이 프로토콜은 성인 과 초기 산후 마우스 모두에서 폐 동맥 혈관을 캐스팅하기위한 정확한 단계별 지침을 제공합니다. 이 기술을 통해 사용자는 연조직의 무결성을 유지하면서 마이크로 CT를 포함한 다양한 방법으로 시각화를 위해 전체 혈관 네트워크를 완전히 캐스팅할 수 있습니다. 이 기술은 폐 혈관 형태와 아키텍처를 보는 데 특히 유용하지만 다른 혈관 침대의 타겟팅에 쉽게 적응 할 수 있습니다.
많은 수술과 해부와 마찬가지로 실제로 절차를 시각화하는 대신 사용할 수 없으며 시청자는 더 도전적인 기동이 수행되는 것을 보는 것이 도움이 될 수 있습니다. xiphoid 프로세스가 노출되면 갈비뼈를 부드럽게 잡고 상승시킵니다. 지금 노출되고 반투명한 다이어프램을 조심스럽게 절개합니다.
폐는 눈에 띄게 붕괴하고 다이어프램에서 물러나게 됩니다. 폐와 기관지를 노출 한 후, 30 게이지 바늘의 허브에 PE10 튜브의 15 센티미터 를 스레드. 그리고 PBS에서 이 장치를 1밀리리터 주사기에 부착하여 10을 함유하여 4개의 니트로프사이드 나트륨에 대해 부착한다.
모든 공기가 제거 될 때까지 튜브를 프라임 플런저를 진행합니다. 텍스트에 효과적인 대안으로, 한쪽에 심장의 정점을 관통하고, 근육을 통해 곡선 집게의 끝을 전달, 조직의 다른 측면을 밖으로. 7-0 실크의 10센티미터 길이의 한쪽 끝을 잡고 조직을 통해 약 2센티미터를 당깁니다.
봉합사를 묶은 후 남은 8센티미터의 봉합사를 사용하여 심장을 caudally 당깁니다. 그리고 수술 보드에 봉합사의 끝을 테이프. 상승 대동맥과 폐 동맥 트렁크 아래에 곡선 집게의 팁을 연결합니다.
그리고 오프닝을 통해 다시 7-0 실크의 3 센티미터 길이를 당겨 단일 던지기 느슨한 봉합사를 만듭니다. 가위를 사용하여 심장 정점을 향해 1-2밀리미터 절개를 하여 얇은 벽으로 둘러싸인 오른쪽 심실을 관통합니다. 그리고 카테터를 반투명하고 얇은 벽의 폐 동맥 트렁크에 부드럽게 전진시키는 프라이밍 튜빙을 오른쪽 심실로 소개합니다.
카테터가 왼쪽 또는 오른쪽 폐 가지로 진행되지 않았는지, 폐 동맥 분기 점에 반소하지 않았는지 시각적으로 확인합니다. 튜브의 탈경 부분을 수술 판에 테이프로 만들고, 두 혈관 주위의 느슨한 봉합사를 부드럽게 조입니다. 8센티미터 의 봉합사를 잘라 서 마음을 자연적인 휴식 위치로 되돌려 놓습니다.
그리고 난파가 혈관을 빠져 나갈 수 있도록 마음의 왼쪽 오라클을 잘라냅니다. 그런 다음 주사기 펌프를 사용하여 혈중 농도가 0.5 ml/min의 유량으로 니트로플루스트사이드를 주입하고, 배분이 명확해질 때까지 혈관을 최대적으로 팽창시다. 폐 인플레이션 장치를 구성하려면 욕조에서 유연한 플라스틱 24 게이지 정맥 카테터를 자르고 나비 주입 세트의 바늘에 연결합니다.
이 유닛을 스톱콕에 부착하고 스톱콕을 오픈 50밀리리터 주사기에 부착합니다. 주사기를 포르말린으로 적재하고 카테터를 프라이밍한 후 스톱콕이 닫혀 있는 후 링 스탠드에 주사기를 배치하여 반월상연연이 기관보다 20센티미터 높은 지점에 놓습니다. 두 개의 느슨한 봉합사를 배치, 2 ~ 4 밀리미터 떨어져, 크리시드 연골열에 열등, 그리고 합사보다 우수한 카리 갑상선 인대에 작은 절개를 만들기 위해 가위를 사용합니다.
카테터를 개구부에 삽입하고 두 개의 느슨한 봉합사를 넘어 팁을 진행합니다. 기관 주위의 봉합사를 조이고 스톱콕을 열어 포멀린이 중력으로 폐로 들어갈 수 있도록 합니다. 폐가 완전히 팽창할 때까지 5분 간 기다립니다.
폐가 인플레이션 중에 갈비뼈를 부착하는 경우, 무딘 팁 의 집모를 사용하여 갈비뼈의 외부를 파악하고 모든 방향으로 갈비뼈를 움직여 폐와 직접 접촉하지 않고 로브를 풀어 줍니다. 5분 후, 첫 번째 봉합사와 리게이트 뒤에 있는 카테터를 철회합니다. 그런 다음 두 번째 봉합사 뒤에 있는 카테터를 철회하고 리게이트를 철회합니다.
폐는 이제 폐쇄되고 가압된 상태로 팽창해야 합니다. 혈관을 캐스팅하려면 폴리머 희석제 의 8-1-1 용액의 밀리리터 1밀리리터를 1밀리리터 주사기로 로드합니다. 그리고 플런저를 조심스럽게 삽입합니다.
주사기가 반전되면 플런저를 우울시켜 공기를 제거하고 주사기 끝에 반월 상 연골이 형성되도록 합니다. 바늘의 허브에서 니트로프사이드 주사기를 제거하고 PBS를 허브로 드립시켜 반월상연증을 생성한다. 폴리머 화합물 주사기를 허브에 가입하고 분당 0.02 밀리미터로 주입을 시작합니다.
그것은 폐 동맥 트렁크를 입력으로 주사기 볼륨을 지적, 튜브를 통해 자유롭게 이동할 때 화합물을 모니터링. 모든 엽이 완전히 채워질 때까지 가장 작은 용기까지 계속 주입을 계속하십시오. 펌프를 멈추고 다시 한 번 주사기 볼륨을 기록하십시오.
광섬유 세척 물티슈로 폐를 덮고 PBS를 자유롭게 적용합니다. 실온에서 30~40분 동안 시편이 방해받지 않고 앉을 수 있도록 합니다. 폴리머 화합물이 경화되고 경화되면 마우스의 사지와 하반신을 끊습니다.
그리고 머리와 흉부를 50 밀리리터 원물 채워진 10 % 버퍼링 포르말린 에 넣고 하룻밤 사이에 놓습니다. 다음 아침, 기관대를 잡고 심장과 폐 유닛을 남은 흉곽과 흉부에서 부드럽게 분리합니다. 수확한 조직 블록을 포르말린으로 채워진 신경병 바이알에 놓습니다.
성공적인 캐스트는 전체 폐 동맥 네트워크의 균일한 충전을 초래할 것입니다. 폐 또는 폐 기도에 손상이 있는 경우에, 작은 누수는 압력을 보유하는 폐를 방지할 것입니다. 카테터를 통해 혈관 시스템에 공기가 유입되어 화합물의 하류 흐름을 차단하여 에어록에서 패치 또는 불완전한 충전이 발생할 수 있습니다.
밑약은 너무 작은 화합물이 혈관에 도입 될 때 발생합니다. 또는 너무 빨리 고분자 화합물을 과도하게 채우거나 너무 많이 도입하면 동맥 파열이나 더 일반적으로 정맥 운송을 유발할 수 있습니다. 폐 트렁크 아래로 카테터를 너무 멀리 진행하면 팁이 한 폐 동맥 가지에 쐐기를 박아 흐름의 불균형을 일으키고 한쪽이 다른 쪽보다 빨리 채워질 수 있습니다.
입증 된 기술의 신중한 성능은, 황사 혈관 끝점의 적절한 직접 모니터링을 사용하여, 표준 주입 속도는 폐 혈관의 최적의 충전귀착될 수 있습니다. 또한, 전신 혈관에이 기술을 적응다른 혈관 침대에서 동등하게 유리한 결과를 얻을 수 있습니다. 주조 후 마이크로 컴퓨팅 단층 촬영 스캐닝을 위해 샘플을 처리할 수 있습니다.
후처리의 경우 상업용 소프트웨어 패키지를 사용하여 폐 혈관 트리의 3D 볼륨 렌더링을 생성할 수 있습니다. 처음으로이 기술을 시도 할 때, 특히 깨지기 쉬운 폐와 폐 동맥 주위에주의하십시오. 가장 중요한 것은 혈관 회로에 공기를 도입하지 않는 것입니다.
성공적인 캐스팅 에 이어 마이크로 CT로 샘플을 스캔할 수 있으며 혈관 morphometry 및 아키텍처와 관련된 질문을 탐색할 수 있습니다.
