이용하여 세포 증식을 평가. 여기에서 우리는 MTS 세포 증식 분석을 사용합니다. 멀티 채널 피펫을 사용하여, 세포를 포함하는 96- 웰 플레이트의 각 웰에 MTS 시약 20 μL를 추가한다. </li><li> 3 시간 동안 95 % 공기 및 5 % CO 2를 함유하는 가습 챔버 내에서 37 ℃에서 플레이트를 배양한다. 마이크로 플레이트 리더를 사용하여 490 nm에서 흡광도를 측정한다. 이것은 도금 후, 7 일 1, 2, 4에서 반복되고. 흡광도 값을 정규화하기 위해, 매일의 값은 1 일 (도 2)에서 얻어진 대응하는 수치로 나누어진다. </li></ol> 3. 종양 세포 주입 참고 : 모든 장비를 압력솥. 살균제 (2 % 클로르헥시딘 액)을 분무하여 수술 영역을 준비하고 absorben 커버T 커튼. 멸균 상태를 유지 수술시 무균 수술 장갑을 착용하고, 색 테이프로 두 영역으로 수술 영역을 나누기 위해. 지역 1 &quot;클린&quot;이라는 살균 공급을 포함합니다; 지역 2 &quot;더러운&quot;로 표시하고, 재료를 사용 포함되어 있습니다. <ol><li> 동물 수술에 앞서, 두개 내 주입을위한 세포 현탁액을 준비합니다. 70 %의 합류 T-75 플라스크 트립신에 의해 단계 1.2에서와 같이 혈구를 통해 세포를 계산하고, 2 + 칼슘없이 행크스 &#39;균형 소금 용액에 1.0 × 10 5 세포 / μL의 농도에서 세포 현탁액을 만들어에서 수확 세포 마그네슘 2+ (HBSS). </li><li> 0.9 %의 식염수에 자일 라진의 케타민 100 ㎎ / ㎏과 10 ㎎ / ㎏을 포함하는 200 μL 혼합물의 복강 내 주사로 쥐를 마취. 적절한 마취를 확인하려면, 마우스의 발가락을 꼬집어. 마우스가 완전 마취 경우, 마우스는 자극에 반응해서는 안된다. </li><li> 0.1 미터를 관리피하 주사를 통해 G / kg의 부 프레 노르 핀은 수술 후 통증을 완화합니다. </li><li> 2 % 클로르헥시딘 용액에 침지면 팁 어플리케이터 및 가위를 사용하여 깨끗한 동물의 머리의 상단 면도. 수술 중 적절한 윤활을 유지하기 위해 눈 연고를 적용합니다. </li><li> 멸균 메스를 사용하여 두정 - 후두 뼈를 통해 약 1cm 길이 시상 절개를합니다. 브레 그마 시각화, 3 % 과산화수소 용액에 적신 솜 팁 어플리케이터 두개골의 표면을 닦아. </li><li> 브레 그마의 오른쪽 바로 뒤에 관상 봉합 3mm 작은 구멍을 만들기 위해 무균 25-G 바늘 두개골을 뚫는다. </li><li> 두개 내 주사 부위는 두개골 3 mm의 깊이에 있는지 확인하기 위해 가위를 사용하여 20 μL 피펫 팁의 끝이 뾰족 오프 3mm을 절감하고 피펫 팁에 주사기를 삽입합니다. </li><li> 이전에 만든 구멍에 수직으로 주사기를 삽입하고 천천히 종양 세포 SUS를 주입1 분 동안 3 μL HBSS에 3.0 × 105 세포를 함유 연금. 다른 분 동안 자리에 바늘을 그대로두고 천천히 바늘을 빼냅니다. </li><li> 3 % 과산화수소에 침지면 팁 어플리케이터 및 2 % 클로르헥시딘 용액 두개골을 면봉. 면 팁 어플리케이터 두개골의 표면을 건조시킵니다. 크기가 3 약 3mm 멸균 뼈 왁스를 잘라면 팁 어플리케이터의 측에 뼈 왁스를 연결합니다. 면 팁 어플리케이터 구멍을 충당하기 위해 뼈 왁스를 적용합니다. </li><li> 집게를 사용하여 두개골을 통해 함께 두피의 각면을 그리고 주식은 상처를 닫습니다. 2 % 클로르헥시딘 용액에 담근면 팁과 상처를 청소합니다. </li><li> 그들은 보행이 될 때까지 수술 후 모든 쥐를 모니터링하고 정상적인 활동을 유지합니다. 일반적으로, 회복 시간은 약 30 분이다. 그들이 완전히 마취에서 회복 될 때까지 다른 동물 케이지에 마우스를 반환하지 않습니다. </li></ol><ol><li> 깨끗한 종이 타월에 살균제의 충분한 양 (0.05 % 디메틸 암모늄 클로라이드 용액)을 스프레이. 철저하게 동물 장치와 접촉 할 것 이미징 챔버 내부의 검은 색 시트, 코 콘 및 디바이더를 닦아 살균제에 젖은 종이 타월을 사용합니다. 철저하게 깨끗하고 마른 종이 타월로 모든 표면을 닦으십시오. 이 한 번 더 반복하고 5 분을 기다립니다. </li><li> 단계 1.14.1과 촬상 국 초기화. </li><li> 복강 주사에 의해 케타민 / 자일 라진 및 200 μL의 100 μL 루시페린 (D-루시페린 칼륨 염 150 ㎎ / ㎏)을 함유 300 μL 혼합물로 마우스를 마취. </li><li> 주사 후 10 분을 기다린 후 쥐가 꼬리를 곤란하게하여 마취하에 완전히 있는지 확인합니다. 이미징 시스템을 설정하려면, &quot;발광&quot;, &quot;자동&quot;노출 시간, &quot;중간&quot;비닝 (binning)을 선택합니다. 영상 stati에 마우스를 놓고과에하면 이미지를 시작합니다 &quot;취득&quot;버튼을 클릭합니다. 주사 후 시간이 각 이미지 세션과 일관성이 있음을 확인합니다. </li><li> 이미지가 성공적으로 획득되면, 화상 창 및 도구 팔레트 나타나야. &quot;투자 수익 (ROI) 도구&quot;를 클릭하고 원 아이콘에서 &quot;자동&quot;을 선택합니다. ROI를 정의하기 위해, 이미지 신호의 영역을 둘러싸하고 SR 광자 / 초 / / ㎠의 단위로 ROI의 측정을 수행. </li><li> 영상 실에서 쥐를 가지고 그들이 보행이 될 때까지 마우스를 모니터링하고 정상적인 활동을 유지합니다. 일반적으로 복구 시간은 약 15 분이다. 그들이 완전히 마취에서 회복 될 때까지 다른 동물 케이지에 마우스를 반환하지 않습니다. </li><li> 동물은 다음과 같은 현상이 제시 될 때까지 일주일에 두 번 생물 발광 이미징에 의해 종양 성장을 모니터 : 체중 감소 (주입 전의 중량에 20 % 이상의 상대적인 손실) inappetance (24 시간 동안 완전한 거식증), 및 지속적인 purposefu ​​부족그들이 안락사해야하는 시간에 부드러운 자극 (최대 얻을 수있는 약한 시도)에 L 응답. 경추 탈구이어서 CO 2 챔버를 사용하여 이러한 증상이있는 동물을 안락사. <ol><li> 장소 안락사 챔버에 마우스 (과밀하지 챔버을) 유입은 5-6 분 동안 이산화탄소를 압축. 모든 동물은 무의식과 후 약 5 분 호흡을하지 않는 것을 관찰한다. </li><li> 챔버에서 마우스를 가져 가라. 심장이 엄지와 집게 손가락 사이의 가슴을 느낌으로 치고 있지 않은지 확인하고, 깜빡임이 없음을 확인합니다. </li><li> 평평한 표면에 발생하기 쉬운 위치에 마우스를 억제하고 엄지와 다른 손의 첫 번째 손가락으로 꼬리의 한 손으로 두개골의 기지에서 목 뒤쪽과 기지를 파악. </li><li> 머리를 제지하고 신속하게 뒤로 꼬리를 잡아 당깁니다. 그 두개골은 엄지와 첫 번째 손가락을 사용하여 첫 번째 경추에서 분리되어 있는지 확인합니다. </li></ol></li><li> 표준단계 2.3 (그림 3A)과 생물 발광 영상의 첫 번째 날에 얻은 대응하는 측정 값에 대한 매일 ALIZE 발광 값. </li><li> 통계적인 분석을 위해, 카플란 - 마이어 추정 (12)을 이용하여 생존 곡선을 생성하고, 로그 - 랭크 테스트 (13)을 이용하여 생존 곡선 사이의 차이를 비교한다. </li></ol>

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(67), (2012).</li></ol>

There are no conflicts of interest to disclose.

동계 면역 C57BL / 6 마​​우스에 두개골 내에 이식 할 때 GL261 쥐의 신경 교종 세포는 인간의 신경 교종 이종 이식 동물 모델에 비해 몇 가지 장점을 제공합니다. 이종 이식 종양의 대부분은 정확하게 침략 인간의 질병을 요점을 되풀이하지 않는 캡슐화 된 병변으로 성장. 반면, GL261 종양뿐만 아니라 인접한 뇌에 침략을 보여줍니다뿐만 아니라, 혈관 신생, 유사 분열, 그리고 깊은 괴사 7. 가장 중요한 것은 종양 면역학 또는 면역 전략 15, 16, C57BL / 6 마우스가 그대로 면역 시스템 (8)을 유지 공부를 할 때. 이전의 연구는 면역 사이토 카인 TGF-β의 강력한 표현을 보여 주었다 및 두개 내 종양은 인간 아교 모세포종 (9), (10)과 유사한 면역 억제 T-조절 세포가 포함되어 있습니다. 여기에 설명 된 간단한 기술은 GL261 세포에 의해 루시 페라 제의 안정적 발현 할 수 있습니다. 우리는 최근 미 신고되었습니다시험 관내 및 GL261 세포에 비해 GL261.luc 세포의 생체 내 성장 LAR은 유사한 종양 조직 학적 특성 및 면역 세포에 더하여 17 침투. GL261.luc 세포 안정적 따라서 광자 검출 광 화학적 에너지 변환 루시페린 기질의 산화를 촉매하는 루시퍼 라제를 발현. 루시페린 안전하게 동물에게 복강 내 투여 또는 정맥 내 주사 후 혈액 뇌 장벽을 통과 할 수있다. 이러한 생쥐 작은 동물 연구에서, 생물 발광을 비 침습적 방식으로 (11)에 외부 적으로 검출 될 수있다. 따라서, 종양의 성장은 직렬 동물의 희생 또는 비용 MRI 또는​​ CT 촬영에 대한 필요없이 평가 될 수있다. 프로토콜의 중요한 단계는 생체 내 실험을 시작하기 전에 시험 관내에서 렌티 바이러스 형질 도입, 또한 루시퍼 라제를 안정적으로 발현 대조까지도 포함한다. 전달의 손실 requi 수 있습니다반복 렌티 바이러스 감염 재. 발현 벡터에 항생제 내성 유전자의 도입은 또한 루시퍼 라제 발현을 선택하는 데 사용될 수있다. 세심한 기술 재현성 다른 처리 군의 비교를 허용하도록 정확한 해부학 적 위치에있는 세포의 수를 일치 배치 두개 내 주입을 위해 요구된다. 현재 연구 및 루시퍼 라제 발현 GL261 셀의 이전 연구 간의 주요한 차이점은 정위 프레임 (18)의 사용에 비해 세포를 주입하는 프리 핸드 기술의 사용이다. 우리는 이전에 한 손 기술 (19)과 일치 주입 결과를 보여 주었다. 자유로운 손 기술의 장점은 다른 치료제의 높은 처리량 분석을 수행 할 수있는 능력이다. 우리의 손에, 우리는 1 시간에 약 60 동물을 이식 할 수 있습니다. 기술을 습득 한 후, 미래 기술의 응용은 무한하다. GL261의 demonstr로축열 상승 유사 분열 및 인간 아교 모세포종 유사한 빠른 종양 성장은, 항 - 증식 치료제가 평가 될 수있다. GL261 종양이 침습성 및 혈관 신생이다 마찬가지로, 항 침습 및 항 - 혈관 신생 요법이 사용될 수있다. 인간 표적 겨냥 화학 치료제의 효과를 평가하는 경우에는주의가 사용되어야한다. 루시퍼 라제를 발현하는 20 인간 아교 모세포종 이종 이식편을 이용한 이전 연구에 비하여, 이것은 우리의 모델의 제한으로 간주 될 것이다. 또한, 종양 성장의 면역 요법 전략의 효과 GL261 이종 이식 모델에서 연구 될 수있다.

Malignant glioma is the most common and most lethal human brain tumor. Even when treated with maximal surgical resection, radiotherapy, and chemotherapy, median survival remains 15-20 months at major brain tumor referral centers1, 2, 3. The most aggressive form of malignant glioma, glioblastoma, is characterized by mitotic figures, neovascularization, invasion into adjacent brain, and pseudopalisading necrosis. Orthotopic brain tumor xenografts using human brain tumor cells have served an essential function in neuro-oncology research and facilitated pre-clinical translation for testing of new agents, prior to entry into human clinical trials. Whereas most of human xenograft models recapitulate many features of the human disease, a fundamental limitation with all human-based xenograft model systems is the use of immunodeficient animals4. 
The absence of an intact host response clearly modifies tumor growth both in terms of tumor morphology, and efficiency of engraftment. While certain assumptions are acceptable in the interpretation of results from xenografted models, achieving relevant conclusions in the area of therapeutic assessment is a challenge. Certain fundamental biologic features are likely to be similar in immunodeficient and immunocompetent animals, but others such as tumor associated inflammation, tissue invasion, response to injury are probably very different. In contrast, GL261 is a chemically induced murine glioma cell line that accurately recapitulates glioma when implanted into the brains of immunocompetent syngeneic C57BL/6 mice5. Similar to the human disease, intracranial tumor growth rapidly and reproducibly leads to neurologic symptoms and animal demise6-10. 
Subcutaneous tumor growth can be directly measured. Intracranial tumor growth can only be measured with animal sacrifice or with costly imaging studies. Stable expression of the enzyme luciferase allows non-invasive and cost-effective intracranial bioluminescence imaging11. Bioluminescence of luciferase transfected GL261 cells correlates well with intracranial tumor growth. We have recently directly compared GL261 to luciferase modified GL261 cells and demonstrated no difference in in vitro growth and invasion, immunologic cytokine profile, in vivo survival of intracranial tumor bearing C57BL/6 mice, or immune cell infiltrate. This technique is applicable to glioblastoma preclinical studies which involve non-invasive monitoring of tumor growth.

<table><tbody><tr><td>D-Luciferin, Potassium Salt</td><td>Gold Biotechonology</td><td>LUCK-100</td><td>Store away from light</td></tr><tr><td>Living Image Software</td><td>Caliper Life Sciences</td><td>Contact for Quote</td><td>none</td></tr><tr><td>Xenogen Lumina</td><td>Caliper Life Sciences</td><td>Contact for Quote</td><td>none</td></tr><tr><td>24-well; Standard tissue culture; flat-bottom</td><td>Falcon</td><td>353047</td><td></td></tr><tr><td>CellTiter 96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay&amp;nbsp;</td><td>Promega</td><td>G3582</td><td>none</td></tr><tr><td>Synergy 2 Multi-Mode Reader</td><td>BioTek</td><td>Contact for Quote</td><td>none</td></tr><tr><td>96 well Assay Plate, Black Plate, Clear bottom with Lid, Tissue culture Tretaed</td><td>Coster</td><td>3603</td><td>none</td></tr><tr><td>Ketaset</td><td>Pfizer</td><td>NDC 0856-2013-01</td><td>Control substance</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>23076-35-9</td><td>none</td></tr><tr><td>28G Needle (with syringe)&amp;nbsp;</td><td>Fisher&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>22-004-270</td><td>AKA Insulin Syringe</td></tr><tr><td>2% Chlorhexidine</td><td>Fisher</td><td>NC9756995</td><td>AKA &amp;ldquo;Nolvasan&amp;rdquo;</td></tr><tr><td>3% Hydrogen Peroxide</td><td>Fisher</td><td>H312P-4</td><td>Store away from light</td></tr><tr><td>Ophthalmic Ointment</td><td>Cardinal Health</td><td>1272830</td><td>AKA &amp;ldquo;Akwa Tears&amp;rdquo;</td></tr><tr><td>25G 1 1/2 needle</td><td>BD Becton Dickinson</td><td>305127</td><td>none</td></tr><tr><td>Disposable Scalpels</td><td>Feather</td><td>2975</td><td>No. 21</td></tr><tr><td>Gauze</td><td>Fisher</td><td>22028563</td><td>Autoclave before use</td></tr><tr><td>Heating Pad</td><td>Dunlap</td><td>HP950</td><td>none</td></tr><tr><td>Skin Stapler, Staples, Remover</td><td>Stoelting</td><td>59020</td><td>none</td></tr><tr><td>PDI Alchol Prep Pads</td><td>Fisher</td><td>23-501-711</td><td>none</td></tr><tr><td>Reflex 7 mm Wound Clips 100 pack</td><td>Brain Tree Scientific, INC</td><td>203 1000</td><td>Autoclave before use</td></tr><tr><td>Reflex 7 mm Wound Clip Applier</td><td>Brain Tree Scientific, INC</td><td>204 1000</td><td>Autoclave before use</td></tr><tr><td>Reflex 7 mm Wound Clip Remover</td><td>Brain Tree Scientific, INC</td><td>205 1000</td><td>none</td></tr><tr><td>Single Ended Round Tip Swab with Wood handle</td><td>Qosmedix</td><td>10107</td><td>Autoclave before use</td></tr><tr><td>Hanks&#039; Balanced Salt Solution without Ca2+ and Mg2+ (HBSS)</td><td>Gibco</td><td>14170-112</td><td>none</td></tr><tr><td>Hamilton Syringe</td><td>Hamilton</td><td>80300</td><td>none</td></tr><tr><td>FuGENE 6 Transfection Reagent</td><td>Promega</td><td>E2961</td><td>none</td></tr><tr><td>Bone Wax</td><td>Harvard Apparatus</td><td>599864</td><td>none</td></tr></tbody></table>

bioluminescence imaging of an immunocompetent animal model for glioblastoma

In contrast to commonly reported human glioma xenograft animal models, GL261 murine glioma xenografts recapitulate nearly all relevant clinical and histopathologic features of the human disease. When GL261 cells are implanted intracranially in syngeneic C57BL/6 mice, the model has the added advantage of maintaining an intact immune microenvironment. Stable expression of luciferase in GL261 cells allows non-invasive cost effective bioluminescence monitoring of intracranial tumor growth. We have recently demonstrated that luciferase expression in GL261 cells does not affect the tumor growth properties, tumor cell immunomodulatory cytokine expression, infiltration of immune cells into the tumor, or overall survival of animals bearing the intracranial tumor. Therefore, it appears that the GL261 luciferase glioma model can be useful in the study of novel chemotherapeutic and immunotherapeutic modalities. Here we report the technique for generating stable luciferase expression in GL261 cells and how to study the in vitro and in vivo growth of the tumor cells by bioluminescence imaging.

GL261 세포는 시험관 내 생물 발광 1. 촬상 인간 아교 모세포종 세포주 U87.luc 양성 대조군의 수준과 유사한 강력한 루시페라아제 발현 (도 1)를 보여주는 단계에서 상술 한 바와 같이 루시페라아제는 렌티 바이러스를 포함하여 감염시켰다. 예상대로, 감염되지 않은 GL261 세포는 어떤 배경 루시 페라 제 표현을 보여 없습니다. 이 단계에서는 아직 종래 안정 루시퍼 라제 발현을 확인 감염된 세포주를 사용하여 추가 연구를 수행하는 것이 중요 간단하다. 두개 내 주입 후 루시 페라 제 표현. 두개 내 주입하기 전에, 우리는 GL261 세포 (그림 2)에 비해 GL261.luc의 체외 성장 속도의 차이를 입증하지 않습니다. 두개 내 성장 및 생존 분석을 위해, 세포에 주입 하였다 BRGL261.luc 종양을 갖는 마우스에서 3 단계 종양 성장 프로토콜에 따라, C57BL / 6 마우스의 AINS 직렬 프로토콜을 사용하여 단계 4 생물 발광 영상을 분석 및 검출 종양 성장 (도 3a)을 입증 하였다. 신속하고 일관 GL261.luc 종양을 갖는 마우스는 죽어가는되었고 안락사시켰다. 중요한 GL261.luc 동물 베어링 GL261 종양 (도 3b) 사이의 전체 생존율에는 차이가 없다. 생체 내 생물 발광 촬상 따라서 실험 아교 모세포종 치료에 반응을 모니터링하는 데 사용될 수있다. 신속한 신뢰성 종양 성장 및 생존율은 짧은 상대적으로 짧은 시간에 많은 양의 데이터를 얻을 수있다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/53287/53287fig1.jpg" /> GL261.luc 세포도 1 루시페라아제 활성. U87.luc는 GL261.luc 및 GL261 (대조군) 세포의 밀도로 플레이 팅 하였다1.0 × 106, 5.0 × 105, 2.5 × 105, 1.0 × 105, 5.0 × 104, 2.5 × 104 세포 / 웰에서 좌우. 발광 (광자 / 초 / / SR CM 2) 루미나 이미징 역으로 측정 하였다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53287/53287fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/53287/53287fig2.jpg" /> 도 2 루시 페라 제 발현은 GL261 세포 증식에 영향을주지 않는다. GL261.luc 세포는 발생하지 않는다 증식의 차이는 MTS 세포 증식 분석에 의해 입증 된 바와 같이. 평균 흡광도 값을 비교함으로써 결정되는 그래프는 일 (1)에 대하여 배 증가를 나타낸다 (제 1 일 평균값 thespecified 시점에서 비교를위한 부대 t의 -test 값 (± SEM을 의미)각 셀 라인 사이 : P = 0.7796) (14). 오차 막대는 평균 값이 하루에 사통 샘플에서 (± SEM을 의미)를 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53287/53287fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/53287/53287fig3.jpg" /> 그림 3. 루시 페라 제 발현은 생체 내 종양 성장과 동물의 생존에 영향을 미치는 것이 아닙니다. (A) 생물 발광 모니터링 C57BL / 6 마우스에서 두개 내 GL261.luc 종양의 진보적 인 성장을 보여줍니다. (B) Kaplan-Meier 생존 분석은 하나 GL261 (실선) 또는 GL261.luc 세포의 두개골 이식 마우스에 대한 전체 생존율의 차이를 보여줍니다 없습니다 (점선).이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

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Bioluminescence Imaging of an Immunocompetent Animal Model for Glioblastoma

GL261 glioma cells provide a useful immunocompetent animal model of glioblastoma. The goals of this protocol are to demonstrate proper techniques for monitoring intracranial tumor growth using in vivo bioluminescence imaging, and to verify the utility of luciferase-modified GL261 cells for studying tumor immunology and immunotherapeutic approaches for treating glioblastoma.

교 모세포종에 대한 면역 적격 동물 모델의 생물 발광 영상

In contrast to commonly reported human glioma xenograft animal models, GL261 murine glioma xenografts recapitulate nearly all relevant clinical and ...

bioluminescence-imaging-an-immunocompetent-animal-model-for

Research

JoVE Journal

Medicine

14.8K 조회수.  University of California San Francisco. GL261 glioma cells provide a useful immunocompetent animal model of glioblastoma. The goals of this protocol are to demonstrate proper techniques for monitoring intracranial tumor growth using in vivo bioluminescence imaging, and to verify the utility of luciferase-modified GL261 cells for studying tumor immunology and immunotherapeutic approaches for treating glioblastoma.

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Establishing Intracranial Brain Tumor Xenografts With Subsequent Analysis of Tumor Growth and Response to Therapy using Bioluminescence Imaging

Transplantation models using human brain tumor cells have served an essential function in neuro-oncology research for many years. In the past, the most commonly used procedure for human tumor xenograft establishment consisted of the collection of cells from culture flasks, followed by the subcutaneous injection of the collected cells in immunocompromised mice. Whereas this approach still sees frequent use in many laboratories, there has been a significant shift in emphasis over the past decade towards orthotopic xenograft establishment, which, in the instance of brain tumors, requires tumor cell injection into appropriate neuroanatomical structures. Because intracranial xenograft establishment eliminates the ability to monitor tumor growth through direct measurement, such as by use of calipers, the shift in emphasis towards orthotopic brain tumor xenograft models has necessitated the utilization of non-invasive imaging for assessing tumor burden in host animals. Of the currently available imaging methods, bioluminescence monitoring is generally considered to offer the best combination of sensitivity, expediency, and cost. Here, we will demonstrate procedures for orthotopic brain tumor establishment, and for monitoring tumor growth and response to treatment when testing experimental therapies.

Luciferase-modified human brain tumor xenografts can be established intracranially in athymic mice, with subsequent monitoring of tumor growth and response to therapy using bioluminescence imaging. In combination with survival analysis, bioluminescence monitoring is an essential research tool for pre-clinical testing of therapies being considered for treating brain tumors.

Bioluminescence 이미징을 사용하여 종양 성장과 치료에 반응 이후 분석 Intracranial 뇌종양의 Xenografts 구축

Transplantation models using human brain tumor cells have served an essential function in neuro-oncology research for many years. In the past, the most ...

연구

신경과학

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

It is well recognized that tumor hypoxia plays an important role in promoting malignant progression and affecting therapeutic response negatively. There is little knowledge about in situ, in vivo, tumor hypoxia during intracranial development of malignant brain tumors because of lack of efficient means to monitor it in these deep-seated orthotopic tumors. Bioluminescence imaging (BLI), based on the detection of light emitted by living cells expressing a luciferase gene, has been rapidly adopted for cancer research, in particular, to evaluate tumor growth or tumor size changes in response to treatment in preclinical animal studies. Moreover, by expressing a reporter gene under the control of a promoter sequence, the specific gene expression can be monitored non-invasively by BLI. Under hypoxic stress, signaling responses are mediated mainly via the hypoxia inducible factor-1&alpha; (HIF-1&alpha;) to drive transcription of various genes. Therefore, we have used a HIF-1&alpha; reporter construct, 5HRE-ODD-luc, stably transfected into human breast cancer MDA-MB231 cells (MDA-MB231/5HRE-ODD-luc). In vitro HIF-1&alpha; bioluminescence assay is performed by incubating the transfected cells in a hypoxic chamber (0.1% O2) for 24 hr before BLI, while the cells in normoxia (21% O2) serve as a control. Significantly higher photon flux observed for the cells under hypoxia suggests an increased HIF-1&alpha; binding to its promoter (HRE elements), as compared to those in normoxia. Cells are injected directly into the mouse brain to establish a breast cancer brain metastasis model. In vivo bioluminescence imaging of tumor hypoxia dynamics is initiated 2 wks after implantation and repeated once a week. BLI reveals increasing light signals from the brain as the tumor progresses, indicating increased intracranial tumor hypoxia. Histological and immunohistochemical studies are used to confirm the in vivo imaging results. Here, we will introduce approaches of in vitro HIF-1&alpha; bioluminescence assay, surgical establishment of a breast cancer brain metastasis in a nude mouse and application of in vivo bioluminescence imaging to monitor intracranial tumor hypoxia.

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

Bioluminescence imaging of hypoxia inducible factor-1&alpha; activity is applied to monitor intracranial tumor hypoxia development in a breast cancer brain metastasis mouse model.

유방암 뇌 전이의 종양 Hypoxia 역학 생체내의 Bioluminescence 이미징에서는 마우스 모델에서

It is well recognized that tumor hypoxia plays an important role in promoting malignant progression and affecting therapeutic response negatively. There ...

의학

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Tumorigenicity is the capability of cancer cells to form a tumor mass. A widely used approach to determine if the cells are tumorigenic is by injecting immunodeficient mice subcutaneously with cancer cells and measuring the tumor mass after it becomes visible and palpable. Orthotopic injections of cancer cells aim to introduce the xenograft in the microenvironment that most closely resembles the tissue of origin of the tumor being studied. Brain cancer research requires intracranial injection of cancer cells to allow the tumor formation and analysis in the unique microenvironment of the brain. The in vivo imaging of intracranial xenografts monitors instantaneously the tumor mass of orthotopically engrafted mice. Here we report the use of fluorescence molecular tomography (FMT) of brain tumor xenografts. The cancer cells are first transduced with near infrared fluorescent proteins and then injected in the brain of immunocompromised mice. The animals are then scanned to obtain quantitative information about the tumor mass over an extended period of time. Cell pre-labeling allows for cost effective, reproducible, and reliable quantification of the tumor burden within each mouse. We eliminated the need for injecting imaging substrates, and thus reduced the stress on the animals. A limitation of this approach is represented by the inability to detect very small masses; however, it has better resolution for larger masses than other techniques. It can be applied to evaluate the efficacy of a drug treatment or genetic alterations of glioma cell lines and patient-derived samples.

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Orthotopic intracranial injection of tumor cells has been used in cancer research to study brain tumor biology, progression, evolution, and therapeutic response. Here we present fluorescence molecular tomography of tumor xenografts, which provides real-time intravital imaging and quantification of a tumor mass in preclinical glioblastoma models.

Vivo에서 이미징 세포종 Xenografts의 형광 분자 단층 촬영

Tumorigenicity is the capability of cancer cells to form a tumor mass. A widely used approach to determine if the cells are tumorigenic is by injecting ...

암 연구학

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

The mouse glioma 261 (GL261) is recognized as an in vivo model system that recapitulates many of the features of human glioblastoma multiforme (GBM). The cell line was originally induced by intracranial injection of 3-methyl-cholantrene into a C57BL/6 syngeneic mouse strain 1; therefore, immunologically competent C57BL/6 mice can be used. While we use GL261, the following protocol can be used for the implantation and monitoring of any intracranial mouse tumor model. GL261 cells were engineered to stably express firefly luciferase (GL261-luc). We also created the brighter GL261-luc2 cell line by stable transfection of the luc2 gene expressed from the CMV promoter. C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr mice (albino variant of C57BL/6) from the National Cancer Institute, Frederick, MD were used to eliminate the light attenuation caused by black skin and fur. With the use of albino C57BL/6 mice; in vivo imaging using the IVIS Spectrum in vivo imaging system is possible from the day of implantation (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA). The GL261-luc and GL261-luc2 cell lines showed the same in vivo behavior as the parental GL261 cells. Some of the shared histological features present in human GBMs and this mouse model include: tumor necrosis, pseudopalisades, neovascularization, invasion, hypercellularity, and inflammation 1.
Prior to implantation animals were anesthetized by an intraperitoneal injection of ketamine (50 mg/kg), xylazine (5 mg/kg) and buprenorphine (0.05 mg/kg), placed in a stereotactic apparatus and an incision was made with a scalpel over the cranial midline. A burrhole was made 0.1mm posterior to the bregma and 2.3mm to the right of the midline. A needle was inserted to a depth of 3mm and withdrawn 0.4mm to a depth of 2.6mm. Two &mu;l of GL261-luc or GL261-luc2 cells (107 cells/ml) were infused over the course of 3 minutes. The burrhole was closed with bonewax and the incision was sutured.
Following stereotactic implantation the bioluminescent cells are detectable from the day of implantation and the tumor can be analyzed using the 3D image reconstruction feature of the IVIS Spectrum instrument. Animals receive a subcutaneous injection of 150&mu;g luciferin /kg body weight 20 min prior to imaging. Tumor burden is quantified using mean tumor bioluminescence over time. Tumor-bearing mice were observed daily to assess morbidity and were euthanized when one or more of the following symptoms are present: lethargy, failure to ambulate, hunched posture, failure to groom, anorexia resulting in &gt;10% loss of weight. Tumors were evident in all of the animals on necropsy.

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

Intracranial implantation of GL261 cells into C57BL/6 mice produces malignant gliomas that recapitulate many of the hallmarks of human glioblastoma multiforme. We used GL261 cells stably expressing luciferase to allow us to use in vivo imaging to follow tumor progression. The surgery and 3D in vivo imaging are demonstrated.

이후 3D로 Intracranial 주입 VIVO에서</emMurine Gliomas의> 발광 생물 이미징

The mouse glioma 261 (GL261) is recognized as an in vivo model system that recapitulates many of the features of human glioblastoma multiforme (GBM). The ...

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality treatment consisting of surgical resection, post-operative radiation therapy and temozolomide chemotherapy 1. New therapeutic approaches are clearly needed to improve patient survival and quality of life. The development of more effective treatment strategies would be aided by animal models of GBM that recapitulate human disease yet allow serial imaging to monitor tumor growth and treatment response. In this paper, we describe our technique for the precise stereotactic implantation of bio-imageable GBM cancer cells into the brains of nude mice resulting in tumor xenografts that recapitulate key clinical features of GBM 2. This method yields tumors that are reproducible and are located in precise anatomic locations while allowing in vivo bioluminescent imaging to serially monitor intracranial xenograft growth and response to treatments 3-5. This method is also well-tolerated by the animals with low perioperative morbidity and mortality.

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

We describe an integrated method for the precise, stereotactic implantation of human glioblastoma multiforme cells into the brains of nude mice and subsequent serial in vivo imaging to monitor growth and response to treatment of the resultant xenografts.

Stereotactic Intracranial 주입 및<em&gt; 생체에</emGlioblastoma의 Multiforme의 마우스 모델 시스템에서 종양 Xenografts의&gt; 발광 생물 이미징

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality ...

Bioluminescent Bacterial Imaging In Vivo

This video describes the use of whole body bioluminesce imaging (BLI) for the study of bacterial trafficking in live mice, with an emphasis on the use of bacteria in gene and cell therapy for cancer. Bacteria present an attractive class of vector for cancer therapy, possessing a natural ability to grow preferentially within tumors following systemic administration. Bacteria engineered to express the lux gene cassette permit BLI detection of the bacteria and concurrently tumor sites. The location and levels of bacteria within tumors over time can be readily examined, visualized in two or three dimensions. The method is applicable to a wide range of bacterial species and tumor xenograft types. This article describes the protocol for analysis of bioluminescent bacteria within subcutaneous tumor bearing mice. Visualization of commensal bacteria in the Gastrointestinal tract (GIT) by BLI is also described. This powerful, and cheap, real-time imaging strategy represents an ideal method for the study of bacteria in vivo in the context of cancer research, in particular gene therapy, and infectious disease. This video outlines the procedure for studying lux-tagged E. coli in live mice, demonstrating the spatial and temporal readout achievable utilizing BLI with the IVIS system.

Bioluminescent Bacterial Imaging In Vivo

This article describes the administration of lux-tagged bacteria to mice and subsequent in vivo analysis using IVIS bioluminescence imaging.

발광 생물 세균 이미징<em&gt; 생체 내</em

This video describes the use of whole body bioluminesce imaging (BLI) for the study of bacterial trafficking in live mice, with an emphasis on the use of ...

면역학 및 감염병학

마우스에서 2P-IVM을 사용한 뇌종양의 나노 입자 실시간 추적

Two-Photon Intravital Microscopy of Glioblastoma in a Murine Model

The delivery of intravenously administered cancer therapeutics to brain tumors is limited by the blood-brain barrier. A method to directly image the accumulation and distribution of macromolecules in brain tumors in vivo would greatly enhance our ability to understand and optimize drug delivery in preclinical models. This protocol describes a method for real-time in vivo tracking of intravenously administered fluorescent-labeled nanoparticles with two-photon intravital microscopy (2P-IVM) in a mouse model of glioblastoma (GBM).
The protocol contains a multi-step description of the procedure, including anesthesia and analgesia of experimental animals, creating a cranial window, GBM cell implantation, placing a head bar, conducting 2P-IVM studies, and post-surgical care for long-term follow-up studies. We show representative 2P-IVM imaging sessions and image analysis, examine the advantages and disadvantages of this technology, and discuss potential applications.
This method can be easily modified and adapted for different research questions in the field of in vivo preclinical brain imaging.

저자 스포트라이트: 교모세포종 치료에서 약물 전달 및 조기 발견 최적화를 위한 멀티모달 이미징 전략

We present a novel approach for two-photon microscopy of the tumor delivery of fluorescent-labeled iron oxide nanoparticles to glioblastoma in a mouse model.

쥐 모델에서 교모세포종의 Two-Photon Intravital Microscopy

The delivery of intravenously administered cancer therapeutics to brain tumors is limited by the blood-brain barrier. A method to directly image the ...

<meta charset="utf8"></head><body>쥐 교모세포종에서 영상 유도 치료 전달을 위한 산화철 나노입자

Nanoparticle Delivery of an Oligonucleotide Payload in a Glioblastoma Multiforme Animal Model

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most common and aggressive form of primary brain malignancy for which there is no cure. The blood-brain barrier is a significant hurdle in the delivery of therapies to GBM. Reported here is an image-guided, iron oxide-based therapeutic delivery nano platform capable of bypassing this physiological barrier by virtue of size and accumulating in the tumor region, delivering its payload. This 25 nm nano platform consists of crosslinked dextran-coated iron oxide nanoparticles labeled with Cy5.5 fluorescent dye and containing antisense oligonucleotide as a payload. The magnetic iron oxide core enables tracking of the nanoparticles through in vivo magnetic resonance imaging, while Cy5.5 dye allows tracking by optical imaging. This report details the monitoring of the accumulation of this nanoparticle platform (termed MN-anti-miR10b) in orthotopically implanted glioblastoma tumors following intravenous injection. In addition, it provides insight into the in vivo delivery of RNA oligonucleotides, a problem that has hampered the translation of RNA therapeutics into the clinic.

<meta charset="utf8"></head><body>저자 스포트라이트: 교모세포종 치료를 위한 산화철 나노입자를 사용한 혁신적인 암 치료법

The blood-brain barrier is a significant hurdle in the delivery of therapies for glioblastoma, a disease for which there is no cure. Here, we report an in vivo image-guided iron oxide therapeutic nano platform that can bypass this physiological barrier by virtue of size and accumulate in the tumor.

Glioblastoma multiforme animal model에서 oligonucleotide payload의 나노입자 전달

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most common and aggressive form of primary brain malignancy for which there is no cure. The blood-brain barrier is a ...

교 모세포종에 대한 면역 적격 동물 모델의 생물 발광 영상

요약

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Bioluminescence 이미징을 사용하여 종양 성장과 치료에 반응 이후 분석 Intracranial 뇌종양의 Xenografts 구축

유방암 뇌 전이의 종양 Hypoxia 역학 생체내의 Bioluminescence 이미징에서는 마우스 모델에서

Vivo에서 이미징 세포종 Xenografts의 형광 분자 단층 촬영

이후 3D로 Intracranial 주입 VIVO에서 발광 생물 이미징

Stereotactic Intracranial 주입 및

발광 생물 세균 이미징

쥐 모델에서 교모세포종의 Two-Photon Intravital Microscopy

쥐 모델에서 교모세포종의 Two-Photon Intravital Microscopy

쥐 모델에서 교모세포종의 Two-Photon Intravital Microscopy

Glioblastoma multiforme animal model에서 oligonucleotide payload의 나노입자 전달