Los autores desean agradecer a la asesoría técnica de David Briles (Universidad de Alabama en Birmingham, AL, EE.UU.). Nos gustaría dar las gracias a Yvette Chen, el encargado del bienestar animal de la Universidad de Melbourne, y David Taylor, el Gerente del establecimiento de animales, por sus útiles sugerencias y discusiones sobre el bienestar animal y la ética y el desarrollo de criterios de intervención y los puntos finales humana para los experimentos descritos en este manuscrito. Odilia Wijburg y lectura Patrick son apoyados por un NHMRC RD Wright Fellowship, Kirsty corto es apoyado por un soporte GSK Postgrado de subvención y una beca Puzey.

<ol>
	<li>Brundage, J. F., Shanks, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deaths+from+bacterial+pneumonia+during+1918-19+influenza+pandemic.">Deaths from bacterial pneumonia during 1918-19 influenza pandemic.</a> Emerg Infect Dis. 14, 1193-1199 (2008).</li><li>Petersdorf, R. G., Fusco, J. J., Harter, D. H., Albrink, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+infections+complicating+Asian+influenza.">Pulmonary infections complicating Asian influenza.</a> AMA Arch Intern Med. 103, 262-272 (1959).</li><li>Diavatopoulos, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influenza+A+virus+facilitates+Streptococcus+pneumoniae+transmission+and+disease.">Influenza A virus facilitates Streptococcus pneumoniae transmission and disease.</a> Faseb J. , (2010).</li><li>Orihuela, C. J., Gao, G., Francis, K. P., Yu, J., Tuomanen, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-specific+contributions+of+pneumococcal+virulence+factors+to+pathogenesis.">Tissue-specific contributions of pneumococcal virulence factors to pathogenesis.</a> J Infect Dis. 190, 1661-1669 (2004).</li><li>Kadurugamuwa, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+monitoring+of+pneumococcal+meningitis+and+evaluation+of+treatment+efficacy+in+an+experimental+mouse+model.">Noninvasive monitoring of pneumococcal meningitis and evaluation of treatment efficacy in an experimental mouse model.</a> Mol Imaging. 4, 137-142 (2005).</li><li>Smith, M. W., Schmidt, J. E., Rehg, J. E., Orihuela, C. J., McCullers, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pro-+and+anti-inflammatory+molecules+in+a+mouse+model+of+pneumococcal+pneumonia+after+influenza.">Induction of pro- and anti-inflammatory molecules in a mouse model of pneumococcal pneumonia after influenza.</a> Comp Med. 57, 82-89 (2007).</li><li>Owen, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nasal-associated+lymphoid+tissue+and+olfactory+epithelium+as+portals+of+entry+for+Burkholderia+pseudomallei+in+murine+melioidosis.">Nasal-associated lymphoid tissue and olfactory epithelium as portals of entry for Burkholderia pseudomallei in murine melioidosis.</a> J Infect Dis. 199, 1761-1770 (2009).</li><li>Luker, G. D., Leib, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Luciferase+real-time+bioluminescence+imaging+for+the+study+of+viral+pathogenesis.">Luciferase real-time bioluminescence imaging for the study of viral pathogenesis.</a> Methods Mol Biol. 292, 285-296 (2005).</li><li>Hutchens, M., Luker, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+bioluminescence+imaging+to+the+study+of+infectious+diseases.">Applications of bioluminescence imaging to the study of infectious diseases.</a> Cell Microbiol. 9, 2315-2322 (2007).</li></ol>

La producción de este video-artículo fue patrocinado por Caliper Life Sciences.

Imágenes in vivo con la máquina de IVIS es una metodología única que permite la visualización en tiempo real de patogénesis microbiana 4, 6-9. Aquí, se muestra la aplicación de esta tecnología a la comprensión de la sinergia entre S. pneumoniae y el virus de la gripe en ratones lactantes. Debido a la naturaleza no invasiva de esta técnica, hemos sido capaces de controlar la progresión de la infección en cada ratón individual a través del tiempo. Esto nos ha permitido documentar la cinética de la transmisión del neumococo entre los ratones jóvenes co-alojados 3. La naturaleza no invasiva de esta técnica permite a los investigadores a utilizar menos animales por experimentar y por lo tanto, reducir el uso de animales. También es posible utilizar la máquina de IVIS para visualizar la diseminación de la infección a sitios desconocidos de la infección en el cuerpo, así como los sitios de muestreo no es fácil por la disección (por ejemplo, el oído medio). Antes de comenzar los experimentos de imagen, se confirmó que los niveles de colonización de la cepa bioluminiscente EF3030 fueron comparables a los niveles de colonización de los padres EF3030 cepa mediante la enumeración de cuenta viable en homogeneizados de tejido. Además, se confirmó por primera vez que la infección con el virus de la influenza resultó en aumento de la carga de bioluminiscentes EF3030 en la nasofaringe de los animales colonizaron como se demuestra con el padre cepa EF3030 (resultados no mostrados). Si bien la tecnología IVIS es fácil de operar y genera reproducible y fácil de entender los datos, los experimentos deben ser diseñados cuidadosamente para que la sensibilidad y la utilidad de la tecnología se maximiza. Por ejemplo, la sensibilidad de la cámara IVIS se ve afectada por la profundidad y la opacidad de los tejidos 8, que en nuestra experiencia, aumenta el límite de detección de señales bioluminiscentes procedente de los pulmones. Además, el pelo oscuro y piel pigmentada reduce la transmisión de la luz hasta en 10 veces (en comparación con los ratones sin pelo) 8. Durante el desarrollo de este método, hemos optimizado el protocolo para su uso con C57BL días 5 a 14 años / 6 ratones y desde entonces han demostrado que IVIS se puede utilizar para detectar la colonización de los 20 días de edad C57BL / 6 ratones con bioluminiscentes S. pneumoniae EF3030. Sin embargo, la detección de la señal puede ser mayor cuando estos experimentos se llevan a cabo en ratones desnudos o BALB / c. Sin embargo, la cámara IVIS representa un nuevo enfoque para vigilar, caracterizar y, finalmente, entender el desarrollo en vivo de la enfermedad neumocócica siguientes infección por influenza A virus.

using bioluminescent imaging to investigate synergism between streptococcus pneumoniae and influenza a virus in infant mice

Durante la pandemia de gripe de 1918 el virus, que mató a unos 50 millones de personas en todo el mundo, la mayoría de las muertes no fueron el resultado de la infección con el virus de la influenza solo. En cambio, la mayoría de las personas se cree que han sucumbido a una infección bacteriana secundaria, principalmente causada por la bacteria Streptococcus pneumoniae (neumococo). La relación sinérgica entre las infecciones causadas por virus de la influenza y el neumococo posteriormente ha sido observado durante la pandemia de 1957, virus de la gripe asiática, así como durante los brotes estacionales de virus (revisado en 1, 2). Aquí se describe un protocolo que se utiliza para investigar el mecanismo (s) que pueden estar involucrados en aumento de la morbilidad como consecuencia de la influenza A virus concurrentes y S. pneumoniae infección. Hemos desarrollado un modelo murino bebé de forma fiable y reproducible demostrar los efectos de la infección por virus de la gripe de los ratones colonizados con S. pneumoniae. El uso de este protocolo, hemos proporcionado una primera visión de la cinética de la transmisión del neumococo entre los compañeros de alojados, los ratones recién nacidos con imágenes in vivo 3.

Watch this Scientific Journal Video about Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice at JoVE.com

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Una infección concurrente con el virus de la influenza es uno de los factores implicados en la inducción de la enfermedad neumocócica invasiva en asintomáticos<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Carro. Aquí se describe un método de infección mixta con ratones lactantes para investigar la sinergia entre estos dos patógenos respiratorios.

Utilizando imágenes bioluminiscentes encargado de investigar la sinergia entre Streptococcus pneumoniae Y el Virus de la Influenza en ratones lactantes

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

using-bioluminescent-imaging-to-investigate-synergism-between

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

16.7K vistas.  University of Melbourne.  中文 