우리는 브리트니 일과 그들의 기술 지원에 대 한 제시카 Onyak와 박사 류 알려주셔서 친절 하 게 그의 epifluorescent 현미경을 사용 하 여 감사 하 고 싶습니다. 지원의 승인: NIH R15EY026255-01 '과 칼 Kirchgessner 재단.

<ol>
	<li>Applebury, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+murine+cone+photoreceptor:+A+single+cone+type+expresses+both+S+and+M+opsins+with+retinal+spatial+patterning.">The murine cone photoreceptor: A single cone type expresses both S and M opsins with retinal spatial patterning.</a> Neuron. 27 (3), 513-523 (2000).</li><li>Hughes, S., Watson, T. S., Foster, R. G., Peirson, S. N., Hankins, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonuniform+distribution+and+spectral+tuning+of+photosensitive+retinal+ganglion+cells+of+the+mouse+retina.">Nonuniform distribution and spectral tuning of photosensitive retinal ganglion cells of the mouse retina.</a> Curr Biol. 23 (17), 1696-1701 (2013).</li><li>Sondereker, K. B., Onyak, J. R., Islam, S. W., Ross, C. L., Renna, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanopsin+ganglion+cell+outer+retinal+dendrites:+Morphologically+distinct+and+asymmetrically+distributed+in+the+mouse+retina.">Melanopsin ganglion cell outer retinal dendrites: Morphologically distinct and asymmetrically distributed in the mouse retina.</a> J Comp Neurol. 525 (17), 3653-3665 (2017).</li><li>Bleckert, A., Schwartz, G. W., Turner, M. H., Rieke, F., Wong, R. O. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+space+is+represented+by+nonmatching+topographies+of+distinct+mouse+retinal+ganglion+cell+types.">Visual space is represented by nonmatching topographies of distinct mouse retinal ganglion cell types.</a> Current Biology. 24 (3), 310-315 (2014).</li><li>Warwick, R. 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L., Pasini, S., Cooper, M. L., Lambert, W. S., Calkins, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axogenic+mechanism+enhances+retinal+ganglion+cell+excitability+during+early+progression+in+glaucoma.">Axogenic mechanism enhances retinal ganglion cell excitability during early progression in glaucoma.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. , (2018).</li><li>Estevez, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Form+and+function+of+the+M4+cell,+an+intrinsically+photosensitive+retinal+ganglion+cell+type+contributing+to+geniculocortical+vision.">Form and function of the M4 cell, an intrinsically photosensitive retinal ganglion cell type contributing to geniculocortical vision.</a> J Neurosci. 32 (39), 13608-13620 (2012).</li><li>Kolesnikov, A. V., Kefalov, V. 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D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standard+anatomical+and+visual+space+for+the+mouse+retina:+Computational+reconstruction+and+transformation+of+flattened+retinae+with+the+Retistruct+package.">Standard anatomical and visual space for the mouse retina: Computational reconstruction and transformation of flattened retinae with the Retistruct package.</a> PLoS Comput Biol. 9 (2), 1002921 (2013).</li></ol>

저자는 공개 없다.

확인 하 고 해 부 공간에서 격리 된 마우스 망막의 방향을 라벨 없음, 표준화 된 프로토콜이 되었습니다. 프로토콜 상세 표준화 함으로써이 공 허를 채우기 위해 시도 여기 고 깊은 해부학 적 랜드마크를 사용 하는 방법을 자세히 참조 포인트를 안정적으로 망막 방향을 식별 합니다. 그것은이 프로토콜에서 깊은 해 부 랜드마크 방향을 마우스 망막 각 막 화상22같은 피상적인 랜드마크 보다 더 정확 하 고 안정적인 방법을 제공 표시 되었습니다. 따라서, 망막 방향에 대 한 각 막 화상에 의존 해야 하는 연구 방향 곧바로 근육, 맥락 막 균열 등 랜드마크에 의존 해야 하는 연구 보다 큰 오류 했다가지고 수 있습니다. 이 불일치에 대 한 필요성 및 결과 해석 하 고 연구 된 정확한 망막 오리엔테이션 사이 비교에 관하여이 표준화 된 프로토콜의 중요성을 강조 표시 합니다. 전반적으로, 표준화 된 프로토콜 제공할 것입니다 비전 연구자에 따라, 일반적인 방법은 망막을 식별 하기 위한 비 표준화 된 방법의 사용으로 발생할 수 있는 데이터 수집에 혼란 변수의 존재 없다 방향입니다.
여기에 제시 된 방법 쉽게 반복 하 고 실험 프로토콜의 많은 종류에 적용할 수 있습니다. 사실,이 프로토콜의 가장 큰 장점 중 하나는 그것의 적응성입니다. 맥락 막의 균열, s opsin 표현과 곧바로 근육 랜드마크 모든 발견 되었습니다 안정적으로 망막 방향22 를 식별 하기 때문에 랜드마크 실험적인 매개 변수에 가장 적합 한 데이터 수집 (테이블을 최적화 하기 위해 선택 될 수 있다 1). 또한, 해 부의 방법을 더 망막의 방향을 명확히 하기 위하여 결합 될 수 있다. 예를 들어 맥락 막 게 인하 결합 될 수 있다 s opsin immunohistochemistry 망막의 모든 4 개의 극의 방향을 위해: 맥락 막 게 상처, 비 강 및 일시적인 반구를 식별할 수 있습니다 및 s opsin immunohistochemistry 식별할 수 복 부와 등 쪽 반구입니다. 그러나,이 프로토콜의 적응성 생리학 실험의 시간-민감한 성격에 의해 제한 될 수 있습니다. 랜드마크를 식별, 각 막 화상, 고 구호 컷을 실행 하는 데 걸리는 시간 ex vivo 실험에서 중요 한 조직의 죽음 귀 착될 수 있었다, 때문에 일부 이러한 절 개 방법의 최적의 수 있습니다. 다행히도, 깊은 랜드마크를 식별 하 고를 완화 하는 것 맥락 막 균열 또는 우수한 곧바로 근육 해 부 방법, 익숙한 되고있다 일단 인하 해 부 루틴의 일부가 빠르고 크게 추가 하지 마십시오 해 부의 길이입니다. 우리는 여기서 설명 하는 단계 시간에 매우 민감한 실험 시간에 추가할 수 없습니다 인정 할 조직의 생존 능력은 더 이상 문제 (그림 3 때 망막 방향 특별 게시물 에 대 한 s opsin 그라디언트를 사용 하 여 것이 좋습니다. ). S opsin로 모든 4 개의 극을 식별할 수 있는 망막, 하는 효과적인 방법에 대 한 망막을 얼룩이 지기: s opsin 얼룩 망막 등 쪽과 복 부 극으로 나누고 비 강 및 임시의 식별 여부에 따라 기둥을 허용 망막 오른쪽 또는 왼쪽 눈 (그림 3)에서 이다. 따라서, 우리는이 프로토콜 실험적인 매개 변수를 충족 수 있습니다 정확 하 게 망막 방향에 대 한 방법의 안정적이 고 반복 가능한 집합을 제공 믿습니다.
어떤 수정 된 망막 해 부 해 부 방법의 타당성은는 것과 고립 된 조직의 품질의 정확도 의해 제한 됩니다. 어떤 조직을 절 개 하는 동안 손실 됩니다 경우는 망막은 너무 정확한 재건에 대 한 손상, Retistruct 및 MATLAB 프로그램 되지 않습니다 안정적으로 재구성 하거나 망막의 방향을. 그것은 따라서 실험 데이터를 수집 하기 위해 그것을 사용 하 여 전에 절 개 방법을 연습 하는 것이 중요입니다. 해의 종류 설명 여기 어려운 되지 않습니다, 하는 동안 그들은 특정 랜드마크 망막 방향 식별의 반복성을 보장 하기 위해 연습 해야 합니다. 또한, 올바른 랜드마크 특정 게 데이터 수집을 시작 하기 전에 해부학 적 랜드마크를 시각적으로 식별 하는 것 연습 사용이 필수적입니다. 특정 것의 정확성을 확인 하는 방법 중 하나는 어느 맥락 막 균열 수 있도록 인하 또는 우수한 곧바로 근육 하 고 고정된 표식 이며 따라서 dissectio의 정확도에 의존 하지 않습니다 이후 s opsin 그라데이션을 상처의 위치 비교 명. 잠재적인 dissectors 또한 인하는 그림 1 에 표시 된 정확한 랜드마크와 재건된 망막의 예에 그들의 재건된 망막을 비교할 수 있습니다 및 그림 2. 본질적으로, 잠재적인 것 특정 해 부 형식에 대해이 프로토콜에서 설명 하는 단계를 수행 해야 합니다, 여부 우수한 곧바로 근육 또는 맥락 막 균열 방법, 및 s opsin 그라데이션 설정의 유효성을 결과 비교할 수는 특정 것입니다. 것은 랜드마크의 위치에 대해 확실 하지 않으면 망막의 부정확 한 방향으로 될 수 있기 때문에 것입니다 기본적으로 영향을 데이터 수집 및 해석.

망막 신경 과학의 중요 하 고 때로는 간과 측면은 전기 생리학 기록 실에서 또는 조직학 슬라이드에 망막의 방향을 적절 한 방향 및 고립 된 전체 마운트 망막의 분석 이다. 이것은 포유류 시각 시스템의 조사에 대 한 가장 널리 사용 되는 모델은 현재 마우스 망막과 관련 된 연구를 위해 특히 중요 하다. 최근의 발견 공개 마우스 망막이 공간적으로 균일 하지만 melanopsin 신경 절 세포, 과도 OFF-알파 신경 절 세포, 원뿔 opsins1,2 등 기능적으로 뚜렷한 망막 세포 유형의 밀도 및 크기 그라디언트는 ,3,,45. 따라서, 망막의 방향을 결정 하는 데 사용 하는 방법 실험 결과 셀 형식 또는 opsin 배포판2,,36을 포함을 영향을 미칠 수 방향 선택의 방향 조정 신경 절 세포7,,89, 그리고 망막 변성10,,1112,13,14의 지형 패턴 . 사실, 안 보고 어떻게 망막 방향을 보고 발생할 수 있습니다 불일치 문학과 혼란에 연구 사이의 데이터를 비교 하려고 할 때. 그것은 따라서 연구팀은 이러한 연구의 결과 정확 하 게 해석 될 수 있도록 망막의 방향을 식별 하는 방법 보고.
망막 방향 일반적으로 안구 enucleation1,3,12,,1516,17 이전 등, 복 부, 비 강 또는 일시적인 각 막 점수 구분 ,,1819 또는 절단 또는 깊은 해 부 눈 아 안구 근육6,7같은 얼룩, 맥락 막 게20,21, 또는 s-opsin 그라데이션2,3. 곧바로 근육 식별 하는 등, 복 부, 비음, 일시적인 망막 우수한 곧바로, 열 등 곧바로, 중간 곧바로, 또는 측면 곧바로 근육, 깊은 구호 컷 하나의 첨부 파일을 양분 하 여 각각 사용할 수 있습니다. 그러나, 대부분의 실험에 대 한 하나의 곧바로 근육을 사용 하 여 망막22방향을 위해 충분 하다. 맥락 막 게 눈 개발의 나머지는 눈의 뒤에 희미 한 가로 라인으로 볼 수 있습니다. 이 선의 각 끝 비음 또는 세계23의 시간 극에서 종료합니다. 마지막으로, s-opsin 식 쥐, 복 부 망막에 비대칭으로 배포 되 고 s opsin 항 체 immunohistochemical 실험1에서 복 부 망막을 사용할 수 있습니다.
최근 작품 Stabio, 외. 22 각 막 화상 등 피상적인 눈 랜드마크는 해 부 공간, 인간의 오류 및 임시 및 중간 사용 하는 경우 각 막 화상에 변화 가능성이 높습니다에 망막 방향을 위한 덜 안정적인 방법 시연 참조 점으로 canthi입니다. 반면, 우수한 곧바로 근육, 맥락 막 균열 및 s opsin 그라데이션 같은 깊은 랜드마크 망막22방향을 위한 더 안정적이 고 정확한 랜드마크 될 표시 되었습니다. 그러나, 이러한 해부학 적 랜드마크의 식별 문학에서 자세히 설명 되지 않은 독특한 절 개 단계를 요구 한다. 따라서,이 프로토콜의 목표는 우수한 곧바로 근육, 맥락 막 균열 및 s opsin 그라디언트를 사용 하 여 마우스 망막의 공간적 방향 정확 하 게 식별 하는 방법에 대 한 포괄적인 자습서를 제공 하는 것입니다. 또한, 우리는 두 s opsin 항 체, s opsin immunohistochemistry에 대 한 프로토콜의 효과의 비교를 포함 했다.
정확 하 게 망막 방향에 의존 하는 연구를 한 추가 도전 wholemount 망막 녹음 실, 접시, 또는 슬라이드에 병합 하는 데 필요한 큰 구호 컷입니다. 이 편평한 2 차원 구조로 군데는 무엇 인지 자연스럽 게 3 차원 구조 분석에 대 한 문제를 발생할 수 있습니다. Retistruct24 라는 프로그램 돌아갑니다 플랫 wholemount 망막의 3 차원 구조 그것에서 수집 된 데이터를 분석 하기 전에 사용할 수 있습니다. 따라서,이 프로토콜의 섹션 Retistruct 소프트웨어를 사용 하 여 s opsin immunostained 마우스 망막을 재구성 하는 데 필요한 단계를 강조 전용입니다. 우리는 또한 s opsin로 얼룩진 정확 하 게 회전 하 고 동양 마우스 망막에 개발 되었다 우리의 사용자 정의 MATLAB 스크립트를 사용 하 여 프로토콜의 섹션을 포함.

<table><tbody><tr><td>0.1 M Phosphate Buffered Saline</td><td>Sigma-Aldrich&amp;nbsp;</td><td>P5244</td><td></td></tr><tr><td>Axioplan2 Epifluorescent Microscope</td><td>Zeiss</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Clear Nailpolish</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Corning LSE Low Speed Orbital Shaker</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS6780FP</td><td></td></tr><tr><td>Costar TC-Treated 24-well Plates</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS3524</td><td></td></tr><tr><td>Dissection Microscope</td><td>Olympus</td><td>SZ51</td><td></td></tr><tr><td>Donkey anti-Goat Alexa 594</td><td>Life Technologies&amp;nbsp;</td><td>A11058</td><td></td></tr><tr><td>Donkey anti-Rabbit Alexa 594</td><td>Life Technologies&amp;nbsp;</td><td>A21207</td><td></td></tr><tr><td>Donkey Normal Serum</td><td>Millipore</td><td>566460</td><td>Use at 5.2% (52 &amp;mu;L with 86 &amp;mu;L of 20% Triton X-100 and 863 &amp;mu;L of 0.1M PBS for 1 mL of blocking solution)</td></tr><tr><td>Fisherbrand Superfrost Plus Microscope Slides</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>Goat anti-s-opsin</td><td>Santa Cruz Biotechnologies&amp;nbsp;</td><td>sc-14363</td><td>Not commerically available as of 2017</td></tr><tr><td>Graefe Curved Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ or FIJI</td><td>National Institute of Health</td><td>N/A</td><td>Freely available software</td></tr><tr><td>Low Temperature Cautery Ophthalmic Fine Tip Cauterizer</td><td>Bovie Medical Corporation</td><td>AA00</td><td></td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>MathWorks</td><td>N/A</td><td>At least version 2007b or later</td></tr><tr><td>Micro Cover Glasses&amp;nbsp;</td><td>VWR International</td><td>48393-241</td><td></td></tr><tr><td>Micro Slide Trays</td><td>VWR International</td><td>82020-913</td><td></td></tr><tr><td>Moira Ultra Fine Forceps</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>11370-40</td><td></td></tr><tr><td>Nitrocellulose membrane</td><td>Millipore</td><td>HAWP04700</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15714-S</td><td>Use at 4% (25 &amp;mu;L and 875 &amp;mu;L of 0.1 M PBS for 1 mL of fixative)</td></tr><tr><td>PrecisionGlide Needle 20G (0.90 mm x 25 mm)&amp;nbsp;</td><td>BD PrecisionGlide</td><td>305175</td><td></td></tr><tr><td>Pyrex Glass Petri Dish</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS3160152</td><td></td></tr><tr><td>R</td><td>The R Project for Statistical Computing</td><td>N/A</td><td>Freely available software; version 3.4.3 or later</td></tr><tr><td>Rabbit anti-s-opsin</td><td>Millipore</td><td>ABN1660</td><td></td></tr><tr><td>Retiga R3 Microscope Camera</td><td>Qimaging</td><td>01-RET-R3-R-CLR-14-C</td><td></td></tr><tr><td>Retistruct</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Freely available software&amp;nbsp; compatiable with Windows 7 or Windows 10</td></tr><tr><td>Shandon Aqua-Mount Slide Mounting Media</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-390-5</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td>Use 1.7% (86 &amp;mu;L of 20% Triton-X with 52 &amp;mu;L of Donkey Normal Serum and 863 &amp;mu;L of 0.1 M PBS for 1 mL of blocking solution)</td></tr><tr><td>Vannas Spring Dissection Scissors&amp;nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-03</td><td></td></tr><tr><td>5MP USB Microscope Digital Camera</td><td>AmScope</td><td>MU500</td><td>To be used with the Olympus Dissection Microscope</td></tr></tbody></table>

where you cut matters: a dissection and analysis guide for the spatial orientation of the mouse retina from ocular landmarks

시각 신경 과학, 밀도의 분석 및 망막 세포 유형의 크기 그라디언트를 포함 하 여 많은 연구에 대 한 중요 하다 정확 하 고 안정적으로 식별 격리 된 마우스 망막의 공간적 방향 방향 선택의 방향 조정 신경 절 세포와 일부 망막 질병에 지형 변성 패턴의 시험. 그러나, 많은 다른 눈 해 부 문학에서 보고 된 사용 되는 방법이 식별 하 고 레이블을 마우스 망막에서 망막 방향 있다. 방향 등의 연구에 사용 하는 방법 자주 간과 하지 보고 어떻게 망막 방향 결정 됩니다 발생할 수 있습니다 불일치 문학과 혼란에 연구 사이의 데이터를 비교 하려고 할 때. 각 막 화상 등 피상적인 눈 랜드마크는 일반적으로 사용 하지만 최근 곧바로 근육, 맥락 막의 균열, 또는 s opsin 그라데이션 같은 깊은 랜드마크 보다 덜 신뢰할 수 표시 되었습니다. 여기, 우리는 정확 하 게 해 부하 고 격리 된 마우스 망막의 공간적 방향 문서화 깊은 눈 건축물의 사용에 대 한 포괄적인 가이드를 제공 합니다. 우리는 또한 두 s opsin 항 체의 효과 비교 하 고 s opsin immunohistochemistry에 대 한 프로토콜을 포함. S-opsin 그라데이션에 따라 망막의 Retistruct 소프트웨어와 함께 망막 재건 및 회전 사용자 지정 코드를 해야 하므로 우리 모두이 프로그램을 사용 하는 데 필요한 중요 한 단계를 제시 했습니다. 전반적으로,이 프로토콜의 목표 안정적이 고 반복 가능한 가장 실험 프로토콜에는 정확 하 게 망막 방향 위한 메서드 집합을 제공 하는. 이 작품의 지배적인 목표는 망막 방향 방법 미래 연구에 대 한 표준화입니다.

정확 하 고 확실 하 게 우수한 곧바로 근육을 양분 하는 하나의 구호 컷 등 쪽 망막 (그림 1)를 식별 합니다. 맥락 막 게 정확 하 고 안정적으로 시간적 및 비 강 맥락 막 균열 (그림 2)에 따라 깊은 구호 상처와 비 강 및 일시적인 망막을 식별합니다. 이 예제에서는 구호 컷도 했다 등 망막에 식별 (그림 2D, 수직 화살표) 망막의 등/복 부 축. 이 프로세스의 단계는 미래 dissectors에 의해 복제의 목적을 위해 표시 됩니다. S-opsin immunohistochemistry의 조합 (그림 3A 및 3D), Retistruct 소프트웨어 (3B, 3E)와 개조와 사용자 지정 MATLAB 코드 (3 C, 3 층)와 함께 정확한 회전 수는 비 강 및 일시적인 극 알려져 있다 (그림 3) 오른쪽 또는 왼쪽 눈에서 망막 인지 하는 경우는 망막의 복 부와 등 쪽으로 식별. 우리는 또한 라벨 s opsin 콘 (그림 4A-D)에 효과 대 한 두 가지 일반적으로 사용 되는 s opsin 기본 항 체 비교: 두 염소 안티-s-opsin 기본 항 체와 토끼 안티-s-opsin 1 차적인 항 체 효과적으로 라벨 동일한 마우스에서 s opsin 콘 (그림 4E)
덜어 컷 s opsin immunostained 재건 망막에 발견 했다 하 고 그들의 위치 s opsin 그라데이션에 의해 결정 하는 방향으로 비교 했다. 우리의 사용자 정의 MATLAB를 사용 하 여 코드 ( 보충 자료참조), 망막 s opsin 얼룩의 높은 농도 ventrally, 따라서 진정한 배치 되도록 회전 정확 하 게 했다 (대 한 우수한 곧바로) 90 °, 0 ° (코에서 진정한 코 등 맥락 막 게) 180 ° (시간적 맥락 막 게)에서 임시 진정한. 각도 잘라 덜어 각각의 값은 후 망막 s opsin 그라데이션에 따라 회전 했다 ImageJ의 각 도구를 사용 하 결정 했다. 각 구호 컷 유형 평균 각도 계산 하 고 각 구호 컷된 타입의 평균 값 다음 극좌표 플롯 (그림 6)에 표시 했다. 평균적으로, 우수한 곧바로 근육 상처 확인 96.3 ± 4.3 °에 지 극 (n = 11) (그림 6). 비 강 맥락 막 게 식별 6.7 ± 5.8 °에서 비 강 극 하 고 시간적 맥락 막 게 식별 172.0 ± 4.4 °에 측 두 엽 극 (n = 9; 그림 6)입니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57861/57861fig1.jpg"> 그림 1: 우수한 곧바로 근육을 사용 하 여 정확 하 게 식별 하는 오른쪽 눈의 등 쪽 망막에. (A)로 팁 펜 (흰색 화살표)로 만든 scleral 각 막 국경 근처 등 각 막 화상의 예. 우수한 곧바로 근육이이 보기 (흰색 화살표)에 표시 이기도합니다. (B)는 전체 예는 구호와 함께 탑재 된 망막 잘라 우수한 곧바로 근육을 양분 하 여 등 쪽 망막에 만든. 화살표 등 망막에 우수한 곧바로 근육을 양분 하 여 만든 컷을 덜어 깊은 묘사. 망막은 1 차적인 항 체 염소 안티-s-opsin 물 ( 재료의 표참조) 및 이차 항 체 당나귀 안티 염소 알 렉 사 594 ( 테이블의 자료를 참조 하십시오 여기: 590 nm; 방출: 620 nm) (청록색). 망막은 텍사스 레드 필터 epifluorescent 현미경으로 몇 군데 (595 nm). (C) A 망막 Retistruct 재건축 및 MATLAB 코드를 사용자 정의 회전 ( 보충 자료참조)는 우수한 곧바로 근육을 덜어 볼 수 컷 (흰색 화살표)와 함께. D: 등, v: 복 부, t: 시간, n: 비음. 스케일 바 = 1 m m. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57861/57861fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57861/57861fig2.jpg"> 그림 2: 오른쪽 눈의 망막의 비 강 및 시간 폴란드를 정확 하 게 식별 하는 맥락 막 게를 사용 하 여. (A)로 팁 펜으로 만든 scleral 각 막 국경 근처 등 각 막 화상의 예. (B)는 맥락 막 게 sclera (흰색 화살표)에 눈의 뒤에 보이는. 등 각 막 화상 또한 시간적 맥락 막 균열에서 약 90 °에 위치한이 보기에 표시 됩니다. Scleral 각 막 경계에 시 신경에서 여행 sclera 눈의 뒷면에 표시 (C) 맥락 막의 균열. (D) A 망막 염소 안티-s-opsin 물 ( 재료의 표참조) 및 이차 항 체 당나귀 안티 염소 알 렉 사 594 ( 테이블의 자료를 참조 하십시오 여기: 590 nm; 방출: 620 nm) 맥락 막 게 인하 (가로 (녹청) 화살표) (수직 화살표)를 잘라 등 완화. 망막은 텍사스 레드 필터 epifluorescent 현미경으로 몇 군데 (595 nm). (E)는 망막 Retistruct에 재건 된 고 등 구호 컷와 비 강 및 시간적 맥락 막 게 컷 표시 (흰색 화살표) 사용자 지정 MATLAB 코드 (보충 자료 참조)와 함께 회전. D: 등, v: 복 부, t: 시간, n: 비음. 스케일 바 = 1 m m. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57861/57861fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57861/57861fig3.jpg"> 그림 3: s-opsin 그라디언트를 사용 하 여 망막의 모든 4 개의 기둥을 식별 하. (A)는 망막의 예는 오른쪽 눈 immunostained s opsin 레이블이 되었으며 텍사스 레드 필터 epifluorescent 현미경으로 몇 군데에서 해 부 (595 nm). 이 망막에 상처는 임의 지형 방향 s opsin 그라데이션에 의해 결정 됩니다. (B) Retistruct와 A에 망막을 재구성의 결과. 그 s opsin 그라데이션 올바르게 정렬 되지 망막 사용자 지정 MATLAB 코드 ( 보충 자료참조)를 통해 실행 하지 않은 때문에 알 수 있습니다. (C) 회전 하는 사용자 지정 코드 A에서 망막의 결과. 망막은 s opsin 얼룩의 높은 농도 하단에 회전 하 고 복 부 망막으로 식별. 오른쪽 눈에서 망막 이므로 일시적인 극은 지 느 러 미 극에서 시계 반대 방향으로 위치 90 ° 이며 비 극 위치 90 ° 등 극에서 시계 방향으로. (D)는 망막의 예 s opsin 라벨 immunostained 되었으며 텍사스 레드 필터 몇 군데 왼쪽된 눈에서 해 부 (595 nm). 이 망막에 상처는 임의 지형 방향 s opsin 그라데이션에 의해 결정 됩니다. (E) 디지털 d Retistruct와 망막을 재구성의 결과. 그 s opsin 그라데이션 올바르게 정렬 되지 때문에 망막에는 사용자 지정 코드에 의해 회전 되지 알 수 있습니다. (F) 사용자 지정 코드와 함께 d에서 망막 회전의 결과. 망막은 s opsin 얼룩의 높은 농도 하단에 회전 하 고 복 부 망막으로 식별. 왼쪽된 눈에서 망막 이므로 코 극 위치 90도 시계 반대 방향으로 지 느 러 미 극에서 이며 일시적인 극 등 극에서 시계 방향으로 위치한 90 ° 이다. D: 등, v: 복 부, t: 시간, n: 비음. 스케일 바 = 1 m m. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57861/57861fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57861/57861fig4.jpg"> 그림 4: 라벨 s opsin 콘에서 두 개의 기본 s opsin 항 체의 비교. (A) A 망막 염소 안티-s-opsin 1 차적인 항 체 물 ( 재료의 표참조). (B) 같은 마우스의 다른 망막 토끼 항 체 안티-s-opsin 기본으로 물 ( 재료의 표참조). (C) A 대표 지역 (0.1 x 0.1 m m2) 염소 안티-s-opsin 1 차 항 체로 얼룩진 망막에서. 40 X 확대 epifluorescent 현미경에 찍은 이미지. (D) A 대표 지역 (0.1 x 0.1 m m2)는 망막에서 토끼 안티-s-opsin 물 ( 재료의 표참조), 기본 항 체 대체. 이미지는 40 X 확대 epifluorescent 현미경에서 촬영 됐다. (E) 두 항 체의 콘 외부 세그먼트의 동일한 수 라벨 immunopositive s-콘은 염소 안티-s-opsin와 토끼 안티-s-opsin 테스트 망막에서 스테인드 수에 상당한 차이가 있기 때문에 기발 (n = 2; ANOVA와 임시 게시 Bonferroni 테스트; p > 0.05). 스케일 바 = 1 mm (A-B); 25 µ m (C-D) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57861/57861fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57861/57861fig5.jpg"> 그림 5: 망막 immunostained s opsin로 재구성 하는 Retistruct 소프트웨어를 사용 하는 비주얼 가이드. (A) A 망막 표시 개요 Retistruct에 열 하 고는 "눈물" 추가. "눈물"의 포인트는 겹쳐 흰색 화살표와 함께 표시 됩니다. 이 망막에 모든 상처는 임의 아니 특정 랜드마크 해 부 동안 망막 방향을 표시 하는 데 사용 되었다 있습니다. 중요 한 버튼은 빨간색으로 설명 되어 있습니다. 모든 "눈물" 추가 (B) 망막 그리고 망막의 가장자리에 "D"로 식별 하는 등 망막. "재구성 망막" 버튼 표시는 알. 중요 한 버튼은 빨간색으로 설명 되어 있습니다. (C)는 망막을 재구성 하는 과정. 재건축된 망막의 극 작 녹청 (파란색 화살표 컷된 위치를 명확 하 게 겹쳐)에 상처를 덜어 표시 오른쪽에 표시 됩니다. (D)는 망막 Retistruct 통해 실행의 최종 결과. 원래 wholemount 망막 왼쪽에 남아 있고 재건된 망막 오른쪽에 나타납니다. 덜어 삭감 녹청 (흰색 화살표 컷된 위치를 명확 하 게 겹쳐)에서 볼 수 있습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57861/57861fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57861/57861fig6.jpg"> 그림 6: 우수한 곧바로 근육 및 맥락 막 게 마우스 망막 하 정확 하 게 사용할 수 있습니다. 어느 우수한 곧바로 근육 상처를 덜어에서 얻은 각도의 극좌표 플롯 또는 Retistruct로 재구성 된 망막에 맥락 막 게 인하. 덜어 컷 s opsin immunostained 재건 망막에 발견 했다 하 고 그들의 위치 s opsin 그라데이션의 위치를 비교 했다. 코 (비 강 맥락 막 균열에 대 한 0 °)를 true와 시간적 (180 ° 시간적 맥락 막에 대 한 진정한 s opsin 얼룩의 높은 농도 ventrally 위치, 진정한 지 (90 ° 우수한 곧바로)는 망막을 정확 하 게 회전을 사용자 지정 MATLAB 코드를 사용 하 여, 게) 각 망막에 대 한 결정 했다. 각 개별 덜어 컷된 각도 ImageJ에 평균 각도 결정 했다의 값 형식 잘라 덜어 각 산출 되었다. 우수한 곧바로 근육 상처 확인 96.3 ± 4.3 °에 지 극 (n = 11). 비 강 맥락 막 게 식별 6.7 ± 5.8 °에서 비 강 극 하 고 시간적 맥락 막 게 식별 172.0 ± 4.5 °에 측 두 엽 극 (n = 9). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57861/57861fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td>깊은 랜드마크</td>
			<td>각 막 화상 위치</td>
			<td>식별 하는 망막의 극</td>
			<td>실험적인 응용 프로그램</td>
		</tr>
<tr>
<td>탁월한 곧바로</td>
			<td>지 느 러 미</td>
			<td>지 느 러 미</td>
			<td>라이브 또는 고정</td>
		</tr>
<tr>
<td>비 강 맥락 막 게</td>
			<td>지 느 러 미</td>
			<td>코</td>
			<td>라이브 또는 고정</td>
		</tr>
<tr>
<td>시간적 맥락 막 게</td>
			<td>지 느 러 미</td>
			<td>임시</td>
			<td>라이브 또는 고정</td>
		</tr>
<tr>
<td>S-opsin 그라데이션</td>
			<td>없음</td>
			<td>등, 복 부, 비 강, 시간적</td>
			<td>고정</td>
		</tr>
</tbody></table>표 1: 깊은 랜드마크, 망막의 극 그들은 식별, 그리고 여부 그들은 라이브 또는 고정 조직의 응용 프로그램에 사용할 수 있습니다.

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Where You Cut Matters: A Dissection and Analysis Guide for the Spatial Orientation of the Mouse Retina from Ocular Landmarks

이 프로토콜 하 정확 하 고 확실 하 게 해 부 공간에서 격리 된 마우스 망막 깊은 눈 랜드마크, s opsin immunohistochemistry, Retistruct, 및 사용자 지정 코드의 사용에 대 한 포괄적인 해 부와 분석 가이드를 제공 합니다.

어디 당신이 문제: 한 해 부 자르고 눈 랜드마크에서 마우스 망막의 공간적 방향에 대 한 분석 가이드

Accurately and reliably identifying spatial orientation of the isolated mouse retina is important for many studies in visual neuroscience, including the ...

where-you-cut-matters-dissection-analysis-guide-for-spatial

Research

JoVE Journal

Neuroscience

13.9K 조회수.  The University of Akron. 이 프로토콜 하 정확 하 고 확실 하 게 해 부 공간에서 격리 된 마우스 망막 깊은 눈 랜드마크, s opsin immunohistochemistry, Retistruct, 및 사용자 지정 코드의 사용에 대 한 포괄적인 해 부와 분석 가이드를 제공 합니다.

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Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium

The retinal pigment epithelium (RPE) lies at the back of the mammalian eye, just under the neural retina, which contains the photoreceptors (rods and cones). The RPE is a monolayer of pigmented cuboidal cells and associates closely with the neural retina just above it. This association makes the RPE of great interest to researchers studying retinal diseases. The RPE is also the site of an in vivo assay of homology-directed DNA repair, the pun assay. The mouse eye is particularly difficult to dissect due to its small size (about 3.5mm in diameter) and its spherical shape. This article demonstrates in detail a procedure for dissection of the eye resulting in a whole mount of the RPE. In this procedure, we show how to work with, rather than against, the spherical structure of the eye. Briefly, the connective tissue, muscle, and optic nerve are removed from the back of the eye. Then, the cornea and lens are removed. Next, strategic cuts are made that result in significant flattening of the remaining tissue. Finally, the neural retina is gently lifted off, revealing an intact RPE, which is still attached to the underlying choroid and sclera. This whole mount can be used to perform the pun assay or for immunohistochemistry or immunofluorescent assessment of the RPE tissue.

A formal demonstration of the dissection of a mouse eye, resulting in a whole mount of the retinal pigment epithelium.

망막 안료 상피의 전체 마운트를위한 마우스 아이의 해부

The retinal pigment epithelium (RPE) lies at the back of the mammalian eye, just under the neural retina, which contains the photoreceptors (rods and ...

연구

신경과학

<meta charset="utf8"></head><body>Retinal Pericytes Visualization Using Tissue-Clearing and Fluorescent Labeling

3D Visualization of Retinal Vascular Pericytes in Mice by Immunostaining 

Retinal pericytes are essential for vascular development and stability of the retina, playing a key role in maintaining the integrity of the retinal vasculature. To provide a detailed view of the morphological characteristics of pericytes, this study described a new approach combining the retro-orbital injection of a fluorescent agent, immunofluorescent-staining, and tissue-clearing treatment. Firstly, the fluorescent tomato lectin was injected into the retro-orbital sinus of the live mouse to label the retinal vasculature. After 5 min, the mouse was sacrificed, and its intact retina was carefully removed from the retinal cup and immunofluorescently stained with platelet-derived growth factor receptor &#946; to reveal the pericytes. Additionally, the stained retina was treated with tissue-clearing reagent and whole mounted on the microscope slide. Through these approaches, the retinal vasculature and pericytes were clearly observed in the transparent retina. Under a confocal microscope, we obtained more opportunities to take high-resolution images for further reconstructing and analyzing the morphological characteristics of pericytes along the retinal vascular tree in a three-dimensional view. Methodologically, this protocol offers an effective approach for visualizing pericytes within the retinal vasculature, providing valuable insights into their role under both physiological and pathological conditions.

<meta charset="utf8"></head><body>Immunostaining을 통한 마우스의 망막 혈관 주위 세포의 3D 시각화

The pericytes in retinal vasculature were examined by immunofluorescent staining with platelet-derived growth factor receptor &#946; after retro-orbital injection of fluorescent tomato lectin. The labeled retina was further treated with the tissue-clearing method and whole mounted for visualizing the three-dimensional views of pericytes surrounding retinal vasculature under a confocal microscope.

Immunostaining을 통한 마우스의 망막 혈관 주위 세포의 3D 시각화 

Retinal pericytes are essential for vascular development and stability of the retina, playing a key role in maintaining the integrity of the retinal ...

생화학

Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo

Structural changes in the retina are common manifestations of ophthalmic diseases. Optical coherence tomography (OCT) enables their identification in vivo&#8212;rapidly, repetitively, and at a high resolution. This protocol describes OCT imaging in the mouse retina as a powerful tool to study optic neuropathies (OPN). The OCT system is an interferometry-based, non-invasive alternative to common post mortem histological assays. It provides a fast and accurate assessment of retinal thickness, allowing the possibility to track changes, such as retinal thinning or thickening. We present the imaging process and analysis with the example of the Opa1delTTAG mouse line. Three types of scans are proposed, with two quantification methods: standard and homemade calipers. The latter is best for use on the peripapillary retina during radial scans; being more precise, is preferable for analyzing thinner structures. All approaches described here are designed for retinal ganglion cells (RGC) but are easily adaptable to other cell populations. In conclusion, OCT is efficient in mouse model phenotyping and has the potential to be used for the reliable evaluation of therapeutic interventions.

Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo

This manuscript describes a protocol for the in vivo imaging of the mouse retina with high-resolution spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT). It focuses on retinal ganglion cells (RGC) in the peripapillary region, with several scanning and quantifying approaches described.

광학 일관성 단층 촬영: 마우스 망막 신경 절 세포에서 Vivo에서 화상 진 찰

Structural changes in the retina are common manifestations of ophthalmic diseases. Optical coherence tomography (OCT) enables their identification in ...

In vivo Structural Assessments of Ocular Disease in Rodent Models using Optical Coherence Tomography

Spectral-domain optical coherence tomography (SD-OCT) is useful for visualizing retinal and ocular structures in vivo. In research, SD-OCT is a valuable tool to evaluate and characterize changes in a variety of retinal and ocular disease and injury models. In light induced retinal degeneration models, SD-OCT can be used to track thinning of the photoreceptor layer over time. In glaucoma models, SD-OCT can be used to monitor decreased retinal nerve fiber layer and total retinal thickness and to observe optic nerve cupping after inducing ocular hypertension. In diabetic rodents, SD-OCT has helped researchers observe decreased total retinal thickness as well as decreased thickness of specific retinal layers, particularly the retinal nerve fiber layer with disease progression. In mouse models of myopia, SD-OCT can be used to evaluate axial parameters, such as axial length changes. Advantages of SD-OCT include in vivo imaging of ocular structures, the ability to quantitatively track changes in ocular dimensions over time, and its rapid scanning speed and high resolution. Here, we detail the methods of SD-OCT and show examples of its use in our laboratory in models of retinal degeneration, glaucoma, diabetic retinopathy, and myopia. Methods include anesthesia, SD-OCT imaging, and processing of the images for thickness measurements.

Here, we describe the use of spectral-domain optical coherence tomography (SD-OCT) to visualize retinal and ocular structures in vivo in models of retinal degeneration, glaucoma, diabetic retinopathy, and myopia.

광학 간섭 단층 촬영을 사용한 설치류 모델에서 안구 질환의 생체 내 구조 평가

Spectral-domain optical coherence tomography (SD-OCT) is useful for visualizing retinal and ocular structures in vivo. In research, SD-OCT is a valuable ...

생체공학

Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research

HR-SD-OCT is utilized to monitor the progression of photoreceptor degeneration in live mouse models, assess the delivery of therapeutic agents into the subretinal space, and to evaluate toxicity and efficacy in vivo. HR-SD-OCT uses near infrared light (800-880 nm) and has optics specifically designed for the unique optics of the mouse eye with sub-2-micron axial resolution. Transgenic mouse models of outer retinal (photoreceptor) degeneration and controls were imaged to assess the disease progression. Pulled glass microneedles were used to deliver sub retinal injections of adeno-associated virus (AAV) or nanoparticles (NP) via a trans-scleral and trans-choroidal approach. Careful positioning of the needle into the subretinal space was required prior to a calibrated pressure injection, which delivers fluid into the sub retinal space. Real time subretinal surgery was conducted on our retinal imaging system (RIS). HR-SD-OCT demonstrated progressive uniform retinal degeneration due to expression of a toxic mutant human mutant rhodopsin (P347S) (RHOP347S) transgene in mice. HR-SD-OCT allows rigorous quantification of all the retinal layers. Outer nuclear layer (ONL) thickness and photoreceptor outer segment length (OSL) measurements correlate with photoreceptor vitality, degeneration, or rescue. The RIS delivery system allows real-time visualization of subretinal injections in neonatal (~P10-14) or adult mice, and HR-SD-OCT immediately determines success of delivery and maps areal extent. HR-SD-OCT is a powerful tool that can evaluate the success of subretinal surgery in mice, in addition to measuring vitality of photoreceptors in vivo. HR-SD-OCT can also be used to identify uniform animal cohorts to evaluate the extent of retinal degeneration, toxicity, and therapeutic rescue in preclinical gene therapy research studies.

Here we demonstrate a novel approach to using high resolution spectral-domain optical coherence tomography (HR-SD-OCT) to assist delivery of gene therapy agents into the subretinal space, assess its areal coverage, and characterize photoreceptor vitality.

초고 해상도 마우스 광학 일관성 단층 촬영 망막 유전자 치료 연구에서 안 구내 주사를 돕기 위해

HR-SD-OCT is utilized to monitor the progression of photoreceptor degeneration in live mouse models, assess the delivery of therapeutic agents into the ...

의학

In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

Spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) and scanning laser ophthalmoscopy (SLO) are extensively used in experimental ophthalmology. In the present protocol, mice expressing green fluorescent protein (gfp) under the promoter of Cx3cr1 (BALB/c-Cx3cr1gfp/gfp) were used to image microglia cells in vivo in the retina. Microglia are resident macrophages of the retina and have been implicated in several retinal diseases1,2,3,4,5,6. This protocol provides a detailed approach for generation of retinal B-scans, with SD-OCT, and imaging of microglia cell distribution in Cx3cr1gfp/gfp mice with SLO in vivo, using an ophthalmic imaging platform system. The protocol can be used in several reporter mouse lines. However, there are some limitations to the protocol presented here. First, both SLO and SD-OCT, when used in the high-resolution mode, collect data with high axial resolution but the lateral resolution is lower (3.5 &#181;m and 6 &#181;m, respectively). Moreover, the focus and saturation level in SLO is highly dependent on parameter selection and correct alignment of the eye. Additionally, using devices designed for human patients in mice is challenging due to the higher total optical power of the mouse eye compared to the human eye; this can lead to lateral magnification inaccuracies7, which are also dependent on the magnification by the mouse lens among others. However, despite that the axial scan position is dependent upon lateral magnification, the axial SD-OCT measurements are accurate8.

In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

This protocol describes how high-resolution imaging techniques such as spectral domain optical coherence tomography and scanning laser ophthalmoscopy can be utilized in small rodents, using an ophthalmic imaging platform system, to obtain information on retinal thickness and microglial cell distribution, respectively.

Vivo에서 스펙트럼-도메인 광학 일관성 단층 촬영 스캐닝 레이저 Ophthalmoscopy와 Cx3cr1gfp/gfp 기자 쥐의 이미징

Spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) and scanning laser ophthalmoscopy (SLO) are extensively used in experimental ophthalmology. In the ...

Using Optical Coherence Tomography and Optokinetic Response As Structural and Functional Visual System Readouts in Mice and Rats

Optical coherence tomography (OCT) is a fast, non-invasive, interferometric technique allowing high-resolution retinal imaging. It is an ideal tool for the investigation of processes of neurodegeneration, neuroprotection and neuro-repair involving the visual system, as these often correlate well with retinal changes. As a functional readout, visually evoked compensatory eye and head movements are commonly used in experimental models involving the visual function. Combining both techniques allows a quantitative in vivo investigation of structure and function, which can be used to investigate the pathological conditions or to evaluate the potential of novel therapeutics. A great benefit of the presented techniques is the possibility to perform longitudinal analyses allowing the investigation of dynamic processes, reducing variability and cuts down the number of animals needed for the experiments. The protocol described aims to provide a manual for acquisition and analysis of high quality retinal scans of mice and rats using a low cost customized holder with an option to deliver inhalational anesthesia. Additionally, the proposed guide is intended as an instructional manual for researchers using optokinetic response (OKR) analysis in rodents, which can be adapted to their specific needs and interests.

A detailed protocol for the assessment of structural and visual readouts in rodents by optical coherence tomography and optokinetic response is presented. The results provide valuable insights for ophthalmologic as well as neurologic research.

쥐와 쥐에 구조와 기능적 시각 시스템 판독으로 광학 일관성 단층 촬영 및 Optokinetic 응답을 사용 하 여

Optical coherence tomography (OCT) is a fast, non-invasive, interferometric technique allowing high-resolution retinal imaging. It is an ideal tool for ...

Application of Optical Coherence Tomography to a Mouse Model of Retinopathy

Optical coherence tomography (OCT) offers a noninvasive method for the diagnosis of retinopathy. The OCT machine can capture retinal crosssectional images from which the retinal thickness can be calculated. Although OCT is widely used in clinical practice, its application in basic research is not as prevalent, especially in small animals such as mice. Because of the small size of their eyeballs, it is challenging to conduct fundus imaging examinations in mice. Therefore, a specialized retinal imaging system is required to accommodate OCT imaging on small animals. This article demonstrates a small-animal-specific system for OCT examination procedures and a detailed method for image analysis. The results of retinal OCT examination of very-low-density lipoprotein receptor (Vldlr) knockout mice and C57BL/6J mice are presented. The OCT images of C57BL/6J mice showed retinal layers, while those of Vldlr knockout mice showed subretinal neovascularization and retinal thinning. In summary, OCT examination could facilitate the noninvasive detection and measurement of retinopathy in mouse models.

Here, we describe an in vivo imaging technique using optical coherence tomography to facilitate the diagnosis and quantitative measurement of retinopathy in mice.

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