이 프로토콜은 확립 된 인간 질병과 유사한 복부 대동맥 동맥류의 마우스 모델과 정맥 카테터를 통한 반복 치료를 결합합니다. 동맥류 진행을 차단해야 하는 임상적 필요성을 해결합니다. 이 프로토콜은 대동맥 직경 부피 및 형태의 확장에 대한 포괄적인 정보를 포함하여 마우스의 동맥류 진행을 줄이기 위한 약물 테스트를 위한 완전한 워크플로를 제공합니다.
플러스 3D 초음파. 3D 초음파는 덜 맛 기반 마우스 모델에서 동맥류가 발생하는 하부 대동맥을 측정하도록 조정할 수 있습니다. 경정맥 카테터 삽입은 정맥주사를 필요로 하는 임의의 세트에 활용될 수 있다.
12-14 주 된 APOE 결핍 메일 마우스를 마취 한 후 등 왼쪽 상단의 작은 부위를 어깨 뼈 위로 면도하고 10 % 포비돈 요오드 용액을 바르면 면도 부위를 소독합니다. 중간 척추와 왼쪽 견갑골 선 사이에 메스로 등 위쪽의 피부에 1 센티미터의 횡단 절개를하십시오. 집게로 피부를 잡고 무딘 곡선 가위를 사용합니다.
왼쪽 뒷다리쪽으로 밀어 피하 주머니를 만드십시오. 가위를 열고 열린 가위를 잘라 당겨 주머니를 넓 힙니다. 절개 부위에서 방출되는 안지오텐신 2의 잠재적 간섭을 최소화하기 위해 흐름 조절기가 꼬리를 향하도록 펌프를 주머니에 부드럽게 삽입합니다.
그런 다음 4.0 흡수성 중단 봉합사로 상처를 닫으십시오. 혈관 접근 시스템 사용. 3개의 프렌치 면을 원하는 길이로 절단하고 최소 3mm 겹침으로 혈관 접근 시스템 또는 VAS의 22게이지 금속 커넥터 위로 카테터를 밀어 카테터를 준비합니다.
포트를 보호하기 위해 버튼에 알루미늄 캡을 놓습니다. 복부 쪽의 목 오른쪽과 마취 된 마우스의 등 위쪽 오른쪽에서 모피를 면도하십시오. 그런 다음 포비돈 요오드 용액을 사용하여 면도 부위를 소독하십시오.
경정맥 준비를 위해 오른쪽 쇄골 위의 목 오른쪽에 0.5cm의 횡단 슈퍼 쇄골 피부 절개를하십시오. 무딘 미세 수술 핀셋을 사용하여 결합 조직과 외부 경정맥을 노출시키는 지방을 분리하십시오. 지방에서 작은 혈관을 찢지 마십시오.
가슴 근육에 가까운 혈관의 5 밀리미터를 분리하십시오. 그런 다음 구부러진 마이크로 핀셋을 사용하여 정맥 아래의 조직을 무딘 해부하고 6.0 실크 합자 중 2-3 개를 통과시킵니다. 합자를 집어 넣고 식염수 한 방울을 사이트에 추가하십시오.
버튼 이식의 경우 마우스를 뒤집어 엎드린 위치에 놓습니다. 면도 부위를 소독하기 위해 포비돈 요오드 용액을 바르십시오. 중간 척추와 오른쪽 견갑골 선 사이에 메스로 등 위쪽에 1cm 시상 절개를하십시오.
다음으로, 무딘 곡선 가위를 사용하여 무딘 해부로 절개 부위 주변의 VAS 크기보다 약간 큰 원형 주머니를 만듭니다. 뭉툭한 구부러진 가위를 사용하여 가위를 살짝 열어 목의 복부 절개 부위를 향해 오른쪽 어깨 너머로 두개골로 터널을 뚫습니다. 그런 다음 열린 가위를 꺼내고 더 밀어 넣으면서 동작을 반복합니다.
터널이 복부 절개에 도달하면 복부에서 등쪽 절개 부위까지 수술 클램프를 통과하십시오. 카테터의 세 개의 프렌치 끝을 클램프에 부착하고 터널을 통해 카테터를 당겨 복부 목 절개 부위에서 벗어나 VAS가 등쪽 절개 부위에 제자리에 있도록 합니다. 그런 다음 VAS 수술 펠트 디스크를 뒤쪽 절개 부위에 피하 삽입합니다.
핸들링 도구의 포크 끝을 사용하여 카테터의 개통 여부를 확인하여 보호용 알루미늄 캡을 제거하고 자석 끝을 사용하여 버튼을 잡고 해당 인젝터에 부착된 1밀리리터 주사기로 식염수 또는 PBS를 주입합니다. 주머니에서 버튼을 꼬리로 누르고 두개골로 두 개의 4 개의 오 중단 봉합사로 VAS의 플랜지 아래 VA의 펠트 디스크 위의 피부를 닫습니다. 정맥 카테터 삽입의 경우 마우스를 앙와위 위치로 다시 뒤집고 절단면에 식염수 한 방울을 추가합니다.
합자를 분리하고 카테터와 경정맥 주위의 첫 번째 합자를 가능한 한 두개골로 2-3 노트로 묶어 정맥을 결찰하고 카테터를 외부에 고정시킵니다. 두 번째 합자를 가슴 근육에 최대한 가깝게 움직입니다. 마이크로 가위를 사용하여 대각선을 잘라 날카로운 끝을 만들어 카테터의 3-5 밀리미터가 정맥에 오도록합니다.
그런 다음 고정 된 두개골 합자를 당기고 바늘을 정맥과 평행하게 밀어 식염수로 채워진 1 밀리리터 주사기에 부착 된 27 게이지 바늘을 사용하여 정맥의 구멍을 뚫습니다. 다음으로, 고정된 두개골 합자를 당기고 구부러진 핀셋을 사용하여 카테터를 정맥에 밀어 넣어 동일한 방식으로 카테터를 정맥에 삽입합니다. 정맥과 정렬 될 때까지 카테터를 밉니다.
카테터 삽입 부위에 두 번째 합자를 2-3 노트로 묶고 혈액 누출이 없는지 확인하십시오. 마이크로 가위로 두 합자의 초과 끝을 잘라 내고 식염수 한 방울을 추가하십시오. 그런 다음 4.0 흡수성 중단 봉합사로 피부를 닫습니다.
앞에서 설명한 대로 원하는 양의 억제제 또는 PBS 식염수를 마우스에 주입합니다. VAS에서 주사기를 분리하는 동안 플런저에 양압을 유지하십시오. 마우스 회복 후 모니터링합니다.
초음파 소프트웨어를 사용하여 설정을 조정하여 30DB 이미지 심도를 9.0mm로, 너비를 8.08mm로 조정합니다. 다음으로, 스테이지에있는 4 개의 심전도 또는 ECG 전극 각각에 전기 젤 한 방울을 넣고 마우스 사지를 테이프로 붙입니다. 마우스의 복부에 따뜻한 초음파 젤을 바르고 송신기를 내려 복부와 접촉시킵니다.
대동맥을 원형의 빠른 맥동 혈관으로 식별하십시오. 왼쪽 신장 동맥을 찾고 관심 영역에 간섭이 없는지 확인하기 위해 두개골로 최대 12mm까지 수동으로 해당 영역을 조사합니다. 왼쪽 신장 동맥으로 돌아갑니다.
그런 다음 동맥에서 두개골로 6 밀리미터에 프로브를 설정하십시오. 3D 초음파 획득의 경우 호흡 게이팅을 25 % 지연으로 설정하고 창을 50 %로 설정하고 ECG 트리거를 50 밀리 초로 설정하십시오. 3D 옵션에서 스캔 거리를 11.96mm로 설정하고 스텝 크기는 0.076mm로 설정합니다.
157프레임을 획득한 후 이미지를 저장하기 전에 스크롤하여 이미지 품질을 확인합니다. 2D 직경 획득의 경우 호흡 게이팅과 ECG 트리거를 끄고 슈퍼 신장 대동맥의 12mm 스트레치에서 직경이 가장 큰 영역을 수동으로 찾습니다. 화면에서 B 모드를 누르고 B 모드 이미지를 획득합니다.
또한 변환기를 움직이지 않고 EKV 이미지의 경우 동일한 사이트에서 시스템의 표준 설정으로 EKV 이미지를 획득합니다. 슈퍼 신장 동맥류의 발달과 진행은 기준선 8 일째와 27 일에 초음파로 모니터링되었습니다. 27 일 대동맥의 삼색 염색은 벽 박리 및 교내 혈전이있는 형성된 동맥류의 형태를 보여줍니다.
8일째 복부 대동맥류 또는 AAA의 발생률과 처음 9일 이내에 대동맥 파열이 발생한 결과, 마우스의 9%가 AAA를 형성하지 못한 것으로 나타났습니다. 그러나 35%의 마우스가 카테터 이식 전에 대동맥 파열을 경험하여 AAA 질환이 확립된 나머지 마우스의 총 56%가 치료 그룹으로 계층화되는 데 최소한이었습니다. PBS 대조군 처리된 마우스에서 초기 빠른 형성 대 중간 성장 동맥류의 초기 확장 및 추가 질병 진행 사이에 반비례 관계가 관찰되었습니다.
예시적인 초음파 결과는 GSK 4 84 치료가 AAA 진행을 억제하는 반면 동맥류는 마우스를 계속 확대하고 대조군하는 것으로 나타났습니다. 정맥 또는 혈관 접근 버튼에서 카테터 연결이 끊어지면 동맥류 부위에서 알 수 없는 약물 농도로 피하 공간으로 약물이 전달되기 때문에 카테터 개통이 필수적입니다. 실험이 끝날 때 마우스를 희생하면 물 및 기타 조직을 조직학적으로 조사하고 혈액 분석을 수행하여 온/오프 표적 약물 효과를 특성화할 수 있습니다.
