이 연구는 국립 암 연구소의 교내 연구 프로그램에 의해 부분적으로 지원되었다.

1. 휴지 및 전이성 종양 세포 라인의 세포 배양 관리 <ol><li> Dulbecco의 수정된 이글의 중간 (DMEM) 높은 포도당와 10 % 태아 소 혈청을 (포함 10cm 문화 접시에 휴지 (D2OR / MCF7/K7M2-AS.46) 및 전이성 종양 세포를 (D2A1 / MDA - MB - 231 / K7M2) 성장 FBS)과 항생제. 세포 70-80%의 합류에 도달하면, 다음과 같은 assays로 진행합니다. </li></ol> 2. 휴지 (정지)과 전이성 (proliferating) 종양 세포의 세포 증식 분석은 3D - BME 시스템에 교양 3D 시스템에 Culturing 휴지 / 전이성 세포 <ol><li> 분석을 수행하기 전에 4 해동 Cultrex 성장 인자 - 감소 지하 막 추출 (BME)는 ° C 냉장고 밤. BME가 항상 얼음에 처리되어야합니다. </li><li> 다음날, 판상 후드 안에 얼음 트레이에 96 잘 접시를 놓으십시오. 주사기와 디스펜서를 사용하여 얼음 차가운 BME 50 - 100μl와 코트 각각 잘. 더 거품이 우물에 형성되지 있는지 확인합니다. 30 분 37 5 % CO 2 humidified 인큐베이터에 BME와 코팅 96 잘 판 ° C를 놓습니다. </li><li> 그동안 동면 또는 전이성 종양 세포 (섹션 1에 준비)에서 미디어를 대기음. 10 ML 인산이 호수, PH 7.4 (PBS)를 버퍼로 문화 접시 린스. 문화 접시에 PBS 및 추가 2ml 트립신 37 미리 예열 ° C를 대기음. 37 humidified 5 % CO 2에서 번호판을 품어 ° C, 5 분. </li><li> 10% FCS와 항생제로 보충 DMEM 높은 포도당의 5ml를 포함한 15 ML 원뿔 튜브에 세포를 전송하고 세포를 계산합니다. </li><li> 5 분 상온에서 1,500g의 속도로 조직 문화 원심 분리기에서 교양으로 전체 휴대폰 번호를 스핀 다운. 우리 assays 우리는 검사 각 세포주 또는 시점에 대해 / 잘 2X10 3 셀을 준비합니다. 그러나, 이것이 사용되는 세포 라인에 따라 다를 수 있습니다. </li><li> 조심스럽게 뜨는을 대기음. 참고 대부분의 경우에 펠렛은 표시되지 않습니다. 따라서 일부 언론의 뒤에 둡니다. 단일 세포 현탁액을 얻은 것입니다 수 있도록 손가락으로 15ml 원뿔 튜브의 아래쪽을 누릅니다. 와 보충 항생제로 DMEM 낮은 포도당과 펠릿 다시 중단 2% FCS + 2 % BME (검정 미디어). 검정 미디어 100 μl마다 2x10 3 세포에 추가되어야합니다. 단일 세포 현탁액이 유지되도록 5ml 피펫으로 세포를 여러 번 씹다. </li><li> 플레이트 세포 혼합물의 100μl 당 자 96 자 BME 코팅 접시의 위에. 배경 평가 (섹션 2.8)를 추가 100μl의 판 당 우물의 96 잘 BME 코팅 접시 위에서만 분석 미디어. 37 humidified 5% CO 2 배양기에서 교양 96 잘 번호판을 품어 ° C. 세포는 분석 매체와 4 일마다 다시 먹이해야합니다. </li></ol> 확산 분석 : <ol start="8"><li> 세포의 확산 분석 : 원하는 시간에 우물에 추가 셀 Titer 96 수성 하나의 솔루션 세포 증식 분석 키트 20 μl를 가리 킵니다. 2 시간을위한 37 ° C에서 humidified 5% CO 2 배양기에서 알을 품다. 490nm에서 엘리사 플레이트 리더 기록 흡광도를 사용하여. 배경 평가 및 뺄셈 들어, BME와 우물 프리 코팅에 셀 Titer 96 수성 하나의 솔루션 세포 증식 분석 키트의 20μl를 추가하고 유일한 분석 매체와 입혔다. 490 NM에서 엘리사 플레이트 리더 기록 흡광도를 사용하여. </li></ol> 3. 및 / 또는 전이성 (proliferating) 휴지 (정지) 종양 세포가 종양 세포에 세포 신호 분자에 대한 Immunofluorescent 얼룩 immunfluorescence 얼룩을 위해 3D 시스템에 Culturing 휴지 / 전이성 세포 * 다음과 같은 프로토콜은 Debnath J 외 18 발행 3D 문화 프로토콜의 수정입니다. <ol><li> 같은 섹션 2.1에 설명된 BME를 준비합니다. 다음날 : 판상 후드 안에 얼음 트레이에 장소 8 챔버 유리 슬라이드 시스템을. 200μl pipetman를 사용하여 얼음처럼 차가운 BME의 50ul와 코트 각각 잘. BME가 고르게 확산이며 거품이 우물에 형성되지 있는지 확인합니다. 20 분 37 humidified 5 % CO 2에서 BME와 코팅 8 챔버 유리 슬라이드 ° C를 놓습니다. </li><li> 섹션 1과 섹션 2.3-2.4에서 설명한대로 문화에 준비에서 수확 동면 또는 전이성 세포. 15 ML 원뿔 관에 교양으로 세포의 총 수를 수집합니다. 우리는 검사 각 세포 라인과 시점에 대해 / 잘 오 X10 3 셀을 준비합니다. 5 분 상온에서 1,500g의 속도로 조직 문화 원심 분리기에있는 세포를 스핀 다운. 자세히 supernate를 대기음. 펠렛 볼하지 않습니다, 따라서 뒤에 어떤 미디어를 두십시오. 단일 세포 현탁액을 얻은 것을 보장하기 위해 손가락으로 15ml 원뿔 튜브의 아래쪽을 누릅니다.검정 미디어와 펠렛을 다시 일시 중지합니다. 검정 미디어 400μl마다 5x10 3 세포에 추가되어야합니다. 5ml 피펫으로 세포를 여러 번 씹다. 이 단계는 단일 세포 현탁액이 유지되도록하는 것은 매우 중요합니다. </li><li> BME와 코팅 8 실의 각 상단에 따라 잘 세포 혼합물의 플레이트 400μl. 37 humidified 5% CO 2 배양기에서 교양 8 실 유리 슬라이드 시스템을 품어 ° C. 세포는 분석 매체와 4 일마다 다시 먹이해야합니다. </li></ol> Immunofluorescence 염색법 : <ol start="4"><li> 원하는 시간 지점에서, 대중 매체의 상위 레이어를 대기음 4 %의 Paraformaldehyde (PFA), 5 % 자당 및 0.1 % 트리톤 X - 100을 포함하고있는 정착액의 200μl를 추가하고 5 분 실온에서 알을 품다. 정착액을 대기음 25 분 상온에서 5 %의 자당과 부화를 포함한 4퍼센트 PFA의 200μl를 추가합니다. </li><li> 정착액을 기음, 인산염의 추가 400 μl 각 잘하는 (PBS) 살린 버퍼. 실온에서 10 분 알을 품다. PBS를 대기음 400 μ PBS는 실온에서 10 분 트윈 20 0.05 %를 포함하는 추가합니다. </li><li> 10% 당나귀 혈청 중의 200μl 또는 1시간 (사용할 수 있도록 솔루션을 각 기본 항체에 대해 경험적으로 결정되어야 차단)을 3 % BSA와 함께 실온에서 고정 세포를 차단합니다. </li><li> 차단 솔루션을 기음과 주요 항체의 200μl을 (희석을 사용하여 각 기본 항체에 대해 경험적으로 결정한다)을 추가합니다. 10% 당나귀 혈청이 차단에 사용되는 경우 10 % 당나귀 혈청의 기본 항체를 희석하거나 3% BSA 차단 솔루션이 사용된 경우 3 % BSA의 기본 항체를 희석. 4 밤새 차 항체와 함께 품어 ° C. </li><li> 항체를 대기음, 15 분 동안 PBS 400μl로 우물을 세척하고 두 번 반복합니다. PBS를 기음과 rhodamine 빨간색 (희석이 경험적으로 결정한다)에 안티 - 각 - IgG 복합 당나귀의 200μl를 추가, 실온에서 1 시간 동안 알루미늄 호일과 부화로 8 챔버 슬라이드 커버. </li><li> 400μl PBS (각 씻어 3x15 분)와 우물을 씻으십시오. 대기음 PBS. VECTASHIELD는 DAPI와 매체 장착과 탑재. 어둠 속에서 실온에서 40 분 건조 슬라이드. 슬라이드 4 ° C. 1 주일 동안 보관 가능 어둠의 슬라이드를 저장합니다. 이미지 공촛점 현미경으로 슬라이드. </li></ol> 4. 대표 결과 : 3D 문화의 휴지 D2.0R 및 전이성 종양 D2A1 세포의 확산 분석 예제는 그림 1A에 표시됩니다. 높은 전이성 D2A1 세포는 그들이 세포 분열 따위에 의해 번식하기 시작 이후 4~6일 동안 수면 상태에 남아있는 반면 D2.0R 세포는 전체 실험 십사일 문화 시대를 통해 (정지) 휴면 수 있습니다. 다른 아닌 proliferating 세포가 여러 세포 spheroids을 형성하는 반면, 초기 잠복 단계 동안, 많은 전지 (일 4 그림 1B) 3 - D 문화의 독방 남아 있습니다. 3 - D의 문화에 proliferative 상태로 휴면에서 D2A1 세포의 전환 (그림 1B, 12 일) 셀 형태의 극적인 변화와 관련된 것입니다. 따라서,이 분석은 어떤 요소를 테스트하는 데 사용할 수있는 / S는 수면 상태에서 등장하는 휴면 D2.0R 세포를 실행할 수 있으며, 어떤 요소 것은 / s의 자신의 수면 상태에서 전환할 D2A1 세포를 방지할 수 있습니다. 그림 2는 에이전트의 예입니다 휴면에서 proliferative 상태로 전환하는 D2A1 세포를 방지. 그림 2에서 그림, 마이 오신 라이트 체인 키나제 (ML - 7)의 특정 억제제 D2A1 세포의 트리 트먼트는 휴면 상태에 D2A1 세포를 유지. 3D 시스템에 교양 동면 proliferating 종양 세포의 신호를 세포는 세포 신호 분자에 대한 immunofluorescence 얼룩으로 공부하실 수 있습니다. 그림 3에서 그림 굴지 스트레스 섬유 (녹색 얼룩)을 형성 F - 굴지의 필라멘트의 개편 다음 D2A1 셀 (빨간색 얼룩)에서 마이 오신 라이트 체인 인산화에 상당한 증가는 휴면으로부터 전환 (1-4 일) 동안 발생 확산 (일 7). 그러나, shRNA 또는 특정 약물 (ML - 7)에 의해 D2A1 세포의 마이 오신 라이트 체인 키나제의 활동을 차단하는 것은 D2A1 휴면 상태에있는 세포와 마이 오신 경쇄 인산화 및 F - 굴지 스트레스 섬유 조직 (그림 4)의 억제에 결과를 유지합니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/2914/2914fig1.jpg" /> 그림 1. 독방 종양 세포 휴면 및 전이성 성장에 스위치를 공부 체외 모델 인치 3 - D Cultrex BME의 휴면 D2.0R 및 전이성 D2A1의) 확산, N = 8 (± SE를 의미). 세 실험 (* P ≤ 0.05)의 대표적인 결과입니다. B) D2.0R 및 D2A1 세포의 라이트 현미경 이미지는 3 - D Cultrex BME의 배율 x20에서 교양.그림 Barkan 외 17 수정되었습니다. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/2914/2914fig2.jpg" /> 그림 2. 마이 오신 라이트 체인 키나제 (MLCK)의 억제에 의해 3D 문화 시스템의 확산에 휴지 (정지)에서 D2A1 세포의 스위치를 예방. 3 - D Cultrex BME, N의 교양 D2A1 세포 증식의 시간 코스 = 8 (± SE를 의미). 전지 (제어) 치료했다, 또는 MLCK의 특정 억제제 (ML - 7, 5 μm의)와 함께 치료를 문화의 날 5 48 시간부터 시작하십시오. 그림 Barkan 외 17 수정되었습니다. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/2914/2914fig3.jpg" /> 그림 3. 마이 오신 경쇄 인산화은 proliferative 성장 휴면에서 D2A1 세포의 스위치 중에 F - 굴지의 개편으로 따라갔다. D2A1 전지는 8 챔버 유리 슬라이드에 3 - D Cultrex BME에 교양되었습니다. 세포 고정과 핵 지방화를위한 DAPI (파란색), F - 굴지에 대한 phalloidin (녹색)과 같은 다양한 시간 지점에서 지적 마이 오신 라이트 체인 (MLC - P) (적색)의 phosphorylated 양식에 대한 항체 물들일되었습니다. F - 굴지 및 MLC - P의 얼룩 (노란색)의 병합. MLC - P 표현은 굴지 스트레스 섬유 형성 (화살표) 다음 proliferative 성장 (일 7) 휴면 (days1 - 4)에서 D2A1 세포의 이행 기간 동안 증가했다. 공촛점 현미경, 확대 x63. 화이트 막대는 20 미크론 같습니다. 그림 Barkan 외 17 수정되었습니다. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/2914/2914fig4.jpg" /> 그림 4. . 문화의 날 48 시간의 시작을 위해, 마이 오신 라이트 체인 키나제 (MLCK) D2A1 세포 중재 F - 굴지 스트레스 섬유 형성의 억제 D2A1 세포 (제어) 치료했다, 또는 MLCK (5 μm의 ML - 7)에 대한 억제제로 치료 5 또는 발진 또는 MLCK shRNA 취급 및 마이 오신 라이트 체인 (MLC - P) (적색), F - 굴지 (녹색), 그리고 핵 (파란색)의 phosphorylated 양식 스테인드. F - 굴지 및 MLC - P의 얼룩 (노란색)의 병합. 공촛점 현미경, 확대 x63. 화이트 막대는 20 미크론 같습니다.

<ol>
	<li>Aguirre-Ghiso, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models,+mechanisms+and+clinical+evidence+for+cancer+dormancy.">Models, mechanisms and clinical evidence for cancer dormancy.</a> Nat Rev Cancer. 7, 834-846 (2007).</li><li>Pantel, K., Woelfle, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micrometastasis+in+breast+cancer+and+other+solid+tumors.">Micrometastasis in breast cancer and other solid tumors.</a> J Biol Regul Homeost Agents. 18, 120-125 (2004).</li><li>Naumov, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ineffectiveness+of+doxorubicin+treatment+on+solitary+dormant+mammary+carcinoma+cells+or+late-developing+metastases.">Ineffectiveness of doxorubicin treatment on solitary dormant mammary carcinoma cells or late-developing metastases.</a> Breast Cancer Res Treat. 82, 199-206 (2003).</li><li>Klein, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Framework+models+of+tumor+dormancy+from+patient-derived+observations.">Framework models of tumor dormancy from patient-derived observations.</a> Curr Opin Genet Dev. , (2010).</li><li>Naumov, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+solitary+mammary+carcinoma+cells+in+a+secondary+site:+a+possible+contributor+to+dormancy.">Persistence of solitary mammary carcinoma cells in a secondary site: a possible contributor to dormancy.</a> Cancer Res. 62, 2162-2168 (2002).</li><li>Townson, J. L., Chambers, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dormancy+of+solitary+metastatic+cells.">Dormancy of solitary metastatic cells.</a> Cell Cycle. 5, 1744-1750 (2006).</li><li>Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissemination+and+growth+of+cancer+cells+in+metastatic+sites.">Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites.</a> Nat Rev Cancer. 2, 563-572 (2002).</li><li>Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+of+proliferation-associated+molecules+in+individual+micrometastatic+carcinoma+cells.">Differential expression of proliferation-associated molecules in individual micrometastatic carcinoma cells.</a> J Natl Cancer Inst. 85, 1419-1424 (1993).</li><li>Demicheli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumour+dormancy:+findings+and+hypotheses+from+clinical+research+on+breast+cancer.">Tumour dormancy: findings and hypotheses from clinical research on breast cancer.</a> Semin Cancer Biol. 11, 297-306 (2001).</li><li>Braun, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pooled+analysis+of+bone+marrow+micrometastasis+in+breast+cancer.">A pooled analysis of bone marrow micrometastasis in breast cancer.</a> N Engl J Med. 353, 793-802 (2005).</li><li>Pantel, K., Alix-Panabieres, C., Riethdorf, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+micrometastases.">Cancer micrometastases.</a> Nat Rev Clin Oncol. 6, 339-351 (2009).</li><li>Goss, P. E., Chambers, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+tumour+dormancy+offer+a+therapeutic+target.">Does tumour dormancy offer a therapeutic target.</a> Nat Rev Cancer. 10, 871-877 (2010).</li><li>Mendoza, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+metastasis+biology+and+therapy+in+real+time+in+the+mouse+lung.">Modeling metastasis biology and therapy in real time in the mouse lung.</a> J Clin Invest. 120, 2979-2988 (2010).</li><li>Naumov, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+human+tumor+dormancy:+an+angiogenic+switch+from+the+nonangiogenic+phenotype.">A model of human tumor dormancy: an angiogenic switch from the nonangiogenic phenotype.</a> J Natl Cancer Inst. 98, 316-325 (2006).</li><li>Barkan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+growth+from+dormant+cells+induced+by+a+col-I-enriched+fibrotic+environment.">Metastatic growth from dormant cells induced by a col-I-enriched fibrotic environment.</a> Cancer Res. 70, 5706-5716 (2010).</li><li>Barkan, D., Green, J. E., Chambers, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix:+A+gatekeeper+in+the+transition+from+dormancy+to+metastatic+growth.">Extracellular matrix: A gatekeeper in the transition from dormancy to metastatic growth.</a> Eur J Cancer. , (2010).</li><li>Barkan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+metastatic+outgrowth+from+single+dormant+tumor+cells+by+targeting+the+cytoskeleton.">Inhibition of metastatic outgrowth from single dormant tumor cells by targeting the cytoskeleton.</a> Cancer Res. 68, 6241-6250 (2008).</li><li>Debnath, J., Muthuswamy, S. K., Brugge, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphogenesis+and+oncogenesis+of+MCF-10A+mammary+epithelial+acini+grown+in+three-dimensional+basement+membrane+cultures.">Morphogenesis and oncogenesis of MCF-10A mammary epithelial acini grown in three-dimensional basement membrane cultures.</a> Methods. 30, 256-268 (2003).</li><li>Morris, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammary+carcinoma+cell+lines+of+high+and+low+metastatic+potential+differ+not+in+extravasation+but+in+subsequent+migration+and+growth.">Mammary carcinoma cell lines of high and low metastatic potential differ not in extravasation but in subsequent migration and growth.</a> Clin Exp Metastasis. 12, 357-367 (1994).</li><li>Khanna, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+membrane-cytoskeleton+linker+ezrin+is+necessary+for+osteosarcoma+metastasis.">The membrane-cytoskeleton linker ezrin is necessary for osteosarcoma metastasis.</a> Nat Med. 10, 182-186 (2004).</li></ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

전이성 성장하기 위해 전환에 휴면 상태 또는 결과 종양 세포를 전파 관리 기본 메커니즘은 크게 알려지지 않은 상태로 유지됩니다. 이러한 현상은 인간의 환자 4,12 그리고 몇 잠복기 모델이 문제를 해결하기 위해 개발되었습니다에서 공부하는 것은 매우 어려운되었습니다. 그럼에도 불구하고, 생체내 및 종양 휴면에 대한 전 생체내 모델 시스템의 일부 (1,12에서</...

<table border="1"><tbody><tr><th> 시약의 이름 </th><th> 회사 </th><th> 카탈로그 번호 </th><th> 댓글 </th></tr><tr><td> DMEM 높은 포도당 </td><td> Invitrogen </td><td> 11965-118 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM 낮은 포도당 </td><td> Invitrogen </td><td> 11885-092 </td><td></td></tr><tr><td> 태아 소 혈청 (FBS) </td><td> Invitrogen </td><td> 10091-148 </td><td></td></tr><tr><td> 성장 인자 - 삭감 3 - D Cultrex의 지하 막 추출 </td><td> Trevigen 주식 회사 </td><td></td><td> 14-15mg/ml 간의 단백질 농도 </td></tr><tr><td> D2.0R 및 D2A1 세포 라인 </td><td></td><td></td><td> 5,19 </td></tr><tr><td> K7M2 및 K7M2AS1.46 세포 </td><td></td><td></td><td> 20 </td></tr><tr><td> MCF - 7과 MDA - MB - 231 유방암 세포 </td><td> ATCC </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 8 챔버 유리 슬라이드 시스템 </td><td> (랩 - 테크, 써모 과학) </td><td> 177402 </td><td></td></tr><tr><td> 셀 Titer 96 수성 한 솔루션 세포 증식 분석 키트 </td><td> Promega </td><td> G3580 </td><td></td></tr><tr><td> VECTASHIELD는 DAPI로 미디어를 장착 </td><td> 벡터 연구소 주식 회사 </td><td> H - 1200 </td><td></td></tr><tr><td> 일반 당나귀 혈청 </td><td> 잭슨 ImmunoResearch </td><td> 017-000-121 </td><td></td></tr><tr><td> 엘리사 플레이트 리더 </td><td> 바이오 테크 </td><td></td><td> 기록 490nm </td></tr><tr><td> 공촛점 현미경 </td><td> 자이스 혈구 - LSM - 510 </td><td></td><td> 확대 x63 </td></tr></tbody></table>

an in vitro system to study tumor dormancy and the switch to metastatic growth

유방암의 재발은 종종 암의 흔적이 없다는있는 긴 잠재 기간을 다음과 metastases는 기본 종양과 도움이되는 치료의 제거 후 수년 전까지는 임상적으로 명백한 될 수 없습니다. 이러한 현상의 가능성이 설명은 종양 세포가 전이성 사이트 씨앗 기존 치료에 저항하고, 시간이 1-4 오랜 기간 동안 휴면 남아있다는 것입니다. 보조 사이트에서 휴지 암세포의 존재는 둘 다 분아 따위에 의해 번식하지 않으며 apoptosis가 5-7 받아야 정지 독방 세포로 이전에 설명되었습니다. 또한, 이러한 고독한 세포는 질병의 진행의 80-10의 초기 단계에서 기본 종양에서 보급하고 환자의 골수, 혈액, 림프절 1,4,11에서 성장 체포 거주 보여왔다. 따라서, proliferative 상태로 휴면 또는 스위치를 조절 메커니즘을 이해하는 것은 질병 재발을 방지하기 위해 새로운 목표와 중재를 발견하기위한 중요합니다. 그러나, 전이성 종양 성장에 휴면에서 스위치를 조절 메커니즘을 분열하는 것은 가능한 모델 시스템의 부족에 의해 방해되었다. 생체내 및 종양 세포의 전이성 진행을 공부하기 전 생체내 모델 시스템에서 이전에 설명한 1,12-14되었습니다. 그러나 이러한 모델 시스템은 실시간 및 전이성 질환으로 세포 분열 따위에 의해 번식하는 고독한 휴면 종양 세포의 출현을 트리거 무엇으로 높은 처리량 방식의 기계론의 통찰력에서 제공하지 않았습니다. 우리는 최근 (D2A1, MDA - MB - 231, K7M2) 중 휴면 (D2.OR, MCF7, K7M2 - AS.46) 또는 proliferative 전이성 동작을 세포의 생체내 성장 특성 모델 체외 시스템에서 3D를 개발 생체내 인치 우리는 전이성 사이트에서 생체내의 휴면을 전시 종양 세포가 3 차원 (3D) 지하 막 추출물 (BME)에서 양식 때 생체내 높은 전이성 세포가 쉽게 변수 후 3D 문화 분아 따위에 의해 번식하는 반면, 정지 남아 있지만, 상대적으로 짧은 것을 보여주 정지의 기간. 중요한 시험 관내 모델 시스템에서 3D를 이용하여 우리는 ECM 성분이 휴면 종양 세포가 proliferative 상태로 전환되며, 생체내 연구 15-17에서에서 이것을 확인했는지 여부 조절에 중요한 역할을하는 처음으로 보여주었다. 따라서이 보고서에서 설명하는 모델 시스템 모델 종양의 휴면을 체외 방식의를 제공하고 microenvironment에 의해 유도된 proliferative 성장로의 전환을 공부합니다.

Watch this Scientific Journal Video about An In Vitro System to Study Tumor Dormancy and the Switch to Metastatic Growth at JoVE.com

An In Vitro System to Study Tumor Dormancy and the Switch to Metastatic Growth

체외 시스템에 수정 3 - D는 재구성 지하 막 여러 종양 세포 라인의 성장 특성 전이성 보조 사이트에서 종양 세포의 휴지 또는 proliferative 행위와 연관있는 제공됩니다<em&gt; 생체내에</em&gt;.

체외에서</em전이성 종양 성장에 휴면하고 스위치를 연구하기> 시스템

Recurrence of breast cancer often follows a long latent period in which there are no signs of cancer, and metastases may not become clinically apparent ...

an-vitro-system-to-study-tumor-dormancy-switch-to-metastatic

Research

JoVE Journal

Medicine

An In Vitro System to Study Tumor Dormancy and the Switch to Metastatic Growth

15.7K 조회수.  University of Haifa. 체외 시스템에 수정 3 - D는 재구성 지하 막 여러 종양 세포 라인의 성장 특성 전이성 보조 사이트에서 종양 세포의 휴지 또는 proliferative 행위와 연관있는 제공됩니다 생체내에.

비디오: An In Vitro System to Study Tumor Dormancy and the Switch to Metastatic Growth

Utilizing Transcranial Magnetic Stimulation to Study the Human Neuromuscular System

Transcranial magnetic stimulation (TMS) has been in use for more than 20 years 1, and has grown exponentially in popularity over the past decade. While the use of TMS has expanded to the study of many systems and processes during this time, the original application and perhaps one of the most common uses of TMS involves studying the physiology, plasticity and function of the human neuromuscular system. Single pulse TMS applied to the motor cortex excites pyramidal neurons transsynaptically 2 (Figure 1) and results in a measurable electromyographic response that can be used to study and evaluate the integrity and excitability of the corticospinal tract in humans 3. Additionally, recent advances in magnetic stimulation now allows for partitioning of cortical versus spinal excitability 4,5. For example, paired-pulse TMS can be used to assess intracortical facilitatory and inhibitory properties by combining a conditioning stimulus and a test stimulus at different interstimulus intervals 3,4,6-8. In this video article we will demonstrate the methodological and technical aspects of these techniques. Specifically, we will demonstrate single-pulse and paired-pulse TMS techniques as applied to the flexor carpi radialis (FCR) muscle as well as the erector spinae (ES) musculature. Our laboratory studies the FCR muscle as it is of interest to our research on the effects of wrist-hand cast immobilization on reduced muscle performance6,9, and we study the ES muscles due to these muscles clinical relevance as it relates to low back pain8. With this stated, we should note that TMS has been used to study many muscles of the hand, arm and legs, and should iterate that our demonstrations in the FCR and ES muscle groups are only selected examples of TMS being used to study the human neuromuscular system.

Transcranial magnetic stimulation (TMS) is a non-invasive tool to gain insight on the physiology and function of the human nervous system. Here, we present our TMS techniques to study cortical excitability of the upper limb and lumbar musculature.

인간 신경근육학 시스템을 공부하기 Transcranial 자기 자극을 활용

Transcranial magnetic stimulation (TMS) has been in use for more than 20 years 1, and has grown exponentially in popularity over the past decade.  While ...

연구

의학

The Measurement and Treatment of Suppression in Amblyopia

Amblyopia, a developmental disorder of the visual cortex, is one of the leading causes of visual dysfunction in the working age population. Current estimates put the prevalence of amblyopia at approximately 1-3%1-3, the majority of cases being monocular2. Amblyopia is most frequently caused by ocular misalignment (strabismus), blur induced by unequal refractive error (anisometropia), and in some cases by form deprivation.
Although amblyopia is initially caused by abnormal visual input in infancy, once established, the visual deficit often remains when normal visual input has been restored using surgery and/or refractive correction. This is because amblyopia is the result of abnormal visual cortex development rather than a problem with the amblyopic eye itself4,5 . Amblyopia is characterized by both monocular and binocular deficits6,7 which include impaired visual acuity and poor or absent stereopsis respectively. The visual dysfunction in amblyopia is often associated with a strong suppression of the inputs from the amblyopic eye under binocular viewing conditions8. Recent work has indicated that suppression may play a central role in both the monocular and binocular deficits associated with amblyopia9,10 .
Current clinical tests for suppression tend to verify the presence or absence of suppression rather than giving a quantitative measurement of the degree of suppression. Here we describe a technique for measuring amblyopic suppression with a compact, portable device11,12 . The device consists of a laptop computer connected to a pair of virtual reality goggles. The novelty of the technique lies in the way we present visual stimuli to measure suppression. Stimuli are shown to the amblyopic eye at high contrast while the contrast of the stimuli shown to the non-amblyopic eye are varied. Patients perform a simple signal/noise task that allows for a precise measurement of the strength of excitatory binocular interactions. The contrast offset at which neither eye has a performance advantage is a measure of the "balance point" and is a direct measure of suppression. This technique has been validated psychophysically both in control13,14 and patient6,9,11 populations.
In addition to measuring suppression this technique also forms the basis of a novel form of treatment to decrease suppression over time and improve binocular and often monocular function in adult patients with amblyopia12,15,16 . This new treatment approach can be deployed either on the goggle system described above or on a specially modified iPod touch device15.

Amblyopia is a developmental disorder of the visual cortex that is often accompanied by strong suppression of one eye. We present a new technique for measuring and treating interocular suppression in patients with amblyopia that can be deployed using virtual reality goggles or a portable iPod Touch device.

약시의 억제의 측정 및 치료

Amblyopia, a developmental disorder of the visual cortex, is one of the leading causes of visual dysfunction in the working age population. Current ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a novel platform that allows for direct long-term visualization of tissue structure changes intracranially. Imaging at a single cell resolution in a real-time fashion provides supplementary dynamic information beyond that provided by standard end-point histological analysis, which looks solely at 'snap-shot' cross sections of tissue.
Establishing this intravital imaging technique in fluorescent chimeric mice, we are able to image four fluorescent channels simultaneously. By incorporating fluorescently labeled cells, such as GFP+ bone marrow, it is possible to track the fate of these cells studying their long-term migration, integration and differentiation within tissue. Further integration of a secondary reporter cell, such as an mCherry glioma tumor line, allows for characterization of cell:cell interactions. Structural changes in the tissue microenvironment can be highlighted through the addition of intra-vital dyes and antibodies, for example CD31 tagged antibodies and Dextran molecules.
Moreover, we describe the combination of our ICW imaging model with a small animal micro-irradiator that provides stereotactic irradiation, creating a platform through which the dynamic tissue changes that occur following the administration of ionizing irradiation can be assessed.
Current limitations of our model include penetrance of the microscope, which is limited to a depth of up to 900 &mu;m from the sub cortical surface, limiting imaging to the dorsal axis of the brain. The presence of the skull bone makes the ICW a more challenging technical procedure, compared to the more established and utilized chamber models currently used to study mammary tissue and fat pads 5-7. In addition, the ICW provides many challenges when optimizing the imaging.

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

We describe a novel in vivo imaging technique that couples fluorescent chimeric mice with intracranial windows and high-resolution 2-photon microscopy. This imaging platform aids studies of dynamic changes in brain tissue and microvasculature, at a single-cell level, following pathological insults and is adaptable to assess intracranial drug delivery and distribution.

소설 고해상도<em&gt; 생체 내</em종양의 성장과 치료학에 두개 내 구조물의 동적 응답을 공부하기&gt; 이미징 기술

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the functions of proteins involved in oncogenic progression or help to discover new tumor suppressors. In addition, injecting cancer cells into mice with different genotypes might provide a better understanding of the importance of the stromal compartment. Many models may be useful to investigate certain aspects of disease progression but do not recapitulate the entire cancerous process. In contrast, breast cancer cells engraftment to the mammary fat pad of mice better recapitulates the location of the disease and presence of the proper stromal compartment and therefore better mimics human cancerous disease. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into mice orthotopically and explain how to collect tissues to analyse the tumor milieu and metastasis to distant organs. Using this model, many aspects (growth, angiogenesis, and metastasis) of cancer can be investigated simply by providing a proper environment for tumor cells to grow.

Cancer is a complex disease that is influenced by the tissue surrounding the tumor as well as local pro- and anti-inflammatory mediators. Therefore, orthotropic injection models, rather than subcutaneous models may be useful to study cancer progression in a manner that better mimics human pathology.

마우스의 유방 지방 패드에 유방암 세포의 소성 주입은 종양의 성장을 연구한다.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Establishment of a Human Multiple Myeloma Xenograft Model in the Chicken to Study Tumor Growth, Invasion and Angiogenesis

Multiple myeloma (MM), a malignant plasma cell disease, remains incurable and novel drugs are required to improve the prognosis of patients. Due to the lack of the bone microenvironment and auto/paracrine growth factors human MM cells are difficult to cultivate. Therefore, there is an urgent need to establish proper in vitro and in vivo culture systems to study the action of novel therapeutics on human MM cells. Here we present a model to grow human multiple myeloma cells in a complex 3D environment in vitro and in vivo. MM cell lines OPM-2 and RPMI-8226 were transfected to express the transgene GFP and were cultivated in the presence of human mesenchymal cells and collagen type-I matrix as three-dimensional spheroids. In addition, spheroids were grafted on the chorioallantoic membrane (CAM) of chicken embryos and tumor growth was monitored by stereo fluorescence microscopy. Both models allow the study of novel therapeutic drugs in a complex 3D environment and the quantification of the tumor cell mass after homogenization of grafts in a transgene-specific GFP-ELISA. Moreover, angiogenic responses of the host and invasion of tumor cells into the subjacent host tissue can be monitored daily by a stereo microscope and analyzed by immunohistochemical staining against human tumor cells (Ki-67, CD138, Vimentin) or host mural cells covering blood vessels (desmin/ASMA).
In conclusion, the onplant system allows studying MM cell growth and angiogenesis in a complex 3D environment and enables screening for novel therapeutic compounds targeting survival and proliferation of MM cells.

Human multiple myeloma (MM) cells require the supportive microenvironment of mesenchymal cells and extracellular matrix components for survival and proliferation. We established an in vivo chicken embryo model with engrafted human myeloma and mesenchymal cells to study effects of cancer drugs on tumor growth, invasion and angiogenesis.

닭에서 인간의 다발성 골수종 이종 이식 모델의 설립은 종양의 성장, 침략과 혈관 신생을 공부하기

Multiple myeloma (MM), a malignant plasma cell disease, remains incurable and novel drugs are required to improve the prognosis of patients. Due to the ...

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

High-grade serous ovarian cancer (HGSC), the cause of widespread peritoneal metastases, continues to have an extremely poor prognosis; fewer than 30% of women are alive 5 years after diagnosis. The omentum is a preferred site of HGSC metastasis formation. Despite the clinical importance of this microenvironment, the contribution of omental adipose tissue to ovarian cancer progression remains understudied. Omental adipose is unusual in that it contains structures known as milky spots, which are comprised of B, T, and NK cells, macrophages, and progenitor cells surrounding dense nests of vasculature. Milky spots play a key role in the physiologic functions of the omentum, which are required for peritoneal homeostasis. We have shown that milky spots also promote ovarian cancer metastatic colonization of peritoneal adipose, a key step in the development of peritoneal metastases. Here we describe the approaches we developed to evaluate and quantify milky spots in peritoneal adipose and study their functional contribution to ovarian cancer cell metastatic colonization of omental tissues both in vivo and ex vivo. These approaches are generalizable to additional mouse models and cell lines, thus enabling the study of ovarian cancer metastasis formation from initial localization of cells to milky spot structures to the development of widespread peritoneal metastases.

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

We outline a protocol that implements both in vivo and ex vivo approaches to study ovarian cancer colonization of peritoneal adipose tissues, particularly the omentum. Furthermore, we present a protocol to quantitate and analyze immune cell-structures in the omentum known as milky spots, which promote metastases of peritoneal adipose.

생체 내 및 생체 외 복막 지방이에 밀키 스팟 구조의 난소 암 전이성 식민지를 연구하는 접근 방식

High-grade serous ovarian cancer (HGSC), the cause of widespread peritoneal metastases, continues to have an extremely poor prognosis; fewer than 30% of ...

Injection of Syngeneic Murine Melanoma Cells to Determine Their Metastatic Potential in the Lungs

Approximately 90% of human cancer deaths are linked to metastasis. Despite the prevalence and relative harm of metastasis, therapeutics for treatment or prevention are lacking. We report a method for the establishment of pulmonary metastases in mice, useful for the study of this phenomenon. Tail vein injection of B57BL/6J mice with B16-BL6 is among the most used models for melanoma metastases. Some of the circulating tumor cells establish themselves in the lungs of the mouse, creating "experimental" metastatic foci. With this model it is possible to measure the relative effects of therapeutic agents on the development of cancer metastasis. The difference in enumerated lung foci between treated and untreated mice indicates the efficacy of metastases neutralization. However, prior to the investigation of a therapeutic agent, it is necessary to determine an optimal number of injected B16-BL6 cells for the quantitative analysis of metastatic foci. Injection of too many cells may result in an overabundance of metastatic foci, impairing proper quantification and overwhelming the effects of anti-cancer therapies, while injection of too few cells will hinder the comparison between treated and controls.

Metastasis plays a profound role in the virulence of cancer, accounting for an estimated 90% of deaths. We report a protocol for a metastatic melanoma model in mice that is useful for determining the efficacy of therapeutic agents against this clinical phenomenon.

동계 쥐 흑색 종 세포의 주입은 폐에서 그들의 전이성 잠재력을 확인하는 방법

Approximately 90% of human cancer deaths are linked to metastasis.  Despite the prevalence and relative harm of metastasis, therapeutics for treatment or ...

Using Retinal Imaging to Study Dementia

The retina offers a unique &#8220;window&#8221; to study pathophysiological processes of dementia in the brain, as it is an extension of the central nervous system (CNS) and shares prominent similarities with the brain in terms of embryological origin, anatomical features and physiological properties.&#160; The vascular and neuronal structure in the retina can now be visualized easily and non-invasively using retinal imaging techniques, including fundus photography and optical coherence tomography (OCT), and quantified semi-automatically using computer-assisted analysis programs. Studying the associations between vascular and neuronal changes in the retina and dementia could improve our understanding of dementia and, potentially, aid in diagnosis and risk assessment.&#160; This protocol aims to describe a method of quantifying and analyzing retinal vasculature and neuronal structure, which are potentially associated with dementia. This protocol also provides examples of retinal changes in subjects with dementia, and discusses technical issues and current limitations of retinal imaging.

The retina shares prominent similarities with the brain and thus represents a unique window to study vasculature and neuronal structure in the brain non-invasively. This protocol describes a method to study dementia using retinal imaging techniques. This method can potentially aid in diagnosis and risk assessment of dementia.

망막 화상 진 찰을 사용 하 여 치 매 공부 하기

The retina offers a unique &#8220;window&#8221; to study pathophysiological processes of dementia in the brain, as it is an extension of the central ...

Surgical Labyrinthectomy of the Rat to Study the Vestibular System

To study the vestibular system or the vestibular compensation process, a number of methods have been developed to cause vestibular damage, including surgical or chemical labyrinthectomy and vestibular neurectomy. Surgical labyrinthectomy is a relatively simple, reliable, and rapid method. Here, we describe the surgical technique for rat labyrinthectomy. A postauricular incision is made under general anesthesia to expose the external auditory canal and the tympanic membrane, after which the tympanic membrane and the ossicles are removed without the stapes. The stapes artery, which is located between the stapes and the oval window, is a vulnerable structure and must be preserved to obtain a clear surgical field. A hole to fenestrate the vestibule is made with a 2.1-mm drill bur superior to the stapes. Then, 100% ethanol is injected through this hole and aspirated several times. Meticulous dissection under a microscope and careful bleeding control are essential to obtain reliable results. Symptoms of vestibular loss, such as nystagmus, head tilting, and a rolling motion, are seen immediately after surgery. The rotarod or rotation chair test can be used to objectively and quantitatively evaluate the vestibular function.

This protocol describes the surgical labyrinthectomy of a rat, which is a useful method for studying the vestibular system.

Vestibular 시스템 공부를 쥐의 외과 Labyrinthectomy

To study the vestibular system or the vestibular compensation process, a number of methods have been developed to cause vestibular damage, including ...

Rat DRG 압축 모델을 위한 표준화된 Tuina 프로토콜

Analgesic Effect of Tuina on Rat Models with Compression of the Dorsal Root Ganglion Pain

Neuropathic pain is a prevalent condition that affects 6.9%-10% of the population and results from nerve damage due to various etiologies, such as lumbar disc herniation, spinal canal stenosis, and intervertebral foramen stenosis. Although Tuina, a traditional Chinese manual therapy, has shown analgesic effects in clinical practice for the treatment of neuropathic pain, its underlying neurobiological mechanisms remain unclear. Animal models are essential for elucidating the basic principles of Tuina. In this study, we propose a standardized Tuina protocol for rats with compression of the dorsal root ganglion (DRG), which involves inducing DRG compression by inserting a stainless steel rod into the intervertebral foramen, performing Tuina manipulation with specific parameters of location, intensity, and frequency in a controlled environment, and assessing the behavioral and histopathological outcomes of Tuina treatment. This article also discusses the potential clinical implications and limitations of the study and suggests directions for future research on Tuina.

저자 스포트라이트: 등뿌리 신경절 통증을 압박하는 쥐 모델에 대한 Tuina의 진통 효과  

This article presents a manipulation for treating chronic compression of the dorsal root ganglion in rats using Tuina therapy, along with a method for evaluating its effectiveness based on pain behavior and histopathological results.

등쪽 뿌리 신경절 통증의 압축이 있는 쥐 모델에 대한 Tuina의 진통 효과

Neuropathic pain is a prevalent condition that affects 6.9%-10% of the population and results from nerve damage due to various etiologies, such as lumbar ...

체외에서 시스템