Comece usando um kit de extração comercial para extrair o DNA genômico das pupas ou de mosquitos Anopheles machos adultos. Em seguida, prepare a mistura de reação de PCR. Rotular o 18 SR-DNA e o satélite AGY 53B realizando uma reação de PCR.
Para a preparação da solução de hibridização, adicione cinco microlitros de sonda de DNA marcado a um tubo de 1,5 mililitro. Em seguida, adicione cinco microlitros de DNA de esperma de salmão. Precipitar a sonda de DNA adicionando dois volumes de etanol a 100% e volume 0,1 volume de acetato de sódio a três molares.
Mantenha a menos 20 graus Celsius por pelo menos 2,5 horas. Centrifugar o tubo a 17.000 G durante 20 minutos a quatro graus Celsius. Em seguida, retire o etanol e seque ao ar o pellet em temperatura ambiente no escuro por 20 minutos.
Em seguida, prepare o tampão de hibridização em um tubo de 1,5 mililitro. Vórtice a solução por um minuto e deixe o sulfato de dextran dissolver a 37 graus Celsius por 30 minutos. Para obter a solução de hibridização, dissolver a paleta de DNA em 20 a 30 microlitros do tampão de hibridização.
Vórtice a solução por um minuto. Dê uma volta rápida e guarde os tubos a 37 graus Celsius no escuro.
