Os autores gostariam de agradecer a assessoria técnica de David Briles (Universidade do Alabama em Birmingham, AL, EUA). Gostaríamos de agradecer a Yvette Chen, o Diretor de Bem-Estar Animal da Universidade de Melbourne, e David Taylor, o Gerente de Biotério, para sugestões e discussões sobre bem-estar animal e ética eo desenvolvimento de critérios de intervenção e pontos finais humano para as experiências descritas neste manuscrito. Odilia Wijburg e Patrick Leitura são apoiadas por uma RD NHMRC Wright Fellowship, Kirsty curto é suportado por uma Pós-Graduação Apoio GSK e conceder uma bolsa de estudos Puzey.

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	<li>Brundage, J. F., Shanks, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deaths+from+bacterial+pneumonia+during+1918-19+influenza+pandemic.">Deaths from bacterial pneumonia during 1918-19 influenza pandemic.</a> Emerg Infect Dis. 14, 1193-1199 (2008).</li><li>Petersdorf, R. G., Fusco, J. J., Harter, D. H., Albrink, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+infections+complicating+Asian+influenza.">Pulmonary infections complicating Asian influenza.</a> AMA Arch Intern Med. 103, 262-272 (1959).</li><li>Diavatopoulos, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influenza+A+virus+facilitates+Streptococcus+pneumoniae+transmission+and+disease.">Influenza A virus facilitates Streptococcus pneumoniae transmission and disease.</a> Faseb J. , (2010).</li><li>Orihuela, C. J., Gao, G., Francis, K. P., Yu, J., Tuomanen, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-specific+contributions+of+pneumococcal+virulence+factors+to+pathogenesis.">Tissue-specific contributions of pneumococcal virulence factors to pathogenesis.</a> J Infect Dis. 190, 1661-1669 (2004).</li><li>Kadurugamuwa, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+monitoring+of+pneumococcal+meningitis+and+evaluation+of+treatment+efficacy+in+an+experimental+mouse+model.">Noninvasive monitoring of pneumococcal meningitis and evaluation of treatment efficacy in an experimental mouse model.</a> Mol Imaging. 4, 137-142 (2005).</li><li>Smith, M. W., Schmidt, J. E., Rehg, J. E., Orihuela, C. J., McCullers, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pro-+and+anti-inflammatory+molecules+in+a+mouse+model+of+pneumococcal+pneumonia+after+influenza.">Induction of pro- and anti-inflammatory molecules in a mouse model of pneumococcal pneumonia after influenza.</a> Comp Med. 57, 82-89 (2007).</li><li>Owen, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nasal-associated+lymphoid+tissue+and+olfactory+epithelium+as+portals+of+entry+for+Burkholderia+pseudomallei+in+murine+melioidosis.">Nasal-associated lymphoid tissue and olfactory epithelium as portals of entry for Burkholderia pseudomallei in murine melioidosis.</a> J Infect Dis. 199, 1761-1770 (2009).</li><li>Luker, G. D., Leib, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Luciferase+real-time+bioluminescence+imaging+for+the+study+of+viral+pathogenesis.">Luciferase real-time bioluminescence imaging for the study of viral pathogenesis.</a> Methods Mol Biol. 292, 285-296 (2005).</li><li>Hutchens, M., Luker, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+bioluminescence+imaging+to+the+study+of+infectious+diseases.">Applications of bioluminescence imaging to the study of infectious diseases.</a> Cell Microbiol. 9, 2315-2322 (2007).</li></ol>

A produção deste vídeo-artigo foi patrocinado pela Caliper Life Sciences.

In vivo de imagens com a máquina IVIS é uma metodologia exclusiva que permite a visualização em tempo real da patogênese microbiana 4, 6-9. Aqui, mostramos a aplicação desta tecnologia para a compreensão do sinergismo entre S. pneumoniae e vírus influenza em camundongos lactentes. Devido à natureza não-invasiva desta técnica, temos sido capazes de monitorar a progressão da infecção em cada rato individuais ao longo do tempo. Isto permitiu-nos para documentar a cinética de transmissão pneumocócica entre camundongos co-infantil alojados 3. A natureza não-invasiva desta técnica permite aos pesquisadores usar menos animais por experimento e, portanto, reduzir o uso de animais. Também é possível usar a máquina IVIS para visualizar a disseminação da infecção para locais previamente desconhecida de infecção no organismo, bem como sites que não são facilmente amostradas por dissecção (como o ouvido médio). Antes de se iniciar os experimentos de imagem, que confirmaram que os níveis de colonização da cepa EF3030 bioluminescentes foram comparáveis ​​aos níveis de colonização da estirpe EF3030 enumerando Contagem em homogeneizados de tecido. Além disso, confirmou que a primeira infecção pelo vírus da influenza resultaram em aumento da carga de bioluminescent EF3030 na nasofaringe de animais colonizados como ficou demonstrado com a estirpe EF3030 (resultados não mostrados). Embora a tecnologia IVIS é fácil de operar e gera reprodutível e fácil de entender os dados, os experimentos devem ser cuidadosamente projetado de modo que a sensibilidade ea utilidade da tecnologia é maximizado. Por exemplo, a sensibilidade da câmera IVIS é afetada pela profundidade e opacidade do tecido 8, que em nossa experiência, aumenta o limite de detecção de sinais bioluminescentes originário dos pulmões. Além disso, pêlo escuro e pele pigmentada reduz a transmissão de luz em até 10 vezes (em comparação com camundongos sem pêlo) 8. Durante o desenvolvimento deste método, temos este protocolo otimizado para uso com 5-14 dias de idade C57BL / 6 e camundongos têm demonstrado que desde IVIS pode ser usado para detectar a colonização de 20 dias de idade C57BL / 6 ratos com bioluminescent S. pneumoniae EF3030. No entanto, a detecção do sinal pode ser aumentada quando estes experimentos são realizados em camundongos nus ou BALB / c. No entanto, a câmera IVIS representa uma nova abordagem para monitorar, caracterizar e, finalmente, compreender o desenvolvimento in vivo da doença pneumocócica seguintes influenza A infecção pelo vírus.

using bioluminescent imaging to investigate synergism between streptococcus pneumoniae and influenza a virus in infant mice

Durante a pandemia de influenza vírus de 1918, que matou aproximadamente 50 milhões de pessoas em todo o mundo, a maioria das mortes não foram o resultado de infecção com o vírus da gripe sozinho. Em vez disso, a maioria dos indivíduos são pensados ​​para ter sucumbido a uma infecção bacteriana secundária, predominantemente causada pela bactéria Streptococcus pneumoniae (pneumococo a). A relação sinérgica entre as infecções causadas pelo vírus influenza e pneumococo foi posteriormente observado durante a pandemia de vírus influenza asiática de 1957, bem como durante os surtos sazonais do vírus (revisto em 1, 2). Aqui, nós descrevemos um protocolo usado para investigar o mecanismo (s) que podem estar envolvidos no aumento da morbidade, como resultado da gripe A concorrente vírus e S. infecção pneumoniae. Nós desenvolvemos um modelo murino infantil de forma confiável e reprodutível demonstrar os efeitos da infecção pelo vírus influenza de ratos colonizados com S. pneumoniae. Usando este protocolo, temos desde o primeiro discernimento da cinética de transmissão pneumocócica entre co-alojados, ratos neonatal usando in vivo de imagens 3.

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Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

A infecção concomitante com o vírus influenza A é um dos fatores implicados na indução de doença pneumocócica invasiva durante assintomáticos<em&gt; Streptococcus pneumoniae</emTransporte&gt;. Aqui nós descrevemos um método de infecção mista com ratos infantil para investigar o sinergismo entre esses dois patógenos respiratórios.

Usando imagens Bioluminescent para Investigar sinergismo entre Streptococcus pneumoniae E Vírus da Influenza A em Ratos infantil

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

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JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

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