Iniciar a coleta do coração do doador neonatal anestesiando e esterilizando o rato e fazendo uma incisão horizontal no xifoide com bisturi de 15 lâminas sob microscópio cirúrgico de 12,5x. Em seguida, use tesoura para criar incisões verticais lateralmente até as axilas, em ambos os lados. Remover a parede torácica anterior com outra incisão horizontal abaixo do pescoço.
Dissecar a veia cava inferior, ou VCI, as veias cavas superiores direita e esquerda, ou VCS, e os vasos pulmonares com tesoura. Circundar e ligar vasos sem brilho usando uma sutura de seda 7-0. Empurre levemente o diafragma para baixo com pinça e administre três mililitros de solução de Krebs-Henseleit modificada com alto teor de potássio e gelado no átrio direito, puncionando a VCI com uma agulha de calibre 30.
Corte a VCI, a VCS e os vasos pulmonares com tesoura. Assegurar o comprimento adequado transeccionando as artérias pulmonares na medida do possível, e a aorta, distal ao tronco braquiocefálico, com bisturi com lâmina número 11. Lave o coração com a solução cardioplégica gelada usando uma seringa de três mililitros.
Coloque o rato anestesiado em uma prateleira oblíqua. Fixe os dentes anteriores com uma corda e posicione a cabeça em direção ao cirurgião. Coloque a luz na parte externa do pescoço na área das cordas vocais.
Segure a língua com dois dedos e empurre-a suavemente para cima e para a esquerda para obter a visibilidade ideal da intubação. Agora, use uma cânula de 18 gauge de duas polegadas para um rato de 100 a 150 gramas e prenda o tubo intratraqueal com fita adesiva. Conecte a cânula de intubação ao ventilador de pequenos animais e ajuste as configurações com base no tamanho do animal, seguindo as instruções do fabricante.
Após a intubação do rato, realizar laparotomia mediana com bisturi de 15 lâminas para incisão na pele. Abra a parede abdominal anterior com tesoura e mobilize os intestinos em direção ao quadrante superior direito. Em seguida, expor a aorta abdominal retroperitoneal e a VCI, utilizando aplicadores de ponta de algodão.
Cubra os intestinos com gaze quente e embebida em soro fisiológico e use afastadores para manter a exposição ideal da VCI e da aorta abdominal. Agora, realizar dissecção romba da VCI infrarrenal e da aorta abdominal até a bifurcação. Ligate artérias e veias infrarrenais ramificadas sem brilho com fio de náilon 10-0.
Transporte do coração do doador colhido em bacia cirúrgica estéril contendo tampão Krebs-Heneseleit até o campo cirúrgico. Certifique-se de irrigar o coração doador intermitentemente com solução cardioplégica gelada. Em seguida, separar o tronco pulmonar e a aorta descendente com microtesoura e irrigar o coração doador com solução cardioplégica gelada.
Em seguida, aplicar quatro pinças vasculares atraumáticas nos segmentos distal e proximal da aorta infrarrenal e da VCI. Realizar uma aortotomia utilizando micro tesoura para fazer dois pequenos cortes horizontais. Em seguida, coloque o coração doador no lado esquerdo da aorta.
Fixar a aorta infrarrenal do receptor e a aorta ascendente do doador e lateralizar nas posições 12 e seis horas da aortotomia com suturas. Prosseguir com a terceira e quarta suturas nas posições de três e nove horas, virando suavemente o coração para o lado esquerdo da aorta após a terceira sutura. Finalizar a anastomose arterial adicionando uma a duas suturas em cada interespaço.
Agora, gire o rato no sentido anti-horário, para que a cabeça fique voltada para a mão esquerda do cirurgião. Deslocar o coração do doador para o lado esquerdo da aorta abdominal para uma visão ideal da VCI. Realizar uma venotomia na VCI, ligeiramente proximal à anastomose aórtica.
Com lâmina 11 para punção e microtesoura para ajustar o tamanho de acordo com o diâmetro do tronco pulmonar do doador, lave a luz intracoval com solução salina heparinizada. Em seguida, realizar a anastomose venosa entre a VCI do receptor e o tronco pulmonar do doador, colocando-se pontos de náilon 11-0 interrompidos na parede posterior do vaso, iniciando nas posições 12 e seis horas. Coloque uma sutura contínua de náilon 11-0 na parede frontal, coloque tiras de esponja de gelatina absorvível sobre as anastomoses e remova as pinças microvasculares, começando pelas distais.
Certifique-se de que os vasos coronários se encham e que o coração do doador comece a bater logo após a liberação das pinças proximais. Aplique uma leve pressão usando um aplicador de ponta de algodão sobre as esponjas para obter a hemostasia ideal. Coloque cuidadosamente os intestinos de volta no abdômen, sendo cauteloso para não distorcer a anastomose arterial e venosa.
Feche a parede abdominal e permita que o animal se recupere. Um corte horizontal do enxerto doador ressecado no nível médio do ventrículo dos ventrículos direito e esquerdo é mostrado. A análise histológica indicou que o tecido endocárdico fibroelastose apresentava elevada quantidade de fibras colágenas e elastina organizadas.
Tecido fibroelastose endocárdica, dupla coloração para VE-Caderina e alfa-SMA. CD-31, fosfo-SMAD2 e SMAD3, CD-31 e lesma ou caracol indicaram transição endotelial para mesenquimal.
