이 새로운 프로토콜은 조사자가 세포종 및 미토콘드리아 산소화뿐만 아니라 세포성 redox 상태를 포함한 여러 대사 매개 변수를 모니터링 할 수 있게합니다. 동시에 심근 기능의 전통적인 측정을 측정하는 동안. 이 기술의 주요 장점은 반사 분광법과 관련된 유물을 피하는 침투 된 심장에서 미토콘드리아 대사의 중요한 요소에 대한 간단한 비파괴 동적 모니터링입니다.
이 기술에 새로운 사람들은 밸브를 손상시키지 않고 카테터를 삽입하는 데 어려움을 겪고 실내 조명 오염을 피할 수 있습니다. 카테터를 삽입하고 신중하게 조정해야 합니다. 또한 수집 섬유는 어려울 수 있는 왼쪽 심실 프리 월을 가로질러 전달되는 빛을 최대화하기 위해 적절하게 배치되어야 합니다.
왼쪽 심방 부속물의 작은 조각을 잘라 내고 승모 판막을 통해 왼쪽 심실에 광섬유 카테터를 삽입합니다. 그런 다음 회전하여 조명이 켜진 왼쪽 심실 없는 벽을 달성합니다. 픽업 섬유의 다른 쪽 끝을 빠른 스캐닝 분광계에 연결합니다.
왼쪽 심실의 최대 조명 영역 바로 맞은편에 광섬유를 심혼에서 약 1센티미터 떨어진 지점에서 놓습니다. 방 광원은 0이어야 합니다. 카테터의 회전과 픽업 광섬유의 위치 지정은 검출기의 포화 없이 적절한 빛을 얻기 위해 조정되어야 합니다.
완전한 어둠을 얻기 위해 실험 영역의 조명을 끕니다. 분광계 드라이버를 통합한 사용자 지정 프로그램을 시작하여 전송된 라이트의 데이터 수집 및 실시간 분석을 수행합니다. 모든 프롬프트를 탐색하여 심심 분광검사 획득 모드에 대한 옵션을 선택합니다.
다음 페이지에서 보조 데이터 수집이 발생하는지 여부를 나타냅니다. 마지막으로 저장할 크로모포레 참조 스펙트럼과 데이터의 위치를 포함한 수집 매개 변수를 입력합니다. 이제 490 ~ 630 나노미터의 대역폭을 입력합니다.
두 헤르츠의 샘플링 속도를 입력합니다. 광원을 끄면 어두운 전류 또는 제로 광 스펙트럼을 수집하여 배경 신호 레벨을 수정합니다. 피팅 루틴에 사용할 원하는 염색체 참조를 선택하려면 클릭합니다.
획득 데이터 페이지에서 카테터와 픽업 섬유의 위치를 조정하여 산소가 공급된 근로로빈 흡수력을 관찰해야 하는 500나노미터 영역에서 신호 진폭에 특정주의를 기울여 소프트웨어에 표시되는 전송된 빛을 최대화한다. 600 나노미터 영역에서 검출기를 포화시키는 것이 아니라는 것을 확인하십시오. 카테터 조명을 끄고 빛이 감지되지 않음을 확인하여 수집된 스펙트럼에 외부 광원이 기여하지 않도록 하십시오.
스펙트럼 저장 버튼을 클릭하여 데이터 수집을 시작합니다. 현재 제어 스펙트럼에 비해 향후 스펙트럼의 차이 흡광도 스펙트럼을 보려면 컨트롤로 설정하려면 설정합니다. 이 시점에서 원하는대로 어떤 생리적 혼란을 수행.
예를 들어, 시안화물이 심장 성능 및 염색체 흡수에 미치는 영향을 결정하기 위해, 시안화물의 재활용을 피하기 위해 난투의 재순환을 중단한다. 주사기 펌프를 사용하여 대동맥 카눌라 바로 앞의 난간으로 다른 속도로 시안화물을 주입하여 심장으로 흐르는 후두에서 시안화물의 원하는 농도를 달성하십시오. 동시에 심장 기능과 광학 특성을 모니터링합니다.
관상 동맥 흐름과 심박수의 효과와 심장 벽을 통한 광학 전달이 안정된 상태일 때 시안화물 주사기 펌프를 중지하십시오. 시안화물 주입을 중지 한 후 5 분 시스템에서 산소를 제거하기 위해 100 % 산소에서 100 %의 질소로 버블링 가스를 전환합니다. 약 10분 후에 흐름을 멈추고 총 허혈성 및 저산소 상태를 시뮬레이션합니다.
스펙트럼 데이터 분석을 위해 퍼퓨히된 심장 분석 모드에서 프로그램을 실행합니다. 적절한 분석 프로그램을 선택합니다. 데이터 파일 경로 및 참조 스펙트럼 파일을 입력합니다.
카테터 광원의 미리 저장된 스펙트럼을 로드하는 카테터 광원을 선택합니다. 빈 데이터 읽기를 선택합니다. 그런 다음 최소 및 최대 파장 집합을 선택합니다.
데이터 분석을 위한 대역폭을 490 내지 630나노미터로 입력한다. 메인 메뉴로 돌아가기를 선택한 다음 참조 읽기를 선택합니다. 해석에 사용할 참조 스펙트럼을 확인합니다.
메인 메뉴로 돌아가기를 선택한 다음 기본 메뉴에서 시간 점을 선택합니다. 이제 시간 제로 타임 포인트를 컨트롤로 선택하고 범위를 100점으로 설정합니다. 또한 100점 범위에서 실험 기간으로 한 번 포인트를 선택합니다.
평균 흡광스펙트럼 탭에서 원시 차광 스펙트럼을 관찰합니다. 메인 메뉴로 돌아가차다 차흡수 계산을 선택합니다.
모든 위치에서 시간 제로와 시간 1의 차이를 선택합니다. 서로 다른 스펙트럼 창과 참조 중량 창의 피팅 요소에 장착 된 스펙트럼을 관찰합니다. 이 절차를 반복하여 실험의 다른 시간 지점을 비교합니다.
메인 메뉴로 돌아갑니다. 원하는 이름을 입력하고 다른 프로그램과의 추가 분석을 위해 데이터 저장을 선택하여 스프레드시트 보고서에서 데이터 및 분석을 저장합니다. 여기에 도시된 카테터의 스펙트럼과 토끼 심장 프리 월로부터 전달된 빛의 원시 스펙트럼이 여기에 있다.
이러한 데이터는 스펙트럼의 파란색 영역에서 빛의 매우 큰 감쇠를 보여줍니다. 그러나, 미오글로빈과 미토콘드리아 사이토크롬으로부터의 흡광도 대역은 인서식에서 490~580나노미터 사이에서 직접 관찰될 수 있다. 대조군과 시안화물 처리 심장의 차이 스펙트럼은 여기에 표시됩니다.
맞춤 스펙트럼은 참조 스펙트럼에서 계산됩니다. 잔류 스펙트럼은 원시 데이터에서 핏을 빼는 것입니다. 여기에 참조 스펙트럼의 스펙트럼 진폭이 표시됩니다.
사이토크롬 사슬 아래로 전자의 흐름이 시안화물에 의해 차단됨에 따라 대부분의 사이토크롬의 흡수도가 강한 증가가 관찰된다. 또한 산소 소비가 시안화물에 의해 제거됨에 따라 산소가 공급되는 근로로빈의 흡수도증가했습니다. 시안화물 세척과 시안화물 주입의 차이 스펙트럼은 시안화물 효과의 부분반전을 드러낸다.
여기에 도시된 무유 허혈 상태의 차이 스펙트럼과 대조군이다. 이 스펙트럼은 세포성 미토콘드리아 의 완전히 탈산소 및 감소 된 상태를 나타냅니다 제어 조건. 우리는 현재 심장 대사에 산화 질소의 효과 연구 하 고 있습니다.
앞서 언급한 크로모포리 외에도 산화질소에 의해 생성된 다른 광학 검출 가능한 종도 추적할 수 있습니다. 또한 카테터는 레이저에 연결하여 라만 분광법을 사용하여 지질 대사를 연구할 수 있습니다. 칼슘 심장 대사는 또한 외인성 또는 유전적으로 통합된 칼슘 프로브의 흡수에 의해 공부될 수 있습니다.
