이 프로토콜은 종양 이질성, 분자 다양성을 더 잘 반영하고 임상 결과를 예측하는 ATC 및 HNSCC PDX 모델을 설정하는 데 도움이 됩니다. 이 기술은 작동이 간단하고 성공률이 높으며 다른 PDX 모델에도 적합할 수 있습니다. 이 기술은 암 환자의 맞춤형 치료를 안내하기 위해 항암제 감수성 스크리닝으로 확장될 수 있습니다.
이 기술을 한 번도 수행하지 않은 개인은 약간의 어려움을 겪을 수 있으며 계획의 모든 세부 사항에주의를 기울이는 것이 좋습니다. 멸균 HTK 용액이 들어있는 50mm 원심 분리 튜브에서 ATC 및 HNSCC 종양 샘플을 얻은 후 75 % 알코올로 소독합니다. 멸균 된 안과 용 집게를 사용하여 종양 조직을 식염수로 채워진 6 센티미터 페트리 접시에 옮기고 칼날을 사용하여 작은 조각으로 자릅니다.
그런 다음 조각을 식염수가 들어있는 새로운 6 센티미터 페트리 접시에 옮기고 밀봉 필름으로 감싼다. 포장된 접시를 아이스박스에 넣고 가위, 집게, 접종 바늘을 사용하여 병원균이 없는 동물실로 운반합니다. 마우스를 마취 한 후 오른쪽 외측 흉부의 머리카락을 제거하고 75 % 알코올로 해당 부위를 소독합니다.
가위를 사용하여 오른쪽 측면 흉부 중앙에 2mm 절개를하십시오. 집게를 사용하여 페트리 접시에서 티슈를 꺼내 투관침 바늘에 넣습니다. 마우스를 잡고 펑크 부위의 피부를 조입니다.
종양 조각이 있는 투관침을 절개 부위에 피하 공간에 삽입한 다음 어깨 뒤쪽으로 이동하여 투관침 코어를 밀어 넣습니다. 멸균 거즈를 사용하여 나머지 조직을 보존하려면 종양 표면에서 식염수를 제거하여 과도하게 젖지 않도록 합니다. 2 밀리리터 세포 동결 보존 튜브에 4-6 개의 티슈 조각을 넣고 1 밀리리터의 동결 보존 용액을 튜브에 첨가합니다.
그런 다음 튜브를 그라디언트 냉각 상자에 넣고 밤새 섭씨 영하 80도에서 얼립니다. 마지막으로 액체 질소로 옮깁니다. PDX 모델 종양을 소생시키기 위해, 버니어 캘리퍼스를 사용하여 일주일에 한 번 피하 종양의 길이와 너비를 측정한다.
종양 부피를 계산하고 종양 성장 곡선을 그립니다. 그런 다음 가위를 사용하여 종양을 둘러싼 안락사 된 마우스 피부를 자릅니다. 집게로 종양을 제거하고 페트리 접시에 넣으십시오.
앞서 입증 된 바와 같이 5 세대 마우스까지 종양 이식을 수행하십시오. P5세대 ATC PDX 모델 마우스의 종양 조직을 선택한다. 2-4 입방 밀리미터 조각으로 자릅니다.
앞서 시연한 대로 이 조각을 누드의 4-6주 암컷 BALB/c 마우스의 오른쪽 등에 피하 주사합니다. 종양이 50-150 입방 밀리미터로 자라면 생쥐를 세 그룹으로 나눕니다. 렌바티닙, 시스플라틴 및 대조군을 일주일에 두 번 투여한 후 마우스의 체중을 측정합니다.
또한 종양 부피를 측정하십시오. 상관관계 분석 결과 ATC PDX 모델 구축의 성공률은 연령, 성별, 종양 직경, 종양 등급 및 분화에 의존하지 않는 것으로 나타났습니다. HNSCC PDX 모델 구성에서 종양 흡수율은 분화 정도가 모델 성공률과 관련이 있는 반면 다른 매개변수는 종양 흡수율에 영향을 미치지 않는다는 것을 입증했습니다.
각각의 PDX 모델에 대한 종양 성장 곡선은 ATC 샘플이 P3 세대로 안정적으로 전달된 반면, HNSCC 샘플의 2가지 사례는 P1 세대로 전달된 후 종양을 형성하지 못했음을 설명하였다. 대부분의 PDX 모델에서 P0 생성의 종양 성장률은 이후 계대보다 상대적으로 느렸는데, 이는 아마도 마우스 미세 환경의 적응으로 인한 것 같습니다. 조직병리학적 검사는 PDX 종양이 원발성 종양의 형태학적 특징을 보유한다는 것을 입증하였다.
렌바티닙을 사용한 치료는 대조군에 비해 ATC PDX 모델에서 종양 성장을 유의하게 억제하고 더 낮은 종양 중량을 보였다. 또한, 렌바티닙을 투여한 마우스는 전체 체중에서 눈에 띄는 변화를 나타내지 않았습니다. 과도한 시스플라틴 복용량은 체중 감소와 심지어 사망으로 입증되는 바와 같이 상당한 독성을 초래했습니다.
신선한 종양은 조각으로 자르기 전에 생리 식염수로 여러 번 씻어야합니다. 생검된 종양 샘플과 혼합하고 접종하면 종양이 형성될 수 있습니다. 이 모델은 종양 생물학 연구, 약물 스크리닝, 개인화 치료에 사용할 수 있습니다.
