인공 공급 및 타액 수집은 곤충 타액에서 이펙터를 검출하는 직접적인 방법을 제공합니다. 그러나, 이것은 이전에 자세히 설명되지 않았습니다. 이 프로토콜은 사프로피틱 곤충의 타액 수집에 효과적입니다.
또한, 그것은 간단한 기술, 우리는 인공 다이어트로 만 자당을 포함 하는 매체를 사용 하 여. 사프로피틱 곤충의 타액은 수유 행동을 유익하고 병원균을 전송하기 위하여 호스트의 면역 계통에 대하여 영향을 미칠 수 있습니다. 곤충 행동과 곤충 뼈 경로 연구에 사용할 수있는이 약.
이것은 수행하는 간단한 방법입니다. 그러나, 이것은 타액이 추가 연구를 위해 수집되고 있기 때문에 깨끗한 실험 환경의 장착을 건의합니다. 먼저 인공 식단을 위한 5% 자당 용액을 준비하고, 0.22 미크론 필터를 통해 용액을 걸기하여 세균 오염 및 불순물을 제거합니다.
약 200개의 작은 갈색 식물 호퍼 애벌레를 3~5시간 동안 굶주린 후 먹이실에 도입하십시오. 다음으로, 유리 실린더를 먹이챔버로 준비하고, 실험곤충을 도입하기 전에 파라핀 멤브레인으로 챔버의 한 쪽 끝을 덮은 다음, 곤충을 유리 실린더로 옮기고 챔버의 다른 쪽 끝을 뻗은 파라핀 멤브레인으로 덮는다. 멤브레인에 인공 식단200 마이크로리터를 추가한 다음 액체를 뻗은 파라핀 멤브레인의 또 다른 층으로 덮습니다.
마지막으로, 알루미늄 호일로 챔버를 덮고 빛에 노출된 인공 식단 장치로 끝을 남깁니다. 24시간 후, 곤충을 고정하기 위해 섭씨 4도에서 실린더를 냉각하여 SBPH 타액을 수집한 다음 외부 필름을 발견하고 멸균 파이펫을 사용하여 1.5 밀리리터 멸균 튜브로 인공 식단을 수집합니다. 수집된 타액을 분석할 때까지 영하 80도에서 보관하십시오.
다음으로, 50 마이크로리터의 신선한 인공 식단으로 내부 막을 부드럽게 배관하여 헹구고 인공 세척 식단을 1.5 밀리리터 멸균 튜브로 수집합니다. 세 번의 헹구기 후, 내부 막에 신선한 인공 식단을 추가하고 갓 뻗은 파라핀 멤브레인을 위에 놓습니다. 마지막으로, 수집된 샘플을 0.22 미크론 필터 유닛을 통해 필터링하여 미생물 및 기타 오염 물질을 제거합니다.
500 마이크로리터, 10킬로달톤 원심 필터로 집단 타액 샘플을 전송합니다. 원심분리시 시료를 원심분리합니다. 상체를 수집하고 100 마이크로 리터에 최종 볼륨을 제기.
수집된 타액의 농도를 측정하려면 UV 가시 분광광계를 켜고 받침대를 이중 증류수로 세 번 세척합니다. 다음 순서로 화면에 옵션을 선택, 단백질, 단백질 A280. 밀리리터당 1밀리그램에 해당하는 유형과 하나의 흡광도 장치를 선택합니다.
그런 다음 340 나노미터의 기준선 보정을 위해 상자를 선택합니다. 다음으로, 5%의 수성 용액을 빈으로 두 개의 마이크로리터를 적재한 다음 화면 하단에 블랭크를 터치합니다. 마지막으로, 표준을 설정한 후 수집된 타액의 마이크로리터 2개를 적재하고 단백질 농도를 기록한다.
5%의 자당을 먹일 때, SBPH의 80% 이상이 처음 4일 동안 살아남았습니다. 그러나, 5일째부터 사망률은 40%로 빠르게 증가했고, 7일째에는 SBPH의 절반도 안 되는 사람들이 살아남았습니다. SDS 페이지 분석은 RSV 감염 SBPH 타액에서 농축 타액 샘플이 5% 자당 음성 대조군보다 더 많은 단백질을 함유하고 있음을 보여주었다.
RSV 캡시드 단백질, 비감염 및 비생물 곤충의 검출을 위한 서양 얼룩 분석에서. RSV 캡시드 단백질은 LssgMP유전자에 대하여 설계된 항체인 비수명성 샘플에서 성공적으로 검출되었으며, LssgMP는 타액 단백질임을 입증하여 감염되지 않은 비감염 및 비수성 샘플에서 78킬로달톤 단백질을 검출하였다. 다른 조직에서 LssgMP 성적증명서 수준의 QRT PCR 분석은 침샘의 Lssg 성적증명서 수준이 전신과 창자보다 20배 높은 것으로 나타났으며, 타액선에서 LssgMP의 특정 발현을 확인했습니다.
타액 수집의 효율성을 보장하기 위해 챔버에 도입하기 전에 실험 곤충을 굶주리고 필요합니다. 게다가, 수집된 견본에 있는 미생물 오염을 감소시키기 위하여 인공 매체를 24 시간마다 수집하고 교환되어야 합니다. 이 기술은 병원균을 전달하는 타액의 기능을 연구하는 직접적인 방법을 제공한다.
또한, 그것은 곤충 병원체 호스트 상호 작용을 연구하는 데 도움이 될 수 있습니다.
