창 자 혈액 장벽은 영양분의 통과를 제어 하는 다층 시스템, 세균성 대사 산물, 마약, 그리고 혈액 스트림에 장 루멘에서 다른 외인 성 화합물. 우리가 알다시피, 장벽의 무결성은 심장 혈관 및 혈액 스트림에 창자 세균 대사 산물과 같은 생물학적 활성 화합물의 쉽게 접근을 초래할 수 있는 몇몇 신진 대사 질병에서 뿐만 아니라 위장에서 손상될 수 있고 전체 유기체의 기능에 영향을 미칠 수 있습니다. 따라서 장 혈액 장벽의 투과성은 장및 외장 질환 모두의 마커일 수 있습니다.
이 비디오에서는, 우리는 소화관에 시험 물질의 투여 후 포털 혈액 샘플링을 사용하여 쥐의 장 혈 장벽 투과성의 직접 측정을 제시한다. 우리는 심정맥 합류 바로 위에 포털 정맥과 열등한 정맥 카바의 분류를 자세히 설명합니다. 포탈 정맥과 열등한 정맥에서 혈액 샘플링은 장혈 장벽 투과성뿐만 아니라 장내 세균 대사 산물 이나 의약품과 같은 관심분자의 간 통관 및 흡수 경로를 평가 할 수 있습니다.
이 방법은 사실상 간과 신장 기능에 의해 영향을 받지 않으며 생체 내 및 체외 방법에 일반적으로 사용되는 것에 비해 강한 이점인 장 혈류를 보존합니다. 동물은 절차 전에 하룻밤 금식해야합니다. 전신 마취 중에 모든 절차를 수행하십시오.
동물은 실험 후 안락사된다. 우리의 절차는 장 내 투여를위한 라인의 삽입으로 시작합니다. 여기서 우리는 마커의 대장 내 투여를 제안합니다.
그것은 어쩌면 소화 관의 다양 한 수준에서 관리에 의해 수정 될. 예를 들어, 위 또는 십이지들. 그러나, 위장관의 상부에 마커를 투여하면서 연반의 가변 속도와 효소 및 위산과의 가능한 상호 작용을 고려하십시오.
소아 폴리 카테터 크기 10 F 또는 8 F를 식민지 카테터로 사용하십시오. 카테터를 표시하여 결장내 약 8센티미터에 삽입될 부품을 표시합니다. 항문 부위와 직장에 있는 대변의 수를 확인한 후 결장에 카테터를 삽입합니다.
의자가 있는 경우 직장 영역을 마사지하여 직장을 비웁니다. 카테터를 따라 윤활유를 넣습니다. 다음으로, 윤활유로 항문과 주변을 촉촉하게 합니다.
외부 항문 괄약근을 통해 가이드 와이어와 카테터를 삽입합니다. 앞으로, 뒤로 및 원형 의 움직임을 느리게 합니다. 카테터를 삽입하는 동안 복부 심백에 의해 카테터의 위치를 계속 확인하십시오.
다음 단계는 열등한 베나 카테터화입니다. 당신은 창자 투과성 연구에서이 절차를 건너 뛸 수 있습니다. 대퇴동맥의 맥박을 느끼고 맥박이 만져볼 수 있는 장소에서 약 2센티미터의 길이를 세로로 잘라보십시오.
근막과 근육을 해부하여 신경 혈관 번들을 시각화합니다. 다음으로, 신경 혈관 번들에서 대퇴 정맥을 해부. 첫 번째 신경, 다음 대퇴 동맥 및 정맥.
대퇴 정맥의 몇 가지 작은 가지가 쉽게 손상 될 수 있기 때문에 번들의 해부 동안주의하십시오. 다음으로 대퇴 정맥에 두 개의 합자를 넣습니다. 아직 매듭을 묶지 마십시오.
바늘 홀더로 근위 합자의 끝을 잡으세요. 그런 다음 조심스럽게 합자 끝을 위쪽으로 당겨 정맥의 근위 부분을 닫습니다. 정맥이 피로 가득 차서 말단 매듭을 묶을 때까지 기다립니다.
다음으로, 미세 수술 가위를 사용하여 매듭과 근위 합자 사이의 정맥에 작은 절개를합니다. 그런 다음 비디오에서와 같이 핀셋 또는 곡선 끝이있는 바늘을 사용하여 카테터를 삽입하십시오. 정맥을 뚫고 바늘의 구부러진 끝을 카테터의 가이드로 사용하십시오.
카테터를 삽입하는 동안 근위 합자를 느슨하게 합니다. 동물의 크기에 따라 약 6~7센티미터의 카테터를 삽입하여 카테터의 근위 팁을 정맥 내 바로 위에 열등한 베나 카바에 배치한다. 카테터의 적절한 배치는 실험 후 확인되어야 한다.
두 개의 단일 수술 매듭으로 대퇴 정맥에서 카테터를 확보하십시오. 근위 합자도 묶습니다. 주사기로 혈액을 그리려고 시도하여 카테터의 가부장성을 확인하십시오.
카테터를 0.3 밀리리터의 헤파리니화식 식염수로 헹구는 다. 단일 바늘의 두 층으로 수술 상처를 닫습니다. 이제 포털 정맥 카테터로 이동합니다.
포털 카테터를 준비합니다. 그것은 바늘, 유연한 폴리 우레탄 카테터, 카테터, 플러그 및 합자의 유연한 폴리에틸렌 끝으로 구성됩니다. 절차의 첫 번째 단계는 중간 라인 복강경을 수행하는 것입니다.
수술장을 준비한 후 흉골의 시포이드에서 배꼽까지 피부를 세로로 자른다. 흰색 선을 따라 복벽의 근육을 잘라. 다음으로, 시포이드 연골이 두 컷 사이에 있도록 y 모양으로 장밋빛 으로 컷을 확장합니다.
다음 단계는 포털 정맥 해부입니다. 먼저 면봉을 식염수로 적시다. 그런 다음 cecum, 상승 및 횡단 결장, 그리고 소장 루프를 외부화합니다.
장자를 왼쪽에 올려 대간의 뿌리를 노출시한다. 생리식염수로 촉촉한 거즈로 내장을 덮어 건조로부터 보호합니다. 포털 정맥을 노출하려면 간 엽을 양면으로 또는 위쪽으로 모은 면봉으로 다이어프램쪽으로 조심스럽게 움직입니다.
여기에서 우리는 포털 정맥과 상부 막질 정맥을 볼 수 있습니다. 간질로 덮여 있지 않은 포털 정맥의 일부를 현지화하고 포털 정맥 아래에 합자를 전달합니다. 손상으로부터 조직을 보호하기 위해, 생리식염수 용액으로 합자를 적시.
합자 끝을 집게하여 고정하고 부드럽게 조여 혈관을 안정시합니다. 카테터 의 합자 의 긴 부분을 포털 정맥의 자유 부분 아래에 전달하고 카테터가 포털 정맥 바로 옆에 위치하도록 당겨. 상부 막자 정맥과 포문 정맥의 접합 아래 3 밀리미터 의 상부 막질 정맥에 바늘을 삽입합니다.
바늘을 30도 각도로 잡고 정맥에 들어간 후 각도를 줄이고 약 6~7mm의 길이로 포탈 정맥과 평행하게 바늘을 거의 수평으로 전진시다. 바늘이 삽입된 장소에 한두 방울의 조직 접착제를 발라주세요. 간을 덮은 면봉을 제거합니다.
그 후 내장을 복강에 다시 넣습니다. 내장을 따뜻하게 한 식염수 용액으로 촉촉하게 닦고 촉촉한 멸균 거즈로 덮습니다. 카테터의 가자성을 확인하고 카테터를 분리된 식염수로 헹구세요.
정맥 혈액은 카테터에서 자발적으로 역류합니다. 5 분 후에 적절한 장막혈류가 유지되는지 확인하기 위해 장과 연동 운동의 색상을 확인하십시오. 결국, 배꼽 주위의 카테터의 탈산 부분을 외부화 하는 바늘의 세 층으로 복강을 닫습니다.
포털 정맥에서 혈액을 수집하려면 포털 카테터 플러그를 열고 혈액이 자유롭게 흐르게하십시오. 주사기와 무딘 바늘을 사용하고 혈액의 0.7 밀리리터 를 수집하지 않습니다. 카테터를 분리된 식염수로 헹구고 카테터 플러그를 닫습니다.
여기서 우리는 창자 투과성 평가를 위한 예시적인 포탈 혈액 샘플링 프로토콜을 제시합니다. 열등한 베나 카바의 혈액 샘플은 간 간 정리 및 흡수 연구에 필요합니다. 열등한 베나 카바로부터 혈액을 채취하려면 포탈 정맥에서 혈액을 복용할 때와 똑같이 진행됩니다.
여기에서 우리는 간 통관 측정을 위한 예시적인 혈액 샘플링 프로토콜을 제시하고 선택된 화합물의 창자 포털 혈액 간 조직 혈액 통로를 추적하기 위한. 우리의 연구에서 우리는 세균 대사 산물을 사용, 트리메틸레민 투과성의 마커로. 그러나 클래스 투과성 마커를 포함한 많은 다른 물질도 사용될 수 있다.
각종 박테리아 및 대사 산물 및 관도 또한 흡수 통로 또는 간 정리를 관하기 위하여 이용될 수 있습니다. 가이드와이어를 제거하고 일반적으로 1 밀리리터의 멸균 수를 사용하여 풍선을 팽창하지만 삽입 하기 전에 실제로 풍선 크기를 확인 합니다. 풍선 직경이 1센티미터를 초과해서는 안 됩니다.
쥐 머리를 아래로 내려 놓고 결장에서 투여 된 용액의 유출 위험을 최소화하십시오. 배수 포트와 대장 카테터를 사용하여 테스트 된 물질을 천천히 관리하십시오. 우리는 식염수의 0.7 밀리리터에 용해 킬로그램 체중 당 100 밀리그램의 용량에 트리메틸라민을 사용했다.
10분 후 카테터 풍선을 수축시합니다. 간 추출로 이해된 간 통관은 포탈 혈중 농도와 열등한 베나 카바 혈중 농도 의 차이 또는 열등한 베나 카바 및 포탈 혈중 농도의 비율에 의해 발현될 수 있다. 우리는 성공적으로 쥐에서 트리메틸라민의 창자 혈액 장벽 투과성 및 간 정리를 측정했습니다.
다음은 고혈압 쥐가 노민쥐에 비해 TMA에 결장 투과성을 증가시켰다는 것을 보여주는 대표적인 결과입니다. 또 다른 연구에서 우리는 높은 소금 섭취 창 자 혈액 장벽 투과성과 트리메틸라민의 간 통관에 영향을 미치는지 여부를 연구했다. 트리메틸라민의 대장 내 투여는 포탈 혈액 TMA 농도에서 상당한 증가를 일으켰다.
증가와 간 통관의 크기는 그룹 사이에서 유사했습니다. 우리는 또한 짧은 사슬 지방산의 흡수 경로를 추적했습니다. 우리는 대변, 포탈 혈액 및 말초 혈액의 농도를 측정했습니다.
이 비디오에서우리는 일반적으로 사용되는 방법과 는 달리 간 및 신장 기능, 간 통관 측정 및 세 번째 외인성 화합물의 흡수 경로에 의해 영향을받지 않는 생체 내장 혈액 장벽 투과성의 직접 측정을 포함하는 포괄적 인 프로토콜을 설명했습니다. 제시된 기술은 다른 실험 목적으로 조절될 수 있다. 예를 들어, 포털 혈압 측정 또는 약물 투여를 포털 정맥으로 직접 투여한다.
