이 작품은 스위스 국가 재단 (SNF) 프로젝트 그랜트 31003A_135649, 31003A_153457 및 31003A_172994 (JVS), 하와 Leopoldina 친목 LPDS 2011-16 (BS)에 의해 투자 되었다. 이 작품 "현미경 이미징 센터의" (마이크) 베른 대학교의 광학 설정에서 benefitted.

모든 동물 일 동물 실험에 대 한 Cantonal 위원회에 의해 승인 되었습니다 있으며 연방 정부의 지침에 따라 실시.
1. 마우스 anesthetize
<ol><li>실험실 외 투, 장갑 등 개인 보호 장비를 착용 하십시오.</li>
	<li>케 타 민, xylazine, 및 20 mg/mL 및 1 mg/mL 작업 농도에 염 분을 각각 혼합. Intraperitoneally 작업 사진 주사 (i.p.) 마우스의 8-10 µ L/g에. 감 금 소에 다시 마우스를 놓습니다. 참고:이 프로토콜 C57BL/6 배경 6에 40-주-오래 된 남성 및 여성 쥐에 대 한 테스트 되었습니다.</li>
	<li>2.5 mg/mL에서 acepromazine 솔루션을 준비 하 고 30 µ L i.p., 15 분 (75 µ g/마우스) 케 타 민-xylazine 주입 후 주입.</li>
	<li>5-15 분 후 반사, 예를 들면, 발 또는 각 막 반사의 철수 반사를 제어 하 여 적절 한 마 취와 진통에 대 한 확인 합니다.</li>
	<li>제어 반사에 대 한 약 30 분 마다 실험의 전체 기간 동안. 피하 주사 마 취 제/xylazine 1.5 µ L/g 마우스, 모든 60 분 또는 이전 경우의 반사는 긍정적인. 참고: 흡입 마 취와 isoflurane 같은 마우스의 고정 때문이 프로토콜을 사용할 수 없습니다.</li>
</ol>2. 운영 영역에서 모피를 제거
<ol><li>전기 면도기를 사용 하 여 약 5 mm의 양쪽 귀 쪽으로 턱을 통해 스트레칭 앞 다리 쪽으로 입 꼬리에서 확장 영역을 면도.</li>
	<li>제 모 크림 면봉으로 면도 영역에 적용 됩니다. 신중 하 고 철저 하 게 젖은 티슈로 닦아 하 여 예를 들어, 3 분 후 제거 합니다.</li>
</ol>3. 스테이지에서 마우스 수정
참고:이 프로토콜 사용 하 여 사용자 지정된 단계 (그림 1) 커버 전표 (나사와 단계에 연결 된 하나, 다른 그것에 영구적으로 고정);에 대 한 두 명의 자유롭게 조정 가능한 홀더 장착 조정 가능한 정위 적 귀 바; 나사; 강화 될 수 있는 문자열 자유롭게 조정 가능한 금속 난방 반지; 그리고 마우스의 몸통을 배치에 지정 제기 지역. 이 단계는 추가 정위 적 보유자와 exteriorized SMG 들고 낮은 커버 슬립에 대 한 지원 오 금 림프절 단계에서 수정 됩니다. 상세한 계획 또는 따옴표는 무대의 요청에 따라 사용할 수 있습니다.
<ol><li>이동식 커버 슬립 홀더 난방 반지 홀더를 제거 하 여 무대를 준비 합니다. 귀 바 홀더 및 고정된 커버 슬립 홀더의 나사를 풉니다. 마우스에 대 한 침구도 무대의 중심 영역에 거 즈의 조각 테이프.</li>
	<li>접착제를 사용 하 여 ( 재료의 표참조) 원통형 금속 홀더 (올 낮은 커버 유리)의 상단에 20 m m 직경 커버 유리를 연결할. 편평한 금속 홀더 (올 상단 커버 유리)의 바닥에 25 m m 커버 유리 접착제. 커버 유리 금속 소지자와 약 2-3 mm 겹치는 고 유리의 나머지 그리스와 접착제의 무료 남아 확인 하십시오.</li>
	<li>귀 바 사이 중심으로 머리와 거 즈, 수직으로 뻗어 문자열에 그것의 뒤에 마우스를 놓습니다.</li>
	<li>외과 테이프와 함께 무대에 마우스의 위 사지를 수정 합니다.</li>
	<li>다음, 상단 전면 앞 니에 문자열을 연결 하 고 턱에는 수평 위치를 도달할 때까지 조입니다. 각된 곡선된 집게를 사용 하 여 약간 호흡을 용이 하 게 입에서 혀를 꺼내.</li>
	<li>단단히, 하지만 하지 강제로, 꼬리를 당겨 하 고 무대에 테이프.</li>
	<li>귀 바 바와 스테이지 가장자리 간의 약 30 °의 각도 달성 하기 위해 맞춥니다. 이 각도 되도록 삼각형 눈금자를 사용 하 여 종이, 시트에 좌우 30 °의 각도 그릴 하 고 소유자에 따라 맞게 종이에 투명 한 무대를 놓습니다.</li>
	<li>안쪽까지 턱 운동, 동시에 왼쪽 및 오른쪽 막대를 이동 하 여 귀 바 사이의 턱을 해결 하 고 나사를 조이십시오. 전에, 하는 동안, 그리고 턱을 고정 시킨 후 가슴 움직임을 관찰 합니다. 감소 또는 호흡에 결 석 바는 아니라 턱 뼈; 목에 고정 하는 것을 나타냅니다 이 경우에, 즉시 고정 절차를 반복 합니다.</li>
	<li>근처 난방 램프 또는 무대 아래 난방 패드를 배치 하 여, 예를 들어, 마우스를 난방을 제공 합니다.</li>
</ol>4. 수술 노출은 Stereomicroscope를 사용 하 여 침 샘의
참고: 다음 단계는 stereomicroscope와 미세 집게, 수술가 위 사용을 해야합니다. 이후 절차는 터미널, 살 균 동작 상태를 유지 하기 위해 필요는 없습니다. 에탄올 청소 기기 충분합니다.
<ol><li>피부 약 15 m m 입과 턱 선의 5 m m 중간의 꼬리에 약간의 돌출을 찾아서 오른쪽 SMG 엽의 대략적인 위치를 찾습니다. 돌출의 중앙에 작은 피부 겹을 들어올린 만들려고 그것과 약 5mm 길이의 오프닝 컷.</li>
	<li>즉시 상처 주변 피부에 진공 그리스의 4 m m 고리를 적용 합니다. (무딘된 25 G 피하 주사 바늘으로 진공 기름 가득 주사기 사용).</li>
	<li>유지 조직 습 한 작업 중에 염 분으로 기름 반지를 채우십시오.</li>
	<li>Stereomicroscope에서 다음 절차를 사용 하 여 결합 조직 방해: 한 미세 집게를 사용 하 여 단단히 잡기는 서울시에 직접 연결 하는 결합 조직의 조각 하 고 그것은 파열 때까지 원심 결합 조직을 두 번째 집게를 사용 하 여. 일부 결합 조직 유지; 서울시에 연결 된 이것은 처리 수 있기 때문에 바람직하다입니다. 이 출혈을 일으킬 것입니다 때문에, 집게와 선 자체를 만지지 마십시오.</li>
	<li>선, 위에 다음 (SMG의 오른쪽과 왼쪽 엽) 사이 중간 측에 먼저 결합 조직 방해의이 동작을 반복 합니다. 삶의 submandibular 동맥에서 분리 하지 마십시오.</li>
	<li>(꼬리, 원심 rostral 하 하 하 중간) SMG 주위 반대 측면 결합 조직 제거를 계속 합니다.</li>
	<li>혈액 공급, 원심 lymphatics 고 침 덕트 모두에 있는 동맥의 두개골 사이트에서 번들, 파열 되지 것을 확인 하십시오.</li>
	<li>측면 결합 조직 중단 되 면 집게를 사용 하 여 당겨 위쪽으로 리프트는 SMG의 꼬리 끝에 서울시의 꼬리 끝에 연결 하는 결합 조직. SMG 엽 아래 결합 조직 방해는 꼬리에서 시작 하 고 rostral 끝 쪽으로 이동.</li>
	<li>(주요 먹이/배출 혈관와 WD rostral 사이트 제외)는 서울시의 모든 사이트에 결합 조직 제거 될 때까지 계속 합니다.</li>
</ol>5. 고정 선
<ol><li>식 염 수를 들고 그리스 링 4mm 이상 높은 그리고 새 (단계 4.2 참조) 확인 합니다.</li>
	<li>설치 (단계 3.2 참조) 낮은 커버 유리 금속 막대의 높이 조절 가능한 홀더를 연결 하 여. 커버 슬립 홀더 최상의 위치로 조정 되 고 그리스 링 무대에 연결 될 때 터치 하지 않습니다 확인 합니다. 커버 슬립 덮고 대략 3 분의 2 (꼬리와 말 초 부분) 노출된 엽의와 마우스, 약 60 °의 각도에서 꼬리 방향에서 홀더를 배치 합니다. 그것까지 커버 유리를 낮은 선 접촉 하 게.</li>
	<li>새로운 염 저수지를 커버 글라스 위에 그리스 반지를 완료 합니다.</li>
	<li>조심 스럽게 내 커버 슬립 위에 SMG 엽 집게만 만지고 그것에 연결 하는 결합 조직 (기관 위쪽으로 향하게 하는 아래 사이트와 뒤집힌 수 있습니다).</li>
	<li>그리스 링 4mm 이상도 높이, 누설 하지 않습니다 확인 하십시오. 필요한 경우 리필 30 G을 사용 하 여 염 분 저수지 주사기 염 분으로 가득 합니다.</li>
	<li>커버 유리 홀더 상단 커버 유리에 대 한 최상의 위치에 있는지 확인 합니다. 나사를 사용 하 여 소유자를 25 m m 상단 커버 유리 금속 홀더를 연결. 소유자의 조절 나사를 사용 하 여 중간에 SMG를 중심으로 커버 유리를 위치.</li>
	<li>조정 가능한 홀더 나사를 사용 하 여 직접 서울시를 연결 하는 그것 때까지 상단 커버 유리를 낮은. 모양 및이 단계는 동맥의 색을 관찰 합니다. 체 표면적 나타납니다, 또는 착 색 (예를 들어 흰색 분홍색)에서 즉시 변경 하는 경우 서울시에 압력을 완화에 더 높은 위치에 커버 유리를 넣어.</li>
	<li>공기 방울 나 방울 저수지 밖 염 분의 보고 누수에 대 한 식 염 수 저수지를 확인 합니다. 누설 또는 공기 거품을 감지 하는 경우 제거 모두 커버 실수할 하 고는 모든 그리스 및 2 단계에서 다시 시작.</li>
	<li>나사 고정 나사를 모두 종료 하십시오.</li>
</ol>6. 고정 난방 반지 및 온도 프로브
<ol><li>저수지에 온도 프로브를 삽입 하 고 선, 가까운 위치 다음 단계로 프로브 와이어 테이프.</li>
	<li>(그리스 링의 직경 난방 반지의 직경에 해당) 센터에서 서울시와 상단 커버 슬립을 그리스 링을 적용 합니다. 커버 슬립 위에 난방 반지를 놓고 그리스와 함께 인감. 무대에 난방의 배관 테이프.</li>
</ol>7입니다. 영상
참고: 우리는 직 립 2 광자 현미경 시스템 가변 Ti:Sa 레이저와 물 침수 또는 25 X 20 X 목표와 형광 현미경을 사용 합니다. 중 조직 드리프트의 실시간으로 보정 된 자동화 된 단계 및 VivoFollow19를 사용 하 여 구현할 수 있습니다. 이미지 수집의 안정성을 향상 시키지만 필요 하지 않습니다.
<ol><li>현미경 제조업체에서 제공 하는 적절 한 소프트웨어를 사용 하 여 똑바로 현미경 시스템을 켭니다. 780-900 nm 여기 파장에 Ti:Sa 레이저 조정.</li>
	<li>난방 배관 난방 반지에 연결 합니다. 연동 펌프는 SMG를 따뜻하게 반지를 통해 뜨거운 물 (80 ° C 물 목욕에서 튜브의 부분을 물속에 의해가 열)를 순환.</li>
	<li>디지털 온도계를 온도 프로브를 연결 합니다. 온도가 사이 35-39 ° c.의 경우 연동 펌프의 속도 조정 빨리 펌프 작동, 온 열 장치 개체가 되 면 반대로.</li>
	<li>이미지 수집을 시작 하기 전에 혈액 흐름 속도의 시각적 컨트롤을 수행 합니다. 신중 하 게 백혈구 통로 형광 dextran 주입 또는 얇은 모 세관을 통해 확인 합니다. 참고: 정 맥으로 주입 된 형광 dextran 채울 것입니다 즉시 전체 서울시 맥 관 구조에 밖으로 혈액 흐름은 생리 할 때. 이것은 거의 항상이 절차의 경우입니다.</li>
	<li>따라 면역 세포, 이미징 깊이 일반적으로 20-150 µ m 2차 고조파 생성 신호를 구분 하는 SMG의 표면 아래. 픽셀 해상도 약 512 x 512 이상, 150-300 µ m 시야의 기록 이미지 스택 그리고 z 이미지 사이 2-4 µ m의 간격을 가진 20-60 µ m의 깊이. 20-60 분의 총 시간에 대 한 스택 수집 모든 20-30 s를 반복 합니다.</li>
	<li>디지털 온도계를 사용 하 여 하나의 이미지 시퀀스의 취득 후 최소 및 최대 온도 레벨을 제어. 최소 또는 최대 37 ±의 범위에 있지 않은 경우 이미지 시퀀스를 삭제 2 ° c. 이미지 시퀀스 간의 목표의 침수 물 리필.</li>
	<li>이미징 세션의 끝에, 쥐를 마 취 CO2 질 식에 의해 안락사. 참고: 이것은 동물 실험;의 스위스 연방 정부의 지침에 따라 안락사에 대 한 다른 지침 다른 곳에서 적용할 수 있습니다.</li>
</ol>

<ol>
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(51), e3074 (2011).</li><li>Chen, G. Y., Nu&#241;ez, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sterile+inflammation:+Sensing+and+reacting+to+damage.">Sterile inflammation: Sensing and reacting to damage.</a> Nat Rev Immunol. 10 (12), 826-837 (2010).</li><li>McLaren, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+causes+of+variation+of+body+temperature+in+mice.">Some causes of variation of body temperature in mice.</a> Q J Exp Physiol Cogn Med Sci. 46 (1), 38-45 (1961).</li><li>Baumgart, K., Wagner, F., Gr&#246;ger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+and+metabolic+effects+of+hypothermia+and+inhaled+hydrogen+sulfide+in+anesthetized+and+ventilated+mice.">Cardiac and metabolic effects of hypothermia and inhaled hydrogen sulfide in anesthetized and ventilated mice.</a> Crit Care Med. 38 (2), 588-595 (2010).</li><li>Crouch, A. C., Manders, A. B., Cao, A. A., Scheven, U. M., Greve, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-sectional+area+of+the+murine+aorta+linearly+increases+with+increasing+core+body+temperature.">Cross-sectional area of the murine aorta linearly increases with increasing core body temperature.</a> Int J Hyperth. , 1-13 (2017).</li><li>Smith, C. J., Caldeira-Dantas, S., Turula, H., Snyder, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+CMV+infection+induces+the+continuous+production+of+mucosal+resident+T+cells.">Murine CMV infection induces the continuous production of mucosal resident T cells.</a> Cell Rep. 13 (6), 1137-1148 (2015).</li><li>Lindquist, R. L., Shakhar, G., Dudziak, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+dendritic+cell+networks+in+vivo.">Visualizing dendritic cell networks in vivo.</a> Nat Immunol. 5 (12), 1243-1250 (2004).</li><li>Riedl, J., Flynn, K. C., Raducanu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifeact+mice+for+studying+F-actin+dynamics.">Lifeact mice for studying F-actin dynamics.</a> Nat Methods. 7 (3), 168-169 (2010).</li><li>Chtanova, T., Hampton, H. R., Waterhouse, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+interactive+two-photon+photoconversion+of+recirculating+lymphocytes+for+discontinuous+cell+tracking+in+live+adult+mice.">Real-time interactive two-photon photoconversion of recirculating lymphocytes for discontinuous cell tracking in live adult mice.</a> J Biophotonics. 7 (6), 425-433 (2014).</li><li>Kyratsous, N. I., Bauer, I. J., Zhang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+context-dependent+calcium+signaling+in+encephalitogenic+T+cells+in+vivo+by+two-photon+microscopy.">Visualizing context-dependent calcium signaling in encephalitogenic T cells in vivo by two-photon microscopy.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 114 (31), E6381-E6389 (2017).</li><li>Mank, M., Reiff, D. F., Heim, N., Friedrich, M. W., Borst, A., Griesbeck, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+FRET-based+calcium+biosensor+with+fast+signal+kinetics+and+high+fluorescence+change.">A FRET-based calcium biosensor with fast signal kinetics and high fluorescence change.</a> Biophys J. 90 (5), 1790-1796 (2006).</li><li>Tsyboulski, D., Orlova, N., Saggau, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amplitude+modulation+of+femtosecond+laser+pulses+in+the+megahertz+range+for+frequency-multiplexed+two-photon+imaging.">Amplitude modulation of femtosecond laser pulses in the megahertz range for frequency-multiplexed two-photon imaging.</a> Opt Express. 25 (8), 9435 (2017).</li><li>Potma, E. O., Xie, X. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+single+lipid+bilayers+with+coherent+anti-Stokes+Raman+scattering+(CARS)+microscopy.">Detection of single lipid bilayers with coherent anti-Stokes Raman scattering (CARS) microscopy.</a> J Raman Spectrosc. 34 (9), 642-650 (2003).</li></ol>

관심 없음 충돌 선언.

이 프로토콜 murine submandibular 고 설 침 샘을 면역학의 분야에서 자주 사용 하는 직 립 비 선형 현미경 검사 법을 사용 하 여의 비보에 이미징에 대 한 간단한 접근을 제공 합니다. 메서드는 머리와 목 지역에 다른 전 샘의 이미징에 대 한 적용할 수 있습니다. 예를 들어, 우리의 실험실 (표시 되지 않음)는 유사한 방식으로 눈물 샘의 이미지를 수행 하고있다.
SMG 주위 결합 ?...

타 액은 음식에 기름칠을, 구두 관의 점 막 표면 보호 항균 물질1,2뿐 아니라 소화 효소를 제공 하 고 전 분 비에 의해 은닉 된다. 구두 submucosa에 산재 된 작은 침 샘은 귀 밑, 설, 그리고 submandibular로 확인 하는 주요 동맥의 3 개의 양자 세트 그들의 위치1,2에 있습니다. 플라스 크 모양의 낭 (acini)으로 구성 된 피라미드 모양의 상피 세포, myoepithelial 세포 및 지하실 막에 의해 포위 된다 demilunes 분 비 타 액1의 장 액 및 점액 구성 요소 또는. 그들은 마침내 단일 배설 덕트1에 가입 때까지 전기 덕트에 결합 삽입 된 덕트로 acini 빼낸의 좁은 luminal 공간. 서울시의 주요 배설 덕트와 튼의 덕트 (WD) 이라고 하 고 설 caruncle3,4로 열립니다. SMG 상피 구획은 따라서 끝점과 매니폴드 터미널, 포도1,,56의 번들을 닮은 높은 arborized 구조를 나타냅니다. SMG interstitium 혈액과 림프 혈관 결합 조직7 8 부 교감 신경 신경 및 세포 외 매트릭스5에 포함 된 구성 됩니다. 일반 인간과 설치류 침 샘은 또한 T 세포, 대 식 세포, 및 수지상 세포9, 뿐만 아니라 플라즈마 세포 분 비 면역 글로불린 (IgA)는 타 액9,10에 포함 되어 있습니다. 건강과 질병에서의 다각적인 기능, SMG은 치과4, 면역학11, 종양학12, 생리학8, 세포 생물학 등 생물학 연구의 많은 분야에 대 한 관심의 대상이 3.
동적 세포질 프로세스와 상호 작용의 이미징 생물학 연구13,14에서 강력한 도구입니다. 깊은 조직 이미징 및 혁신 inmicroscopes 비선형 광학 (NLO)에 따라 산란 또는 샘플에서 여러 개의 광자의 흡수에 의존 하는 개발 복잡 한 조직13 에서에서 세포 프로세스를 직접 검사를 수 있다 15. 여러 개의 광자의 흡수 낮은 에너지 광자, 초점면에 어떤 경계 fluorophore 여기에 의해 총 여기 에너지의 납품의를 포함 하 고 따라서 초점에서 잡음 감소 photodamage와 깊은 조직 침투 수 있습니다. 여기13,15. 이 원리 2 광자 현미경 (2 분)에 의해 고용 하 고 최대 1 m m15,16의 깊이에 형광 표본의 이미징에 대 한 수 있습니다. 사용자 친화적이 고 믿을 수 있는 셋업 되 상용 2 오후 동안 intravital 이미징에 대 한 주요 도전 신중 하 게 노출 하 고 특히 시간 경과 시리즈의 이미지에 대 한 마 취 쥐의 대상 기관 안정입니다. 디지털 드리프트 보정 후 데이터 수집을 위한 여러 가지 방법을 게시17,18 그리고 우리는 최근에 "VivoFollow", 실시간으로 사용 하 여 느린 조직 드리프트를 중화 하는 자동된 보정 시스템 개발을 컴퓨터 단계19. 그러나, 그것은 여전히 고품질 이미징 조직 운동, 호흡 또는 하트 비트19기인 특히 빠른 움직임을 최소화 하기 위해 중요 합니다. 준비 및 안정화 절차 척수20, 간21, 피부22,23, 폐 및 림프 노드24를 포함 하 여 여러 장기에 대 한 출판 되었습니다. 또한, 쥐 침 샘 이미징 모델 개발된3,25 되었고 더 높은 해상도 intravital 이미징 murine SMG는 거꾸로 한 현미경 설치26, 에 맞게의 세련 된 27 , 28.
여기, 선물이 murine SMG의 intravital 이미징에 대 한 실용적이 고 적응력 프로토콜 intravital 이미징 면역학 분야에서 일반적으로 사용 되는 직 립 비선형 현미경을 사용 하 여. 이 위해, 우리는 오 금 림프절 준비에 사용 되는 널리 고용된 immobilization 무대 수정.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Narketan 10 %&#160; (Ketamine) 20ml (100 mg/ml)</td>
			<td>Vetoquinol</td>
			<td>3605877535982</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rompun 2% (Xylazine) 25 ml (20 mg/ml)</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>680538150144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline NaCl 0.9%</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>3535789</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prequillan 1% (Acepromazine) 10 ml (10 mg/ml)</td>
			<td>Fatro</td>
			<td>6805671900029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric shaver</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>9818L</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair removal cream</td>
			<td>Veet</td>
			<td>4002448090656</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Durapore Surgical tape (2.5 cm x 9.1 m and 1.25 cm x 9.1 m)</td>
			<td>Durapore (3M)</td>
			<td>1538-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Durapore Surgical tape (2.5 cm x 9.1 m and 1.25 cm x 9.1 m)</td>
			<td>Durapore (3M)</td>
			<td>1538-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super glue Ultra gel, instantaneous glue</td>
			<td>Pattex, Henkel</td>
			<td>4015000415040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope cover glass slides 20 mm and 22 mm</td>
			<td>Menzel-Gl&#228;ser</td>
			<td>631-1343/ 631-1344</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grease for laboratories 60 g glisseal N</td>
			<td>Borer (VWR supplier)</td>
			<td>DECO514215.00-CA15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>Fine Science Tools (F.S.T )</td>
			<td>14090-09</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools (F.S.T )</td>
			<td>11252-20</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swab</td>
			<td>Migros</td>
			<td>617027988254</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Gazin 5 x 5 cm</td>
			<td>Lohmann and Rauscher</td>
			<td>18500</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ16</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Texas Red dextran 70kDa</td>
			<td>&#160;Molecular Probes</td>
			<td>D1864</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cascade Blue dextran 10kDa</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>D1976</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Two-photon system</td>
			<td>LaVision Biotec</td>
			<td>TrimScope I and II</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XLUMPLANFL 20x/0.95 W objective</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>n/a</td>
			<td>or other water immersion objective&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital thermometer</td>
			<td>Fluke</td>
			<td>95969077651</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of murine submandibular salivary gland for upright intravital microscopy

Submandibular 침 샘 (SMG) 3 개의 주요 침 샘의 하나 이며 생물학 연구, 세포 생물학, 종양학, 치과, 면역학 등의 다양 한 분야에 대 한 관심의 이다. 서울시는 전 선 분 비 상피 세포, myofibroblasts, 내 피 세포, 신경, 세포 외 매트릭스의 구성 이다. 쥐와 쥐 SMG에서 동적 세포질 과정 몇 군데 이전 있다, 주로 사용 하 여 거꾸로 다중 광자 현미경 시스템. 여기, 우리는 수술 준비와 똑바로 다중 광자 현미경 시스템 이미징 비보에 마 취 쥐에서 murine SMG의 안정화에 대 한 간단한 프로토콜을 설명합니다. 우리 생의 대표적인 intravital 이미지 세트를 제시 하 고 adoptively 형광 세포, 혈관 또는 침 덕트 및 원 콜라겐 시각화를 둘째로 고조파 생성의 라벨을 포함 하 여 전송. 합계에서는, 우리의 프로토콜 intravital 이미징 면역학 분야에서 일반적으로 사용 되는 직 립 현미경 시스템에서 마우스 침 샘의 수술 준비를 위해 수 있습니다.

이 프로토콜에는 거의 전체 등 또는 복 부 측면의 SMG의 영상 수 있습니다. 보기의 필드 일반적으로 또한 세포질 구성4서울시에서 약간 다릅니다 설 침 샘을 포함 한다. 두 샘 원 콜라겐에 의해 캡슐화 되며 돌출부를 세분화. 대부분 오후 2 시스템 2차 고조파 신호를 측정 하 여 원 콜라겐의 레이블 없는 이미지를 생성할 수 있습니다 하지만 일반적?...

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Preparation of Murine Submandibular Salivary Gland for Upright Intravital Microscopy

똑바로 Intravital 현미경 Murine Submandibular 침 샘의 준비

우리는 수술 노출 하 고 안정화 murine submandibular 침 샘 intravital 이미징 똑바로 intravital 현미경 검사 법을 사용 하 여 프로토콜을 설명 합니다. 이 프로토콜은 머리와 목 지역 쥐 및 다른 작은 설치류의 다른 전 동맥에 쉽게 적응 합니다.

The submandibular salivary gland (SMG) is one of the three major salivary glands, and is of interest for many different fields of biological research, ...

preparation-murine-submandibular-salivary-gland-for-upright

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

8.0K 조회수.  University of Bern. 우리는 수술 노출 하 고 안정화 murine submandibular 침 샘 intravital 이미징 똑바로 intravital 현미경 검사 법을 사용 하 여 프로토콜을 설명 합니다. 이 프로토콜은 머리와 목 지역 쥐 및 다른 작은 설치류의 다른 전 동맥에 쉽게 적응 합니다.

비디오: Preparation of Murine Submandibular Salivary Gland for Upright Intravital Microscopy

Intravital Microscopy of the Inguinal Lymph Node

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune response and therefore, the development of effector cells. As such, LNs are key to fighting invading pathogens and maintaining health. The choice of LN to study is dictated by accessibility and the desired model; the inguinal lymph node is well situated and easily supports studies of biologically relevant models of skin and genital mucosal infection.
The inguinal LN, like all LNs, has an extensive microvascular network supplying it with blood. In general, this microvascular network includes the main feed arteriole of the LN that subsequently branches and feeds high endothelial venules (HEVs). HEVs are specialized for facilitating the trafficking of immune cells into the LN during both homeostasis and infection. How HEVs regulate trafficking into the LN under both of these circumstances is an area of intense exploration. The LN feed arteriole, has direct upstream influence on the HEVs and is the main supply of nutrients and cell rich blood into the LN. Furthermore, changes in the feed arteriole are implicated in facilitating induction of adaptive immune response. The LN microvasculature has obvious importance in maintaining an optimal blood supply to the LN and regulating immune cell influx into the LN, which are crucial elements in proper LN function and subsequently immune response. 
The ability to study the LN microvasculature in vivo is key to elucidating how the immune system and the microvasculature interact and influence one another within the LN. Here, we present a method for in vivo imaging of the inguinal lymph node. We focus on imaging of the microvasculature of the LN, paying particular attention to methods that ensure the study of healthy vessels, the ability to maintain imaging of viable vessels over a number of hours, and quantification of vessel magnitude. Methods for perfusion of the microvasculature with vasoactive drugs as well as the potential to trace and quantify cellular traffic are also presented. 
Intravital microscopy of the inguinal LN allows direct evaluation of microvascular functionality and real-time interface of the direct interface between immune cells, the LN, and the microcirculation. This technique potential to be combined with many immunological techniques and fluorescent cell labelling as well as manipulated to study vasculature of other LNs.

A technique for performing intravital microscopy of the inguinal lymph node (LN) is outlined. Such technique allows for real-time, in vivo study of the lymph node microvasculature and structure both during homeostasis and infection. This technique can be adapted to cell trafficking studies and to other lymph node sites.

사타구니 림프 노드의 Intravital 현미경

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune ...

연구

면역학 및 감염병학

Tracking Neutrophil Intraluminal Crawling, Transendothelial Migration and Chemotaxis in Tissue by Intravital Video Microscopy

The recruitment of circulating leukocytes from blood stream to the inflamed tissue is a crucial and complex process of inflammation1,2. In the postcapillary venules of inflamed tissue, leukocytes initially tether and roll on the luminal surface of venular wall. Rolling leukocytes arrest on endothelium and undergo firm adhesion in response to chemokine or other chemoattractants on the venular surface. Many adherent leukocytes relocate from the initial site of adhesion to the junctional extravasation site in endothelium, a process termed intraluminal crawling3. Following crawling, leukocytes move across endothelium (transmigration) and migrate in extravascular tissue toward the source of chemoattractant (chemotaxis)4. Intravital microscopy is a powerful tool for visualizing leukocyte-endothelial cell interactions in vivo and revealing cellular and molecular mechanisms of leukocyte recruitment2,5. In this report, we provide a comprehensive description of using brightfield intravital microscopy to visualize and determine the detailed processes of neutrophil recruitment in mouse cremaster muscle in response to the gradient of a neutrophil chemoattractant. To induce neutrophil recruitment, a small piece of agarose gel (~1-mm3 size) containing neutrophil chemoattractant MIP-2 (CXCL2, a CXC chemokine) or WKYMVm (Trp-Lys-Tyr-Val-D-Met, a synthetic analog of bacterial peptide) is placed on the muscle tissue adjacent to the observed postcapillary venule. With time-lapsed video photography and computer software ImageJ, neutrophil intraluminal crawling on endothelium, neutrophil transendothelial migration and the migration and chemotaxis in tissue are visualized and tracked. This protocol allows reliable and quantitative analysis of many neutrophil recruitment parameters such as intraluminal crawling velocity, transmigration time, detachment time, migration velocity, chemotaxis velocity and chemotaxis index in tissue. We demonstrate that using this protocol, these neutrophil recruitment parameters can be stably determined and the single cell locomotion conveniently tracked in vivo.

We describe a protocol of brightfield intravital microscopy for measuring dynamic neutrophil-endothelial cell interactions during neutrophil recruitment in response to the source of a neutrophil chemoattractant in vivo. Neutrophil intraluminal crawling, transendothelial migration and chemotaxis in mouse cremaster muscle tissue are visualized with time-lapsed video photography and tracked with ImageJ.

추적 호중구 Intraluminal 크롤링, Intravital 비디오 현미경에 의한 조직의 Transendothelial 마이 그 레이션 및 Chemotaxis

The recruitment of circulating leukocytes from blood stream to the inflamed tissue is a crucial and complex process of inflammation1,2. In the ...

Intravital Imaging of the Mouse Thymus using 2-Photon Microscopy

Two-photon Microscopy (TPM) provides image acquisition in deep areas inside tissues and organs. In combination with the development of new stereotactic tools and surgical procedures, TPM becomes a powerful technique to identify "niches" inside organs and to document cellular "behaviors" in live animals. While intravital imaging provides information that best resembles the real cellular behavior inside the organ, it is both more laborious and technically demanding in terms of required equipment/procedures than alternative ex vivo imaging acquisition. Thus, we describe a surgical procedure and novel "stereotactic" organ holder that allows us to follow the movements of Foxp3+ cells within the thymus.
Foxp3 is the master regulator for the generation of regulatory T cells (Tregs). Moreover, these cells can be classified according to their origin: ie. thymus-differentiated Tregs are called "naturally-occurring Tregs" (nTregs), as opposed to peripherally-converted Tregs (pTregs). Although significant amount of research has been reported in the literature concerning the phenotype and physiology of these T cells, very little is known about their in vivo interactions with other cells. This deficiency may be due to the absence of techniques that would permit such observations. The protocol described in this paper provides a remedy for this situation.
Our protocol consists of using nude mice that lack an endogenous thymus since they have a punctual mutation in the DNA sequence that compromises the differentiation of some epithelial cells, including thymic epithelial cells. Nude mice were gamma-irradiated and reconstituted with bone marrows (BM) from Foxp3-KIgfp/gfp mice. After BM recovery (6 weeks), each animal received embryonic thymus transplantation inside the kidney capsule. After thymus acceptance (6 weeks), the animals were anesthetized; the kidney containing the transplanted thymus was exposed, fixed in our organ holder, and kept under physiological conditions for in vivo imaging by TPM. We have been using this approach to study the influence of drugs in the generation of regulatory T cells.

We have developed novel laboratory tools and protocols for intravital imaging acquisition of the thymus. Our technique should help in the identification of &#x201C;niches&#x201D; within the thymus where T cell development occurs.

2 - 광자 현미경을 사용하여 마우스 Thymus의 Intravital 영상

Two-photon Microscopy (TPM) provides image acquisition in deep areas inside tissues and organs. In combination with the development of new stereotactic ...

Intravital Microscopy of the Spleen: Quantitative Analysis of Parasite Mobility and Blood Flow

The advent of intravital microscopy in experimental rodent malaria models has allowed major advances to the knowledge of parasite-host interactions 1,2. Thus, in vivo imaging of malaria parasites during pre-erythrocytic stages have revealed the active entrance of parasites into skin lymph nodes 3, the complete development of the parasite in the skin 4, and the formation of a hepatocyte-derived merosome to assure migration and release of merozoites into the blood stream 5. Moreover, the development of individual parasites in erythrocytes has been recently documented using 4D imaging and challenged our current view on protein export in malaria 6. Thus, intravital imaging has radically changed our view on key events in Plasmodium development. Unfortunately, studies of the dynamic passage of malaria parasites through the spleen, a major lymphoid organ exquisitely adapted to clear infected red blood cells are lacking due to technical constraints.
Using the murine model of malaria Plasmodium yoelii in Balb/c mice, we have implemented intravital imaging of the spleen and reported a differential remodeling of it and adherence of parasitized red blood cells (pRBCs) to barrier cells of fibroblastic origin in the red pulp during infection with the non-lethal parasite line P.yoelii 17X as opposed to infections with the P.yoelii 17XL lethal parasite line 7. To reach these conclusions, a specific methodology using ImageJ free software was developed to enable characterization of the fast three-dimensional movement of single-pRBCs. Results obtained with this protocol allow determining velocity, directionality and residence time of parasites in the spleen, all parameters addressing adherence in vivo. In addition, we report the methodology for blood flow quantification using intravital microscopy and the use of different colouring agents to gain insight into the complex microcirculatory structure of the spleen. 
Ethics statement
All the animal studies were performed at the animal facilities of University of Barcelona in accordance with guidelines and protocols approved by the Ethics Committee for Animal Experimentation of the University of Barcelona CEEA-UB (Protocol No DMAH: 5429). Female Balb/c mice of 6-8 weeks of age were obtained from Charles River Laboratories.

We show the method for performing intravital microscopy of the spleen using GFP transgenic malaria parasites and the quantification of parasite mobility and blood flow within this organ.

비장의 Intravital 현미경 : 기생충 이동성 및 혈류의 정량 분석

The advent of intravital microscopy in experimental rodent malaria models has allowed major advances to the knowledge of parasite-host interactions 1,2. ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne relapsing fever (Borrelia spp.), Rocky Mountain Spotted fever (Rickettsia rickettsii), ehrlichiosis (Ehrlichia chaffeensis and E. equi), anaplasmosis (Anaplasma phagocytophilum), encephalitis (tick-borne encephalitis virus), babesiosis (Babesia spp.), Colorado tick fever (Coltivirus), and tularemia (Francisella tularensis) 1-8. To be properly transmitted into the host these infectious agents differentially regulate gene expression, interact with tick proteins, and migrate through the tick 3,9-13. For example, the Lyme disease agent, Borrelia burgdorferi, adapts through differential gene expression to the feast and famine stages of the tick's enzootic cycle 14,15. Furthermore, as an Ixodes tick consumes a bloodmeal Borrelia replicate and migrate from the midgut into the hemocoel, where they travel to the salivary glands and are transmitted into the host with the expelled saliva 9,16-19.
As a tick feeds the host typically responds with a strong hemostatic and innate immune response 11,13,20-22. Despite these host responses, I. scapularis can feed for several days because tick saliva contains proteins that are immunomodulatory, lytic agents, anticoagulants, and fibrinolysins to aid the tick feeding 3,11,20,21,23. The immunomodulatory activities possessed by tick saliva or salivary gland extract (SGE) facilitate transmission, proliferation, and dissemination of numerous tick-borne pathogens 3,20,24-27. To further understand how tick-borne infectious agents cause disease it is essential to dissect actively feeding ticks and collect tick saliva. This video protocol demonstrates dissection techniques for the collection of hemolymph and the removal of salivary glands from actively feeding I. scapularis nymphs after 48 and 72 hours post mouse placement. We also demonstrate saliva collection from an adult female I. scapularis tick.

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

The collection of infected tick hemolymph, salivary glands, and saliva is important to study how tick-borne pathogens cause disease. In this protocol we demonstrate how to collect hemolymph and salivary glands from feeding Ixodes scapularis nymphs. We also demonstrate saliva collection from female I. scapularis adults.

Ixodes Scapularis 진드기의 타액, 침샘 및 Hemolymph 컬렉션

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Highly Resolved Intravital Striped-illumination Microscopy of Germinal Centers

Monitoring cellular communication by intravital deep-tissue multi-photon microscopy is the key for understanding the fate of immune cells within thick tissue samples and organs in health and disease. By controlling the scanning pattern in multi-photon microscopy and applying appropriate numerical algorithms, we developed a striped-illumination approach, which enabled us to achieve 3-fold better axial resolution and improved signal-to-noise ratio, i.e. contrast, in more than 100 &#181;m tissue depth within highly scattering tissue of lymphoid organs as compared to standard multi-photon microscopy. The acquisition speed as well as photobleaching and photodamage effects were similar to standard photo-multiplier-based technique, whereas the imaging depth was slightly lower due to the use of field detectors. By using the striped-illumination approach, we are able to observe the dynamics of immune complex deposits on secondary follicular dendritic cells &#8211; on the level of a few protein molecules in germinal centers.

High-resolution intravital imaging with enhanced contrast up to 120 &#181;m depth in lymph nodes of adult mice is achieved by spatially modulating the excitation pattern of a multi-focal two-photon microscope. In 100 &#181;m depth we measured resolutions of 487 nm (lateral) and 551 nm (axial), thus circumventing scattering and diffraction limits.

어린 싹 센터의 높은 해결의 intravital 스트라이프 - 조명 현미경

Monitoring cellular communication by intravital deep-tissue multi-photon microscopy is the key for understanding the fate of immune cells within thick ...

Intravital Microscopy Imaging of the Liver following Leishmania Infection: An Assessment of Hepatic Hemodynamics

Intravital microscopy (IVM) is a powerful optical imaging technique that has made possible the visualization, monitoring and quantification of various biological events in real time and in live animals. This technology has greatly advanced our understanding of physiological processes and pathogen-mediated phenomena in specific organs.
In this study, IVM is applied to the mouse liver and protocols are designed to image in vivo the circulatory system of the liver and measure red blood cell (RBC) velocity in individual hepatic vessels. To visualize the different vessel subtypes that characterize the hepatic organ and perform blood flow speed measurements, C57Bl/6 mice are intravenously injected with a fluorescent plasma reagent that labels the liver-associated vasculature. IVM enables in vivo, real time, measurement of RBC velocity in a specific vessel of interest. Establishing this methodology will make it possible to investigate liver hemodynamics under physiological and pathological conditions. Ultimately, this imaging-based methodology will be important for studying the influence of L. donovani infection&#160;on hepatic hemodynamics.
This method can be applied to other infectious models and mouse organs and might be further extended to pre-clinical testing of a drug&#8217;s effect on inflammation by quantifying its effect on blood flow.

Intravital Microscopy Imaging of the Liver following Leishmania Infection: An Assessment of Hepatic Hemodynamics

This article reports on a detailed method for the dynamic measurement and quantification of blood flow velocity within individual blood vessels of the mouse liver vasculature using intravital microscopy imaging in combination with a specific methodology for image acquisition and analysis.

다음 간 생체 내에 현미경 이미징<em&gt; 슈만 편모충</em&gt; 감염 : 간 혈류의 평가

Intravital microscopy (IVM) is a powerful optical imaging technique that has made possible the visualization, monitoring and quantification of various ...

Long Term Intravital Multiphoton Microscopy Imaging of Immune Cells in Healthy and Diseased Liver Using CXCR6.Gfp Reporter Mice

Liver inflammation as a response to injury is a highly dynamic process involving the infiltration of distinct subtypes of leukocytes including monocytes, neutrophils, T cell subsets, B cells, natural killer (NK) and NKT cells. Intravital microscopy of the liver for monitoring immune cell migration is particularly challenging due to the high requirements regarding sample preparation and fixation, optical resolution and long-term animal survival. Yet, the dynamics of inflammatory processes as well as cellular interaction studies could provide critical information to better understand the initiation, progression and regression of inflammatory liver disease. Therefore, a highly sensitive and reliable method was established to study migration and cell-cell-interactions of different immune cells in mouse liver over long periods (about 6 hr) by intravital two-photon laser scanning microscopy (TPLSM) in combination with intensive care monitoring.
The method provided includes a gentle preparation and stable fixation of the liver with minimal perturbation of the organ; long term intravital imaging using multicolor multiphoton microscopy with virtually no photobleaching or phototoxic effects over a time period of up to 6 hr, allowing tracking of specific leukocyte subsets; and stable imaging conditions due to extensive monitoring of mouse vital parameters and stabilization of circulation, temperature and gas exchange.
To investigate lymphocyte migration upon liver inflammation CXCR6.gfp knock-in mice were subjected to intravital liver imaging under baseline conditions and after acute and chronic liver damage induced by intraperitoneal injection(s) of carbon tetrachloride (CCl4).
CXCR6 is a chemokine receptor expressed on lymphocytes, mainly on Natural Killer T (NKT)-, Natural Killer (NK)- and subsets of T lymphocytes such as CD4 T cells but also mucosal associated invariant (MAIT) T cells1. Following the migratory pattern and positioning of CXCR6.gfp+ immune cells allowed a detailed insight into their altered behavior upon liver injury and therefore their potential involvement in disease progression.

Stable intravital high-resolution imaging of immune cells in the liver is challenging. Here we provide a highly sensitive and reliable method to study migration and cell-cell-interactions of immune cells in mouse liver over long periods (about 6 hours) by intravital multiphoton laser scanning microscopy in combination with intensive care monitoring.

CXCR6.Gfp 기자 마우스를 사용하여 건강하고 병에 걸린 간에서 면역 세포의 장기 생체 내에 다중 광자 현미경 이미징

Liver inflammation as a response to injury is a highly dynamic process involving the infiltration of distinct subtypes of leukocytes including monocytes, ...

Intravital Microscopy of Leukocyte-endothelial and Platelet-leukocyte Interactions in Mesenterial Veins in Mice

Intravital microscopy is a method that can be used to investigate different processes in different regions and vessels in living animals. In this protocol, we describe intravital microscopy of mesentery veins. This can be performed in a short period of time with reproducible results showing leukocyte-endothelial interactions in vivo. We describe an inflammatory setting after LPS challenge of the endothelium. But in this model one can apply many different types of inflammatory conditions, like bacterial, chemical or biological and investigate the administration of drugs and their direct effects on the living animal and its impact on leukocyte recruitment. This protocol has been applied successfully to a number of different treatments of mice and their effects on inflammatory response in vessels. Herein, we describe the visualization of leukocytes and platelets by fluorescently labeling these with rhodamine 6G. Additionally, any specific imaging can be performed using targeted fluorescently labeled molecules.

This simplified application of intravital microscopy of mesentery veins in mice can be used in different models of inflammation to observe leukocyte-endothelial and platelet-leukocyte interactions.

마우스의 Mesenterial 혈관에서의 생체 내에 현미경 백혈구 - 내피 세포와 혈소판 - 백혈구 상호 작용

Intravital microscopy is a method that can be used to investigate different processes in different regions and vessels in living animals. In this ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced saliva production. Similarly, saliva production is severely compromised in patients receiving radiation treatment for head and neck cancers. Rodent models, developed to mimic these clinical conditions, facilitate an understanding of the disease pathogenesis and allow for the development of new therapeutic strategies. Therefore, the ability to accurately, reproducibly, and repeatedly measure salivary gland function in animal models is critical. Building on procedures previously described in the literature, a method was developed that meets these criteria and was used to evaluate salivary gland function in mice. An additional advantage of this new method is that it is easily mastered, and has little inter-operator variation. Salivary gland function is evaluated as the amount (weight or volume) or rate (mL/min) of saliva produced in response to pilocarpine stimulation. The collected saliva is a good source for the analyses of protein content, immunoglobulin concentrations, and other biomolecules.

Salivary gland hypofunction is a frequent consequence of autoimmune disease and radiation therapy. Reproducible evaluation of salivary gland function in mouse models of these diseases is a technical challenge. Here, a simple method for accurate and reproducible measurement of saliva production in mice is described.

쥐에 있는 침 샘 기능의 측정 하는 방법

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...