O transplante de rim em camundongos é essencial para o estudo de mecanismos de rejeição aguda e alusão crônica. Aqui introduzimos uma nova técnica cirúrgica para anastomose de vasos e a implantação ureteral no modelo de transplante de rim abdominal em camundongos. Nos modelos tradicionais de transplante de rim de camundongos, a parte superior da aorta é ligada aproximada das artérias renais.
A veia renal esquerda do doador é transcectada na veia cava e a aorta doadora é dividida igualmente abaixo da artéria renal para ser posteriormente anastomosa à aorta abdominal do receptor. Nesta técnica modificada do transplante renal do camundongo, o doador deixou a veia renal também é transcectada na veia cava, mas a aorta do doador é cortada acima da prole da artéria renal e sua anastomose para o receptor de aorta abdominal. Enquanto o fim doador da aorta é ligatado, a artéria ureteral é deliberadamente preservada.
Agora começamos a demonstração do procedimento cirúrgico. Para anestesia, coloque o rato na caixa para inalação de isoflurano cerca de 40 a 60 segundos, a fim de induzir a inconsciência. Uma vez que o mouse é anestesiado, pese o mouse.
De acordo com o peso do camundongo, a injeção intraperitoneal de cetamina, xilazina, acepromazina é dada ao rato anestesiado. Quando a anestesia tiver efeito, corte a pele abdominal. Em seguida, conserte e desinfete o mouse na mesa de operação.
Corte a pele usando a incisão abdominal cruzada. Corte os músculos da parede abdominal. Em seguida, cubra cautelosamente afastar as vísceras com uma gaze salina absorída.
Exponha o rim esquerdo, a aorta e a veia cava inferior. Cauterize as veias lombares esquerdas, incluindo seus ramos subjacentes e outros pequenos vasos, incluindo o vaso adrenal esquerdo cuidadosamente. Mobilize a região aórtica entre as artérias renais esquerda e direita com aproximadamente dois milímetros de comprimento.
Separe a veia cava e a aorta inferiores infrarenais. E passe fórceps curvas sob a aorta para colocar uma gravata solta de 7,06 sutura em torno deste vaso. Grampo cruzado na área da aorta abaixo da artéria renal direita e da veia cava inferior usando dois grampos microvasculares de cinco milímetros.
Transecte a veia renal esquerda da veia cava. Lave a aorta com um mililitro de solução de heparina. Aperte a ligadura e corte a aorta abaixo da ligadura, bem como abaixo do grampo proximal.
Prepare-se cuidadosamente, para que a delicada artéria ureteral esteja completamente preservada. libertar o rim esquerdo e os vasos associados completamente cauterizando cautelosamente todos os vasos ao redor do tecido. Remova o rim e guarde-o na solução de linha celular a quatro graus.
As etapas iniciais de operação são semelhantes às mostradas anteriormente para o rato doador, incluindo anestesia e desinfecção. Abra o abdômen através de incisão mediana, em seguida, cubra os órgãos abdominais com uma gaze molhada usando solução salina. Preserve cuidadosamente a aorta infrarenal e certifique-se de que todos os grandes ramos de embarcação são cauterizados.
Use o cautery elétrico para dissecar o ureter esquerdo cuidadosamente em uma posição proximal à pelve renal. Então, remova o rim esquerdo. Exponha a veia cava inferior e a aorta abdominal e desvincule-as do tecido adiposo circundante com aproximadamente mais de quatro milímetros de comprimento.
Em seguida, apertem cada um com dois grampos microvasculares aproximadamente e distally deles. Use um suporte de micro agulha para guiar uma agulha de sutura de monofilamento 10/0, que é colocada através da parede de aorta de forma proximal para distal. Uma arteriotomia elíptica de aproximadamente um milímetro é alcançada pela suave tração ascendente da sutura, enquanto corta diretamente abaixo da face inferior da agulha com uma tesoura fina e curva.
Realize a aorta anastomose de lado. Costure as extremidades proximal e distal da anastomose. Último ponto usando duas suturas 10.0 separadas.
Depois de amarrar, deixe as duas suturas longas, incluindo a agulha, no lugar. Costure o lado esquerdo da parede aortal da anastomose continuamente com dois pontos espaçados uniformemente em uma direção distal-proximal. Após o último ponto, guie a sutura através de uma espessura parcial da parede do vaso acima da gravata sutura superior e, simultaneamente, exerça tração suave até a extremidade curta da gravata sutura inferior.
Note que, nesta nova técnica sem nó, o último ponto não está amarrado à extremidade curta da gravata superior. Entregue o rim transplantado à sua posição normal. Agora, costure continuamente a parede direita da anastomose aortal de forma proximal a distal usando três pontos de forma proximal a distal.
Note que, em comparação com a técnica cirúrgica convencional, a última sutura é mesclada com a gravata distal nas proximidades. Não amarre-o ao final da sutura inferior, corte-o para deixar um comprimento livre de cerca de dois a três milímetros em vez disso. Corte a veia cava longitudinal inferior com comprimento suficiente de aproximadamente 1,5 milímetros.
Posicione esta incisão ligeiramente abaixo de sua contraparte aórtica. Realize a anastomose venosa utilizando o mesmo procedimento de sutura descrito anteriormente com a diferença de que são necessários quatro a cinco pontos para cada lado da anastomose. O ponto final é deixado como uma extremidade livre de comprimento semelhante à anastomose aortal descrita acima.
E a nova técnica de anastomose sem nó, o último ponto não está amarrado, mas deixado livre. Isso reduz o tempo de operação e permite ao cirurgião aumentar ou diminuir o tamanho da anastomose. Essa melhora reduz a dificuldade e as complicações pós-operatórias da anastomose vascular.
Depois de completar ambos os anastomoses, use um cotonete seco para exercer pressão suave em direção à área suturada por cerca de 10 a 20 segundos. Depois disso, ambos os grampos podem ser removidos. Penetre através da bexiga de urina do receptor usando uma agulha reta com sutura 10.0 e insira-a em um lúmen de agulha de 21 G para orientação.
Agora guie a agulha de 21 G para costurar um buraco no local da aplicação anterior da agulha e puxar a agulha. Costureter aro e perfure a bexiga com esta sutura 10.0 novamente no local de sua entrada. Reboque o filamento 10.0 e o ureter na bexiga de urina através do buraco construído.
Anastomose o ureter do doador na bexiga de urina do receptor. Aqui, conecte a membrana externa do ureter à membrana externa da parede da bexiga e realize suturas intermitentes com três a quatro pontos. Puxe a sutura de tração.
Coloque os intestinos de volta na cavidade abdominal. Realizar suturas de duas camadas, primeiro os músculos abdominais seguidos pela pele para fechar a ferida abdominal. Coloque os ratos transplantados em uma câmara controlada por oxigênio e temperatura para se recuperar após a cirurgia.
Dê analgesia pós-operatória adequada quatro dias consecutivos após a operação. Realizar nefrectomia contralateral do camundongo receptor cinco dias após a anestesia do transplante. Levante e regise o estado do rato.
Comparamos as técnicas convencionais e modificadas de transplante, avaliando alterações histológicas dos rins isoentorados transplantados versus os rins contralaterais receptores nativos. Tanto o grau do troféu dos túbulos renais quanto da fibrose intersticial renal não foram significativamente diferentes quatro e 12 semanas após o transplante, respectivamente. Investigamos anteriormente o resultado desta nova técnica sem nó e comparamos-na com a abordagem clássica em termos de aspectos técnicos do procedimento interoperatório e complicações pós-operatórias.
A técnica modificada aqui mostrada foi associada a uma menor ocorrência de eventos trombóticos venosos arteriais intraenxertos. O tempo para realizar a estenose foi significativamente menor e um excelente isoenxerto renal, a sobrevivência a longo prazo foi alcançada. O transplante de rim em camundongos é um procedimento complicado e de ponta.
Esta é uma nova técnica cirúrgica para uma anastomose de vaso e implante renal comprometida em melhorar a taxa de sucesso geral, tornando-se uma ferramenta confiável para estudar a resposta autoimune após o transplante renal.
