이 프로토콜은 암 전이 필드에 있는 중요한 질문에 대답하는 것을 허용했습니다. 포함, 종양 세포는 폐를 식민지? 종양 세포는 어떻게 휴면 상태로 유지합니까?
그리고 무엇이 휴면 상태를 종료하고 결국 전이를 형성하도록 유도. 이 프로토콜의 주요 장점은 동적 전이성 프로세스가 실제 미세 환경에서 실시간으로 생체 내에서 직접 연구할 수 있다는 것입니다. 이 방법은 몇몇 폐 질병에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다, 그러나 폐, 전이의 일반적인 사이트인 폐에 전파하는 개별 종양 세포가 그(것)들을 이해하는 데 특히 유용합니다.
2-0 실크 봉합사를 사용하여 22 게이지 카테터의 베이스에 매듭을 묶어 2 인치 긴 꼬리를 남깁니다. 마우스가 완전히 마취되면 마우스를 수술 테이블로 이동하여 마우스를 삽관한 다음 마우스 주아웃 주위에 2-0 실크 봉합사를 묶어 삽관 카테터를 고정합니다. 인공호흡기를 삽관 카테터에 연결합니다.
종이 테이프를 사용하여 앞쪽을 두개골로 고정하고 후드 팔다리를 가열 된 수술 단계로 caudally 고정하십시오. 수술장에 대한 노출을 최대화하기 위해 마우스 뒷면의 길이에 종이 테이프를 놓습니다. 포셉으로 피부를 들어 올리고 약 10mm의 원형 절개를 왼쪽에서 흉골까지 약 7mm, 서브코스트 마진보다 약 7mm 더 우수합니다.
갈비뼈를 덮어 연조직을 절제합니다. 집게를 사용하여 여섯 번째와 일곱 번째 갈비뼈를 상승시킵니다. 무딘 마이크로 해부 가위를 폐쪽으로 둥글게 한 면으로 사용하여 내장 공간에 들어가기 위해 여섯 번째와 일곱 번째 갈비뼈 사이의 늑간 근육을 조심스럽게 관통하십시오.
결점에서 압축 공기 통을 섬세하게 배출하여 폐를 붕괴시키고 폐를 가슴 벽에서 분리했습니다. iatrogenic 폐 손상을 방지하기 위해 짧은 버스트에 압축 공기를 발사. 생검 펀치를 절삭 공구 위에 놓고 늑간 절개를 통해 절삭 공구의 베이스를 조심스럽게 기동합니다.
절단 공구 베이스를 흉벽과 평행하게 방향을 지정하고 리브 케이지를 통해 5mm 원형 구멍을 뚫습니다. 5-O 실크 봉합사를 사용하여 구멍에서 약 1mm 떨어진 지갑 끈 스티치를 배치합니다. 다음으로 창 틀을 가슴 벽에 배치하고 창 홈 내에서 원형 결함의 가장자리가 캡처됩니다.
5-O 실크 봉합사를 단단히 묶어 이식된 창을 단단히 잠급구습니다. 폐를 건조하기 위해 약 10~20초 동안 안정적이고 부드러운 압축 공기 스트림을 적용합니다. 집게를 사용하여 외부 가장자리로 창 프레임을 잡고 부드럽게 들어 올려 창 프레임의 밑면에서 폐를 분리하십시오.
광학 창 프레임의 밑면을 따라 청약 접착제의 얇은 층을 분배합니다. 광학 창 틀을 폐 조직에 10~20초 간 부드럽게 누르고 부착합니다. 직사각형 커버 슬립에 접착제 5mm 방울을 분배합니다.
진공 픽업 도구를 사용하여 5mm 커버 슬립을 선택합니다. 커버의 밑면을 접착제에 담근 다음, 직사각형 커버 슬립의 측면에 대해 여분의 접착제를 세 번 긁어 커버 슬립에 접착제의 매우 얇은 층을 확인합니다. 조심스럽게 커버슬립을 폐 조직 바로 위에 광학 창 프레임의 중앙에 있는 오목 내부의 각도로 배치합니다.
인공호흡기를 잠깐 고정하여 양압을 생성하고 폐를 팽창시다. 커버가 폐 조직과 평행하게 미끄러지는 방향을 조정하고, 회전 운동을 사용하여 폐 표면과 커버 슬립의 지하표면 사이의 직접 증착을 생성한다. 약 25초 동안 부드러운 압력을 유지하여 시아노아크릴레이트 접착제를 설정합니다.
커버 슬립을 진공 픽업 도구에서 집게로 분리합니다. 5-O 실크 봉합사를 사용하여 피부 절개 가장자리에서 1mm 미만의 지갑 스트링 스티치를 만듭니다. 창을 고정 매듭으로 단단히 묶기 전에 창 프레임의 바깥 쪽 테두리 아래에 여분의 피부를 넣습니다.
금속 유리 인터페이스에 소량의 접착제를 분배하여 커버 슬립과 창 프레임 사이의 밀폐 씰을 보장합니다. 멸균 바늘을 인슐린 주사기 1ml에 부착합니다. 시포이드 프로세스 아래에 바늘을 삽입하고, 왼쪽 어깨쪽으로 전진하고, 횡격막을 통해 흉부 구멍에 들어갑니다.
주사기를 부드럽게 뒤로 끌어서 흉부 구멍에서 잔류 공기를 제거합니다. 단일 폐 부위의 다광인 인트라베이티 이미징은 마이크로혈관이 3일 연속으로 재배치될 수 있음을 보여주었다. 단일 선박에서 정의 가능한 지점은 매일 연속확인되었습니다.
표지가 없는 적혈구는 큰 혈관에서 흐를 때 그림자를 만들었습니다. 선박에 대한 분기 점의 각도를 사용하여 적혈구 유량을 계산할 수 있습니다. 적혈구 속도는 또한 형광 마이크로스피어와 마우스를 주입하여 정량화되었고 그들의 트랙 길이는 프레임 획득 시간으로 나누어 측정되었다.
고정되고 흐르는 마이크로스피어는 구별할 수 있었습니다. 보급된 종양 세포의 운명은 폐의 고해상도 화상 진찰을 위한 창을 사용하여 며칠 동안 연속 화상 진찰로 추적되었습니다. 종양 세포는 도착하여 첫날폐 혈관에 박혀 있었습니다.
그러나, 세포는 재순환 또는 사치를 나타내는 2 일과 3일에 폐 혈관에서 검출되지 않았습니다. 폐내 전이성 진행의 절정 단계는 종양 세포 도착, 종양 세포의 사치를 폐 parenchyma로 시작하고 매크로 전이를 형성하는 증식으로 시작하여 시각화되었다. 광학 창 프레임 배치 중 폐에 대한 외상을 피하기 위해주의하십시오.
폐는 출혈하는 경향이 있으며, 이는 나중에 배치 하는 동안 커버 미끄러짐 준수를 방해할 것입니다. 이 절차에 따라 수행 될 수있는 다른 방법은 마이크로 카르타포그래피에 수정 된 접근 방식으로 고용 될 때 반복 된 이미징에 대한 관심 영역의 정확한 재지역화를 허용하는 인트라 베이직 현미경 검사를 포함합니다. 이 프로토콜은 전이의 기계장치에 관하여 중요한 질문의 조사에서 폐의 시각화를 허용했습니다.
이 연구 결과는 암 환자를 위한 새로운 처리를 재건하기 위하여 잠재력을 가지고 있습니다.
