이 연구는 중서부 대학 건강 과학 연구 촉진 기금, EEH 수여, Midwestern University Office of Research 및 후원 프로그램 교내 기금, KJL에게 수여되었습니다. Affiliated Laboratories 및 Affiliated Dermatology에서 추가 지원을 제공했습니다. 기술 지원을 위해 Sarah Potekhen, Jamie Barto, Stefani Fawks, Cody Jording, Stacie Schimke, Heather Kissel 및 Ali Zaidi에게 감사드립니다.

인간 조직 샘플에 대한 모든 실험은 Western IRB (WIRB Protocol # 20142461)에 의해 승인되었습니다. 이 절차에 대한 조직 수집에 대한 단일 기준은 생검에서 입증 된 SCC 진단입니다. 원래의 IRB 프로토콜에는 제외 기준이 제시되어 있지 않았지만, 혈액으로 전염 된 질병이 알려진 환자의 샘플은 사용되지 않았습니다. 피부 조직, 혈액 및 타액을 수집하기 전에 사전 동의를 얻었습니다. 중서부 기관 검토위원회 (Midwestern Institutional Review Board)는 Midwestern University (AZ # 807)에서 진료소 기반의 생물 저장소 샘플을 사용한 검증 작업을 승인했습니다. 1. 피부 종양 조직 처리 참고 : 이것은 Mohs histotechnologist가 수행해야합니다. <ol><li> RNA 및 외과 적 배양을위한 새로운 편평 세포 암종 (SCC) 조직의 가공 <ol><li> 조직이 모스 외과 의사에 의해 절제 된 후, 10 ~ 50 mg (≥ 10 mm 3 </sup&gt;) 조직 샘플을 추가 처리하기 전에 이완하는 동안 조직의 꼭대기 쪽 중심에서 제거합니다 (이는 슬라이드에서 평평하게 놓일 수 있도록 조직을 조작하는 과정입니다). 참고 : 이것은 종양이 Mohs 절차의 일부인 조직 학적 평가 이전에 10-50 mg 크기의 샘플 (≥10 mm2)을 제거 할 수있을만큼 충분히 큰 경우에만 가능합니다. 종양의 크기가 최소 2mm 3 이 될만큼 크지 않은 경우 RNA 처리를 계속하지 마십시오 (5 단계 생략). </li><li> 핀셋을 사용하여 문화 매체 (DMEM의 1 : 1 혼합물 : 햄의 F - 12, 25 MM HEPES, 100 IU / ML 페니실린, 그리고 100 μg / ML streptomycin)가 포함 된 표시된 1.5 ML 튜브로 실행 가능한 조직을 전송하고 조직은 매체에 완전히 잠겨 있습니다. 추가 처리 전에이 튜브를 4 ° C에 보관하십시오. </li><li> RNA 분리 및 발현 분석을 위해 조직을 사용하십시오 (5 단계 참조) 및 / 또는24 시간 이내에 체외 이식편 배양 (단계 6 참조). </li><li> 환자 (1.1.1 단계)에서 제거한 종양 샘플의 나머지 부분을 저온 유지 장치 홀더 (또는 &quot;척&quot;) 위에 놓습니다. 모스 조직학의 완성과 실험 분석을위한 추가 histological 슬라이드의 준비를 허용하기 위해 최적 절단 온도 (OCT) 화합물에 조직을 포함, 홀더 내의 조직을 동결. </li></ol></li><li> 조직 슬라이드의 준비 <ol><li> 저온 유지 장치를 사용하여 7 μm 두께의 조직 섹션을 잘라내 각 종양 샘플에 대해 두 개 (또는 그 이상)의 슬라이드를 만듭니다. 각 슬라이드에는 전체 종양의 섹션이 최대 3 개까지 포함되도록하십시오. 참고 : 두 개의 슬라이드 중 하나는 Mohs histotechnologist가 H &amp; E로 염색하고 추가 슬라이드는 IF, IHC 또는 FISH 분석으로 처리 할 수 ​​있습니다. </li><li> 조직을 고정하기 위해 아세톤에 슬라이드를 1-2 초 동안 놓습니다. 이 슬라이드를 건조 상태로 두십시오. H &amp; E하지 마라.실험 프로토콜에 따라 미래 immunofluorescence (IF), immunohistochemistry (IHC), 또는 형광 in situ 하이브리드 화 (FISH) 분석에 사용되는 슬라이드를 얼룩이나 coverslip. </li></ol></li><li> 모종 조직 처리 <ol><li> 일단 모스 처리가 완료되면 (단계 1.1-1.2), 저온 유지 장치 챔버에서 작업하고 냉동 저울 매질에서 샘플을 꺼내어 조직을 표시된 극저온 튜브에 넣습니다. </li><li> 조직이 해동되기 전에 표시된 바이알을 액체 질소에 넣으십시오. 시료를 단백질 및 / 또는 DNA 분석에 사용하려면 액체 질소 또는 -80 ° C의 냉동고로 몇 분 안에 옮겨 미래의 단백질 발현 및 DNA 돌연변이 분석을 위해 보관할 수 있습니다 (4-5 단계 참조) . NOTE : post-Mohs sample에서 온전한 RNA가 필요하다면, cryo-embedding 매질에서 제거하는 동안 샘플을 얼게 유지하는 것이 중요합니다. 극도의주의를 기울이지 않은 경우이 단계에서 모스 샘플은 단백질 및 / 또는 DNA 분석을 위해 예약해야합니다. </li></ol></li><li> 새로운 ANT 처리 <ol><li> 모스 종결 시점에 모스 외과 의사로부터 ANT를 구하십시오. </li><li> 정상 조직의 꼭대기 쪽에서 SCC 샘플 (위 참조)에서 수확 한 것과 동일하거나 더 많은 양의 ANT를 제거하고 배양 배지가 들어있는 라벨이있는 1.5 mL 튜브 (DMEM : Ham &#39;s F- 12에 25 mM HEPES, 100 IU / mL 페니실린 및 100 μg / mL 스트렙토 마이신을 보충 한 것)을 사용 하였다. </li><li> 동일한 배양 배지에 조직을 완전히 담그고 4 ℃에서 보관합니다 (후속 처리 (4-6 단계 참조)까지). </li></ol></li></ol> 2. 혈액, 타액 및 구강 내 면봉 처리 <ol><li> venipuncture를 통해 EDTA 수집 튜브에서 약 10mL의 혈액을 얻습니다. </li><li> 수집 튜브에서 멸균 된 15 또는 50 mL 원심 분리 튜브로 혈액을 옮긴다.. 거품을 피하면서 1.5 mL 극저온 튜브에 약 200 μL를 제거합니다. 필요한 경우이 전체 혈액 샘플을 -80 ° C에 보관하여 향후 genotyping 및 tissue matching에 사용하십시오. <ol><li> 나머지 혈액을 1000 xg에서 30 분간 회전시키고 표준 절차에 따라 혈장 분획을 수집합니다. </li><li> 분주하여 1.5mL 극저온 튜브에서 1mL 씩 증분하고 -80 ° C에서 보관하여 향후 액체 생검 분석에 사용하십시오. </li></ol></li><li> 멸균 된 면봉을 사용하여 협측 면봉 샘플을 얻고 상온에서 멸균 된 튜브에 면봉을 보관하십시오. </li><li> 필요한 경우 타액 샘플을 얻고 실온에서 멸균 튜브에 저장하십시오. NOTE :이 샘플은 필요할 경우, 향후 genotyping과 tissue matching을 위해 사용될 수있다. </li></ol> 3. 샘플의 기록 관리 <ol><li> 환자 표본 체크리스트의 정보를 바이오 저장소 데이터베이스로 전송합니다. 환자 정보 및 진단 포함환자 차트에서 코. </li><li> 각 샘플에 대한 바코드 라벨을 인쇄하고 데이터베이스에 각각 기록하여 수집 된 각 샘플을 환자 데이터와 연결합니다. </li><li> 샘플을 연구실로 옮기기 전에 바이오 리포 지 토리 데이터베이스에 비확인 된 샘플의 분포를 기록하십시오. </li></ol> 4. 단백질 분리 및 Western Blot 분석 <ol><li> 각 조직 샘플 (SCC 및 / 또는 ANT)을 조직 100mg 당 프로 테아 제 억제제가 들어있는 세포 용해 완충액 500 μL가 들어있는 유리 병에 넣고 조직을 녹입니다. 참고 : 우리는 50mM Tris pH 8.0, 150mM NaCl, 0.5 % 나트륨 deoxycholate, 1.0 % NP - 40 및 0.1 % SDS로 구성된 radioimmunoprecipitation 분석 (RIPA) 버퍼를 사용했습니다. 다른 세포 용해 완충액을 사용할 수 있습니다. </li><li> 4 ° C에서 20 초 간격으로 5 분 동안 조직 균질기를 사용하여 조직을 균질화하십시오. 21,000 xg와 4 ° C에서 20 분 동안 시료를 회전시키고 단백질을 함유하는 상청액을 신선한 tu있다. 동일한 조건을 사용하여 상등액을 다시 스핀하고 최종 상등액을 신선한 튜브에 수집합니다. </li><li> 4 ~ 20 % SDS-polyacrylamide gradient gel을 사용하여 각 시료에서 30-50 μg의 단백질을 전기 영동합니다. 원하는 경우 Coomassie Blue로 젤을 염색하여 단백질 밴드를 시각화하십시오. </li><li> 발현 된 단백질의 웨스턴 블럿 분석이 필요한 경우 표준 프로토콜에 따라 젤의 단백질을 polyvinylidene difluoride (PVDF) 막으로 옮깁니다. 전달 후 Ponceau는 원하는 경우 단백질 밴드를 시각화하기 위해 PVDF 막을 얼룩지게합니다. </li><li> 표준 프로토콜에 따라 관심 단백질을 검출하기 위해 PVDF 멤브레인과 프로브를 차단하십시오. 서양 얼룩 분석을 위해 제조업체에서 권장하는 농도로 1 차 항체에 해당하는 2 차 항체와 함께 해당 단백질에 특이적인 1 차 항체를 사용하십시오. </li><li> chemiluminescent 기판을 사용하여 탐침 막을 노출하고 imagi를 사용하여 막 이미지시스템. </li></ol> RNA 분리 및 정량적 중합 효소 연쇄 반응 (qPCR) <ol><li> 즉시 RNA 안정화 용액이 들어있는 1.5 mL 튜브에 신선한 조직 샘플 (SCC 및 / 또는 ANT)을 놓고 고정 된 조직 전이 용액이 들어있는 1.5 mL 튜브에 Mohs 조직 샘플을 넣으십시오. 조직이 완전히 잠겨 있는지 확인하십시오. 이 샘플을 사용할 때까지 -80 ° C에서 보관하십시오. </li><li> -80 ° C에서 RNA 샘플을 제거하고 얼음 위에서 녹입니다. 조직 50-100 MG 당 1 ML의 RNA 추출 버퍼 (페놀 / 구아니딘 thiocyanate)를 포함하는 새로운 1.5 ML 튜브에 조직을 전송하십시오. </li><li> 조직 호 모지 나이저를 사용하여 조직을 용해시킵니다. 6 회의 균질화를 수행 한 다음 샘플 냉각 기간을 수행합니다. 각 사이클은 4 ℃에서 40 초의 균질화와 20 초의 균질화로 구성됩니다. 균질화 후, 실온에서 5 분 동안 샘플을 배양한다. </li><li> 0.2 추가1 mL의 RNA 추출 완충액 당 1 mL의 클로로포름을 넣고 15 초 동안 손으로 튜브를 격렬히 흔드십시오. 실온에서 2-3 분 동안 품어 낸다. </li><li> 12,000 xg와 4 ° C에서 15 분 동안 시료를 회전시킵니다. 샘플의 수성 상을 제거하고 새로운 1.5 mL 튜브에 넣으십시오. </li><li> 수성 상에 단계 5.2에서 사용 된 RNA 추출 완충액 1 mL 당 100 mL의 이소프로판올 0.5 mL를 첨가하고 실온에서 10 분 동안 항온 처리한다. 참고 : RNA 수율이 낮을 것으로 예상되는 경우 ( 즉, 시작 조직 부피가 10mg 미만인 경우), 샘플은 밤새 -80 ° C에서 침전 될 수 있습니다. 또한 RNA 추출액 500 μL 당 RNase가없는 글리코겐 5 μg을 이소프로판올 침전 단계에서 첨가하여 RNA 수율을 향상시킬 수 있습니다. </li><li> 4 ℃에서 12,000 xg에서 10 분간 시료를 회전시킨다. 뜨는을 제거하고 75 % 에탄올 1 ML로 펠렛을 씻으십시오. </li><li> 샘플을 간단하게 볼텍스 한 다음 7,500 x 4 및 4 °로 회전시킵니다.5 분간 C로 처리 하였다. 세척을 버리고 5 ~ 10 분 동안 펠렛을 공기 건조시킵니다. </li><li> RNase가없는 물 20 μL에 RNA 펠렛을 Resuspend. <ol><li> 원한다면 RNA 제조사의 권고에 따라 RNA 클린업 키트를 사용하여 각 RNA 샘플을 정제하십시오. 참고 :이 단계를 수행하면 작은 RNA가 샘플에서 손실됩니다. </li></ol></li><li> RNA의 품질을 분석하기 위해 1.2 % 포름 알데히드 -MOPS 아가 로스 젤을 사용하여 1 μg 샘플을 전기 영동하십시오. 참고 : 대안으로, 바이오 분석기를 사용하여 샘플을 분석하여 RIN 번호 13 을 얻습니다. </li><li> 대상 mRNA (또는 miRNA)의 qPCR 분석을 위해 역전사 프로토콜을 사용하여 RNA를 cDNA에 역전사하십시오. </li></ol> 6. 조직 미생물 배양 <ol><li> 조직을 70 % 에탄올로 침지하여 배양하기 전에 절제 된 조직을 소독하십시오. </li><li> 슬라이드 또는 접시에 조직을 놓고 충분한 배양 배지 (DMEM : Ham &amp; # 1 : 1 혼합물)조직을 건조시키기 위해 10 % FBS, 25 mM HEPES, 100 IU / mL 페니실린 및 100 μg / mL 스트렙토 마이신을 보충 한 F-12; 메스 블레이드를 사용하여 조심스럽게 조직을 파편 (&lt;1 mm 3 )으로 자릅니다. </li><li> 35 mm 조직 배양 접시에 조직 조각을 전송하고 각 조각 상단에 태아 소 혈청 (FBS)의 약 20 μL를 추가합니다. </li><li> 접시를 20 ~ 30 분 동안 또는 거의 건조 될 때까지 문화 후드에서 열어 두십시오. </li><li> 각 접시에 문화 매체 (10 % FBS, 25 MM HEPES, 100 IU / ML 보충의 DMEM : 햄의 F - 12 1 : 1 혼합물, 페니실린 100 μg / ML streptomycin)를 추가하고 37 ° 부화 5 % CO2에서 C. 필요에 따라 하위 문화를 배양하거나 배양 물을 복제하십시오. </li></ol>

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저자의 지식에 따르면이 프로토콜은 비용 효율적이고 빠른 접근 방식으로 피부 조직 샘플을 임상 적으로 조달하는 데 주력하는 최초의 제품입니다. Mohs 미세 수술을받는 환자는 일반적으로 특정 시간대에 예정되며 수집은이 기간으로 제한됩니다. 샘플 채취에는 환자 관리에 종사하는 의료 보조원, 종양 샘플을 처리하는 모스 (Mohs) histotechnologist 및 샘플 진입 및 혈액 처리를 담당하는 지정 실험실...

암 및 바이오 마커 연구는 우수한 인체 조직 샘플의 공급에 의존하며, 제한된 공급으로 인해 연구 1,2 가 방해 받고 있습니다. 많은 피부 과학 연구는 인간 조직의 사용과 관련된 부적절한 공급, 다양한 품질 및 비용으로 인해 제한됩니다. 대형 전용 바이오 뱅크를 설립하는 데 드는 비용은 약 2 백만 달러로 추정되며, 이러한 비용은 인체 조직을 많은 연구자들이 사용할 수 없게 만듭니다. 또한 연구 샘플을 생성하고 저장하는 과정은 신중하게 실행하지 않으면 임상 조작에 영향을 미치고 환자 치료를 지연시킬 위험이 있습니다. 비용 효과적인 클리닉 기반의 바이오 저장소는 권장되는 모범 사례와 샘플 검증 4 , 5 , 6 에 따라 피부암 샘플에 초점을 맞추고 있습니다. <p이 프로토콜은 편평 세포 암종 (SCC), 기저 세포 암종 (BCC) 및 흑색 종 피부암을 제거하기 위해 대량의 모스 현미경 수술을 수행하는 피부과 전문의에서 개발되었습니다. 자원 봉사자 기증자는이 환자 집단에서 모집 할 수 있습니다. 치료를 지연시키지 않고 동의 한 환자의 조직과 혈액을 신속하게 포획하기 위해서는 수집 장소에 바이오 저장소를 설치하는 것이 중요합니다. 같은 클리닉에서 샘플을 수집하면 수집 기술의 변화를 최소화하고 샘플의 품질 변화를 최소화 할 수 있습니다. 이는 다운 스트림 어플리케이션 7 , 8 에서 문제가 될 수 있습니다. Mohs 현미경 수술 기술의 목표는 최대한 많은 건강한 조직을 보존하면서 모든 암 조직을 제거하는 것입니다. 이 절차는 종양 조직의 얇은 층을 점진적으로 제거하는 것을 포함합니다. 연속되는 각 레이어는 그의(모든 종양 조직이 제거되었는지 여부를 결정하기 위해 피부과 의사가 종양 조직을 냉동시키고 H &amp; E 염색을 시행 한 후) 논리적으로 검사했다. 환자가 사무실에있는 동안 조직의 후속 층의 절제 및 검사가 실행됩니다. 이 기술은 SCC 9 에 대한 최상의 치료 옵션으로 간주됩니다. 이 시점에서 상처는 닫히고, 치유 및 미용 외관을 향상시키기 위해 인접한 정상 조직 (ANT)을 자주 절제합니다. 따라서 종양 제거 수술은 향후 연구를 위해 조직 학적으로 특성화 된 조직을 수집하는 데 이상적입니다. 종양 조직, 인접한 정상 조직, 타액 및 혈액 샘플을 얻기위한 조달 절차는 정상적인 직원 업무에 미치는 영향을 최소화하도록 설계되었습니다 ( 그림 1 ). 의료 보조원은 절차를 위해 환자를 준비하는 동안 혈액을 채취합니다. 모스 절차 완료 후, M<html> ohs histotechnologist는 표본의 추가 조직 슬라이드를 준비하고 조직을 biorepository에 전송합니다. 바이오 리포지토리 구축과 관련된 비용으로는 냉동 보관 냉동고 구입, 겸손한 임상 실험실 공간 창출 및 재고 추적 프로그램 개발 등이 있습니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/55583/55583fig1.jpg" /> 그림 1 : 샘플 수집 및 담당 직원의 순서. 환자가 체크인하고 환자의 동의를 얻으면 의료 보조원은 협측 면봉을 수집하여 혈액을 채취합니다. 피부과 의사와 의료 보조원은 종양을 절제하고 상처를 닫습니다. SCC와 ANT 표본은 각각 수집됩니다. 헌혈 기술자가 혈액을 처리하고 SCC 및 ANT 표본에 조직 배양, 보존 및 바이오 저장소로 들어가기위한 섹션을 분류합니다.ftp_upload / 55583 / 55583fig1large.jpg &quot;target =&quot;_ blank &quot;&gt;이 그림의 확대 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. 수집 된 샘플의 다양성은 다양한 실험 접근법을 가능하게합니다 ( 그림 2 ). 환자에게서 채취 한 샘플은 협측 면봉 (필요한 경우 타액을 수집 할 수 있음), 전혈 및 절제 된 조직입니다. 구강 내 면봉과 전혈에서 채취 한 샘플은 유전자 타이핑과 조직 일치를 위해 가공없이 저장됩니다. 미래의 분석을 위해 전혈이 백혈구 (WBC)와 혈장 분획으로 분리됩니다. 모스 처리 후, 동결 된 종양을 액체 질소에 직접 놓고 -80 ° C의 냉동고로 옮깁니다. 신선하고 실행 가능한 종양 조직 및 ANT 샘플은 이전 기술 10 , 11의 변형을 사용하여 배양 한 다음 저온 보존합니다. 수집하는 동안 각 샘플 유형의 번호는 스프레드 시트에 기록되기 전에 기록됩니다<html> 재고 추적 프로그램은 정확한 처리를 용이하게합니다 ( 표 1 ). <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/55583/55583fig2.jpg" /> 도표 2 : 진료소 ​​근거한 biorepository 견본 수집과 가공의 개관. 환자에게서 협측 면봉과 혈액 샘플을 수집하여 다운 스트림 genotyping과 조직 매칭을 위해 보관합니다. 전혈은 백혈구 (WBC) 분리 및 CTC 분석뿐만 아니라 혈장 수집 및 액체 생검 분석을 위해 추가 처리됩니다. Mohs 절차 중에 절제 한 조직을 진단 목적으로 조직 학적으로 처리 한 후 조직학 슬라이드를 면역 조직 화학 분석을 위해 실험적으로 사용할 수 있습니다. 절제 된 조직 샘플이 충분히 큰 경우, 신선한 조직의 일부를 제거하고 단백질 및 RNA 분리 및 배양 된 세포주를 확립하기 위해 절단한다.55583 / 55583fig1large.jpg &quot;target =&quot;_ blank &quot;&gt;이 그림의 확대 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> 컬렉션 날짜 : </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> 환자 1 </td><td> 환자 2 </td><td> 환자 3 </td><td> 환자 4 </td><td> 환자 5 </td></tr><tr><td> 이니셜 및 생년월일 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 눈 색깔 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 샘플 유형 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 샘플 위치 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 타액 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 승구멍 혈액 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 혈장 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 유력한 종양 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 조직 생체 적합성 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 종양 모스 액체 질소 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 조직 일반 액체 질소 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 슬라이드 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> 표 1 : 샘플 수집을 기록하기위한 체크리스트. 수집 된 각 샘플과 함께 추적되고 기록 된 데이터에는 환자의 머리 글자, 생년월일, 눈색 (피부 유형의 경우), 로케티on 표본 제거. 타액 샘플 수, 혈액 수집 체적 및 수집 된 생존 및 보존 된 조직 검체 수 또한 추후 사용을위한 참고 자료로 기록됩니다. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55583/Table1.xlsx">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a> 샘플 수집 절차의 유효성을 확인하기 위해 각 샘플 유형은 다운 스트림 어플리케이션에서 테스트되었습니다. 이전 기술 12의 수정을 사용하여, 종양 및 ANT는 단백질 및 RNA 분리에 성공적으로 사용되었으며 잠재적으로 DNA 분리에 사용될 수 있습니다. 조직 절편으로부터 확립 된 생체 외편은 현미경으로 평가되었으며, 보존 된 조직 슬라이드는 면역 조직 화학과 면역 형광 검사에 사용되었다. 여기에 설명 된 프로토콜을 따르면이 모델을 다른 피부과 진료소, 다른 종양 유형 (예 : 흑색 종)으로 확장 할 수 있습니다., 그리고 인간 암에 대한 다방면 연구를위한 인간 조직 샘플을 제공하는 기타 외과 전문 분야 및 관행. 이 프로토콜의 약간의 수정은 다른 관행에 필수적 일 수 있지만 원칙적으로이 프로토콜은 환자 치료 과정에서 수집 된 환자 샘플을 정기적으로 폐기하는 모든 수술에 적용 할 수 있습니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BD Vacutainer Plastic Blood Collection Tubes with K3EDTA</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>02-685-2B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electron Microscopy Sciences Double Edge Blades</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>50-949-411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved Medium Point General Purpose Forceps</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>16-100-110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Premium Microcentrifuge Tubes</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>05-408-138</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lonza Walkersville KGM Keratinocyte Medium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>NC9791321</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electron Microscopy Sciences Tissue TEK OCT Compound</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>50-363-579</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica CM1950 Cryostat</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>14047743909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frosted Microscope Slides</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>12-550-343</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon Rapid-Chrome H&#38;E Frozen Section Staining Kit</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>99-900-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene Long-Term Storage Cryogenic Tubes</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>03-337-7X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 15 mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14-959-53A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Boca Scientific BuccalT-Swab&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>NC9679349</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Signaling Technology 10x RIPA Buffer</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>50-195-822</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halt Protease and Phosphatase Inhibitor Cocktail</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>PI78443</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf 5424R Microcentrifuge</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>05-401-203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pellet Morter Cordless Homogenizer</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>12-141-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAse Free Pellet Pestle</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>121-141-364</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forma SteriCycle CO2 Incubator</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>13-998-089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HyClone Fetal Bovine Serum</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>SH30071.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco Advanced DMEM/F-12</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>12-634-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15140148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco 1M Hepes</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15-630-130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc Cell Culture 35 mm with Vent</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>1256591</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CFH monoclonal antibody clone OX-24</td>
			<td>Abnova</td>
			<td>MAB12583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-p40 (p63 delta) antibody</td>
			<td>Abnova</td>
			<td>ABX-144A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti MUC-1 antibody</td>
			<td>Santa Cruz Biotech</td>
			<td>sc-7313</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Snail + Slug (phospho S246)</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>Ab63568</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit IgG, Alexa Fluor 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 568 Phallodin</td>
			<td>Molecular Probes&#160;</td>
			<td>A12380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold Antifade Mountant with DAPI</td>
			<td>Molecular Probes&#160;</td>
			<td>P36941</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss Axio Imager Z1 Microscope with Axiocam camera</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>4300009901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus IX51 phase contrast with DP72 camera</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX511F3</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of a clinic-based biorepository

지난 몇 년 동안 피부암 ( 예, 편평 세포 암종, 기저 세포 암종 및 흑색 종)이 증가 해 왔습니다. 생물 의학 연구를위한 피부 종양 샘플에 대한 병행 요구가있을 것으로 예상됩니다. 그러나 조직 가용성은 생물 저장소를 확립하는 비용과 임상 조작을 방해하지 않는 임상 샘플을 입수 할 수있는 프로토콜이 없기 때문에 제한적입니다. 모스 수술 날짜에 일상적인 임상 절차에 최소한의 영향을 미치는 피부 종양 및 관련 혈액 및 타액 샘플을 수집하고 처리하기위한 프로토콜이 수립되었습니다. Mohs histotechnologist가 생검에서 입증 된 피부 악성 종양에 대한 첫 번째 모스 수술을받는 환자로부터 종양 샘플을 수집하고 가공합니다. 인접한 정상 조직은 수술 종결시 수집됩니다. 수집 할 수있는 추가 샘플은 전혈 및 협측 스왑입니다.. 정상적으로 폐기 된 조직 표본을 활용함으로써 병원에서 실험실 환경을 기반으로 여러 가지 주요 이점을 제공하는 생물 저장소가 생성되었습니다. 여기에는 광범위한 수집 된 샘플이 포함됩니다. 병리학 보고서를 포함하여 확인되지 않은 환자 기록에 대한 접근; 전형적인 기증자의 경우 추적 방문 중에 추가 샘플을 이용할 수 있습니다.

종양 및 ANT는 단백질 분리에 성공적으로 사용되고 웨스턴 블 랏팅으로 시험되었습니다. 그림 3 에서 볼 수 있듯이, 클리닉 기반 바이오 저장소에 수집 및 저장 한 환자 표본에서 피부 편평 세포 암종 마커 (Muc1 14 , FHL-1 15 및 p40 16 , 17 )를 검출 할 수 있습니다. <p class="jove_content" f...

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Establishment of a Clinic-based Biorepository

피부 종양은 모스 (Mohs) 현미경 수술 후 폐기됩니다. 임상 지원 직원이 임상 작업을 방해하지 않고 하류 실험실 응용을위한 피부 종양 ( 예 : 편평 세포 암종, 기저 세포 암종 및 흑색 종) 샘플을 효과적으로 처리하고 저장할 수있는 프로토콜이 여기에 설명되어 있습니다.

클리닉 기반 생물 저장소의 설립

The incidence of skin cancer (e.g., squamous cell carcinoma, basal cell carcinoma, and melanoma) has been increasing over the past several years. It is ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

6.4K 조회수.  Midwestern University.  피부 종양은 모스 (Mohs) 현미경 수술 후 폐기됩니다. 임상 지원 직원이 임상 작업을 방해하지 않고 하류 실험실 응용을위한 피부 종양 ( 예 : 편평 세포 암종, 기저 세포 암종 및 흑색 종) 샘플을 효과적으로 처리하고 저장할 수있는 프로토콜이 여기에 설명되어 있습니다. 

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Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited time. These cultured tumorspheres may exhibit markedly different cellular phenotypes when compared to the original tumors. Demonstration that cultured cells have the capability of forming new tumors is important to ensure that cultured cells model the biology of the original tumor. 
Here we present a protocol for propagating human retinoblastoma tumors in vivo using Rag2-/- immune deficient mice. Cultured human retinoblastoma tumorspheres of low passage or cells obtained from freshly harvested human retinoblastoma tumors injected directly into the vitreous cavity of murine eyes form tumors within 2-4 weeks. These tumors can be harvested and either further passaged into murine eyes in vivo or grown as tumorspheres in vitro. Propagation has been successfully carried out for at least three passages thus establishing a continuing source of human retinoblastoma tissue for further experimentation. 
Wesley S. Bond and Lalita Wadhwa are co-first authors.

A method is described to propagate human retinoblastoma tumors in mice. Tumor cells are directly injected into the eyes of immune deficient mice. Secondary tumors have been successfully established using both cells directly harvested from human tumors and cultured tumorspheres.

면역 결함 마우스의 확립과 인간 Retinoblastoma 종양의 전파

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

연구

의학

Minimally Invasive Establishment of Murine Orthotopic Bladder Xenografts

Orthotopic bladder cancer xenografts are the gold standard to study molecular cellular manipulations and new therapeutic agents&#160;in vivo. Suitable cell lines are inoculated either by intravesical instillation (model of nonmuscle invasive growth) or intramural injection into the bladder wall (model of invasive growth). Both procedures are complex and highly time-consuming. Additionally, the superficial model has its shortcomings due to the lack of cell lines that are tumorigenic following instillation. Intramural injection, on the other hand, is marred by the invasiveness of the procedure and the associated morbidity for the host mouse.
With these shortcomings in mind, we modified previous methods to develop a minimally invasive approach for creating orthotopic bladder cancer xenografts. Using ultrasound guidance we have successfully performed percutaneous inoculation of the bladder cancer cell lines UM-UC1, UM-UC3 and UM-UC13 into 50 athymic nude. We have been able to demonstrate that this approach is time efficient, precise and safe. With this technique, initially a space is created under the bladder mucosa with PBS, and tumor cells are then injected into this space in a second step. Tumor growth is monitored at regular intervals with bioluminescence imaging and ultrasound. The average tumor volumes increased steadily in in all but one of our 50 mice over the study period.
In our institution, this novel approach, which allows bladder cancer xenograft inoculation in a minimally-invasive, rapid and highly precise way, has replaced the traditional model.

The established technique to inoculate primary invasive orthotopic bladder cancer xenografts requires laparotomy and mobilization of the bladder. This procedure inflicts significant morbidity on the mice, is technically challenging and time-consuming. We therefore developed a high-precision, percutaneous approach utilizing ultrasound guidance.

쥐과 동 소성 방광 이종 이식의 최소 침습 설립

Orthotopic bladder cancer xenografts are the gold standard to study molecular cellular manipulations and new therapeutic agents&#160;in vivo. Suitable ...

Establishment of Human Epithelial Enteroids and Colonoids from Whole Tissue and Biopsy

The epithelium of the gastrointestinal tract is constantly renewed as it turns over. This process is triggered by the proliferation of intestinal stem cells (ISCs) and progeny that progressively migrate and differentiate toward the tip of the villi. These processes, essential for gastrointestinal homeostasis, have been extensively studied using multiple approaches. Ex vivo technologies, especially primary cell cultures have proven to be promising for understanding intestinal epithelial functions. A long-term primary culture system for mouse intestinal crypts has been established to generate 3-dimensional epithelial organoids. These epithelial structures contain crypt- and villus-like domains reminiscent of normal gut epithelium. Commonly, termed &#8220;enteroids&#8221; when derived from small intestine and &#8220;colonoids&#8221; when derived from colon, they are different from organoids that also contain mesenchyme tissue. Additionally, these enteroids/colonoids continuously produce all cell types found normally within the intestinal epithelium. This in vitro organ-like culture system is rapidly becoming the new gold standard for investigation of intestinal stem cell biology and epithelial cell physiology. This technology has been recently transferred to the study of human gut. The establishment of human derived epithelial enteroids and colonoids from small intestine and colon has been possible through the utilization of specific culture media that allow their growth and maintenance over time. Here, we describe a method to establish a small intestinal and colon crypt-derived system from human whole tissue or biopsies. We emphasize the culture modalities that are essential for the successful growth and maintenance of human enteroids and colonoids.

We describe a method to establish human enteroids from small intestinal crypts and colonoids from colon crypts collected from both surgical tissue and biopsies. In this methodological article, we present the culture modalities that are essential for the successful growth and maintenance of human enteroids and colonoids.

전체 조직과 조직 검사에서 인간 상피 Enteroids과 Colonoids 설립

The epithelium of the gastrointestinal tract is constantly renewed as it turns over. This process is triggered by the proliferation of intestinal stem ...

Establishment and Characterization of UTI and CAUTI in a Mouse Model

Urinary tract infections (UTI) are highly prevalent, a significant cause of morbidity and are increasingly resistant to treatment with antibiotics. Females are disproportionately afflicted by UTI: 50% of all women will have a UTI in their lifetime. Additionally, 20-40% of these women who have an initial UTI will suffer a recurrence with some suffering frequent recurrences with serious deterioration in the quality of life, pain and discomfort, disruption of daily activities, increased healthcare costs, and few treatment options other than long-term antibiotic prophylaxis. Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) is the primary causative agent of community acquired UTI. Catheter-associated UTI (CAUTI) is the most common hospital acquired infection accounting for a million occurrences in the US annually and dramatic healthcare costs. While UPEC is also the primary cause of CAUTI, other causative agents are of increased significance including Enterococcus faecalis. Here we utilize two well-established mouse models that recapitulate many of the clinical characteristics of these human diseases. For UTI, a C3H/HeN model recapitulates many of the features of UPEC virulence observed in humans including host responses, IBC formation and filamentation. For CAUTI, a model using C57BL/6 mice, which retain catheter bladder implants, has been shown to be susceptible to E. faecalis bladder infection. These representative models are being used to gain striking new insights into the pathogenesis of UTI disease, which is leading to the development of novel therapeutics and management or prevention strategies.

The ability to model urinary tract infections (UTI) is crucial in order to be able to understand bacterial pathogenesis and spawn the development of novel therapeutics. This work&#8217;s goal is to demonstrate mouse models of experimental UTI and catheter associated UTI that recapitulate and predict findings seen in humans.

마우스 모델의 설립 및 요로 감염 및 CAUTI의 특성

Urinary tract infections (UTI) are highly prevalent, a significant cause of morbidity and are increasingly resistant to treatment with antibiotics. ...

Establishment of a Segmental Femoral Critical-size Defect Model in Mice Stabilized by Plate Osteosynthesis

The use of tissue-engineered bone constructs is an appealing strategy to overcome drawbacks of autografts for the treatment of massive bone defects. As a model organism, the mouse has already been widely used in bone-related research. Large diaphyseal bone defect models in mice, however, are sparse and often use bone fixation which fills the bone marrow cavity and does not provide optimal mechanical stability. The objectives of the current study were to develop a critical-size, segmental, femoral defect in nude mice. A 3.5-mm mid-diaphyseal femoral ostectomy (approximately 25% of the femur length) was performed using a dedicated jig, and was stabilized with an anterior located locking plate and 4 locking screws. The bone defect was subsequently either left empty or filled with a bone substitute (syngenic bone graft or coralline scaffold). Bone healing was monitored noninvasively using radiography and in vivo micro-computed-tomography and was subsequently assessed by ex vivo micro-computed-tomography and undecalcified histology after animal sacrifice, 10 weeks postoperatively. The recovery of all mice was excellent, a full-weight-bearing was observed within one day following the surgical procedure. Furthermore, stable bone fixation and consistent fixation of the implanted materials were achieved in all animals tested throughout the study. When the bone defects were left empty, non-union was consistently obtained. In contrast, when the bone defects were filled with syngenic bone grafts, bone union was always observed. When the bone defects were filled with coralline scaffolds, newly-formed bone was observed in the interface between bone resection edges and the scaffold, as well as within a short distance within the scaffold. 
The present model describes a reproducible critical-size femoral defect stabilized by plate osteosynthesis with low morbidity in mice. The new load-bearing segmental bone defect model could be useful for studying the underlying mechanisms in bone regeneration pertinent to orthopaedic applications.

Although mouse models are invaluable tools for bone tissue engineering, models of long bone defects are sparse. This need motivated development of the present protocol which uses a locking plate with four screws and a dedicated jig to perform and stabilize a reproducible, femoral, critical-size defect with low morbidity.

마우스의 분절 대퇴 임계 크기 결함 모델의 설립은 플레이트 고정술에 의해 안정화

The use of tissue-engineered bone constructs is an appealing strategy to overcome drawbacks of autografts for the treatment of massive bone defects. As a ...

Establishment of a Severe Dry Eye Model Using Complete Dacryoadenectomy in Rabbits

Dry eye disease (DED) is a complex disease with multiple etiologies and variable symptoms, having ocular surface inflammation as its key pathophysiologic step. Despite advances in our understanding of DED, significant knowledge gaps remain. Advances are limited in part due to the lack of informative animal models. The authors recently reported on a method of DED induced by injecting all orbital lacrimal gland (LG) tissues with the lectin concanavalin A. Here, we report a novel model of aqueous-deficient DED based on the surgical resection of all orbital LG (dacryoadenectomy) tissues. Both methods use rabbits because of their similarity to human eyes in terms of the size and structure of the ocular surface. One week after removal of the nictitating membrane, the orbital superior LG was surgically removed under anesthesia, followed by removal of the palpebral superior LG, and finally removal of the inferior LG. Dacryoadenectomy induced severe DED, evidenced by a marked reduction in the tear break up time test and the Schirmer&#39;s tear test, and significantly increased tear osmolarity and rose bengal staining. Dacryoadenectomy-induced DED lasted at least eight weeks. There were no complications and animals tolerated the procedure well. The technique can be mastered relatively easily by those with adequate surgical experience and appreciation of the relevant rabbit anatomy. Since this model recapitulates the features of human aqueous-deficient DED, it is suitable for studies of ocular surface homeostasis, DED, and candidate therapeutics.

A novel approach is presented to induce chronic dry eye disease in rabbits by surgically removing all orbital lacrimal glands. This method, distinct from those previously reported, produces a stable, reproducible model of aqueous deficient dry eye well suited to study tear physiology and pathophysiology and ocular therapeutics.

토끼의 완전한 다크레오아데네절제술을 이용한 중증 안구건조증 모델 구축

Dry eye disease (DED) is a complex disease with multiple etiologies and variable symptoms, having ocular surface inflammation as its key pathophysiologic ...

Establishment of a Mouse Severe Acute Pancreatitis Model using Retrograde Injection of Sodium Taurocholate into the Biliopancreatic Duct

The prevalence of acute pancreatitis (AP), especially severe acute pancreatitis (SAP), is increasing in younger age groups annually. However, there is a lack of effective treatments in the current clinical practice. With the easy accessibility of transgenic and knockout strains and their small size, which allows minimal doses of drugs required for in vivo evaluation, a well-established experimental model in mice is preferred for AP research. Moreover, SAP induced through sodium taurocholate (TC) is currently one of the most widely used and best characterized models. This model has been investigated for novel therapies and possible molecular events during the process of AP. Here, we present the generation of an AP mouse model using sodium taurocholate and a simple homemade microsyringe. Moreover, we also provide the methodology for the subsequent histology and serological testing.

A mouse model of severe acute pancreatitis is described herein. The procedure presented here is very rapid, simple, and accessible, thereby potentially allowing the study of the molecular mechanisms and different therapeutic interventions in acute pancreatitis in a convenient way.

비리오크크레아티드 덕트에 타우로콜레이트 나트륨의 역행 주입을 사용하여 마우스 심각한 급성 췌장염 모델의 설립

The prevalence of acute pancreatitis (AP), especially severe acute pancreatitis (SAP), is increasing in younger age groups annually. However, there is a ...

Establishment and Evaluation of a Porcine Vein Graft Disease Model

Venous graft disease (VGD) is the leading cause of coronary artery bypass graft (CABG) failure. Large animal models of CABG-VGD are needed for the investigation of disease mechanisms and the development of therapeutic strategies. 
To perform the surgery, we enter the cardiac chamber through the third intercostal space and carefully dissect the internal mammary vein and immerse it in normal saline. The right main coronary artery is then treated for ischemia. The target vessel is incised, a shunt plug is placed, and the distal end of the graft vein is anastomosed. The ascending aorta is partially blocked, and the proximal end of the graft vein is anastomosed after perforation. The graft vein is checked for patency, and the proximal right coronary artery is ligated. 
CABG surgery is performed in minipigs to harvest the left internal mammary vein for its use as a vascular graft. Serum biochemical tests are used to evaluate the physiological status of the animals after surgery. Ultrasound examination shows that the proximal, middle, and distal end of the graft vessel are unobstructed. In the surgical model, turbulent blood flow in the graft is observed upon histological examination after the CABG surgery, and venous graft stenosis associated with intimal hyperplasia is observed in the graft. The study here provides detailed surgical procedures for the establishment of a repeatable CABG-induced VGD model.

In this protocol, novel pig vein bypass grafting was performed through a small incision in the left chest wall without cardiopulmonary bypass. A postoperative pathology study was done, which showed intimal thickening.

돼지 정맥 이식 질환 모델의 수립 및 평가

Venous graft disease (VGD) is the leading cause of coronary artery bypass graft (CABG) failure. Large animal models of CABG-VGD are needed for the ...

Establishment of a Simple and Effective Rat Model for Intraoperative Parathyroid Gland Imaging

Parathyroid gland (PG) identification is a critical unmet need in thyroidectomy. The identification of the PG is challenging in thyroid surgery as it is similar in color to the thyroid gland. The lack of effective animal models in preclinical research is a severe limitation for the development of PG identification techniques. This protocol allows for the establishment of a simple and effective rat model for PG identification. In this model, black iron oxide nanoparticles (IONPs) are injected locally in the thyroid gland and rapidly diffuse within the thyroid gland but not the PG. A negatively stained PG and a positively stained thyroid gland can be easily identified by the naked eye without requiring external microscopes. The position of the PG can be identified by increasing the color contrast between the thyroid gland and the PG, based on the color of the black IONPs. This rat model is low-cost and convenient for PG identification, and the IONPs are a novel PG contrast agent.

To date, the development of parathyroid gland (PG) identification methods is limited by the lack of animal models in preclinical research. Here, we establish a simple and effective rat model for intraoperative PG imaging and evaluate its effectiveness by using iron oxide nanoparticles as a novel PG contrast agent.

수술 중 부갑상선 영상촬영을 위한 간단하고 효과적인 쥐 모델 구축

Parathyroid gland (PG) identification is a critical unmet need in thyroidectomy. The identification of the PG is challenging in thyroid surgery as it is ...

RV Volume Overload 마우스 모델을 확립하기 위해 수정된 동정맥루 수술

Establishment and Confirmation of a Postnatal Right Ventricular Volume Overload Mouse Model

Right ventricular (RV) volume overload (VO) is common in children with congenital heart disease. In view of distinct developmental stages,the RV myocardium may respond differently to VO in children compared to adults. The present study aims to establish a postnatal RV VO model in mice using a modified abdominal arteriovenous fistula. To confirm the creation of VO and the following morphological and hemodynamic changes of the RV, abdominal ultrasound, echocardiography, and histochemical staining were performed for 3 months. As a result, the procedure in postnatal mice showed an acceptable survival and fistula success rate. In VO mice, the RV cavity was enlarged with a thickened free wall, and the stroke volume was increased by about 30%-40% within 2 months after surgery. Thereafter, the RV systolic pressure increased, corresponding pulmonary valve regurgitation was observed, and small pulmonary artery remodeling appeared. In conclusion, modified arteriovenous fistula (AVF) surgery is feasible to establish the RV VO model in postnatal mice. Considering the probability of fistula closure and elevated pulmonary artery resistance, abdominal ultrasound and echocardiography must be performed to confirm the model status before application.

저자 스포트라이트: Establishment and Confirmation of a Postnatal Right Ventricular Volume Overload Mouse Model(출생 후 우심실 용적 과부하 마우스 모델의 확립 및 확인)  

This protocol presents the establishment and confirmation of a postnatal right ventricular volume overload (VO) model in mice with abdominal arteriovenous fistula (AVF), which can be applied to investigate how VO contributes to postnatal heart development.