이 프로토콜은 광학적으로 기화된 퍼플루오로카본 나노방울의 간단하고 빠른 합성을 허용하고 이러한 입자의 성능을 향상시키는 방법을 제공합니다. 사람 버전은 초음파 영상의 위상을 먼저 조작하여 대비를 향상시킬 수 있습니다. 추가 장비가 필요하지 않으며 프로그래밍 가능한 모든 초음파 시스템에서 수행 할 수 있습니다.
클로로포름으로 10 밀리리터 둥근 바닥 플라스크를 헹구고 전체 주사기 부피를 반복적으로 흡인하고 총 3 회 배출하여 클로로포름으로 10 마이크로 리터 및 1 밀리리터 기밀 유리 주사기를 씻어냅니다. 주사기를 사용하여 DSPE-mPEG-2000 밀리리터당 25 밀리그램 200 마이크로리터, DSPC 밀리리터당 10 밀리그램 8 마이크로리터, IR-1048 밀리리터당 1밀리리터 1밀리리터를 둥근 바닥 플라스크에 추가합니다. 스톡의 오염을 방지하기 위해 지질이나 염료 사이의 주사기를 청소하는 것을 잊지 마십시오.
회전 증발기를 사용하여 용매를 제거합니다. 범핑을 방지하기 위해 진공을 332밀리바로 천천히 조정해야 합니다. 5 분 후 압력을 42 밀리바로 낮추어 용액에 들어갔을 수있는 물을 제거하십시오.
지질 케이크를 PBS 1 밀리리터에 현탁시키고 실온에서 5 분 동안 또는 모든 지질 케이크가 현탁되어 용액에 용해 될 때까지 초음파 처리 또는 와동시킨다. 용액을 7 밀리리터 유리 바이알에 옮기고 바이알을 얼음으로 채워진 유리 접시에 넣어 용액을 5 분 동안 식히십시오. 가스 밀폐 유리 주사기를 퍼플루오로헥산으로 헹굽니다.
그런 다음 주사기를 사용하여 50 마이크로 리터의 퍼플 루오로 헥산을 바이알에 첨가하십시오. 프로브는 진폭이 1로 설정되고, 공정 시간이 20초로 설정되고, 펄스가 1초로 설정되고, 펄스 오프가 5초로 설정된 혼합물을 초음파 처리합니다. 그런 다음 텍스트 원고에 언급 된대로 설정을 변경하고 혼합물을 한 번 더 초음파 처리합니다.
나노 액적 용액을 1.5 밀리리터 원심 분리 튜브로 옮기고 300g에서 3 분 동안 원심 분리하여 작은 물방울에서 1 마이크로 미터 이상인 큰 물방울을 분리합니다. 펠릿을 버리고 상청액을 다른 1.5 밀리리터 원심 분리 튜브로 옮깁니다. 상층액을 3, 000g에서 5분 동안 원심분리하여 용액 중의 모든 액적을 펠렛화하여 세척한다.
펠릿을 위아래로 피펫팅하여 PBS 1밀리리터에 PFCnD를 다시 현탁한 다음 배스 소닉케이터에서 1분 동안 초음파 처리합니다. 990 마이크로리터의 PBS에 10 마이크로리터의 PFCnD 스톡을 추가하여 스톡 PFCnD를 100배 희석하고 크기를 측정하기 전에 PFCnD를 분산시키기 위해 초음파 처리를 합니다. 동적 광산란을 사용하여 액적의 크기를 측정합니다.
500 밀리리터 진공 플라스크에 400 밀리리터의 탈 이온수를 채워 물을 탈기시키고 고무 코르크로 밀봉하고 플라스크를 진공 라인에 연결합니다. 진공 라인을 열고 플라스크의 바닥을 욕조 소닉 케이터에 담그십시오. 5 분 동안 또는 가스 거품 형성이 보이지 않을 때까지 초음파 처리하십시오.
5 밀리리터의 탈기 된 물에 500 밀리그램을 용해시켜 황산염 용액 당 10 % 암모늄을 준비하십시오. 과황산 암모늄이 완전히 녹지 않으면 용액을 부드럽게 소용돌이 치십시오. 교반 플레이트에 교반 막대가 있는 400밀리리터 비커에 탈기된 물 150밀리리터와 40아크릴아미드 비스아크릴아미드 용액 50밀리리터를 추가하여 200밀리리터의 10%아크릴아미드 비스아크릴아미드 용액을 형성합니다.
기포가 생기지 않고 적절하게 혼합될 수 있도록 혼합물을 200RPM으로 저어줍니다. 실리카 400 밀리그램을 계량하고 10 % 아크릴 아미드 비스 아크릴 아미드 용액에 첨가하여 0.2 %의 실리카 및 아크릴 아미드 용액을 형성합니다. 플라스틱 이송 피펫에서 팁을 잘라내고 실험실 테이프로 금형에 지지하여 원통형 개재물이 있는 정사각형 금형을 준비합니다.
비커에 10 % 과황산 암모늄 용액 2 밀리리터를 추가하여 최종 농도 0.1 %가되고 팬텀 용액에 250 마이크로 리터의 TEMED를 추가합니다. 용액을 1분 미만 동안 저어줍니다. 용액에 기포가 유입되지 않도록 주의하면서 용액을 금형에 빠르게 붓습니다.
용액은 10 분 이내에 중합되어야합니다. 실험실 주걱의 평평한 끝을 금형 가장자리에 돌리고 금형을 뒤집어 팬텀을 제거합니다. 제조업체 지침에 따라 펄스 레이저 시스템을 켜고 약 20분 동안 예열합니다.
광섬유 번들이 레이저 출력에 제대로 연결되어 있고 두 다리가 광섬유 번들 홀더 내에 올바르게 배치되었는지 확인하십시오. 초음파 이미징 시스템을 켠 후 어레이 이미징 변환기를 시스템에 연결하고 홀더 내부에 변환기를 고정하여 이미징 평면을 레이저 단면에 맞춥니다. 레이저 시스템의 펄스 반복 주파수를 10Hz로 설정하고 광섬유 다발 끝에 파워 미터를 배치하여 에너지를 측정합니다.
예상 플루언스가 평방 센티미터당 70밀리율이 될 때까지 Q 스위치 지연을 조정합니다. 1 밀리리터 플라스틱 슬립 팁 주사기를 사용하여 초음파 겔 및 PFCnD 혼합물로 폴리아크릴아미드 팬텀의 채널 중 하나를 백필한다. 채널 상단을 초음파 젤로 자유롭게 덮고 1 밀리리터 플라스틱 슬립 팁 주사기로 기포를 제거하십시오.
마지막으로 폴리 아크릴아미드 팬텀을 변환기와 섬유 다발 아래에 놓습니다. PFCnDs의 성공적인 제형 및 원심 분리는 직경이 약 200-300나노미터의 액적을 생성합니다. 물방울의 크기는 Ostwald 숙성으로 알려진 과정에서 유착 및 확산으로 인해 시간이 지남에 따라 증가합니다.
종단 펄스에 대한 포함으로부터의 대조는 약 3.2 배 더 큰 것으로 나타 났으며, 이는 P- 펄스보다 220 % 개선 된 것입니다. 고에코 영역은 각 프레임에 대해 계산되고 첫 번째 프레임의 고에코 영역에 의해 정규화된 다음 지수 감쇠 모델에 적합되었습니다. 정규화 된 고 에코 영역의 특징적인 감쇠 시간은 P- 펄스에 비해 N- 펄스 이미징에서 최대 3.5 배 더 길었습니다.
B-모드 차동 화상 프레임은 각각의 N-펄스 및 P-펄스 이미징에 대해 시간에 기록되었다. 가장 중요한 것 중 하나는 플라스크 바닥의 지질을 배출하여 지질 케이크에 제대로 통합되도록 하는 것입니다.
