이 절차의 전반적인 목표는 제브라피시의 난소 여포에서 여포 세포와 Oocytes를 분리하는 것입니다. 여포는 난소의 기본 단위이며, 이는 난소와 주변 여포 세포로 구성됩니다. 여포 세포의 1 차 적인 캡처를 포함 하 여 잘 연구 정책에 대 한 여포 세포와 외부 구획을 분리 하는 넓은 도구이며 유전자 발현에 상승, 모든 채도 및 체 외 수정.
최근 Zebrafish는 닛산의 강력한 모델이 되었으며, 이는 이미 개발의 제어를 연구하고 있습니다. 여기서, 우리는 간단한 방법을 제시하므로, 제브라피시에서 이미 개발의 조사를 용이하게 할 제브라 피쉬 여포의 여포 세포와 난모세포를 분리하여 상업적, 질량 또는 여포 세포에 대한 두 개의 분리및 스핀의 모든 면은 미로가 있는 포스트를 사용하고 있으며, 시간이 많이 걸리고 외부에 높은 손상을 입었다. 여기서, 우리는 순수한 암초 아래 타멜라 비율을 사용하여 두 개의 별도의 구획또는 부품 안경타멜라 속도에 간단한 방법을 설립했습니다.
우리의 메트로 범위, 외부와 여포 세포 모두 쉽게 뽑아 유리 모세관을 입력하여 조작 할 수 있습니다. 첫째, 시인 유리 모세관을 준비합니다. 알코올 버너에 유리 모세관의 머리를 명중.
유리 모세관을 레이브 카드 직경으로 스트레칭하려면 4면을 사용합니다. 둘째, 성인 여성 물고기에서 과다 모독, 난소 여포를 난소에서 분리. 마지막으로 난소 여포에서 여포 세포와 오키테를 분리하기 위해 설문 조사 유리 모세관을 사용합니다.
유리 모세관, 날카로운 용기, 충분한 커터, 알코올 버너 및 집게를 준비합니다. 알코올 버너를 거짓말, 모세관 한 잔을 집에 가져 와서 알코올 버너의 불에 유리 모세관의 한쪽 끝을 가열. 집게를 사용하여 유리 모세관의 또 다른 끝을 잡고 유리 모세관을 빠르고 부드럽게 강조합니다.
날카로운 용기에 유리 폐기물을 넣습니다. 유리와 함께 수영장에 충분한 커터 그렛치를 사용합니다. 그런 다음 부드럽게 집게에 의해 분해하여 포트 눈의 매끄러운 개구부를 만들어 신속하게 알코올 버너에 유리 모세관의 끝을 여러 번 구울 하고 충분한 커터로 오픈 엔드를 문지릅니다.
재배 된 물 시스템에서 어조를 가져 가라. 그리고 이제 물고기가 길의 움직임을 멈출 때까지 적어도 2 ~ 5 분 동안 얼음 물에 물고기를 배치하여 성인 여성을 묶습니다. 얼음 상자에서 물고기를 꺼내 수건으로 남은 물 물고기 몸을 제거하고 4 세트로 D 섹션 접시에 물고기를 놓습니다.
물고기는 죽음을 보장하기 위해 날카로운 가위를 사용하여 Spang 화음을 제공함으로써 참수되었다. 해부 가위를 사용하여 다음과 같이 잘라냅니다. 클로이컷에서 복부의 중간선을 따라 아가미로 해부하고, 클로이 의 은행에서 잘라 내고, 앞쪽 끝에서 등쪽끝으로 잘라낸다.
몸의 한쪽에 있는 피부와 근육을 부드럽게 제거하고, 내부 장기를 노출시키고, 4단계로 건강한 전체 난소를 섭취하십시오. 난소는 문화권 100mm, 접시 용기 60%L 50 중앙분리대에서 즉시 부드럽게 배치하였다. 다른 단계의 난소 여포의 크기와 형태에 따라 전송 된 광 광학해부 현미경을 보냈습니다.
이 난소 여포를 4세트와 경쟁하는 맥주를 사용하여 수동으로 분리합니다. 고립 된 난소 여포를 수집하고 60 %L 50 배지를 포함하는 다른 배양 요리에 넣어, 좋은 고립 된 난소 여포는 여포 세포와 Oocytes를 분리하는 데 사용됩니다. 그런 다음 분리를 위한 장치를 설정합니다.
30센티미터 의 플라스틱 튜브를 사용하십시오. 한쪽 끝은 필터 요소가 있는 1밀리리터 파이펫 팁과 연결됩니다. 또 다른 끝은 200 마이크로리터 파이펫 팁과 연결되어 있습니다.
분부 현미경에서, 결함이 유리 모세관수영장으로 이동하게 하기 위해 공기 흐름을 제어하기 위해 입을 사용하여 유리 모세관에서 어리석은 외출을 날려 버릴 수 있습니다. 이 과정에서 난소 여포의 여포 세포와 난소 모낭의 Oocytes를 분리 할 수 있습니다. 이것은 성숙한 단계 여포를 위한 분리 과정입니다.
흡입 과정에서 여포 세포 층은 Oocyte에서 분리되며 여포 세포를 불어 낸 후 및 Oocyte를 분리 할 수 있습니다. 이것은 전체 지상 단계 여포입니다. 우리는 여포 세포 층이 오낭에서 분리되는 것을 볼 수 있습니다.
이 방법은 또한 초기 단계 난소 여포에서 적용될 수 있습니다. 이것은 중간 라텔라 창세기 단계에서 여포입니다. 이것은 초기 바텔라 창세기 단계에서 여포입니다.
이것은 사전 바칼라 창세기 단계에서 여포입니다. 이 그림에서 분리 과정을 볼 수 있습니다. 패널 하나는 전체 성장 무대 패널에서 그대로 여포를 보여줍니다.
패널 2는 이 여포의 협응을 유리 모세관으로 보여줍니다. 패널 세 는 여포가 뽑아 진 유리 모세관에서 날아 갔다 보여줍니다. 패널 4는 성공적인 분리 F 디누드 Oocyte 및 여포 세포를 나타냅니다.
심지어이 방법, Oocyte에서 여포 세포의 분리는 다른 단계 여포에서 수행 될 수있다. 여포 세포가 그대로 여포에서 분리되었는지 여부를 조사합니다. 그대로 여포를 분리하고 BV 단계에서 FG 단계로 여포의 다른 단계에서 오키테를 분리DAPI로 염색했다.
여포 세포의 핵은 DAPI에 의해 얼룩질 수 있다. DAPI의 파란색 신호는 그대로 여포에서 관찰되었지만 이러한 다른 단계의 여포에서 난모세포는 제거되지 않았습니다. 명확한 분리를 더 확인하기 위해, 그대로 여포와 분리 된 난귀는 조직학적 섹션에 내장했다.
DAPI 진술 결과는 여포 세포가 명확하게 제거되고 Oocytes를 삭제했다는 것을 보여주었습니다. 이 방법을 사용하여, 전체 성장 단계 여포에서 분리 된 누드 난귀는 자발적인 Oocyte 성숙을 겪는 것으로 나타났다. 4 시간 잠복 후 어떤 치료없이.
물에 의해 활성화 후, 이러한 성숙한 난귀는 전체 초리온 확장을 겪을 수 있습니다. 이 결과는 이 방법을 사용하여 Oocyte의 손상이 낮음을 나타냅니다. 따라서, 이 겨자는 얼룩말 물고기의 오키테 성숙한 배급을 공부하기 위한 누드 Oocyte를 얻기 위하여 이용될 수 있습니다.
여포에 대한 물질의 여포 층은 모세관 유리 튜브에 의해 제거 될 수 있습니다. 이들은 수정되고 부화 단계로 변질될 수 있습니다. 결과는 이 방법이 얼룩말 물고기에 있는 체외 수정에 사용될 수 있다는 것을 건의합니다.
우리는 여기에 얼룩말 물고기 난소 여포에서 여포 세포와 오키테의 신속하고 쉬운 분리를위한 새로운 방법을 설명합니다. 이 방법은 몇 가지 중요한 장점이 있습니다, 방법을 전복. 이들 중 1차는 단 하나의 외부 조작만요구되기 때문에 분리의 용이성을 크게 높이는 것이다.
분리의 증가 용이성은 미세 절에 숙련되지 않은 그 연구원에이 방법의 가용성을 증가. 둘째, 이러한 방법은 PV, EBV MV 단계를 포함한 난소 여포 및 초기 발달 단계의 여포 세포 및 Oocyte를 분리하는 데 사용될 수 있으며, 이러한 분리는 현재 방법론을 사용하여 초기 단계 여포에서 수행될 수 없다. 셋째, 이 새로운 방법은 오사이클에 대한 손상이 줄어듭니다.
이 방법에 의해 분리 된 누드 난초는 Oocyte 성숙을 겪을 수 있으며 수정 될 수 있습니다. 또한,이 방법은 다른 물고기에도 적용 할 수 있습니다.
