파킨슨병의 6-하이드록시도파민 래트 모델에서 L-DOPA 유도 운동이상증 등급은 효과적인 항이동성 중재를 확인하기 위한 중요한 전임상 도구입니다. 이 모델은 비교적 간단하고 비용이 저렴하며 클리닉에서 일어나는 일과 유사합니다. 이 절차는 실험실의 박사 과정 학생 인 Danilo Leandro Ribeiro가 시연합니다.
무게가 200-250 그램 인 Sprague-Dawley 수컷 쥐로 실험을 시작하십시오. 표준 실험실 조건에서 케이지 당 2-3 마리의 동물을 수용하고 음식과 물을 자유롭게 이용할 수 있습니다. 수술 전에 노르에피네프린 수송체 억제제인 이미프라민을 쥐에게 복강 주사로 투여합니다.
발가락 꼬집음에 대한 반응의 부족에 의한 마취를 확인한 후, 가열 패드 상단의 정위 장치에서 엎드린 위치에 쥐를 위치시킨다. 쥐가 위치하면 메스를 사용하여 미세 주사가 발생할 부위에 1cm 길이의 절개를합니다. 그런 다음 면봉으로 두개골 부위를 청소하고 브레그마와 람다가 노출되었는지 확인합니다.
내측 전뇌 다발 또는 MFB, 브레그마에서 정위 좌표를 전방 4.3mm, 오른쪽 측면 1.6mm, 경도계에서 복부 8.3mm에서 취하십시오. 좌표가 결정되면 6- 하이드 록시 도파민 또는 6- OHDA를 50 마이크로 리터 해밀턴 유리 주사기로 오른쪽 MFB에 분당 0.4 마이크로 리터의 속도로 일방적으로 투여합니다. 수술이 끝나면 두피 절개를 봉합하고 따뜻하고 멸균 된 0.9 % 식염수로 동물을 킬로그램 당 10 밀리리터의 용량으로 피하 재수 화합니다.
정위 프레임에서 동물을 제거하고 따뜻한 회복 케이지에 넣고 의식을 회복 할 때까지 모니터링하십시오. 병변 후 4 주에, 병변에 반대하는 앞다리의 무 운동증을 평가함으로써 스테핑 테스트를 사용하여 도파민 성 병변의 효과를 측정하십시오. 반대쪽 앞다리와 함께 3 개 이하의 조정 단계를 나타내는 쥐는 추정되는 심각한 6-OHDA 병변 쥐로 연구에 포함되어야합니다.
6-OHDA 병변 4 주 후 월요일에 만성 치료를 시작하고 수요일에 비정상적인 비자발적 움직임을 기록합니다. 이렇게하려면 쥐를 직경 20cm, 높이 40cm의 투명한 실린더 안에 넣고 최소 15 분 동안 순응하도록하십시오. 바닥이 침구 재료로 덮여 있고 가능한 모든 각도에서 동물을 관찰 할 수 있도록 거울이 실린더 뒤에 있는지 확인하십시오.
고해상도 비디오 카메라를 배치하여 축, 사지 및 구강 언어의 비정상적인 비자발적 움직임을 볼 수 있습니다. 실린더 뒤의 거울을 사용하면 비정상적인 비자발적 움직임을 360도 각도로 추적 할 수 있습니다. 카메라는 동물로부터 15도 각도로 비행기 약간 아래에 위치하여 구강 언어의 비정상적인 비자발적 움직임을 관찰 할 수 있습니다.
위치가 결정되면 카메라를 벤치에 직접 고정하십시오. 동물이 15 분 동안 순응하면 실린더에서 동물을 제거하고 새로 준비된 L- 도파민 또는 L-DOPA를 킬로그램 당 5 밀리그램과 벤세 라지드 킬로그램 당 12.5 밀리그램을 피하 투여합니다. 동물을 실린더에 다시 넣고 비정상적인 비자발적 움직임을 추적하는 타이머를 시작하십시오.
비디오 카메라를 사용하여 주사 후 180분 동안 30분 간격으로 비정상적인 비자발적 움직임을 기록하여 오프라인 채점을 수행합니다. 6 개의 관찰 기간이 지나면 점수는 1-2 분 에포크에 걸쳐 주어져야하며 축 방향, 사지 또는 구강 언어로 분류되어야합니다. 정상적인 동작을 포함하지 않도록 합니다.
L-DOPA 및 벤세라자이드 치료는 월요일부터 금요일까지 하루에 한 번 3주 동안 계속되어야 합니다. 대표적인 시간 경과 분석에서, 만성 L-DOPA 투여 3주 동안 축, 사지 및 구강 언어의 비정상적인 비자발적 움직임에 적용된 점수가 표시됩니다. L-DOPA 유도 피크 용량 운동 이상증은 30 분에서 90 분 사이에 발생하며 주사 후 120 분 후에 점진적으로 감소하는 것으로 나타났습니다.
또한, 축, 사지 및 구강 언어의 비정상적인 비자발적 움직임의 합계가 개인에게 제시되었으며, 만성 L-DOPA 투여 3 주 동안 일 및 매주 점수를 매겼습니다. 비정상적인 비자발적 운동 프로토콜은 일반적으로 항이동성 번역 잠재력을 가진 새로운 치료 도구의 조사를 위한 것입니다.
