Método de criação manual para saguis infantis

Resumo

Aqui, descrevemos um método de criação manual para criação de saguis infantis em uma incubadora de animais. Este método aumenta consideravelmente a taxa de sobrevivência de bebês saguis, o que oferece a oportunidade de estudar o desenvolvimento de bebês saguis com origens genéticas semelhantes criados em diferentes ambientes pós-natais.

Resumo

O sagui-comum (Callithrix jacchus) é um macaco pequeno e altamente social do Novo Mundo com altas taxas de reprodução, que provou ser um modelo de primata não humano atraente para pesquisas biomédicas e de neurociência. Algumas fêmeas dão à luz trigêmeos; no entanto, os pais não podem criar todos eles. Para salvar esses bebês, desenvolvemos um método de criação manual para criar saguis recém-nascidos. Nesse protocolo, descrevemos a fórmula do alimento, o tempo para alimentação, a configuração da temperatura e umidade, bem como a adaptação dos lactentes criados manualmente ao ambiente da colônia. Este método de criação manual aumenta significativamente a taxa de sobrevivência de lactentes saguis (sem criação manual: 45%; com criação manual: 86%) e oferece a oportunidade de estudar o desenvolvimento de lactentes saguis com origens genéticas semelhantes criados em diferentes ambientes pós-natais. Como o método é prático e fácil de usar, antecipamos que ele também poderia ser aplicado a outros laboratórios que trabalham com saguis comuns.

Introdução

O sagui-comum (Callithrix jacchus) é um pequeno e arborícola macaco do Novo Mundo originário da América do Sul e Central. O uso de saguis em pesquisas biomédicas tem crescido rapidamente nas últimas décadas devido a várias vantagens importantes dos saguis em comparação com outros primatas não humanos (NHPs), incluindo seu menor tamanho corporal, manuseio e reprodução mais fáceis em cativeiro, menor tempo de gestação, maturação sexual mais precoce e menores riscos zoonóticos 1,2,3,4,5,6 . O sagui comum tem uma estrutura cerebral e função cerebral semelhantes aos humanos e exibe um rico repertório de vocalizações e comportamento altamente social com emoções ricas. É um modelo de PNC convincente para diferentes tipos de estudos em neurociência, como estudos sobre processamento sensorial7,8,9,10,11,12,13,14, comunicação^{vocal15,16,17,18,19,} modelos de lesão medular20 21,22,23, doença de Parkinson ^{24,25,26,27,28} e doenças relacionadas à idade ²⁹. Comparado com outros NHPs, o sagui-comum tem uma taxa de reprodução relativamente alta, o que é potencialmente útil para a modificação transgênica^30,31,32. Esse primata também é amplamente utilizado em farmacologia, angiografia, estudos de patógenos e imunoterapia 33,34,35,36,37,38,39. No entanto, a oferta de saguis continua a ser muito limitada, especialmente na China, e não pode satisfazer as necessidades em rápido crescimento da investigação científica.

Em colônias de saguis, os animais adultos são alimentados uma ou duas vezes por dia, e algumas instituições alteram a dieta para saguis juvenis⁴⁰. Geralmente, os saguis infantis geralmente agarram firmemente o corpo do pai ou dos irmãos mais velhos para cuidados diários e são entregues à mãe várias vezes ao dia para obter leite. Alguns saguis fêmeas dão à luz trigêmeos e, neste caso, um ou dois bebês não podem sobreviver devido à falta de leite; Além disso, alguns pais não cuidam de seus bebês por falta de experiência em enfermagem ou por outros motivos desconhecidos. Esta é uma grande perda para muitos laboratórios. Poucos estudos têm relatado métodos de manejo nutricional para saguis adultos em cativeiro 40,41,42 utilizando alimentos e fórmulas com diferentes composições de macronutrientes, vitaminas e minerais, bem como diferentes protocolos alimentares para enriquecimento (amassado, gelificado, purificado ou enlatado)^2,41. Um estudo anterior relatou um método de criação colaborativa para trigêmeos saguis⁴³, no qual os cuidadores pegam um bebê por dia, alimentam-no manualmente ao longo do dia e o trocam por outro dos trigêmeos no dia seguinte. Embora esse método permita que os bebês tenham cuidado parental, requer um cuidador experiente para agarrar o bebê do corpo dos pais todos os dias e é trabalhoso. Até o momento, nenhum estudo relatou um método detalhado e passo a passo de criação manual para saguis recém-nascidos.

O objetivo do presente estudo é fornecer um método de criação manual para aqueles interessados no desenvolvimento de saguis, mas com recursos limitados. Ao contrário do método de criação colaborativa anterior⁴³, o método atual é uma alternativa que causa menos transtornos à família do lactente e é de fácil aprendizado. Com base nas regras básicas do aleitamento materno e nos 5 anos de prática, este artigo descreve um método de criação manual para a criação de saguis infantis que inclui o preparo do alimento, um cronograma de alimentação, a configuração da temperatura e umidade da incubadora de animais, bem como a adaptação dos animais infantis ao ambiente da colônia.

Protocolo

Todos os procedimentos experimentais foram aprovados pelo Comitê de Uso e Cuidado Animal da Universidade de Zhejiang e seguiram as diretrizes do National Institutes of Health (NIH).

1. Habitação e criação⁴⁴

1. Defina a sala de colônia com um ciclo dia/noite de 12 h:12 h, a temperatura em 26-28 °C e a umidade relativa do ar em 45%-55%.
2. Emparelhe saguis machos e fêmeas aos 2-6 anos de idade e mantenha-os em gaiolas (850 mm x 800 mm x 800 mm) com espaço suficiente e ar fresco com um sistema de ventilação de 24 horas.
3. Providencie tábuas de descanso, balanços, poleiros e redes nas gaiolas.
4. Alimente o par de saguis com água fresca e 30-40 g de alimentos duas vezes por dia, incluindo cereais, ovos, batata-doce, mel, frutas, vegetais e larvas de farinha.
   NOTA: Os veterinários e experimentadores devem inspeccionar a instalação animal pelo menos uma vez por dia para garantir que todos os indivíduos doentes são diagnosticados e tratados imediatamente.

2. Preparação antes do nascimento dos filhotes de saguis

1. Cuidados com os saguis gestantes
   OBS: O tempo de concepção foi diagnosticado por palpação (tipicamente 10-20 dias após o início do período embrionário), e também nos referimos à história reprodutiva dos animais.
   1. Proporcionar um espaço maior e mínima perturbação humana para os pares reprodutores.
   2. Alimente os pares reprodutores com alimentos adicionais, como larvas, ovos, iogurte e frutas secas para garantir a nutrição das fêmeas.
   3. Cuide e verifique frequentemente os saguis grávidas para se preparar para o parto.
      NOTA: O período de gestação do sagui é estimado em 148 dias ± 4,3 dias⁴⁵.
2. Prepare os seguintes itens: incubadora de animais (855 mm [L] x 470 mm [L] x 440 mm [H]), almofadas descartáveis (tamanhos M/L), lenços umedecidos, brinquedos de pelúcia (Figura 1A), rolos de brinquedo (Figura 1B), armações de escalada (Figura 1B), cobertores (10 cm х 10 cm, Figura 1C) e balança eletrônica (precisão de 0,2 g, Figura 1F).
   OBS: Para evitar o enforcamento de animais, os brinquedos de pelúcia não devem ter estruturas de laço.
3. Preparação de alimentos e aparelhos de alimentação
   1. Preparar os seguintes itens: fórmula infantil (adequada para 0-12 meses de idade), pasta de arroz para bebês (adequada para 0-6 meses de idade), chaleira elétrica, copo (100 mL), almofada de aquecimento, pesagem plástica (80 mm x 80 mm x 22 mm, Figura 1D), tubos de centrífuga estéreis (50 mL), seringas estéreis descartáveis (1-5 mL), injetores intravenosos (para mamilos de alimentação personalizados) (Figura 1E), e swabs (80-100 cm).
      OBS: Para fazer um bico para alimentação, é feito um corte a 1 cm da extremidade de um injetor intravenoso acoplado a uma seringa (Figura 1E).
4. Preparação do formulário de gravação
   1. Prepare um formulário, geralmente de várias páginas, para cada sagui infantil para registrar informações básicas, como nome, data de nascimento, peso de nascimento, pais, outras informações básicas de interesse, como perímetro cefálico e comprimento da cauda, informações de reprodução, como data e hora de reprodução, quantidade (mL) de ingestão de alimentos, estado de defecação (sim/não, duro/solto), e a temperatura e umidade da incubadora.
      NOTA: Normalmente, o peso corporal é medido e registrado duas vezes ao dia, uma vez antes da primeira refeição e uma vez antes da última refeição.

Figura 1: Fotos dos itens da incubadora e das ferramentas e acessórios de alimentação. (A) Brinquedos de pelúcia; (B) rolos de brinquedo e armações de escalada; (C) cobertor; (D) pesagem de plástico; (E) injetor intravenoso e seringa com bico de alimentação personalizado; (F) balança eletrônica; (G) cuidador com equipamento de proteção individual. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

3. Procedimento de criação manual

1. Limpe e esterilize o quarto antes da data de vencimento.
   1. Borrife ácido hipocloroso ou álcool etílico 75% no chão e na mesa, deixe por 30 s, depois limpe a mesa e esfregue o chão.
2. Ajuste a temperatura da incubadora em 35 °C e a umidade em 40%. Geralmente, para simular a exigência básica de temperatura dos saguis lactentes, como mostra a Tabela 1 , antes do 14º dia pós-natal (P14), manter a temperatura da incubadora em 35 °C e, a partir de P15, baixar a temperatura em 0,5 °C a cada 3 dias. Mantenha a umidade em 40%-45% dentro da incubadora, que fica próxima à umidade da colônia e mantém os pelos dos bebês secos.
3. Azulejo uma almofada de fraldas descartável para cobrir o chassi da incubadora.
4. Para minimizar o estresse dos bebês, coloque alguns cobertores e brinquedos de pelúcia na incubadora antes de introduzir os saguis infantis, que tendem a imitar os saguis adultos.
   OBS: Os cobertores e brinquedos de pelúcia são colocados na gaiola caseira dos pares reprodutores por 1 dia antes do uso.
5. Coloque os saguis infantis na incubadora e coloque-os nos brinquedos de pelúcia assim que forem separados de seus pais na gaiola de casa.
   OBS: Para evitar o isolamento social e de acordo com o bem-estar animal, geralmente, dois filhotes são escolhidos juntos para a criação manual.
   1. Usar equipamento de proteção individual esterilizado (EPI, Figura 1G) antes da alimentação.
   2. Aqueça um par de cobertores a 35 °C.
   3. Segure suavemente o sagui infantil com cobertores quentes e obtenha o peso do animal como o peso ao nascer.
   4. Transfira o sagui infantil para a incubadora com cobertores quentes.
   5. Faça registros, conforme mencionado na etapa 2.4.
6. Misture os ingredientes alimentares e alimente o sagui infantil.
   1. Dissolver 5 g de fórmula infantil em 30 ml de água fervida a 50 °C num tubo centrífugo estéril de 50 ml.
      NOTA: Saguis infantis em diferentes idades pós-natais precisam de receitas alimentares diferentes. A Tabela 2 inclui as diferentes dosagens de fórmula infantil, pasta de arroz e água nas idades pós-natais de P1 a P60. A dosagem é geralmente suficiente para 1 dia. Misture os ingredientes antes da primeira refeição e guarde o resto dos alimentos num frigorífico a 4 °C. Aqueça os alimentos a 30-35 °C para cada refeição.
   2. Tome 1 mL de alimento com uma seringa de 1 mL e cubra a seringa com um bico de alimentação personalizado.
      NOTA: Selecione uma seringa do tamanho adequado, consultando a Tabela 2.
   3. Mantenha a temperatura dos alimentos a 30-35 °C com a almofada de aquecimento.
   4. Aqueça as mãos antes de se alimentar e segure suavemente o sagui infantil com um cobertor quente em uma das mãos na incubadora.
   5. Coloque o bico de alimentação na boca do sagui infantil enquanto a cabeça do sagui infantil é segurada suavemente com o polegar e o indicador da mão seguradora do cuidador e empurre lentamente o alimento para fora da seringa em uma velocidade constante.
      NOTA: Nunca empurre o alimento mais rápido do que o sagui infantil engole. Empurrar rápido pode causar engasgos, com comida saindo do nariz pela garganta. Isso pode causar doenças como pneumonia, que pode até levar à morte. Se a comida transbordar, o sagui infantil terá dificuldades. Sempre que isso ocorrer, pare de se alimentar e limpe o alimento do rosto do animal com cuidado. Continue a se alimentar depois que o sagui começar a se comportar normalmente.
7. Depois que o sagui infantil consumir uma quantidade adequada de alimentos, limpe seu ânus com um cotonete com água morna, que limpa o ânus e promove a defecação.
8. Observe o animal por alguns minutos, e verifique a locomoção e defecação do animal.
9. Registre o tempo de alimentação, a quantidade (mL) de alimento ingerido, o estado de defecação (sim/não, duro/solto) e a temperatura e umidade da incubadora.
   NOTA: Embrulhe o sagui infantil com cobertores quentes durante a pesagem para evitar que o bebê fique frio ou machucado.
10. Mantenha o chassi da incubadora limpo, pegando fezes sólidas ou trocando para um novo bloco de fraldas descartável.
11. Antes do P50, alimentar o sagui infantil seguindo os passos 3.3-3.7 e utilizar a dosagem dos ingredientes alimentares e o tempo e frequência de alimentação mostrados na Tabela 2.
12. A partir de P50, o sagui infantil geralmente está pronto para comer voluntariamente.
    1. Use pratos de pesagem de plástico em vez de seringas. Prepare os alimentos misturando os ingredientes alimentares diretamente no prato; consulte a Tabela 2 para os valores.
    2. Coloque o prato de comida na incubadora e fixe o fundo caso ele seja virado. Observe por alguns minutos para se certificar de que os saguis infantis comem o alimento. Nas primeiras vezes, oriente o animal a comer voluntariamente, atraindo-o para o prato de comida e orientando sua boca a tocar o alimento várias vezes.
       OBS: Nunca deixe o nariz do animal tocar no alimento. Normalmente, o animal aprende a comer voluntariamente em 1 dia.

4. Aclimatação antes do retorno dos saguis infantis à colônia

NOTA: Normalmente, a criação manual é terminada quando os saguis infantis aprendem a comer sozinhos. Existem alguns procedimentos de adaptação a serem realizados antes de serem devolvidos à gaiola de origem na colônia de saguis.

1. Mova os saguis infantis da incubadora de animais para pequenas gaiolas (45 cm x 45 cm x 40 cm), que são semelhantes a uma gaiola de pássaros. Pendure uma garrafa de água (50 mL) em cada gaiola pequena.
2. Transfira as pequenas gaiolas com os saguis infantis para a colônia e posicione-os próximos à gaiola da família.
3. Alimente os saguis infantis separadamente com um prato de pesagem de plástico por 1 semana, misturando os alimentos de acordo com as receitas diárias preparadas para toda a colônia.
4. Faça um registro do peso corporal e do estado de defecação uma vez por dia.

5. Filhotes de saguis que retornam à gaiola da família

NOTA: Depois de viver na pequena gaiola por 7-10 dias, os saguis infantis geralmente se adaptam bem ao ambiente da colônia e não exibem mais ansiedade.

1. Coloque os saguis infantis de volta na gaiola da família pela manhã.
2. Observe os animais por pelo menos 15 minutos para se certificar de que não há mordidas, brigas ou perseguições entre os membros da família e os novos participantes.
   OBS: Se ocorrer mordida, briga ou perseguição, separe o bebê dos demais o mais rápido possível; e tentar devolver o bebê à família mais uma vez em outro dia. Se a falha ocorrer novamente, selecione outra família para promovê-la. Os grupos familiares que têm rica experiência parental são a primeira escolha para o fomento. Coloque um brinquedo de pelúcia em uma nova gaiola para acompanhar o macaco bebê se nenhuma família aceitar.
3. Pare de alimentar os saguis infantis separadamente e comece a alimentá-los usando a dieta para a colônia.
4. Preste muita atenção à atividade dos saguis infantis por 1 semana após o retorno à gaiola da família.
5. Meça os pesos corporais dos saguis infantis a cada 2 dias e faça um registro. Se perderem peso, alimente-os com alimentos nutritivos extras por seringa na gaiola da família.
6. Prestar cuidados diários para os saguis infantis, como para os saguis na colônia.

Resultados

O peso corporal é um índice-chave do desenvolvimento corporal dos animais e é utilizado como indicador do estado de saúde dos saguis neste protocolo. Neste trabalho, o peso corporal dos animais criados à mão aumentou gradualmente com a idade (Figura 2A, n = 16), semelhante ao peso dos recém-nascidos em estudo anterior⁴⁶. Para minimizar o transtorno às famílias reprodutoras na colônia, não pesamos os saguis filhotes na colônia todos os dias. Foram obtidos o...

Discussão

O sagui-comum é um modelo de PNH muito útil para pesquisas biomédicas e de neurociências. No entanto, os recursos do sagui são muito limitados para atender às necessidades em rápido crescimento. Neste trabalho, desenvolvemos um método de criação manual que não só aumenta a taxa de sobrevivência de filhotes de saguis, mas também oferece uma oportunidade de estudar seu desenvolvimento pós-natal. Este método de criação manual é prático e fácil de aprender e, portanto, é facilmente aplicável a outros l...

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
animal incubator	RCOM, Korea		MX - BL600N, 855 mm (W) x 470 mm (L) x 440 mm (H)
baby milk powder	Meadjohnson, America		suitable for 0-12 months of age, executive standard - GB25596
baby rice paste	HEINZ, China		suitable for 0-6 months of age, executive standard - GB10769
baby wipes	babycare, China		soft
beaker	ShuNiu, China		100 mL
blankets	Grace, China		10 cm × 10 cm, soft
climbing frame	WowWee, China		firm and no small circular structures
disposable diaper pads	Hi Health Pet, China		either M or L size
disposable sterile syringe	Cofoe, China		1 mL, 2.5 mL, 3 mL, 5 mL, 10 mL
electronic scale	YouSheng, China		measuring range from 0 to 6,000 g with precision of 0.2 g
intravenous injector	HD, China		0.55 mm x 20 mm needle
kettle	FGA, China		warm-keeping kettle 1,500 mL
lactulose	BELCOL, China		to solve constipation
plastic weighing dish	SKSLAB, China		80 mm x 80 mm x 22 mm, used as a bowl
plush toy	Lebiyou, China		soft
probiotic powder	G-Pet, China		to regulate gastrointestinal environment
sterile centrifuge tube	NEST, China		50 mL
swab	OYEAH, China		80 - 100 mm
toy roller	WowWee, China		firm and no small circular structures