직접적인 대동맥 내 세포 추적기 적용을 사용함으로써, 우리는 두 개의 다른 시점에서 신생내막 형성에서 부모 동맥으로부터 기원되는 내피 세포의 역할을 분석 할 수 있습니다. 이 기술의 가장 큰 장점은이 모델을 강력하고 재현 가능한 기술로 만드는 직접적이고 원 포인트 해석적인 생체 내 주입입니다. 수술 전에 기증자 쥐의 동맥 파우치를 섭씨 37도에서 10 시간 동안 0.1 % 나트륨 도데실 설페이트로 배양하여 탈세포 동맥류를 얻습니다.
수술 며칠 전에 기증자 동물로부터이 파우치를 수집하십시오. 시작하려면 동물의 행동을 분석하고 수술 전 임상 검사의 일환으로 점액막과 터고르를 검사하십시오. 각 동물의 무게를 기록하십시오.
마취 유도를 위해, 다섯 분에서 10 분 후에 의식이 상실 될 때까지 산소가 제공된 깨끗한 상자에 모든 쥐를 넣으십시오. 페달 금단 반사의 부재에 의해 마취의 깊이를 확인하십시오. 쥐를 수핀 위치에 놓고 전기 면도기로 흉부 복부 부위를 면도하십시오.
테이프를 사용하여 자동 조절 직장 프로브에 연결된 가열 패드로 덮인 보드에 쥐의 발을 고정하십시오. 직장 프로브를 쥐의 항문에 삽입하여 가열 패드를 사용하여 섭씨 37 도의 원하는 온도를 유지하십시오. 그런 다음 수술 중 활력 징후를 검사하기 위해 컴퓨터 시스템에 연결된 오른쪽 뒷다리에 센서를 설치하십시오.
마취 전 치료를 위해 멸균 안과 윤활제를 눈에 바르고 불투명 한 호일 마스크로 덮어 수술 램프로 인한 건조 및 손상을 방지하십시오. 포비돈 요오드로 수술 현장을 소독하고 수술 현장을 멸균 방식으로 드레이프하십시오. 대동맥의 근위 및 원위 부분 아래에 보라색 패딩이있는 마이크로 면봉을 넣어 기병 정맥에서 분리되는 즉시 동맥을 더 잘 시각화하십시오.
그런 다음 흰 거즈로 복부를 보호하십시오. 수술 당일, PBS의 한 밀리리터에 피펫팅하여 세포 추적기의 두 마이크로리터를 용해시킨다. 혼합물을 캐뉼라가 장착 된 한 밀리리터 주사기로 옮깁니다.
수술실의 조명을 끕니다. 현미경을 사용하여 마이크로 포셉으로 대동맥의 중간 복부 부분에 원 포인트 주사를 수행하고 헤파린화 된 0.9 % 식염수 1 밀리리터를 조심스럽게 주입하십시오. 세포 추적기를 조심스럽게 주입하고 즉시 작동 현미경을 끕니다.
젖은 거즈로 복부를 다시 보호하십시오. 염료를 적어도 15 분 동안 인큐베이션하게하십시오. 그런 다음 현미경과 수술실 조명을 켭니다.
마이크로 포셉과 마이크로 가위를 사용하여 길이 동맥 절제술을 수행하여 길이가 수확 된 동맥류의 직경을 평균화하도록하십시오. 동맥류를 올바른 길이를 보장하기 위해 동맥 절제술을 수행하기 전에 대동맥류 옆에 놓습니다. 비 흡수성 10-0 봉합사를 사용하여 8 ~ 10 개의 단일 스티치로 동맥류를 봉합하십시오.
최종 스티치 전에 코일을 한 센티미터의 포장 밀도로 전달하십시오. 이 모델에서 코일 또는 스텐트 처리를 수행 할 수 있습니다. 그런 다음 조심스럽게 임시 클램프를 제거하십시오., 원위적으로, 헤파린화 된 식염수로 지속적인 관개하에 시작.
상처를 겹겹이 겹쳐서 닫으십시오. 수술이 끝나면 피하 주사로 마취를 되돌립니다. 각 조작 된 동물이 가열 램프로 필요에 따라 완전히 깨어나고 따뜻해질 때까지 깨끗한 새장에서 회복하게하십시오.
일곱째 날과 21일째에 당겨진 기준선 동맥류 부피는 코일 또는 스텐트 치료 그룹 사이의 탈세포화 또는 바이탈 동맥류에 대해 유의하게 다르지 않았다. 탈세포화된 동맥류에 대해 당겨진 FU 부피는 스텐트된 동맥류에 비해 코일링된 동맥류에서 유의하지 않은 동맥류 성장을 나타냈다. 당겨진 FU 부피는 스텐트된 그룹에서보다 바이탈 코일링에서 유의하게 더 컸다.
탈세포화된 동맥류의 신생물성에서 세포-트레이서 양성 세포의 양은 일곱 FU에서 스텐트 또는 코일 처리된 그룹간에 유의하게 다르지 않았지만, 21일째에 스텐트 래트에서 유의하게 더 높았으 FU.No, 7일 FU에서 탈세포화된 동맥류 FU.In 7일 또는 21일에 활력-동맥류를 봉합한 래트에서 유의한 차이가 관찰되었고, 상당히 더 많은 세포-트레이서 양성 세포는 코일 처리군에 비해 스텐트 처리의 혈전에 남아있었다. 이 차이는 칠일 FU에서 중요한 동맥류에서 관찰되지 않았다. 퇴색을 방지하기 위해 셀 트레이서를 주입하기 전에 항상 수술실의 조명을 끄는 것을 잊지 마십시오. 또한, 적어도 15분 동안 염료를 인큐베이션하자.
