짧은 펩티드 서열의 넓은 범위를 감안할 때,이 방법은 다른 많은 나노 입자 설계로 확장 될 수있다. 펩티드 변형은 진단을 목적으로 시스템을 적합하게 만들 수 있습니다. 항암 백금을 생분해성, 독성 안정화제로 약물에 캡슐화하는 것은 제약 응용 분야에서 매우 관련이 있습니다.
난소암을 가진 예비 생체 내 연구 결과는 유망하고 추가 조사될 것입니다. 우선, 섭씨 60도에서 초순수 수분 4밀리리터에 50밀리그램의 시스플라틴을 중단하십시오. 시스플라틴 용액에 낙하 하는 실버 질산염 용액을 넣고 어둠 속에서 섭씨 60도에서 2 시간 동안 300 ~ 400 RPM에서 혼합물을 저어줍니다.
그 후, 10%의 중량염산을 사용하여 용액에 이온이 없음을 확인합니다. 염산을 첨가하면 추가 은염화물이 형성되지 않으면 혼합물을 10분 동안 3, 220배 의 중력으로 원심분리합니다. 상체를 데수화하고 0.2 마이크로 미터 주사기 필터를 통해 필터링합니다.
이어서, 10개의 염화물 결정으로 2~3방울을 적용하여 백금용 여과물을 테스트한다. 서스펜션이 짙은 갈색 또는 주황색으로 변하면 플래티넘이 존재합니다. 다음으로, 1밀리리터의 물에 13.3밀리그램의 수산화나트륨을 섭씨 60도에서 3밀리리터의 물에 올레산 의 94.2 밀리그램 현탁액에 넣습니다.
혼합물을 섭씨 60도에서 2시간 동안 저어줍니다. 이어서, 열을 끄고 16~24시간 동안 실온에서 계속 저어주면서 원유를 유성, 황갈색 침전제로 얻는다. 반응 혼합물을 3, 220배 의 중력에서 10분 동안 원심분리하고 상체를 제거합니다.
섭씨 25도에서 회전 증발기에서 제품을 건조하십시오. 원심분리에 의한 제품을 소용돌이게 하고 회수하여 아세토나이트 5밀리리터로 원유 제품을 중단합니다. 이 세척 과정을 적어도 3회 이상 반복하여 순한 올레산 백금 II 컨쥬게이트를 옅은 노란색 고체로 획득한다.
먼저 5.7그램의 Fmoc 보호 L-페닐알라닌 기능을 있는 왕 수지(Wang 수지)를 1시간 동안 25밀리리터의 디메틸포르마미드에 담급니다. 그런 다음, 80 RPM에서 흔들면서 아민을 보호하기 위해 5 분 동안 DMF에서 20 % piperidine의 15 밀리리터에 수지. 수지물을 빼내고 20분 동안 보호 해제를 반복합니다.
수지는 DMF와 이소프로필 알코올로 씻어내십시오. 보호 가 확인되면, Fmoc 보호 L-티로신 TBTU 및 DIPEA를 추가하고 결합을 수행하기 위해 16 ~ 24 시간 동안 혼합물을 교반. DMF와 이소프로필 알코올로 수지세척.
카이저 테스트를 수행하고 이전에 설명한 대로 보호 해제 및 세척을 계속합니다. 커플과 보호 해제 Fmoc 같은 방법으로 리신을 보호. 그 후 DMF, IPA, 메탄올, 디클로로메탄 및 디틸 에테르로 수지세척을 세척합니다.
FITC 수정을 위해 KYF 베어링 수지 1그램을 따로 두십시오. 나머지 수지는 95%의 트리플루오로아세산에 담급니다. 2.5%트리이소프로필란과 2.5%의 물은 3시간 동안 수지에서 트리펩티드를 갈라둡니다.
다이틸 에테르로 원유 펩티드를 섭씨 20도까지 식힙니다. 침전액을 30~40밀리리터 의 차가운 다이틸 에테르로 3배 씻어 진공 상태에서 건조시. 다음으로, KYF 수지의 나머지 그램과 6-아세토헥사노산 30 밀리리터에 TBTU 및 DIPEA를 혼합합니다.
아지드 변형 트리펩티드를 얻기 위해 실온에서 16~ 24시간 동안 혼합물을 교반한다. 그런 다음 이 수지 253밀리그램과 3.78 밀리그램의 고체 구리(I)요오디드 71.9 밀리그램의 propargyl florisean 및 DIPEA 2.24 밀리그램을 결합하십시오. 24 시간 동안 흔들면서 혼합물이 반응하게하십시오.
그런 다음 FITC 변형 된 KYF 베어링 수지를 철저히 세척하십시오. FITC는 수지에서 KYF를 수정하고 수정되지 않은 트리펩티드와 동일한 방식으로 정화합니다. 나노에몰리젼을 준비하기 시작하려면, IPA의 1.5 밀리리터에 올레산 백금 II 컨쥬게이트의 10 밀리그램을 용해하십시오.
이 용액을 5 밀리리터 주사기에 넣고 20 게이지 바늘을 부착하고 주사기를 반응 부위 에 주사기 펌프에 장착합니다. 주사기 펌프를 분당 0.1 밀리리터로 설정합니다. FITC 변형 KYF를 가진 나노에멀젼의 경우 FITC 변형 된 KYF 1 밀리그램과 20 밀리리터의 물에 수정되지 않은 KYF 1 밀리그램을 녹입니다.
수정되지 않은 KYF를 가진 나노에멀젼의 경우, 대신 20 밀리리터의 물에 KYF 2 밀리그램을 녹입니다. FITC 수정 또는 수정되지 않은 KYF 용액을 섭씨 37도로 가열합니다. KYF 솔루션이 약 400RPM에서 교반되고 주사기가 용액과 정렬되었는지 확인합니다.
이어서, 주사기 펌프를 시작하여 올레산 백금 2개의 컨쥬게이트 드롭을 현명하게 첨가하기 시작한다. 컨쥬게이트가 추가되면 교반 속도를 150RPM으로 줄이고 용액을 실온으로 냉각시킵니다. 계속 16~24시간 동안 저어줍니다.
이어서, 나노멀티온을 10, 000 달톤 원심 필터 단위로 농축한다. 초순수의 4밀리리터 부분으로 원심 필터 단위로 나노에멀젼을 세 번 씻으시면 됩니다. 그리고 섭씨 4도에 수성 용액으로 보관하십시오.
최종 제품은 FITC 변형 나노 입자에 대한 KYF 나노 입자 및 형광에 대한 오팔레산입니다. 수정되지 않은 KYF로 제조된 나노에멀젼의 액적물은 구형, 잘 분산되어 있으며 크기가 상대적으로 균일했다. 전송 전자 현미경 심상을 기반으로, 코어는 직경 약 107 나노미터이었다.
FITC 수정 된 나노 에멀젼은 녹색으로 여기에서 나타나며 다양한 난소 암 세포주에서 세포를 입력 할 수 있습니다. 두 제제의 유체 역학 직경은 4개월 동안 물에 저장되는 동안 증가했지만 전체 치수는 보존되었습니다. 또한, 20%의 태아 소 혈청에서 배양의 하루 후에 에멀젼의 공화가 관찰되지 않았다.
에멀젼에서 플래티넘의 출시는 pH 7.4에서 가장 낮았으며 4시간 후에 출시된 플래티넘의 20.8%에 불과했습니다. 플래티넘 릴리스는 pH가 감소함에 따라 가속화되었습니다. 백금 함유 KYF 코팅 된 나노 에멀젼은 이러한 난소암 세포주의 생존가능성을 임상적으로 관련된 카보플라틴에 의해 달성된 것보다 훨씬 더 큰 수준으로 감소시켰다.
나노에멀젼은 또한 6개의 세포주 중 5에서 cisplatin 보다는 생존가능성에 있는 비교하거나 더 중대한 감소를 보여주었습니다. KYF 코팅 된 나노 에멀젼은 지속적으로 단독으로 올레산 백금 II 컨쥬게이트보다 생존가능성이 크거나 더 큰 감소를 유도했다. 이것은 트리펩타이드 염기 나노입자 스캐폴드 내에서 소수성 치료제를 캡슐화하는 간단하고 효율적인 방법입니다.
짧은 펩타이드는 생분해성이 있으며 독성이 낮으며 의학 및 생명 공학에 중요합니다. 유기 용매에 노출되지 않도록 연기 후드에서이 절차를 수행합니다. 백금 올레산과 KYF 백금 나노에멀젼은 항암 성질을 가지고 있으므로 특별한 주의를 기울여 처리해야 합니다.
이 방법은 낮은 filabilator 활동 및 장비의 관점에서 간단합니다, 그러나 그것은 합성 전략의 적당한 적용에 의존하고, 근본적인 화학 개념. 우리의 방법은 다른 작은 약물 분자를 제공하기 위해 확장 될 수있다. 나노 입자 코어는 올레산으로 구성되어 있으므로 소수성 제제의 캡슐화에 적합합니다.
