<p class="jove_content"> Estes estudos foram suportados em parte pelo financiamento pelo NIH R01 AI36532 para GAH. Gostaríamos de agradecer o apoio de destaque no transplante de patologia fornecidos pelo Dr. Tibor Nadasdy, ea orientação de valor inestimável e previsão fornecida pelo falecido Dr. Charles G. Orosz em iniciar este esforço de pesquisa. </p>

<p class="jove_title"> Colheita de doadores de órgãos (2): </p><ol><li> Anestesiar o doador utilizando 65mg/kg IP pentobarbital; anestesia é mantida por isoflurano (2-3%). </li><li> Faça uma incisão na linha média do esterno às pubis para entrar no abdômen do doador e expor o rim esquerdo, deslocando o intestino lateralmente para o lado direito. </li><li> Isolar o rim esquerdo por ligadura e dividindo os vasos adrenal e testicular com um fio de seda 8-0. </li><li> Mobilizar a aorta acima de sua junção com a artéria e veia renal. </li><li> Mobilizar a veia cava inferior (VCI) acima e abaixo de sua junção com a artéria e veia renal. </li><li> Ligadura da aorta abaixo da artéria renal e veia com um fio de seda 8-0 para minimizar o sangramento. </li><li> Dissecar o ureter esquerdo do hilo renal até a bexiga. </li><li> Expor a junção ureterovesical usando retração caudal na cúpula da bexiga. </li><li> Especiais de consumo um patch, pequena elíptica da bexiga contendo a junção ureterovesical esquerdo, utilizado para a reconstrução urinária através de uma anastomose da bexiga a bexiga. O ureter direito não está incluído com a bexiga. </li><li> Ligadura da VCI abaixo da artéria renal e veia com um fio de seda 8-0. </li><li> Ligadura da aorta acima da artéria renal e veia e, lentamente, perfundir o enxerto in situ com 0,4 ml de 0,2 frio, heparinizado solução de Ringer lactato através da aorta infra-renal. </li><li> Ligadura da VCI acima da artéria renal e veia com um fio de seda 8-0. </li><li> Transecto da veia renal na sua junção com o IVC. </li><li> Divida a aorta obliquamente, cerca de 2 milímetros abaixo da artéria renal. </li><li> Remover o rim e sua fonte vascular com ureter anexado ao remendo de bexiga em bloco. Loja em solução Ringer com lactato no gelo. </li><li> Euthanize o mouse doador por deslocamento cervical sob anestesia. </li></ol><p class="jove_title"> Transplante de destinatário (2): </p><ol><li> Anestesiar o destinatário IP com 65 mg / kg pentobarbital e manter a anestesia com isoflurano (2-3%). </li><li> Faça uma incisão na linha média, cobrir o intestino com uma gaze molhada e com cuidado retirar-la para o lado esquerdo. </li><li> Ligadura do ureter direito, artéria e veia renal, e remover o rim direito. </li><li> Cuidadosamente isolar e cross-clamp da aorta infra-renal e veia cava inferior com duas pinças de 4 mm microvasular após a ligadura dos ramos lombares. </li><li> Coloque um fio de náilon 10-0 através de uma espessura total de aorta e retrair para fazer uma aortaotomy elíptica por um único corte (cerca de um quinto do diâmetro do vaso). </li><li> Faça uma venotomia longitudinal perfurando a veia cava inferior com uma agulha de calibre 30 e estender adequadamente com microtesoura. </li><li> Irrigar tanto a aorta e veia cava inferior com solução salina heparinizada para limpar o sangue intraluminal ou coágulos. </li><li> Remover o rim de doador do gelo e coloque-o intra-abdominal no flanco direito do mouse. O rim do doador é mantida úmida com uma gaze embebida com solução salina fria. </li><li> Coloque duas suturas permanecer no ápice proximal e distal do aortaotomy destinatários com a braçadeira aórtica doadores. </li><li> Faça uma anastomose término-lateral entre a braçadeira aórtica doador ea parede anterior do aortaotomy destinatários, utilizando 2 ~ 3 contínua 10-0 suturas de nylon na parte externa da aorta. </li><li> Vire o enxerto renal de doador até o flanco esquerdo do destinatário. repita o procedimento anterior entre a braçadeira aórtica doador ea parede posterior da aortaotomy destinatários </li><li> Executar uma anastomose término-lateral entre a veia do doador renal e da parede posterior da VCI destinatários, utilizando 4-5 contínua 10-0 suturas de nylon no interior da VCI. e, em seguida, a parede anterior do IVC e doadores veia renal são fechadas com 4 ~ 5 sutura contínua fora da VCI. </li><li> Anastomose da veia e artéria ambos deve ser concluído dentro de 20 minutos. </li><li> Lavar o enxerto com solução salina fria várias vezes durante a anastomose. </li><li> Divide a cúpula da bexiga destinatário, e parar o sangramento com cauterização. </li><li> Faça um pequeno corte na cúpula. </li><li> Coloque duas suturas estadia de nylon 10-0 para os doadores anastomize bexiga pequena mancha com a cúpula da bexiga destinatários. Cada lado da anastomose é suturada com 8 ~ 10 pontos contínuos. </li><li> Fechar o abdômen em duas camadas com 4-0 estéril, fio absorvível sintético vicryl. </li><li> Dê ratos destinatário salina morna 0,4 ml durante a cirurgia por injeção intermitente IV. </li></ol><p class="jove_title"> Cuidados pós-operatórios de destinatário </p><ol><li> Após o fechamento do abdome, uma única injeção intramuscular de penicilina (500U/10g) é administrado (2). </li><li> Além disso, os destinatários recebem buprenorfina 0,05 mg / kg por via intramuscular no dia 0 e cirurgia dia pós 1 para dor. Após a cirurgia, pacientes transplantados recebem água contendo sulfatrim (100mg/kg) até que o experimento é terminated. </li><li> Para primeiras 24h pós-operatório os ratos são mantidos em uma temperatura controlada incubadora. </li><li> Camundongos geralmente se recupera da anestesia dentro de 1 hora da operação e recebem comida regular e água ad libitum. </li><li> Suturas são removidas duas semanas após a cirurgia. </li></ol><p class="jove_title"> Destinatário nefrectomia </p><ol><li> Anestesiar o destinatário 4 ~ 7 dias pós-transplante renal com 65 mg / kg IP pentobarbital; anestesia é mantida por isoflurano (2-3%). </li><li> Abrir o abdómen através de uma incisão mediana. </li><li> Cobrir o intestino com solução salina, gaze e com cuidado retirar-la para o lado direito. </li><li> Remover o rim esquerdo após ligadura à esquerda ureter veia renal e artéria. </li><li> Fechar o abdômen em duas camadas com fio absorvível 4-0 vicryl sintéticos. </li></ol><p class="jove_title"> As determinações de creatinina Sangue Total </p><ol><li> Semanais para coleta de sangue a cada duas semanas, inferior a 0,2 cc é realizada submandibularly sem anestesia ou retro-orbital sob anestesia isoflurano. </li><li> Quantitativas dos níveis de creatinina no sangue são determinados utilizando um I-Stat Analyzer portátil Clínica (Heska Corp, Fort Collins, CO). </li><li> Unidades convencionais (mg / dl) são convertidos em unidades SI de micromol / L multiplicando as unidades convencionais por 88,4. </li></ol>

<ol>
	<li>Russell, P. S., Chase, C. M., Colvin, R. B., Plate, J. M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+transplants+in+mice.+An+analysis+of+the+immune+status+of+mice+bearing+long-term,+H-2+incompatible+transplants.">Kidney transplants in mice. An analysis of the immune status of mice bearing long-term, H-2 incompatible transplants.</a> <em style='font-style: italic'>JExpMed</em>. <b>147</b>, 1449-1468 (1978).</li><li>Zhang, Z., Schlachta, C., Duff, J., Stiller, C., Grant, D., Zhong, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+techniques+for+kidney+transplantation+in+mice.">Improved techniques for kidney transplantation in mice.</a> <em style='font-style: italic'>Microsurgery</em>. <b>16</b> (2), 103-109 (1995).</li></ol>

Experimentos em animais foram realizados de acordo com as diretrizes e regulamentos estabelecidos pela The Ohio State University IACUC.

<p class="jove_content"> Efetuamos cerca de 1200 casos de transplante renal em ratos com uma taxa de sucesso técnico de&gt; 90%. Comparado com o transplante cardíaco, a taxa de sucesso de transplante renal é geralmente baixa. No entanto, nosso laboratório tem mantido uma alta taxa de sucesso (&gt; 90%) de transplante renal. Os pontos-chave para o sucesso são para reduzir as lesões de reperfusão a ambos os rins de doadores e receptores, bem como minimizar o sangramento e trombose durante todo o procedimento e pós-operatório. Os seguinte...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>i-STAT</td>
<td>Other</td>
<td>HESKA</td>
<td>Cat 5101</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>i-STAT Cartridge</td>
<td>Other</td>
<td>HESKA</td>
<td>CAT 5110-CREA</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sulfatrim</td>
<td>Other</td>
<td>Actavis</td>
<td>R02109</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isoflurane</td>
<td>Other</td>
<td>NOVAPLUS</td>
<td>CA-0474</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10-0 Suture</td>
<td>Surgery</td>
<td>Sharpoint</td>
<td>AK0100</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

murine renal transplantation procedure

<p class="jove_content"> Transplante renal ortotópico em ratos é um procedimento tecnicamente desafiador. Embora o primeiro transplante renal em ratos foram realizadas por Russell et al mais de 30 anos (1) e refinada por Zhang et al anos depois (2), poucas pessoas no mundo têm dominado este procedimento. Em nosso laboratório temos realizado com sucesso 1.200 transplantes renais com ortotópico&gt; taxa de sobrevivência de 90%. Os pontos-chave para o sucesso incluem o controle rigoroso do sangramento reperfusão, e trombose, tanto durante o procedimento e pós-transplante, e uso de 10-0, em vez de 11-0 sutura para anastomoses. </p><p class="jove_content"> Pós-operatório cuidados e tratamento do destinatário é extremamente importante para o sucesso do transplante e da avaliação. Todos os destinatários do enxerto renal receber antibióticos sob a forma de uma injeção de penicilina imediatamente pós-transplante e sulfatrim na água de beber continuamente. Saúde animal global é avaliado diariamente e análises de creatinina no sangue são realizados rotineiramente com uma máquina portátil I-STAT para avaliar a função do enxerto. </p>

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Murine Renal Transplantation Procedure

<p class="jove_content">Transplante renal em ratos é um procedimento tecnicamente desafiador que requer cuidados pós-operatórios cuidado e tratamento para o sucesso.</p>

Murino Procedimento de Transplante Renal

Renal orthotopic transplantation in mice is a technically challenging procedure. Although the first kidney transplants in mice were performed by Russell ...

Research

JoVE Journal

Biology

29.5K visualizações.  The Ohio State University. Transplante renal em ratos é um procedimento tecnicamente desafiador que requer cuidados pós-operatórios cuidado e tratamento para o sucesso.