이 방법은 급성 담즙 췌장염에서 발생하는 염증 성 사건을 재현하는 데 사용할 수 있습니다. 그것은 그것의 초기 단계에서 췌장 조직에 있는 변경을 공부하는 것이 가능합니다, 이는 일반적으로 진료소에서 가능하지 않습니다. 이 기술의 주요 장점은 훈련 된 연구원을 위해 빠르고 쉽게 재현할 수 있으며 인간의 급성 췌장염과 유사한 결과를 제공한다는 것입니다.
이 방법은 췌장 및 인접 한 장기에서 염증 성 중재 세포의 연구를 허용하기 때문에 약물 분자 및 기타 치료 적 개입의 약리적 면역 반응을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 이 프로토콜을 시도할 때 장기를 찾고 캐니언 영역을 설정하는 것이 중요합니다. 장기의 위치를 암기하고 메틸렌 블루와 같은 색의 용액을 사용하여 먼저 주입 응용 프로그램을 행사합니다.
발가락 핀치로 마취의 깊이를 확인한 후 마취마우스의 복부 부위를 5%의 포비도네 요오드 용액으로 청소하십시오. 트리머를 사용하여 가슴과 하복부 사이의 머리카락을 제거하고 약 2 평방 센티미터의 수술 부위를 70 % 알코올로 청소하십시오. 수술 판에 동물을 고정하고 복부의 상부에 수평으로 피부의 5 밀리미터를 절단하고 xiphoid 과정 아래 1 센티미터를 절단 가위를 사용합니다.
복막에 컷을 반복하여 캐비티를 최소화하여 복강경 절제술을 수행합니다. 리트랙터를 사용하여, 창자에서 약 1 센티미터에서 머리쪽으로 간을 당기고 췌장과 십이지장 의 지역을 찾습니다. 집게를 사용하여 간을 동물의 머리쪽으로 들어 올립니다.
소장의 부분을 부드럽게 당기면, 일반적인 담관의 탈반 부분을 더 잘 볼 수 있는 6-0 폴리프로필렌 봉합사로 두 측면 끝을 고정하십시오. 마이크로 용기 클립을 사용하여 근위 공통 담관을 일시적으로 폐색합니다. 복강에서 장기를 노출시다.
그런 다음 8-0으로 탈모 한 일반적인 담관의 임시 폐색을 합니다. 봉합 사. 일반적인 담관에 접근하려면 소장 벽의 희끄무레한 부분으로 나타나는 복리어 지역을 뚫습니다. 0.54mm 폴리에틸렌 튜브에 0.4 밀리미터 바늘을 연결한 후, 3분간 10그램당 10마이크로리터의 일정한 속도로 2.5%의 타우로콜린산나트륨 용액 주입을 위한 주입 펌프를 시작합니다.
주입 후, 마이크로 용기 클립을 제거, 임시 8-0 봉합사, 췌장 담관에서 주사 바늘. 6-0 비흡수성 모노필라멘트 폴리프로필렌 봉합사로 복부를 봉합합니다. 복강경과 최종 봉합사 사이의 시간은 30 분 이상이어야합니다.
수술 후, 나무 면도와 물과 음식 광고 리비툼 줄 지어 폴리에틸렌 상자에 동물을 집. 피부를 뒤로 당긴 동물을 부드럽게 잡고 안구의 약간의 돌출을 촉진하고, 눈이 위쪽으로 향하여 동물을 배치합니다. 동물의 눈에 국소 마취제를 함유한 눈 연고 한 방울을 주입합니다.
모세관 튜브의 끝을 눈의 내측 모서리에 놓고 약 30~45도 각도로 안구 아래에 부드럽게 삽입합니다. 혈류가 시작될 때까지 모세관 튜브를 회전시십시오. 컬렉션이 끝나면 눈꺼풀을 가벼운 압축으로 닫아 두어 항상성을 보장하십시오.
나중에, 27 게이지 바늘을 사용하여, 마우스의 복막 구멍에 얼음 차가운 PBS의 4 밀리리터를 주입. 주사 후 복막을 10초 동안 부드럽게 마사지하여 부착된 세포를 제거합니다. 가위와 핀셋을 사용하여 내피부와 근육에 0.5cm의 작은 컷을 만들어 복강을 노출시한다.
회막에 전구 파이펫을 삽입하고 지방 조직을 흡인하지 않도록주의하면서 가능한 한 많은 액체를 수집합니다. 추가 처리를 위해 헤드 리전에서 췌장의 일부를 수집합니다. 수집된 유체를 얼음 위에 보관하는 튜브에 보관하십시오.
그런 다음 복막 유체를 5분 동안 250회 G로 원심분리하고 인터류빈-6 투약용 상퍼를 비축합니다. 혈청을 얻으려면 수집된 혈액 샘플을 15분 동안 700배 G로 원심분리하고 아밀라제 및 인터류신-6 투약용 상퍼를 비축한다. 급성 췌장염을 유도한 후 12시간 동안 췌장 조직의 분석은 가짜 그룹에서 조직 샘플과 비교했을 때 영향을받는 장기에서 강렬한 염증을 보였다.
유사한 결과는 샴과 APTA에서 조직 견본의 혈소실린 eosin 염색 후에 조직학적 검사에 의해 표현되었습니다. 혈청의 분석은 샴그룹에 비해 AP 군에서 혈청 아밀라제 및 인터류킨-6 시토카인 농도의 현저한 증가를 제시했다. 동시에, 인터류신-6 농도는 AP 군에서 복막 구멍 유체에서 상당히 높았다.
이 모델에서 췌장염의 중증도는 주입의 농도, 부피 및 압력 및 급성 췌장염 유도 시에 비례적으로 의존합니다. 이 기술의 도움으로, 심한 급성 췌장염에 지속적인 간원 암비의 효과 연구 할 수있다.
