애기장대에서 패턴 트리거 산화 버스트와 모종 성장 억제 어세

이 약은 다른 식물 유전형의 면역 출력을 평가하고 비교하기 위하여 이용될 수 있습니다. 이러한 기술의 주요 장점은 빠르고 신뢰할 수 있으며 일반적인 실험실 장비를 사용한다는 것입니다. 성장 억제 분석의 경우, 동일한 크기와 나이의 묘목을 이식하고 변형을 제한하기 위해 계량하기 전에 건조하게 얼룩져야합니다.

발아 후 4~5주 동안 날카로운 4mm 생검 펀치를 사용하여 아라비도시스 식물당 잎 디스크 1개를 제거하고 미드빈을 피하고 상처를 제한하도록 주의하십시오. 건조를 방지하기 위해, 잘, adaxial 측면 최대, 이중 증류수의 100 마이크로 리터를 포함하는 사용되지 않는 96 웰 발광계 플레이트의 개별 우물로 디스크를 수집합니다. 여러 유도인을 평가하는 경우 각 유도체 처리에 대해 동일한 잎에서 두 번째 잎 디스크를 제거하고 뚜껑으로 플레이트를 덮어 잎 디스크가 실온에서 하룻밤 동안 회복될 수 있도록 합니다.

다음 아침, 마이크로 플레이트 판독기 매개 변수를 40-60분 동안 2분 간격으로 1, 000밀리초의 통합 시간으로 설정하여 동적 산화 버스트를 캡처합니다. 다음으로, 다중 채널 파이펫을 사용하여 각 우물의 물을 100 마이크로리터의 새로 준비된 반응 용액으로 대체하며, 각 유전자형에 대한 유도반응, 유도성이 없는 경우 기저 반응 산소 종 수준을 평가할 수 있다. 그런 다음 마이크로 플레이트 판독기의 가시 스펙트럼에서 모든 파장에 대한 광 방출을 즉시 측정합니다.

발아 후 4 일 동안, 유도제 펩타이드의 희석으로 보충 MS 배지의 500 마이크로 리터와 48 웰 플레이트의 각 우물을로드합니다. 다음으로, 멸균 집게를 사용하여 동일한 크기의 6~8개의 묘목을 각 펩타이드 희석에 신중하게 이식하고, 뿌리에 모종이나 파손에 손상이 없고 뿌리가 매체에 침수되는 것을 주의한다. 모든 묘목이 도금되면, 마이크로포어 테이프로 접시를 밀봉하고, 8 ~ 12 일 동안 표준 짧은 하루 조건하에서 식물을 배치합니다.

백분율 성장 억제를 결정하기 위하여는, 각 우물에서 모종을 주의 깊게 제거하기 전에 시각적으로 성장 억제를 기록하기 위하여 사진을 찍습니다. 그런 다음 종이 타월에 뿌리를 두드려 건조하고 각 모종을 분석 척도로 계량합니다. 이 대표적인 실험에서, 활동적인 면역 신호가 있는 돌연변이 식물은 야생형 아라비도시스 식물에 비해 더 높은 누적 및 평균 산화 파열을 보였으며, 면역 신호가 손상된 돌연변이 식물은 10에서 1, 000 나노몰라 사이의 농도에서 감소된 산화 파열을 나타냈다.

모종 성장 억제에 있는 예상된 다름은 또한 100 및 1, 000 나노 몰라 유도기 펩티드 농도에서 성장한 모든 유전자형 사이에서 분별될 수 있었습니다. 1, 000 나노몰라 펩티드 희석에서 재배될 때, 활동적인 면역 신호가 있는 돌연변이는 동일한 조건에서 자란 야생형 식물보다 현저히 작았고, 면역 신호가 손상된 돌연변이체는 야생형 식물에 비해 약한 성장 억제를 나타냈다. 이 방법은 초기와 늦은 면역 반응을 위한 증거를 제공합니다.

MAP 키나아제 소사, 병원균 유발 유전자 발현 및 감염 방법을 포함한 여러 가지 다른 기술은 이러한 경로를 묘사하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 기술은 병원체 수용체 단백질과 여러 가지 다른 신호 성분을 성공적으로 식별한 대규모 스크린에서 사용하기 위해 수정되었습니다.