저자 아무 승인 있다.

1입니다. 셀의 준비
<ol><li>문화 매체의 2 mL에 20000 셀 biosafety 캐비닛에 무 균 기술을 사용 하 여 6 잘 플레이트의 각 음에 플레이트.</li>
	<li>6 잘 플레이트 플레이트에 셀 수 있도록 24 h 습도 인큐베이터 (37 ° C, 5% CO2)에 배치 합니다.</li>
</ol>2. 셀의 처리를 위한 Photosensitizer의 준비
<ol><li>문화 매체에 0.5, 1 및 2 m m 5-ALA 솔루션을 준비 합니다. 소 태아 혈 청 (FBS) 문화 매체의 성분 인 경우에, 준비 하 고 5-ALA 0.1% 문화 매체 솔루션에 포함 된 셀을 치료 FBS 외피에 대 한. 11 , 12 이 경우 SCC-13 셀 필요가 없습니다 FBS, 5 날개 keratinocyte 혈 청 무료 중간 소 뇌 하 수 체 추출 및 표 피 성장 인자 보충에 직접 추가 되었습니다 그래서.</li>
	<li>문화 매체를 발음 하 고 버퍼링 하는 인산 염 (PBS)의 최소 2 mL로 세포를 씻어.</li>
	<li>PBS를 발음 하 고 별도 접시 또는 우물으로 0, 0.5, 1 또는 2 m m 5-ALA 솔루션의 2 개 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>0, 0.5, 1, 셀을 품 어 또는 30 분에 대 한 블록을 난방 36 37 ° C에 2 m m 5-살라는 알루미늄 호 일을 사용 하 여 외피 동안 가벼운 노출에서 세포를 보호 합니다.</li>
	<li>0, 0.5, 1 및 2 m m 5-ALA 솔루션을 발음 하 고 PBS의 2 mL로 세포 세척.</li>
	<li>PBS를 발음 하 고 블루 빛 조사에 대 한 문화 매체의 2 개 mL를 추가 합니다.</li>
</ol>3. 푸른 빛 광선 요법
<ol><li>셀, 해 전에 블루 빛 장치 (예를 들어, 발광 다이오드, 형광, 또는 할로겐 빛) 설정 하 고 1 사이클에 대 한 실행 (1000 s) 장치를 따뜻하게. 파란 가벼운 장치는 출력 파장 5 + 417의 있어야 한다 nm. 치료 전에 1 사이클에 대 한 실행 장치를 수 있도록 푸른 빛 파장 및 방사는 photoactivation 단계에 걸쳐 일관성이 보장 합니다.</li>
	<li>세포 표면에 방사를 측정 하는 광도 계를 사용 합니다. 세포 표면에 푸른 빛 방사는 10 mW/cm2이어야 한다. 빛과는 셀 사이의 거리는 광원의 강도 따라2 10 mW/cm irradiance를 달성 하기 위하여 조정 될 필요가 있습니다.</li>
	<li>0, 0.5, 1 및 2 m m ALA 치료 그룹 블루 광원 아래 검은 표면에 놓습니다. 셀 1000에 대 한 파란색 빛을 비추는 s (16 분 및 40 s) 10 J/c m2의 총 fluence에 대 한. 블루 빛 photoactivation, 다음 셀 분석에 대 한 준비가.입니다.</li>
</ol>4. 수집 및 얼룩
<ol><li>( 재료의 표참조)는 제조업체 지침에 따라 흐름 버퍼를 준비 합니다.</li>
	<li>문화 매체 및 2 mL의 PBS로 세척 셀 발음.</li>
	<li>0.25 %trypsin-EDTA의 1 mL을 추가 하 고 약 3 ~ 5 분 동안 분리 하는 세포를 허용. 셀 셀 분리 확인 현미경 검사할 수 있습니다.</li>
	<li>비활성화 된 트립 신을 10% 태아 둔감 한 혈 청으로 문화 매체 (PBS)의 1 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>분류 5 mL 흐름 튜브에 세포 현 탁 액을 수집 합니다.</li>
	<li>셀 펠 릿을 제거 하지 않고 5 분 Aspirate 솔루션에 대 한 201 x g 에서 원심 분리기에 5 mL 흐름 튜브를 회전 합니다.</li>
	<li>각 샘플을 활용된 annexin V 항 체 (흐름 버퍼의 39 µ L 당 annexin v의 1 µ L)으로 흐름 버퍼의 200 µ L를 추가 합니다.</li>
	<li>Resuspend 셀과 annexin V 바인딩 수 있도록 20 분 (37 ° C, 5% CO2) 인큐베이터에 놓습니다.</li>
	<li>각 샘플에 7-AAD의 3 µ L를 추가 합니다. 실 온에서 5 분 동안 품 어.</li>
</ol>5. 흐름 Cytometric 분석
<ol><li>설정에 대 한 흐름 cytometer 제조업체 지침에 따라 ( 재료의 표참조).</li>
	<li>수집 및 분석 cytometry 샘플. 13
</li>
	<li>치료 및 분산 분석 (ANOVA)14를 사용 하 여 컨트롤 그룹의 통계 비교를 수행 합니다. 컨트롤의 평균을 치료 그룹의 의미를 비교 하 여 특별 게시물 분석 Dunnett의 테스트와 함께.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Morton, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=European+Dermatology+Forum+guidelines+on+topical+photodynamic+therapy.">European Dermatology Forum guidelines on topical photodynamic therapy.</a> European Journal of Dermatology. 25 (4), 296-311 (2015).</li><li>Ozog, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+therapy:+A+clinical+consensus+guide.">Photodynamic therapy: A clinical consensus guide.</a> Dermatologic Surgery: Official Publication for American Society for Dermatologic Surgery. 42 (7), 804-827 (2016).</li><li>Abrahamse, H., Hamblin, M. 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Annexin V and Propidium Iodide Labeling.</a> JoVE. , (2018).</li><li>Mamalis, A., Koo, E., Sckisel, G., Siegel, D., Jagdeo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature-dependent+impact+of+thermal+aminolaevulinic+acid+photodynamic+therapy+on+apoptosis+and+reactive+oxygen+species+generation+in+human+dermal+fibroblasts.">Temperature-dependent impact of thermal aminolaevulinic acid photodynamic therapy on apoptosis and reactive oxygen species generation in human dermal fibroblasts.</a> British Journal of Dermatology. 175 (3), 512-519 (2016).</li><li>Gilaberte, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+intrinsic+factors+involved+in+the+resistance+of+squamous+cell+carcinoma+to+photodynamic+therapy.">Cellular intrinsic factors involved in the resistance of squamous cell carcinoma to photodynamic therapy.</a> Journal of Investigative Dermatology. 134 (9), 2428-2437 (2014).</li><li>Yoon, H. 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C., Lou, X., Zhang, Z., Ingram, P., Yoon, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+cancer+cell+sphere+formation+for+characterizing+the+efficacy+of+photo+dynamic+therapy+in+3D+cell+cultures.">High-throughput cancer cell sphere formation for characterizing the efficacy of photo dynamic therapy in 3D cell cultures.</a> Scientific Reports. 5, 12175 (2015).</li><li>Campos, C., Inada, N., Kurachi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-dose+PDT+on+breast+cancer+spheroids.">Low-dose PDT on breast cancer spheroids.</a> Optical Methods for Tumor Treatment and Detection: Mechanisms and Techniques in Photodynamic Therapy XXVII. , (2018).</li><li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+temperature+on+5-aminolevulinic+acid-based+photodynamic+reaction+in+keratinocytes+in+vitro.">The influence of temperature on 5-aminolevulinic acid-based photodynamic reaction in keratinocytes in vitro.</a> Photodermatology, Photoimmunology &amp; Photomedicine. 26 (2), 83-88 (2010).</li><li>Juzeniene, A., Juzenas, P., Kaalhus, O., Iani, V., Moan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature+effect+on+Accumulation+of+protoporphyrin+IX+after+topical+application+of+5-aminolevulinic+acid+and+its+methylester+and+hexylester+derivatives+in+normal+mouse+skin.">Temperature effect on Accumulation of protoporphyrin IX after topical application of 5-aminolevulinic acid and its methylester and hexylester derivatives in normal mouse skin.</a> Photochemistry and Photobiology. 76 (4), 452-456 (2002).</li><li>Novak, B., Heesen, L., Schary, N., Lubbert, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+different+illumination+parameters+on+protoporphyrin+IX+induced+cell+death+in+squamous+cell+carcinoma+cells.">The influence of different illumination parameters on protoporphyrin IX induced cell death in squamous cell carcinoma cells.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 21, 385-392 (2018).</li></ol>

DUSA/일 제약 제공 5-살라 고 블루 U 빛 장치. 이 원고는 박사 Jagdeo의 잔류에 의해 지원 되었다 자금. 내용을 미국 재향 군인 담당 부서 또는 미국 정부의 의견을 대표 하지 않는다.

0.5, 1 및 2 m m 5-날개 뒤에 1, 000의 30 분 외피 다음 SCC-13 apoptosis에 상당한 증가 푸른 빛의 s. 이러한 결과 30 분 뒤에 블루 빛 활성화의 5-ALA 외피 fibroblast 세포 apoptosis12, 진행의 백분율에 복용량 의존 증가 리드 보여주는 우리의 이전 출판된 연구와 일치 14.
공부 초가 실험적인 접근 장점과 한계 있다. 설명된 방법 준수 상용 PS로 임상 연습 그리고 광원 사용 되었다. 연구원은 다른 세포 유형, PSs, 광원 및 조사 매개 변수 메서드를 사용자 지정할 수 있습니다. 그러나,이 프로토콜은 부착 세포 경작 한 단층에 대 한 설계 되었습니다 등이 접근에 한계가 있다. 임상 연습에서 조직 아키텍처 또는 질병 병리학 (hyperkeratosis즉, 또는 섬유 증) 차이 PS 흡수 저하 될 수 있습니다 또는 침투15빛. 그 결과, 치료 복용량 및 실험 결과 수 있습니다 일치 하지 않을 직접 임상 연습. 회전 타원 체 종양 모델 및 미세 칩 더 밀접 하 게 종양 microenvironments16,,1718를 복제 하는 방법으로 연구 되었습니다. Spheroids는 내부와 외부 세포 틈새 차동는 photosensitizers를 통합 하 고 다른 유형의 종양 아키텍처를 나타내는 수 있습니다. 다른 연구원은 화면 처리 조건 및 photosensitizers의 혈관 전달 미세 칩을 사용 했습니다. 그러나, 미세 칩 개발 비용이 많이 드는 또는 연구원 기술에 익숙하지에 대 한 구현 하기 어려운 수 있습니다. 또한, spheroids 및 미세 칩에 있는 photosensitizers 직접 혈관 보급 없이 종양 표면에 적용 되는 피부 암의 임상 치료를 반영 하지 않을 수 있습니다. 연구원은 다른 질병 시스템에서 공부 PDT에 대 한 단층 문화, 회전 타원 체 종양 모델 및 미세 칩의 찬 부 양론을 평가 해야 합니다. 면역 세포 또는 세포 외 기질으로 초 복잡 한 세포-세포 상호 작용에 미치는 영향을 확인할 수 아니다. 연구팀은 생체 외에서 실험 결과 동물 모델과 임상 시험을 사용 하 여 확인 해야 합니다. 높은 간 테스트 유효성을 달성 하기 위해 생체 외에서 초 실험을 수행할 때 일관 된 외피와 가벼운 매개 변수를 유지 하기 위해 중요 하다.
온도 변경 PDT19의 효능으로 알려져 있다. 한 연구는 세포 죽음, 5 날개 통풍 관, PP IX 형성과 cytokine 출시 44 ° C19에 최대 5-날개 온도에서 세포를 배양 하 여 향상 될 수 있습니다 설명 했다. 44 ° C의 위 외피 온도 열 유도 된 세포 죽음으로 이어질 수 있습니다 그리고 외피 온도 20 ° c을 중요 한 5-ALA 이해 및 축적19이어질 수 있습니다. 연구원은 잠재적으로 혼동 열 효과 대 한 제어를 일정 한 온도에서 온도 조절 난방 블록에 PS 외피를 수행 하는 것이 좋습니다. 또한, 충분 한 양의 시간 PP IX 5-ALA의 변환에 대 한는 photosensitizer 품 어 중요 하다. 이 프로토콜에 SCC-13 셀 성공적으로 세포 apoptosis 유도 30 분 동안 5-ALA와 인 큐베이 팅 했다. 우리 이전 5-ALA의 10 분 인큐베이션 크게 치료 제어 fibroblasts11,14에 비해 섬유 아 세포에 있는 apoptosis 증가 하지 않았다 설명 했다. PP-IX 5-ALA 37 ° c.에 6 분 동안 잠복기 후 마우스 피부에 축적 시작 따라서, 10 분 후 5-ALA 인큐베이션, 있을 수 있습니다 하지 유도 세포 apoptosis20PP-9의 충분 한 축적. 우리의 이전 연구11,14에 따라 5-날개에 대 한 20 ~ 30 분의 최소 잠복기를 좋습니다. 연구팀은 부 화 기간 설정, 관심, 셀 유형, 및 임상 표시의 photosensitizer 실험실에 따라 최적화 할 수 있습니다. 제조업체 지침을 사용 하 여 최상의 결과 대 한 항 체 적정 및 최적화 실험을 수행할 수 있습니다. 블루 라이트 photoactivation dihydroethidium 흐름 cytometric 정량화 선생님의를 포함 하 여 다음 관심의 다른 분석을 수행할 수 있습니다. 14
빛의 양을 변화 표면 영역 (즉, irradiance)의 단위 당 전달 하 고 photoactivation 단계 총 방사선 복용량 (즉, fluence) 선생님 형성 및 세포 apoptosis21에 영향을 미칠 수 있습니다. Fluence, irradiance, 시간과 관계는 다음 방정식에 의해 기술 될 수 있다:
Fluence (J/c m2) Irradiance (W/c m2) = x 시간 (s)
Fluence는 시간에 따라, 길이 또는 photoactivation 단계를 단축 치료 효능을 변경할 수 있습니다. 방사 광원 및 대상 조직 사이 제곱 거리에 비례 이다. 결과적으로, 빛이 너무 멀리 떨어져, 있을 수 있습니다 하지 자극 대상된 조직에 전달 하는 충분 한 빛 에너지는 ps. 또는,는 irradiance 주변 표면에서 반영 빛에 의해 증가 수 있습니다. 따라서, 빛의 반사를 방지 하기 위해 검은 표면에 세포 배양 배지와 빛 위하여 수행 하는 것이 좋습니다. 연구원은 상업적으로 사용할 수 또는 FDA 승인 파란색 발광 다이오드 및 PDT 실험에 사용 하 여 형광 장치를 획득할 수 있습니다 있지만 이러한 장치 가벼운 분야 균일 하 고 다른 전원 출력을 할 수 있습니다. 파장 별 photometer 세포 표면 및 일관성 있는 결과 대 한 모든 실험 하기 전에 빛의 균일성에 방사를 측정 하기 위해 사용 되어야 한다. 필요한 경우 필드 균일성 향상을 상업적으로 사용할 수 있는 디퓨저를 사용할 수 있습니다.
요약 하자면, 우리 생체 외에서 접근 이론, 실험 방법, 제한, 잠재적인 함정 및 최적화에 대 한 권장 사항을 자세히 설명 하 여 PDT를 조사 하는 것을 설명 했습니다. PDT는 소설 PSs, 프로토콜, 및 초에 대 한 새로운 표시의 최적화의 개발에 대 한 유용한 임상 절차 및 생체 외에서 연구 수 있습니다.

Photodynamic 치료 (태평양 서머 타임) 뒤에 보이는 빛 photoactivation 세포 apoptosis를 유도 하는 것 적용된 photosensitizer (PS)의 외피를 포함 한 의료 절차입니다. 연방 의약품 안전 청 (FDA) actinic keratosis (AK)의 치료에 대 한 PDT를 승인 했습니다 그리고 임상 지침 특정 비 흑색 종 피부 암과 여드름 vulgaris1,2에 대 한 처리로 PDT를 추천. 태평양 표준시에 대 한 신흥 비 피부과 사용 위장, 전립선, 부인과 암3의 치료를 포함합니다. 그것은 저렴 한 비용, 비-침략 적, 그리고 최소한의 부작용 및 흉터2관련 된 PDT는 유리한 치료 양식 적임 이다.
PDT의 첫 번째 단계는 PS 적용 이며 침2축적을 허용. 미국에서는, 국 소 5-aminolevulinic 산 (5-ALA)는 일반적으로 AKs 치료에 사용 됩니다. 부 화 하는 동안 단계, 5-ALA protoporphyrin IX (PP-IX) 통합된 셀3헤 생 합성 통로 통해 변환 됩니다. 암 및 전 암 세포 감소 protoporphyrin IX (PP-IX), 최종 제품으로 변환, ferrochelatase 활동, 헤. 그 결과, 암 세포 정상 세포4,5에 비해 PP IX 누적 됩니다. 암 및 전 암 세포 주변 조직 기준으로 PP-IX의이 축적이 초 최소한의 부작용으로 타겟된 접근을 할 수 있습니다. 가벼운 방사선 반응성 산소 종 (ROS) 생성 산소 PP IX에서 흥분된 전자를 수용 하는 때 이끌어 낸다. PP-IX는 파란색과 빨간색 빛2를 포함 하 여 가시 광선 스펙트럼에 걸쳐 작은 봉우리 자외선 스펙트럼에서 피크 흡수. 선생님 형성 세포 apoptosis, 막 장애, 미토 콘 드 리아 손상, 면역 변조, keratinocyte 확산, 및 교원 질 회전율6,7,,89 에 궁극적으로 이어질 수 있습니다. , 10.
PDT와 진화 치료 양식 적임3는 1970 년대에 개발 되었다. AKs의 처리를 위한 FDA 승인 프로토콜 14-18 시간, 5-ALA 피부 외피를 권장 하지만 1 ~ 2 h 외피 임상 연습2에 일반적으로 사용 됩니다. 생체 외에서 우리는 짧은 15 분 5-ALA 외피 섬유 세포 apoptosis 치료 fibroblasts11,12에 비해 증가 시킬 수 있습니다 나타났습니다. 또한, 소설 chlorin, phthalocyanine, 및 나노 기반 PSs 초 효능3을 개선 하기 위해 공부 되 고 있다. 여기, 우리는 체 외에서 하는 방법 연구 PDT 부착 편평 세포 암 종에서 셀을 제시. 이 프로토콜에서 SCC-13 셀 0, 0.5, 1.0, 및 2 m m 5-ALA 30 분 및 photoactivated 1000 417 nm 블루 빛으로 incubated는 s. 기본 결과 측정은 apoptosis와 괴 사, annexin V 및 7-aminoactinomycin D (7-AAD) cytometry 기준으로 측정. 이 치료 프로토콜 PDT를 시뮬레이션 하도록 설계 되었습니다 그리고 다른 셀 라인, photosensitizers, 부 화 온도, 또는 photoactivation 파장 PDT 사용 하 여 공부 하 고 조정할 수 있습니다. 추가 제어 그룹의 준비 할 수 있습니다, 흠 없는, 단일 fluorophore를 포함 하 여 스테인드, cytometry에 대 한 부정, 및 긍정적인 컨트롤. 이론, 프로토콜, 실험적인 디자인, 그리고 apoptosis 또는 괴 사 cytometry 위한 게이팅의 종합적인 검토 다른13을찾을 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1259">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Keratinocyte serum free medium&#160;</td>
			<td style="width:211px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:204px;">17005042</td>
			<td style="width:623px;">Culture medium for SSC-13 cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM low glucose glutamax</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>10567022</td>
			<td>Possible culture medium for other cell types</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">6-well culture plates</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>720083</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PBS</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>14190250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.25% Trypsin-EDTA</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypan Blue Solution, 0.4%</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>15250061</td>
			<td>For cell counting and plating&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BLU-U light&#160;</td>
			<td>DUSA</td>
			<td>Request from manufacturer</td>
			<td>Other blue LED, flourescent, or halogen lights may used&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5-ALA</td>
			<td>DUSA</td>
			<td>Request from manufacturer</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FBS</td>
			<td>Atlanta Biologicals</td>
			<td>C17032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FlowCellect Annexin Red Kit</td>
			<td>Millipore Sigma&#160;</td>
			<td>FCCH100108&#160;</td>
			<td>Propidium iodide may replace 7-AAD. Comes with annexin-V, 7-AAD, and flow buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FACSCanto II</td>
			<td>BD</td>
			<td>Request from manufacturer</td>
			<td>Any flow cytometer may be used&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Counting Chamber</td>
			<td>Hausser</td>
			<td>3120</td>
			<td>For cell counting and plating&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FlowJo</td>
			<td>FlowJo</td>
			<td>Request from manufacturer</td>
			<td>Flow cytometry analysis software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vitro approach to photodynamic therapy

Photodynamic 치료 (태평양 서머 타임) 뒤에 보이는 빛 photoactivation 세포 apoptosis를 유도 하는 것 적용된 photosensitizer (PS)의 외피를 포함 한 의료 절차입니다. 연방 의약품 안전 청 actinic keratosis, 치료에 대 한 PDT를 승인 했습니다 그리고 임상 지침 특정 비 흑색 종 피부 암과 여드름 vulgaris에 대 한 처리로 PDT를 추천. 그것은 저렴 한 비용, 비-침략 적, 및 관련 된 최소한의 부작용 그리고 무섭게 PDT는 유리한 치료 양식 적임 이다. PDT의 첫 번째 단계는 PS 적용 이며 침 축적을 허용. 후속 빛 방사선 세포 apoptosis, 막 장애, 미토 콘 드 리아 손상, 면역 변조, keratinocyte 확산, 및 교원 질 회전율에 궁극적으로 이어질 수 있습니다 반응성 산소 종 형성을 유도 합니다. 여기, 우리는 체 외에서 하는 방법 연구 PDT 부착 셀 라인에서 제시. 이 치료 프로토콜 PDT를 시뮬레이션 하도록 설계 되었습니다 그리고 다양 한 셀 라인, photosensitizers, 부 화 온도, 또는 photoactivation 파장 PDT 사용 하 여 공부 하 고 조정할 수 있습니다. 편평 세포 암 종 세포 30 분 및 417 nm 블루 빛 1000 photoactivated 0, 0.5, 1.0, 및 2 m m 5-aminolevulinic 산 (5-ALA) incubated 했다 s. 기본 결과 측정 apoptosis와 괴 사, annexin V 및 7-aminoactinomycin D cytometry 기준으로 측정 했다. 다음 5-살라의 30 분 외피 세포 apoptosis에 복용량 의존 증가 높은 간 테스트 유효성을 달성 하기 위해 생체 외에서 초 실험을 수행할 때 일관 된 외피와 가벼운 매개 변수를 유지 하기 위해 중요 하다. PDT는 소설 PSs, 프로토콜, 및 초에 대 한 새로운 표시의 최적화의 개발에 대 한 유용한 임상 절차 및 생체 외에서 연구 수 있습니다.

SCC-13 후 셀 0, 0.5, 1 및 2 m m 5-ALA와 함께 30 분 동안 incubated 되었고 1000 반구 블루 빛, 세포 apoptosis에 복용량 의존 증가의 s. 총 apoptosis (의미의 평균 ± 표준 오차)는 3.94 ± 0.34, 7.90 ± 0.52, 23.86 ± 0.52, 0, 0.5, 1 및 2 m m 5-날개를 가진 외피의 30 분 후 38.33 ± 1.81 각각, 그리고 파란색의 1000 초 빛 (그림 1). 우리는 0, 0.5, 1 및 2 m m 5-ALA incubated 그룹 ANOVA를 사용 하 여 가운데 apoptotic 세포의 평균 비율을 비교. 1 및 2 m m 5-ALA 치료 셀 0 m m 5-ALA 치료 세포에 비해 세포 apoptosis에 크게 증가 했다. 그림 2A 보여주는 대표적인 흐름 측면 살포 (SSC) SCC-13 셀 0, 0.5, 1 및 2 m m 5-살라와 함께 알을 품을 대 앞으로 분산형 (FSC)의 cytometric 게이팅 동그라미 게이팅 SCC-13 세포 인구를 포함합니다. 이 실험을 위해 7500 이벤트 수집 하 고 SCC-13 셀 인구 게이트 캡처한 이벤트의 90% 이상. 그림 2B 는 x 축과 y 축에 annexin V에 7-AAD의 대표 작을 보여줍니다. 세포 인구는 4 개의 사분면으로 문이 (4 분기에 1 분기) 차별을 apoptotic 세포. 1 분기 (높은 annexin v, 낮은 7-AAD) 나타내는 셀 초기 apoptosis를 겪고. Q2 (높은 annexin v, 높은 7-AAD) 대표 셀 늦은 apoptosis 또는 괴 사 진행. 3 분기 (낮은 annexin v, 높은 7-AAD) 나타내는 세포 괴 사를 겪고. 4 분기 (낮은 annexin v, 낮은 7-AAD) 대표 하지 겪고 apoptosis 또는 괴 사 세포. Apoptosis를 받고 세포의 백분율을 계산 하려면 우리는 q 1과 q 2에 셀의 비율 추가 되었습니다. 5-ALA 인큐베이션 기간 길이, 부 화 온도, 또는 photoactivation 방사선 복용량에 불일치는 초 효능을 변경할 수 있습니다. 그림 3 부 화 온도 변화 하는 때 대표 annexin V 및 7-AAD 흐름 cytometric 음모를 보여줍니다 (즉, 27, 36, 또는 42 ° C). Apoptosis에 온도 의존 증가 했다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58190/58190fig1.jpg"> 그림 1: 5-살라의 30 분 부 화 후 apoptosis에 복용량 의존 증가 5-ALA 36 ° C에서 1000 다음 30 분 동안 incubated SCC-13 셀에 푸른 빛의 s. 각 치료 및 제어 그룹에서 평균 백분율 annexin V 긍정적인 세포를 나타내는 막대입니다. 실험 기술 3 중에서 수행 했다. 통계적 의미는 p 와 ANOVA에 의해 결정 되었다 < 0.05 별표 (*)로 표시 됩니다. 오차 막대는 평균 ± 표준 오차의 의미를 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58190/58190fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58190/58190fig2.jpg"> 그림 2: 대표 Cytometry 플롯. (A) 대표 앞으로 분산형 대 측 분산형 cytometry 구획 임의의 단위 (AU)에 대 한 x-축 및 y 축 0, 0.5, 1 및 2 m m 5-ALA incubated 셀. 이 실험을 위해 7500 이벤트 수집 하 고 SCC-13 셀 인구 게이트 캡처한 이벤트의 90%. (B) 대표 annexin V 대 7 AAD cytometry 플롯 AU에 대 한 x-축 및 y 축 0, 0.5, 1 및 2 m m 5-ALA incubated 셀에 대 한 합니다. 질문 1: 초기 apoptotic 세포, Q2: 늦은 apoptotic/회 저 성 세포, 3 분기: 회 저 성 세포, 및 4 분기: 가능한 셀. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58190/58190fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58190/58190fig3.jpg"> 그림 3: 5-ALA 다른 온도에서 배양 초 효능을 변경할 수 있습니다. 7-AAD cytometry 대표 annexin V 대 플롯 AU에 대 한 x-축 및 y-축 0.5 m m 5-27, 36, 42 ° c.에서 ALA와 incubated SCC-13 셀에 대 한 질문 1: 초기 apoptotic 세포, Q2: 늦은 apoptotic/회 저 성 세포, 3 분기: 회 저 성 세포, 및 4 분기: 가능한 셀. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58190/58190fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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An In Vitro Approach to Photodynamic Therapy

Photodynamic 치료 (PDT)는 것 적용된 photosensitizer (PS) 뒤에 보이는 빛 photoactivation apoptosis 유도 보육 관련 의료 절차입니다. 우리는 생체 외에서 PDT 프로토콜 PS 인큐베이션 및 가벼운 치료 매개 변수는 차이 연구 하는 데 사용할 수 있습니다 태평양 표준시를 시뮬레이션 하도록 설계 되었습니다 제시.

Photodynamic 치료 체 외에서 접근

Photodynamic therapy (PDT) is a medical procedure that involves incubation of an exogenously applied photosensitizer (PS) followed by visible light ...

an-in-vitro-approach-to-photodynamic-therapy

Research

JoVE Journal

Medicine

An In Vitro Approach to Photodynamic Therapy

8.6K 조회수.  University of California, Davis. Photodynamic 치료 (PDT)는 것 적용된 photosensitizer (PS) 뒤에 보이는 빛 photoactivation apoptosis 유도 보육 관련 의료 절차입니다. 우리는 생체 외에서 PDT 프로토콜 PS 인큐베이션 및 가벼운 치료 매개 변수는 차이 연구 하는 데 사용할 수 있습니다 태평양 표준시를 시뮬레이션 하도록 설계 되었습니다 제시.

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An In Vitro System to Study Tumor Dormancy and the Switch to Metastatic Growth

Recurrence of breast cancer often follows a long latent period in which there are no signs of cancer, and metastases may not become clinically apparent until many years after removal of the primary tumor and adjuvant therapy. A likely explanation of this phenomenon is that tumor cells have seeded metastatic sites, are resistant to conventional therapies, and remain dormant for long periods of time 1-4.
The existence of dormant cancer cells at secondary sites has been described previously as quiescent solitary cells that neither proliferate nor undergo apoptosis 5-7. Moreover, these solitary cells has been shown to disseminate from the primary tumor at an early stage of disease progression 8-10 and reside growth-arrested in the patients' bone marrow, blood and lymph nodes 1,4,11. Therefore, understanding mechanisms that regulate dormancy or the switch to a proliferative state is critical for discovering novel targets and interventions to prevent disease recurrence. However, unraveling the mechanisms regulating the switch from tumor dormancy to metastatic growth has been hampered by the lack of available model systems.
in vivo and ex vivo model systems to study metastatic progression of tumor cells have been described previously 1,12-14. However these model systems have not provided in real time and in a high throughput manner mechanistic insights into what triggers the emergence of solitary dormant tumor cells to proliferate as metastatic disease. We have recently developed a 3D in vitro system to model the in vivo growth characteristics of cells that exhibit either dormant (D2.OR, MCF7, K7M2-AS.46) or proliferative (D2A1, MDA-MB-231, K7M2) metastatic behavior in vivo . We demonstrated that tumor cells that exhibit dormancy in vivo at a metastatic site remain quiescent when cultured in a 3-dimension (3D) basement membrane extract (BME), whereas cells highly metastatic in vivo readily proliferate in 3D culture after variable, but relatively short periods of quiescence. Importantly by utilizing the 3D in vitro model system we demonstrated for the first time that the ECM composition plays an important role in regulating whether dormant tumor cells will switch to a proliferative state and have confirmed this in in vivo studies15-17. Hence, the model system described in this report provides an in vitro method to model tumor dormancy and study the transition to proliferative growth induced by the microenvironment.

An In Vitro System to Study Tumor Dormancy and the Switch to Metastatic Growth

A modified 3-D in vitro system is presented in which growth characteristics of several tumor cell lines in reconstituted basement membrane correlate with the dormant or proliferative behavior of the tumor cells at a metastatic secondary site in vivo.

체외에서</em전이성 종양 성장에 휴면하고 스위치를 연구하기> 시스템

Recurrence of breast cancer often follows a long latent period in which there are no signs of cancer, and metastases may not become clinically apparent ...

연구

의학

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and acquired diseases. Apart from congenital or inherited abnormalities with the requirement for long-term expression of the delivered gene, several non-inherited perinatal conditions, where short-term gene expression or pharmacological intervention is sufficient to achieve therapeutic effects, are considered as potential future indications for this kind of approach. Candidate diseases for the application of short-term prenatal therapy could be the transient neonatal deficiency of surfactant protein B causing neonatal respiratory distress syndrome1,2 or hyperoxic injuries of the neonatal lung3. Candidate diseases for permanent therapeutic correction are Cystic Fibrosis (CF)4, genetic variants of surfactant deficiencies5 and &alpha;1-antitrypsin deficiency6.
Generally, an important advantage of prenatal gene therapy is the ability to start therapeutic intervention early in development, at or even prior to clinical manifestations in the patient, thus preventing irreparable damage to the individual. In addition, fetal organs have an increased cell proliferation rate as compared to adult organs, which could allow a more efficient gene or stem cell transfer into the fetus. Furthermore, in utero gene delivery is performed when the individual's immune system is not completely mature. Therefore, transplantation of heterologous cells or supplementation of a non-functional or absent protein with a correct version should not cause immune sensitization to the cell, vector or transgene product, which has recently been proven to be the case with both cellular and genetic therapies7.
In the present study, we investigated the potential to directly target the fetal trachea in a mouse model. This procedure is in use in larger animal models such as rabbits and sheep8, and even in a clinical setting9, but has to date not been performed before in a mouse model. When studying the potential of fetal gene therapy for genetic diseases such as CF, the mouse model is very useful as a first proof-of-concept because of the wide availability of different transgenic mouse strains, the well documented embryogenesis and fetal development, less stringent ethical regulations, short gestation and the large litter size.
Different access routes have been described to target the fetal rodent lung, including intra-amniotic injection10-12, (ultrasound-guided) intrapulmonary injection13,14 and intravenous administration into the yolk sac vessels15,16 or umbilical vein17. Our novel surgical procedure enables researchers to inject the agent of choice directly into the fetal mouse trachea which allows for a more efficient delivery to the airways than existing techniques18.

We developed a novel surgical approach for intratracheal administration of bioactive agents into the mouse fetus. The delivery route is more efficient in targeting the fetal mouse lungs than the commonly used intra-amniotic injection. This procedure has to date not been described in a mouse model.

태아 마우스 모델에서 Bioactive 에이전트의 Intratracheal 관리를위한 소설 외과 접근

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and ...

Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules that regulate HSCs. In these transplant model systems, the function of HSCs is determined by the ability of these cells to engraft and reconstitute lethally irradiated recipient mice. Commonly, the donor cell contribution/engraftment is measured by antibodies to donor- specific cell surface proteins using flow cytometry. However, this method heavily depends on the specificity and the ability of the cell surface marker to differentiate donor-derived cells from recipient-originated cells, which may not be available for all mouse strains. Considering the various backgrounds of genetically modified mouse strains in the market, this cell surface/ flow cytometry-based method has significant limitations especially in mouse strains that lack well-defined surface markers to separate donor cells from congenic recipient cells. Here, we reported a PCR-based technique to determine donor cell engraftment/contribution in transplant recipient mice. We transplanted male donor bone marrow HSCs to lethally irradiated congenic female mice. Peripheral blood samples were collected at different time points post transplantation. Bone marrow samples were obtained at the end of the experiments. Genomic DNA was isolated and the Y chromosome specific gene, Zfy1, was amplified using quantitative Real time PCR. The engraftment of male donor-derived cells in the female recipient mice was calculated against standard curve with known percentage of male vs. female DNAs. Bcl2 was used as a reference gene to normalize the total DNA amount. Our data suggested that this approach reliably determines donor cell engraftment and provides a useful, yet simple method in measuring hematopoietic cell reconstitution in murine bone marrow transplantation models. Our method can be routinely performed in most laboratories because no costly equipment such as flow cytometry is required.

Determining donor cell engraftment presents a challenge in mouse bone marrow transplant models that lack well-defined phenotypical markers. We described a methodology to quantify male donor cell engraftment in female transplant recipient mice. This method can be used in all mouse strains for the study of HSC functions.

경쟁 손쥐 골수 이식 모델에서 기증자 세포 Engraftment를 확인하려면 수량 실시간 PCR을 사용하여

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

Cytotoxic Efficacy of Photodynamic Therapy in Osteosarcoma Cells In Vitro

In recent years, there has been the difficulty in finding more effective therapies against cancer with less systemic side effects. Therefore Photodynamic Therapy is a novel approach for a more tumor selective treatment.
Photodynamic Therapy (PDT) that makes use of a nontoxic photosensitizer (PS), which, upon activation with light of a specific wavelength in the presence of oxygen, generates oxygen radicals that elicit a cytotoxic response1. Despite its approval almost twenty years ago by the FDA, PDT is nowadays only used to treat a limited number of cancer types (skin, bladder) and nononcological diseases (psoriasis, actinic keratosis)2.
The major advantage of the use of PDT is the ability to perform a local treatment, which prevents systemic side effects. Moreover, it allows the treatment of tumors at delicate sites (e.g. around nerves or blood vessels). Here, an intraoperative application of PDT is considered in osteosarcoma (OS), a tumor of the bone, to target primary tumor satellites left behind in tumor surrounding tissue after surgical tumor resection. The treatment aims at decreasing the number of recurrences and at reducing the risk for (postoperative) metastasis.
In the present study, we present in vitro PDT procedures to establish the optimal PDT settings for effective treatment of widely used OS cell lines that are used to reproduce the human disease in well established intratibial OS mouse models. The uptake of the PS mTHPC was examined with a spectrophotometer and phototoxicity was provoked with laser light excitation of mTHPC at 652 nm to induce cell death assessed with a WST-1 assay and by the counting of surviving cells. The established techniques enable us to define the optimal PDT settings for future studies in animal models. They are an easy and quick tool for the evaluation of the efficacy of PDT in vitro before an application in vivo.

Cytotoxic Efficacy of Photodynamic Therapy in Osteosarcoma Cells In Vitro

The protocol reported here allows the evaluation of the efficacy of photodynamic therapy (PDT) in cell lines and the optimization of the PDT settings before applying the therapy in animal models.

골육종 세포의 광 역학 치료의 세포 독성 효능<em&gt; 체외</em

In recent years, there has been the difficulty in finding more effective therapies against cancer with less systemic side effects. Therefore Photodynamic ...

A Multi-Modal Approach to Assessing Recovery in Youth Athletes Following Concussion

Concussion is one of the most commonly reported injuries amongst children and youth involved in sport participation. Following a concussion, youth can experience a range of short and long term neurobehavioral symptoms (somatic, cognitive and emotional/behavioral) that can have a significant impact on one&#8217;s participation in daily activities and pursuits of interest (e.g., school, sports, work, family/social life, etc.). Despite this, there remains a paucity in clinically driven research aimed specifically at exploring concussion within the youth sport population, and more specifically, multi-modal approaches to measuring recovery. This article provides an overview of a novel and multi-modal approach to measuring recovery amongst youth athletes following concussion. The presented approach involves the use of both pre-injury/baseline testing and post-injury/follow-up testing to assess performance across a wide variety of domains (post-concussion symptoms, cognition, balance, strength, agility/motor skills and resting state heart rate variability). The goal of this research is to gain a more objective and accurate understanding of recovery following concussion in youth athletes (ages 10-18 years). Findings from this research can help to inform the development and use of improved approaches to concussion management and rehabilitation specific to the youth sport community.

This article provides an overview of a multi-modal approach to assessing recovery following concussion in youth athletes. The described protocol uses pre- and post-concussion assessment of performance across a wide variety of domains and can inform the development of improved concussion rehabilitation protocols specific to the youth sport community.

수류탄에 따라 청소년 운동 선수의 평가 복구에 멀티 모달 접근

Concussion is one of the most commonly reported injuries amongst children and youth involved in sport participation. Following a concussion, youth can ...

A Neuroscientific Approach to the Examination of Concussions in Student-Athletes

Concussions are occurring at alarming rates in the United States and have become a serious public health concern. The CDC estimates that 1.6 to 3.8 million concussions occur in sports and recreational activities annually. Concussion as defined by the 2013 Concussion Consensus Statement &#8220;may be caused either by a direct blow to the head, face, neck or elsewhere on the body with an &#8216;impulsive&#8217; force transmitted to the head.&#8221; Concussions leave the individual with both short- and long-term effects. The short-term effects of sport related concussions may include changes in playing ability, confusion, memory disturbance, the loss of consciousness, slowing of reaction time, loss of coordination, headaches, dizziness, vomiting, changes in sleep patterns and mood changes. These symptoms typically resolve in a matter of days. However, while some individuals recover from a single concussion rather quickly, many experience lingering effects that can last for weeks or months. The factors related to concussion susceptibility and the subsequent recovery times are not well known or understood at this time. Several factors have been suggested and they include the individual&#8217;s concussion history, the severity of the initial injury, history of migraines, history of learning disabilities, history of psychiatric comorbidities, and possibly, genetic factors. Many studies have individually investigated certain factors both the short-term and long-term effects of concussions, recovery time course, susceptibility and recovery. What has not been clearly established is an effective multifaceted approach to concussion evaluation that would yield valuable information related to the etiology, functional changes, and recovery. The purpose of this manuscript is to show one such multifaceted approached which examines concussions using computerized neurocognitive testing, event related potentials, somatosensory perceptual responses, balance assessment, gait assessment and genetic testing.

There is great variability in an individual&#8217;s risk for concussion and their corresponding recovery. A multifaceted approach to concussion evaluation is warranted; including baseline testing of athletes before participation in sport and timely evaluation post injury. The goal of this protocol is to provide an appropriate multifaceted approach to examine concussions.

학생 운동 선수에 진탕의 시험에 대한 신경 과학적 접근

Concussions are occurring at alarming rates in the United States and have become a serious public health concern. The CDC estimates that 1.6 to 3.8 ...

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene and cell therapies are highly promising alternative approaches for CVD treatment. However, the broad clinical application of gene therapy is greatly limited by the lack of suitable gene delivery systems. The development of appropriate gene delivery vectors can provide a solution to current challenges in cell therapy. In particular, existing drawbacks, such as limited efficiency and low cell retention in the injured organ, could be overcome by appropriate cell engineering (i.e., genetic) prior to transplantation. The presented protocol describes the efficient and safe transient modification of endothelial cells using a polyethyleneimine superparamagnetic magnetic nanoparticle (PEI/MNP)-based delivery vector. Also, the algorithm and methods for cell characterization are defined. The successful intracellular delivery of microRNA (miR) into human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) has been achieved without affecting cell viability, functionality, or intercellular communication. Moreover, this approach was proven to cause a strong functional effect in introduced exogenous miR. Importantly, the application of this MNP-based vector ensures cell magnetization, with accompanying possibilities of magnetic targeting and non-invasive MRI tracing. This may provide a basis for magnetically guided, genetically engineered cell therapeutics that can be monitored non-invasively with MRI.

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

This manuscript describes the efficient, non-viral delivery of miR to endothelial cells by a PEI/MNP vector and their magnetization. Thus, in addition to genetic modification, this approach allows for magnetic cell guidance and MRI detectability. The technique can be used to improve the characteristics of therapeutic cell products.

준비 및<em&gt; 체외</em&gt; 자화 특성의 내피 세포를 미르 변성

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene ...

A Method for Quantifying Upper Limb Performance in Daily Life Using Accelerometers

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. It has become important to measure a person's activities in daily life, and not just measure their capacity for activity in the structured environment of a clinic or laboratory. A wearable sensor that is now enabling measurement of daily movement is the accelerometer. Accelerometers are commercially-available devices resembling large wrist watches that can be worn throughout the day. Data from accelerometers can quantify how the limbs are engaged to perform activities in peoples' homes and communities. This report describes a methodology to collect accelerometry data and turn it into clinically-relevant information. First, data are collected by having the participant wear two accelerometers (one on each wrist) for 24 h or longer. The accelerometry data are then downloaded and processed to produce four different variables that describe key aspects of upper limb activity in daily life: hours of use, use ratio, magnitude ratio, and the bilateral magnitude. Density plots can be constructed that visually represent the data from the 24 h wearing period. The variables and their resultant density plots are highly consistent in neurologically-intact, community-dwelling adults. This striking consistency makes them a useful tool for determining if upper limb daily performance is different from normal. This methodology is appropriate for research studies investigating upper limb dysfunction and interventions designed to improve upper limb performance in daily life in people with stroke and other patient populations. Because of its relative simplicity, it may not be long before it is also incorporated in clinical neurorehabilitation practice.

This protocol describes a method to quantify upper limb performance in daily life using wrist-worn accelerometers.

가속도계를 사용하여 일상 생활에서 상지 성능을 정량화하는 방법

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. ...

Neonatal Murine Cochlear Explant Technique as an In Vitro Screening Tool in Hearing Research

While there have been remarkable advances in hearing research over the past few decades, there is still no cure for Sensorineural Hearing Loss (SNHL), a condition that typically involves damage to or loss of the delicate mechanosensory structures of the inner ear. Sophisticated in vitro and ex vivo assays have emerged in recent years, enabling the screening of an increasing number of potentially therapeutic compounds while minimizing resources and accelerating efforts to develop cures for SNHL. Though homogenous cultures of certain cell types continue to play an important role in current research, many scientists now rely on more complex organotypic cultures of murine inner ears, also known as cochlear explants. The preservation of organized cellular structures within the inner ear facilitates the in situ evaluation of various components of the cochlear infrastructure, including inner and outer hair cells, spiral ganglion neurons, neurites, and supporting cells. Here we present the preparation, culture, treatment, and immunostaining of neonatal murine cochlear explants. The careful preparation of these explants facilitates the identification of mechanisms that contribute to SNHL and constitutes a valuable tool for the hearing research community.

Neonatal Murine Cochlear Explant Technique as an In Vitro Screening Tool in Hearing Research

The goal of this protocol is to demonstrate the preparation, culture, treatment, and immunostaining of neonatal murine cochlear explants. The technique can be utilized as an in vitro screening tool in hearing research.

신생아 쥐의 달팽이관 Explant 기법으로<em&gt; 체외에서</em&gt; 청력 연구의 스크리닝 도구

While there have been remarkable advances in hearing research over the past few decades, there is still no cure for Sensorineural Hearing Loss (SNHL), a ...

Designing CAD/CAM Surgical Guides for Maxillary Reconstruction Using an In-house Approach

Computer-aided design/computer-assisted manufacturing (CAD/CAM) is now being evaluated as a preparative technique for maxillofacial surgery. Because this technique is expensive and available in only limited areas of the world, we developed a novel CAD/CAM surgical guide using an in-house approach. By using the CAD software, the maxillary resection area and cutting planes and the fibular cutting planes and angles are determined. Once the resection area is decided, the necessary faces are extracted using a Boolean modifier. These superficial faces are united to fit the surface of the bones and thickened to stabilize the solids. Not only the cutting guides for the fibula and maxilla but also the location arrangement of the transferred bone segments is defined by thickening the superficial faces. The CAD design is recorded as .stl files and three-dimensionally (3-D) printed as actual surgical guides. To check the accuracy of the guides, model surgery using 3-D-printed facial and fibular models is performed. These methods may be used to assist surgeons where commercial guides are not available.

Methods for designing a computer-aided design/computer-aided manufacturing (CAD/CAM) surgical guide are shown. Cutting planes are separated, united, and thickened to easily visualize the necessary bone transfer. These designs can be three-dimensional printed and checked for accuracy.

내부 접근을 사용 하 여 상 악 재건을 위한 디자인 CAD/CAM 수술 가이드

Computer-aided design/computer-assisted manufacturing (CAD/CAM) is now being evaluated as a preparative technique for maxillofacial surgery. Because this ...

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