Gli autori desiderano ringraziare la consulenza tecnica da David Briles (University of Alabama a Birmingham, Alabama, USA). Vorremmo ringraziare Yvette Chen, il Responsabile del Benessere Animale della Università di Melbourne, e David Taylor, il Facility Manager degli animali, per utili suggerimenti e discussioni sul benessere degli animali e l&#39;etica e lo sviluppo di criteri di intervento e punti finali umana per gli esperimenti descritti in questo manoscritto. Odilia Wijburg e Patrick lettura sono supportati da un RD NHMRC Wright Fellowship, Kirsty corto è sostenuto da una borsa post-laurea Supporto GSK e una borsa di studio Puzey.

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	<li>Brundage, J. F., Shanks, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deaths+from+bacterial+pneumonia+during+1918-19+influenza+pandemic.">Deaths from bacterial pneumonia during 1918-19 influenza pandemic.</a> Emerg Infect Dis. 14, 1193-1199 (2008).</li><li>Petersdorf, R. G., Fusco, J. J., Harter, D. H., Albrink, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+infections+complicating+Asian+influenza.">Pulmonary infections complicating Asian influenza.</a> AMA Arch Intern Med. 103, 262-272 (1959).</li><li>Diavatopoulos, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influenza+A+virus+facilitates+Streptococcus+pneumoniae+transmission+and+disease.">Influenza A virus facilitates Streptococcus pneumoniae transmission and disease.</a> Faseb J. , (2010).</li><li>Orihuela, C. J., Gao, G., Francis, K. P., Yu, J., Tuomanen, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-specific+contributions+of+pneumococcal+virulence+factors+to+pathogenesis.">Tissue-specific contributions of pneumococcal virulence factors to pathogenesis.</a> J Infect Dis. 190, 1661-1669 (2004).</li><li>Kadurugamuwa, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+monitoring+of+pneumococcal+meningitis+and+evaluation+of+treatment+efficacy+in+an+experimental+mouse+model.">Noninvasive monitoring of pneumococcal meningitis and evaluation of treatment efficacy in an experimental mouse model.</a> Mol Imaging. 4, 137-142 (2005).</li><li>Smith, M. W., Schmidt, J. E., Rehg, J. E., Orihuela, C. J., McCullers, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pro-+and+anti-inflammatory+molecules+in+a+mouse+model+of+pneumococcal+pneumonia+after+influenza.">Induction of pro- and anti-inflammatory molecules in a mouse model of pneumococcal pneumonia after influenza.</a> Comp Med. 57, 82-89 (2007).</li><li>Owen, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nasal-associated+lymphoid+tissue+and+olfactory+epithelium+as+portals+of+entry+for+Burkholderia+pseudomallei+in+murine+melioidosis.">Nasal-associated lymphoid tissue and olfactory epithelium as portals of entry for Burkholderia pseudomallei in murine melioidosis.</a> J Infect Dis. 199, 1761-1770 (2009).</li><li>Luker, G. D., Leib, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Luciferase+real-time+bioluminescence+imaging+for+the+study+of+viral+pathogenesis.">Luciferase real-time bioluminescence imaging for the study of viral pathogenesis.</a> Methods Mol Biol. 292, 285-296 (2005).</li><li>Hutchens, M., Luker, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+bioluminescence+imaging+to+the+study+of+infectious+diseases.">Applications of bioluminescence imaging to the study of infectious diseases.</a> Cell Microbiol. 9, 2315-2322 (2007).</li></ol>

La produzione di questo video-articolo è stato sponsorizzato da Caliper Life Sciences.

Imaging in vivo con la macchina IVIS è una metodologia unica che permette la visualizzazione in tempo reale della patogenesi microbica 4, 6-9. Qui si mostra l&#39;applicazione di questa tecnologia per comprendere la sinergia tra S. pneumoniae e virus dell&#39;influenza nei topi neonati. A causa della natura non invasiva di questa tecnica, siamo stati in grado di monitorare la progressione della infezione in ogni mouse individuo nel tempo. Questo ci ha permesso di documentare la cinetica di trasmissione da pneumococco tra i co-ospitato topi neonati 3. La natura non invasiva di questa tecnica consente ai ricercatori di utilizzare un minor numero di animali per sperimentare e, quindi, ridurre l&#39;utilizzo di animali. E &#39;anche possibile utilizzare la macchina IVIS di visualizzare la diffusione dell&#39;infezione ad altri siti precedentemente sconosciuti di infezione nel corpo, così come siti non facilmente campionato da dissezione (come l&#39;orecchio medio). Prima di iniziare gli esperimenti di imaging, abbiamo confermato che i livelli di colonizzazione della bioluminescente EF3030 ceppo erano paragonabili ai livelli di colonizzazione del ceppo EF3030 enumerando numero di organismi vitali in omogenati di tessuto. Inoltre, per prima cosa ha confermato che l&#39;infezione da virus dell&#39;influenza portato a un aumento del carico di bioluminescenti EF3030 nel nasofaringe del colonizzato animali come dimostrato con il ceppo EF3030 (risultati non mostrati). Mentre la tecnologia IVIS è facile da usare e genera riproducibile e di facile comprensione dei dati, la sperimentazione deve essere attentamente progettato in modo che la sensibilità e l&#39;utilità della tecnologia è massimizzato. Per esempio, la sensibilità della telecamera IVIS è influenzata dalla profondità e l&#39;opacità del tessuto 8, che nella nostra esperienza, aumenta il limite di rilevamento per i segnali bioluminescenti proveniente dai polmoni. Inoltre, la pelliccia scura e la pelle pigmentata riduce la trasmissione della luce di ben 10 volte (rispetto ai topi glabri) 8. Mentre lo sviluppo di questo metodo, abbiamo ottimizzato questo protocollo per l&#39;uso con 5-14 giorno di vita C57BL / 6 topi e hanno dimostrato che dopo IVIS può essere utilizzato per rilevare la colonizzazione di 20 giorni C57BL vecchio / 6 topi con bioluminescenti S. pneumoniae EF3030. Tuttavia, il rilevamento del segnale può essere aumentato quando questi esperimenti vengono eseguiti in topi nudi o BALB / c. Ciononostante, la fotocamera IVIS rappresenta un nuovo approccio per il monitoraggio, la caratterizzazione e, infine, capire il vivo nello sviluppo della malattia pneumococcica dopo l&#39;infezione da virus influenzale.

using bioluminescent imaging to investigate synergism between streptococcus pneumoniae and influenza a virus in infant mice

Durante la pandemia del virus influenzale del 1918, che uccise circa 50 milioni di persone in tutto il mondo, la maggior parte dei decessi non sono il risultato di infezione con virus dell&#39;influenza da solo. Invece, la maggior parte le persone sono accusate di aver ceduto a una infezione batterica secondaria, prevalentemente causata dal batterio Streptococcus pneumoniae (pneumococco). Il rapporto sinergico tra le infezioni causate da virus influenzale e il pneumococco è stato successivamente osservato durante la pandemia del 1957 asiatici virus dell&#39;influenza, così come durante le epidemie stagionali di virus (recensione a 1, 2). Qui, descriviamo un protocollo utilizzato per studiare il meccanismo (s) che possono essere coinvolti in un aumento della morbilità a causa di un virus influenzale concorrenti e S. pneumoniae infezione. Abbiamo sviluppato un modello murino di neonato in modo affidabile e riproducibile dimostrare gli effetti di infezione da virus influenzale di topi colonizzati con S. pneumoniae. Usando questo protocollo, abbiamo fornito il primo quadro della cinetica di trasmissione pneumococco tra co-ospitato, topo neonato utilizzando imaging in vivo 3.

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Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Un concomitante infezione da virus dell&#39;influenza A è uno dei fattori implicati nella induzione di malattie invasive da pneumococco durante asintomatica<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Trasporto. Qui si descrive un metodo misto infezione usando topi neonati per indagare la sinergia tra questi due patogeni respiratori.

Utilizzando Imaging Bioluminescent per Indagare il sinergismo tra Streptococcus pneumoniae E Influenza A virus in topi neonati

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

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JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

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