루트 엑수데이트에서 뿌리 균 화학 물질의 신속 한 식별에 대 한 향상 된 화학 분석

이 논문은 개선된 화학요법 분석법을 사용하여 뿌리에서 뿌리 균의 화학 요법의 식별을 보고했습니다. 화학 요법 임플란트 뿌리 액추에이트는 식물 성장을 위한 뿌리 식민지화, 뿌리 공포증 박테리아 를 촉진하고 식물 세균 상호 작용의 유용한 파벌을 제공하기 위한 중요합니다. 세균 화학 요법을 분석하기 위해 많은 방법이 사용되었습니다.

예를 들어, 수영 플레이트 방법, 방법, 미세 유체 슬립 칩 장치와 같은 Cappilary. 수영 플레이트 방법의 실험 주기는 길다. Cappilary 방법의 실험 오차가 출시되었고, 미세 유체 슬립 칩 장치는 실험비용이 많이 듭니다.

우리는 복잡한 단계없이 멸균 유리 슬라이드를 사용하여 뿌리 부류 성장 촉진 박테리아의 화학 적 움직임을 유도 할 수있는 화학 요법을 신속하게 식별하는 간단한 방법을 확립했습니다. 이 방법은 플레이트 계수의 오류를 줄이고 실험 주기를 단축시켰다. 화학 물질을 식별하는 것과 관련하여, 새로운 방법은 2-3 일을 절약하고 또한 실험 재료의 비용을 줄일 수 있습니다.

1주일 동안 발생하는 재배챔버 배양에 쌀씨를 무작위로 분배하고 멸균수를 두 번 첨가한다. 비슷한 크기의 쌀 모종을 선택하고 Ms 액체 매체의 50 밀리리터로 식물을 선택합니다. 섭씨 22도및 정화조 조건에서 48시간 동안 배양하세요.

쌀 뿌리 는 Ms 매체로 출시 됩니다. 액체 크로마토그래피 질량 분광분석은 UHPLC 시스템을 사용하여 수행되었다. 화학 요법 수성 용액을 준비하여 멸균되도록 하십시오.

0.22 마이크로미터 박테리아 필터로 화학 요법 용액을 필터링합니다. 화학화수성 용액은 물에 용해된 LCMS 연구에서 얻은 단일 물질이었다. 시트릭스산 용액을 예로 사용하였습니다.

모든 작업은 램프 의 측면에 의해 수행되어야합니다. 유리 슬라이드의 중간 위치를 1센티미터 간격으로 표시합니다. 유리 슬라이드가 화염에 여러 번 살균되었는지 확인합니다.

유리 슬라이드의 왼쪽에 있는 30 마이크로리터 화학 요법용액에서 박테리아가 로그산계로 배양되도록 합니다. 유리 슬라이드 오른쪽에 30 마이크로리터 박테리아 용액을 추가합니다. 염증 루프를 사용하여 화염에 여러 번 접종 루프를 살균하여 화학 요법 수성 용액을 박테리아 용액에 연결하고 깨끗한 벤치에서 20 분 동안 실온에서 유지하십시오.

20분 후 필터 용지로 연결 선을 분리합니다. 1.5 밀리리터 원심분리관이 멸균되었는지 확인하십시오. 유리 슬라이드의 왼쪽에 있는 화학 요법 수성 용액을 수집합니다.

1.5 밀리리터 멸균 원심분리 관으로 용액을 전달합니다. 원심 분리 튜브에 세포 전면 염료의 적절한 부피를 추가합니다. 2 분 후, 혈액 계수 챔버와 박테리아 계산 및 현미경 관찰에 대한 놓칠 수있는 액체를 수집합니다.

다음 방정식을 사용하여 유치된 생존 가능한 미생물의 수를 결정합니다. RCI가 높을수록 화학 요법에 대한 강한 반응을 나타냅니다. 결과는 구연산과 카페인산이 가장 높은 화학상구지수를 가지고 있음을 나타냈다.

새로운 화학 요법 분석 방법 결과는 세균성 구연산, 카페인산 및 갈라토제 실험의 농도가 대조군 및 양성 대조군보다 현저히 높았다고 썼다. 구연산은 가장 강한 화학 요법을 기록했습니다. 실험 결과는 전통적인 방법의 결과와 일치했다.

이 비디오 프로토콜은 식물-미생물 상호 작용의 명확화를 위한 귀중한 자원으로 제시될 수 있습니다.