Um agradecimento especial a Sarah Kossak, Mitchell Guanzon, Sung Yeun Yang e Li Guo Jia, pela colaboração durante a avaliação endoscópica de seus animais experimentais.

1. Configuração do Sistema de Endoscopia <ol><li> Configure o sistema de endoscopia antes de anestesiar os ratos, seguindo as instruções do fabricante. Use um ureteroscope vídeo projetado para os seres humanos para este protocolo (Figura 1). O diâmetro externo do tubo de inserção é de 9,9 Fr (3,3 mm), a sua extremidade distal é de 8,5 Fr (2,8 mm), e o diâmetro interno do canal de instrumentação é 6 Fr (1,2 mm). </li><li> Embora o uso de endoscópios não têm sido associados a transmissão da doença [9], esterilizar a lente do endoscópio e com etanol a 70% ou 10 com técnicas adequadas quando se trabalha com microorganismos que formam esporos. Prepare lubrificante estéril bacteriostática e não coçar limpar tecidos para saturar a ponta do endoscópio. </li><li> Anexar uma seringa de 3 ml cheio de ar (ou de uma mistura de gases adequados CO 2) para a parte superior do canal de instrumentação. </li><li> Ligue o aparelho e configurar o balanço de branco em luz branca normal,modo, assim como estreita banda de imagem (NBI), quando aplicável. Desde 2001, a NBI tem proporcionado benefícios de diagnóstico por imagem, uma vez que enfatiza estruturas dos vasos sanguíneos finos nas membranas mucosas, incluindo lesões ulcerativas e tumorais, que têm característica vascularização anormal 11. Modo NBI-filtro restringe o comprimento de onda da luz captada para 390-445 nm e 530-550 nm, que destaca as estruturas com a hemoglobina. </li><li> Imprimir o formulário de pontuação de avaliação (Figura 2) para registrar suas descobertas. Familiarize-se com as imagens normais e esperados NBI (Figura 3A) ea definição e graus de cada critério antes do exame (ver Secção 6.1). </li><li> Prepara-se uma solução à base de corante em solução salina tamponada com fosfato (PBS) para cromoendoscopia, se desejado. Em cromoendoscopia, o exame é realizado utilizando um corante como meio de contraste para realçar as alterações da mucosa. Use azul de metileno (0,1-1%) e indigotina (0,1%) soluções (Figura 3B). Notaque o azul de metileno é um agente de oxidação-redução, que pode produzir radicais oxidantes, reticulação indirecta de resíduos de aminoácidos e degradação de ADN de 12, o que poderia interferir com a análise de uma amostra. </li></ol> 2. Anestesia Geral do Rato <ol><li> Escolher o agente e via de administração do anestésico. Consulte um veterinário de uma facilidade de recursos animais ou Animal Care e Use Institucional Committee (IACUC) sobre a possibilidade de interferências de medicamentos com o sistema imunológico e os objetivos da pesquisa. Alguns medicamentos podem influenciar a expressão do perfil de citocinas em animais, incluindo roedores 13. Use tribromoetanol injetável para procedimentos terminais ou isoflurano para endoscopias sobrevivência, junto com controles adequados. </li><li> Por indução, administrar 4-5% de isoflurano em oxigênio a 100% a uma taxa de 0,2-0,5 L / min; usar 0,5-2% para manutenção. Este protocolo não é apropriado para todos os animais. Consulte seu veterinário facilidadepara instruções e treinamento adequados. Agir de acordo com as recomendações pertinentes IACUC para alcançar os mais altos padrões de bem-estar animal. Certifique-se de que o mouse se totalmente anestesiado. </li><li> &quot;Strap&quot; o rato anestesiado para uma mesa em uma superfície de apoio dorsal ou posição ventral com fita adesiva laboratório. Cuidado com a orientação anatômica na tela endoscópio. Proteja suas extremidades e cauda inferiores. A banda de fita também pode ser colocado sobre o peito para evitar o movimento para longe do respirador, mas evite restringir movimentos ventilatórios torácicas. </li></ol> 3. Endoscópica exame detalhado <ol><li> Procure lesões perianais antes de introduzir o endoscópio no reto, em seguida, avançar o escopo através do ânus. </li><li> Brasão do endoscópio com lubrificante cirúrgico estéril. Não se esqueça de revestir a superfície do CCD (Charge Coupled Device) sensor. </li><li> Insira o endoscópio e iniciar a gravação. Os vídeos gravados são úteis para mavaliação eticulous da endoscopia, se necessário após o exame. Tente realizar a endoscopia no menor período de tempo possível para minimizar a irritação intestinal / mucosa. </li><li> Aplicar ar usando uma seringa para definir lentamente para além das paredes intestinais. Dependendo do tamanho do animal, usar 1-2 ml de ar. Evite insuflação de ar excessiva, que pode causar dificuldade respiratória e morte do rato anestesiado. </li><li> Avançar o endoscópio para a frente como você limpar o caminho com o ar ou a rotação suave do escopo. Não avance o endoscópio, se você não ver a luz intestinal. Perfurações ou lágrimas reto / cólon pode ocorrer nesta fase, especialmente em ratos jovens (&lt;8-10 semanas de idade). Tire fotos, se necessário. </li><li> Como o escopo avanços, avaliar se há sangramento espontâneo (definido como natural hemorragia mucosa não associados a endoscopia traumático). Hemorragia espontânea pode ser observada quando o endoscópio entra no recto e cólon. </li><li> ComoSess a transparência da parede do cólon. A transparência é definido como a capacidade de visualizar os vasos sanguíneos intramurais no cólon e que das outras vísceras circundantes (Figura 4). Movimento suave do escopo (back-frente, no sentido horário, anti-horário) vai ajudar a determinar se os vasos sanguíneos pode ser visto no contexto de outras vísceras. Tecido adiposo mesentérica pode também ser visto. Nota se no recto para dentro da cavidade pélvica parece menos transparente do que a parede do cólon na cavidade abdominal. </li><li> Inspecione para determinar o tipo e número de lesões focais (áreas edematosas, erosões, úlceras, massas tumorais). Este será gravado na forma de pontuação pelo escore inflamação do cólon e os identificadores de decimais que têm sido desenvolvidos. </li><li> Uma vez que a área onde o cólon flexiona caudal no cólon proximal é atingido, retirar o endoscópio lentamente e procure a presença de hemorragia de contacto (que ocorre devido a mucosa após a friabilidadeendoscópio é avançado ou removido). Não é necessário para raspar a superfície do cólon intencionalmente. Mucosa colorectal saudável não sangra após exame endoscópico adequado. </li></ol> 4. Biopsia <ol><li> Quando são necessárias biópsias, insira a pinça de biópsia através do canal endoscópio dedicado para instrumentação. Monitorar o avanço da pinça na tela do endoscópio para evitar perfuração intestinal. </li><li> Abra os copos de biópsia da pinça a cerca de um ângulo de copo para copo de 60-80 °, e dirigi-los para a área de interesse. Fórceps ou pressão excessivamente abertas pode compreender camadas adicionais de tecido intestinal, o que resulta numa perfuração induzida por biópsia de paredes intestinais transparentes saudáveis. Se ocorrer perfuração, a eutanásia do animal durante a anestesia seguindo suas recomendações IACUC. Perfurações resultar em endotoxemia e peritonite. </li><li> Feche os copos de biópsia, e retirá-los, mantendo a pinça fechada. </li><li> Remove a amostra de a pinça, através de lavagem do tecido com uma solução que é suave para o tecido e a pinça. ARN posterior e PBS são soluções de trabalho comuns, e se necessário, usar a agulha para retirar a amostra. Evite corroendo os copos de fórceps ou arestas cortantes. </li></ol> 5. A recuperação da anestesia <ol><li> Após a conclusão do exame, proporcionar um ambiente acolhedor para o mouse até que ele se recupere. Utilize uma luz elétrica, ou uma almofada quente fixada em 37 ° C. Evitar o sobreaquecimento; vasodilatação periférica compromete a recuperação dos animais. Monitorar o mouse perto até a recuperação completa. </li></ol> 6. Integrado Scoring System endoscópica de colorretal Saúde com decimais Identifiers <ol><li> Utilize o formulário de pontuação (Figura 2) e as definições de parâmetros abaixo (Avaliação endoscópica de Murino colorretal Inflamação e Tumores Usando um sistema decimal ponderada pontuação: Definições dos parâmetros e Protocol) paraexemplos e &quot;sistema distal-proximal endoscópica Colite marcando &#39;opcional (D-PECS) como diretrizes para avaliação nonbiased e manutenção de registros detalhados. </li><li> Marque os quatro parâmetros de inflamação colorectal descritos no formulário sistema de pontuação (Figura 2). Meticulosamente avaliar a região perianal, a transparência intestinal, tipo de sangramento intestinal (se houver), e presença e quantidade de lesões focais (erosiva, ulcerosa, e / ou tumoral). </li><li> Ao avaliar tumores para fins de pesquisa, analisar a quantidade, localização e tamanho, e descrevê-los usando o mapa do cólon e gráfico de barras no formulário de pontuação. A soma numérica das pontuações obtidas e número de lesões (quando aplicável) irá determinar o fundo inflamação do cólon, o tipo mais predominante de lesão, e do número de lesões. </li></ol>

<ol>
	<li>Huang, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colonoscopy+in+mice.">Colonoscopy in mice.</a> Surg. Endosc. 16, 22-24 (2002).</li><li>Wirtz, S., Becker, C., Blumberg, R., Galle, P. R., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+T+cell-dependent+experimental+colitis+in+SCID+mice+by+local+administration+of+an+adenovirus+expressing+IL-18+antisense+mRNA.">Treatment of T cell-dependent experimental colitis in SCID mice by local administration of an adenovirus expressing IL-18 antisense mRNA.</a> J. Immunol. 168, 411-420 (2002).</li><li>Funovics, M. A., Alencar, H., Su, H. S., Khazaie, K., Weissleder, R., Mahmood, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Miniaturized+multichannel+near+infrared+endoscope+for+mouse+imaging.">Miniaturized multichannel near infrared endoscope for mouse imaging.</a> Mol Imaging. 2, 350-357 (2003).</li><li>Becker, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+colitis+and+colon+cancer+development+in+mice+using+high+resolution+chromoendoscopy.">In vivo imaging of colitis and colon cancer development in mice using high resolution chromoendoscopy.</a> Gut. 54, 950-954 (2005).</li><li>Ravnic, D. J., Konerding, M. A., Huss, H. T., Wolloscheck, T., Pratt, J. P., Mentzer, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+microvideo+endoscopy+of+the+colonic+microcirculation.">Murine microvideo endoscopy of the colonic microcirculation.</a> J. Surg. Res. 142, 97-103 (2007).</li><li>Hamilton, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+role+for+mast+cell+tryptase+in+acute+experimental+colitis.">Essential role for mast cell tryptase in acute experimental colitis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 290-295 (2011).</li><li>Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+resolution+colonoscopy+in+live+mice.">High resolution colonoscopy in live mice.</a> Nat. Protoc. 1, 2900-2904 (2006).</li><li>Hensley, H. H., Merkel, C. E., Chang, W. C., Devarajan, K., Cooper, H. S., Clapper, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoscopic+imaging+and+size+estimation+of+colorectal+adenomas+in+the+multiple+intestinal+neoplasia+mouse.">Endoscopic imaging and size estimation of colorectal adenomas in the multiple intestinal neoplasia mouse.</a> Gastrointest. Endosc. 69, 742-749 (2009).</li><li>Banerjee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+control+during+GI+endoscopy.">Infection control during GI endoscopy.</a> Gastrointest. Endosc. 67, 781-790 (2008).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleaning+and+disinfection+of+equipment+for+gastrointestinal+endoscopy.+Report+of+a+Working.">Cleaning and disinfection of equipment for gastrointestinal endoscopy. Report of a Working.</a> Party of the British Society of Gastroenterology Endoscopy Committee. Gut. 42, 585-593 (1998).</li><li>Sano, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+diagnostic+method+based+on+color+imaging+using+narrow+band+imaging+(NBI)+system+for+gastrointestinal+tract.">New diagnostic method based on color imaging using narrow band imaging (NBI) system for gastrointestinal tract.</a> Gastrointest. Endosc. 53, 125-12 (2001).</li><li>Davies, J., Burke, D., Olliver, J. R., Hardie, L. J., Wild, C. P., Routledge, M. 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E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+digital+flexible+ureteroscope:+in+vitro+assessment+of+optical+characteristics.">The digital flexible ureteroscope: in vitro assessment of optical characteristics.</a> J. Endourol. 25, 519-522 (2011).</li><li>Machida, H., Sano, Y., Hamamoto, Y., Muto, M., Kozu, T., Tajiri, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Narrow-band+imaging+in+the+diagnosis+of+colorectal+mucosal+lesions:+a+pilot+study.">Narrow-band imaging in the diagnosis of colorectal mucosal lesions: a pilot study.</a> Endoscopy. 36, 1094-1098 (2004).</li><li>Dohoo, I., Martin, W., Stryhn, H., McPike, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cohort+studies.">Cohort studies.</a> Veterinary Epidemiologic Research. , 151-162 (2003).</li><li>Yiou, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathophysiology+of+pelvic+floor+disorders:+evidence+from+a+histomorphologic+study+of+the+perineum+and+a+mouse+model+of+rectal+prolapse.">The pathophysiology of pelvic floor disorders: evidence from a histomorphologic study of the perineum and a mouse model of rectal prolapse.</a> J. Anat. 199, 599-607 (2001).</li></ol>

Sem financeiro ou conflito de interesses divulgados.

Há várias considerações sobre modificação e solução de problemas da técnica endoscópica em camundongos. Aspectos críticos do procedimento que precisa ser dominado durante o uso da endoscopia flexível incluem o ajuste do volume de ar necessário para evitar a distensão abdominal e comprometimento respiratório do rato, e os aspectos técnicos menores de controle de exibição com a coordenação dos controles de angulação e torque . Controle de torque é importante para minimizar o risco de perfuração in...

Endoscopia de murino foi realizada como uma ferramenta de pesquisa útil para mais de uma década 1-3. Até o momento, a maioria dos estudos que empregam endoscopia murino têm utilizado endoscópios rígidos, embora alguns também têm usado a sigmoidoscopia flexível. Endoscopia Murino proporciona resultados imediatos e uma estimativa mais objetiva da extensão da normalidade intestinal, a gravidade da inflamação e progressão do tumor em comparação com medidas indiretas, tais como perda de peso, diarréia e histologia (que é abaixo do ideal quando as lesões são irregulares), enquanto oferecendo insights sobre a saúde geral do cólon. Mais notavelmente, a endoscopia permite uma avaliação repetida de modelos animais de laboratório ao longo do tempo, em oposição ao exame histológico tradicional que exige que o animal ser sacrificado e de dois pontos a ser colhido para análise 1. Apesar destas vantagens, a utilização de tecnologia endoscópica murino não foi generalizada e é limitada pela falta de protocolos padronizados de implementatiem e pontuação de achados patológicos. Devidamente implementado, endoscopia murino é uma grande promessa para facilitar ainda mais a nossa compreensão e caracterização de modelos animais de vários estados de doença gastrointestinais crônicas, incluindo doenças inflamatórias intestinais, colite, e tumores colorretais. A utilidade da tecnologia endoscópica murino dobradiças em cima de sua reprodutibilidade e objetividade, o que requer a existência de procedimentos de análise padronizados e um sistema de pontuação consistente, não redundante e confiável para patologias intestinais. Pelo menos três sistemas de pontuação descritivo para a avaliação endoscópica de colite 4-6, bem como para os tumores do cólon em ratinhos 4,7,8 foram publicados. No entanto, estas abordagens relatados e sistemas de pontuação não são facilmente comparáveis ​​entre os estudos. Em muitos casos, não existe uma definição clara dos critérios utilizados para a classificação das lesões, e quando os critérios são dados, eles variam muito. Além disso,não existem sistemas de pontuação relataram que integram a avaliação de ambos colite e tumores, duas das patologias do cólon mais comuns que podem ocorrer simultaneamente e têm efeitos interativos sobre o resultado, em uma única ferramenta de medição. Por fim, os sistemas de pontuação endoscópicos que existem para a colite têm frequentemente categorias inflamatórios com discriminação limitada (ie. Opções estreitas de pontuação em escalas de inteiros curtos, muitas vezes 1-4) para representar adequadamente os cenários progressão da doença e permitem o uso de análise estatística paramétrica. Neste trabalho, descreve-se o uso de um endoscópio flexível para avaliar a gravidade da colite murina e tumores do cólon e descrever um protocolo padronizado para empregar esta tecnologia na avaliação anatômica da região perianal, reto e cólon distal. Nós ilustramos solução de problemas eficaz durante a endoscopia para minimizar traumas e artefatos de imagem, e descrevemos um sistema de pontuação reprodutívelcom base nos parâmetros clínicos publicados validados. O sistema de pontuação integra avaliação tanto a inflamação intestinal e tumores utilizando um elevado nível de discriminação com 12 possíveis graus de inflamação, o mapeamento do tumor e as opções de traço, e um novo sistema de unidade decimal (isto é, os identificadores decimais) para destacar resultados com valor de diagnóstico específico ( ou seja, o desenvolvimento de tumores, complicações durante a endoscopia, etc.) A utilização de identificadores decimais permite monitoramento rápido de conjuntos de dados relevantes para uma análise mais aprofundada a jusante. Finalmente, realizamos testes de confiabilidade e do sistema de pontuação validade em vários modelos murinos de colite e câncer associado-colite (dextran sulfato de sódio (DSS), colite induzida, infecção Clostridium difficile, e azoximetano / câncer do cólon induzida por DSS).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="696">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Isoflurane, USP</td>
			<td style="width:160px;">Webster Veterinary&#160;</td>
			<td style="width:217px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:240px;">Surgical lubricant</td>
			<td style="width:160px;">Savage laboratories</td>
			<td style="width:217px;">surgilube, 0281-0205-45</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:240px;">Phosphate Buffered Saline</td>
			<td style="width:160px;">Thermo Scientific&#160;</td>
			<td style="width:217px;">SH30256</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:240px;">RNAlater</td>
			<td style="width:160px;">Ambion</td>
			<td style="width:217px;">AM7021</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:240px;">Methylene Blue 1% Aqueous Solution</td>
			<td style="width:160px;">Fisher Science Education</td>
			<td style="width:217px;">S96393</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:240px;"></td>
			<td style="width:160px;"></td>
			<td style="width:217px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Flexible digital ureteroscope</td>
			<td style="width:160px;">Olympus America</td>
			<td style="width:217px;">URF-V</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Video system center</td>
			<td style="width:160px;">Olympus America</td>
			<td style="width:217px;">VISERA Pro OTV-S7 Pro</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Xenon light source</td>
			<td style="width:160px;">Olympus America</td>
			<td style="width:217px;">VISERA Pro CLV-S40 Pro</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Video recorder</td>
			<td style="width:160px;">MediCapture, Inc.</td>
			<td style="width:217px;">MediCap USB200</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Flexible biopsy cup forceps</td>
			<td style="width:160px;">Olympus America</td>
			<td style="width:217px;">FBC-3115</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Anesthesia machine</td>
			<td style="width:160px;">Euthanex Corporation</td>
			<td style="width:217px;">EZ-7000 Classic System</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

flexible colonoscopy in mice to evaluate the severity of colitis and colorectal tumors using a validated endoscopic scoring system

O uso da endoscopia moderna para fins de pesquisa facilitou enormemente a nossa compreensão de patologias gastrointestinais. Em particular, a endoscopia experimental tem sido muito útil para estudos que requerem avaliações repetidas em um único animal de laboratório, tais como os mecanismos de avaliação de doença inflamatória intestinal crônica ea progressão do câncer colorretal. No entanto, os métodos utilizados em todos os estudos são altamente variáveis. Pelo menos três sistemas de pontuação endoscópicos foram publicadas para a colite murina e publicado protocolos para a avaliação dos tumores colorretais não conseguem resolver a presença de inflamação do cólon concomitante. Este estudo desenvolve e valida um sistema de pontuação endoscópica reprodutível que integra a avaliação de inflamação e tumores simultaneamente. Este novo sistema de pontuação tem três componentes principais: 1) avaliação da extensão e da gravidade da inflamação colorectal (baseado em achados perianal, a transparência do wall, sangramento das mucosas e lesões focais), 2) a gravação quantitativa de lesões tumorais (mapa de grade e gráfico de barras), e 3) a classificação numérica de casos clínicos por sua relevância patológica e de investigação com base em unidades decimais com categorias atribuídas de lesões observadas e complicações endoscópicas (identificadores decimais). Foram preparadas O vídeo eo manuscrito aqui apresentada, seguindo protocolos IACUC-aprovados, para permitir que os investigadores para marcar os seus próprios camundongos experimentais usando uma metodologia endoscópica bem validada e altamente reprodutível, com a opção de sistema para diferenciar distal de colite endoscópica proximal (D-PECS ).

O protocolo e as imagens apresentadas neste estudo foram preparadas com um endoscópio flexível Olympus URF-V 14 e NBI 11,15. As imagens de vídeo foram salvas em formato e de imagens em JPG, TIF, PNG ou formato DICOM com o máximo de 1280 x 1024 pixels, transferíveis para memórias Flash portátil USB padrão MPEG-2. NBI aumenta o contraste visual dos tecidos que contêm hemoglobina. A luz normal e NBI imagens são características fundamentais para ilustrar a anatomia normal da mucosa retal e a...

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Flexible Colonoscopy in Mice to Evaluate the Severity of Colitis and Colorectal Tumors Using a Validated Endoscopic Scoring System

Ao longo dos últimos anos, novas endoscópios geração surgiram como importantes auxiliares de pesquisa de diagnóstico para a avaliação de colite murina e tumores colorectais. Apresentamos aqui um protocolo detalhado para a avaliação endoscópica de inflamação e tumores colo-rectal em ratos, bem como um novo sistema de pontuação que utiliza identificadores decimais para documentar a gravidade endoscópico de colite e tumores colorectais.

A colonoscopia flexível em camundongos para avaliar a gravidade da colite e colorretal Tumores Usando um sistema validado endoscópica Scoring

The use of modern endoscopy for research purposes has greatly facilitated our understanding of gastrointestinal pathologies. In particular, experimental ...

flexible-colonoscopy-mice-to-evaluate-severity-colitis-colorectal

Research

JoVE Journal

Medicine

31.5K visualizações.  Case Western Reserve University School of Medicine, Cleveland.  Ao longo dos últimos anos, novas endoscópios geração surgiram como importantes auxiliares de pesquisa de diagnóstico para a avaliação de colite murina e tumores colorectais. Apresentamos aqui um protocolo detalhado para a avaliação endoscópica de inflamação e tumores colo-rectal em ratos, bem como um novo sistema de pontuação que utiliza identificadores decimais para documentar a gravidade endoscópico de colite e tumores colorectais. 

Vídeo: Flexible Colonoscopy in Mice to Evaluate the Severity of Colitis and Colorectal Tumors Using a Validated Endoscopic Scoring System

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited time. These cultured tumorspheres may exhibit markedly different cellular phenotypes when compared to the original tumors. Demonstration that cultured cells have the capability of forming new tumors is important to ensure that cultured cells model the biology of the original tumor. 
Here we present a protocol for propagating human retinoblastoma tumors in vivo using Rag2-/- immune deficient mice. Cultured human retinoblastoma tumorspheres of low passage or cells obtained from freshly harvested human retinoblastoma tumors injected directly into the vitreous cavity of murine eyes form tumors within 2-4 weeks. These tumors can be harvested and either further passaged into murine eyes in vivo or grown as tumorspheres in vitro. Propagation has been successfully carried out for at least three passages thus establishing a continuing source of human retinoblastoma tissue for further experimentation. 
Wesley S. Bond and Lalita Wadhwa are co-first authors.

A method is described to propagate human retinoblastoma tumors in mice. Tumor cells are directly injected into the eyes of immune deficient mice. Secondary tumors have been successfully established using both cells directly harvested from human tumors and cultured tumorspheres.

Estabelecimento e propagação de Tumores Humanos em Retinoblastoma Imune camundongos deficientes

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

Medicina

Use of Animal Model of Sepsis to Evaluate Novel Herbal Therapies

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several techniques, including infusion of exogenous bacterial toxin (endotoxemia) or bacteria (bacteremia), as well as surgical perforation of the cecum by cecal ligation and puncture (CLP)1-3. CLP allows bacteria spillage and fecal contamination of the peritoneal cavity, mimicking the human clinical disease of perforated appendicitis or diverticulitis. The severity of sepsis, as reflected by the eventual mortality rates, can be controlled surgically by varying the size of the needle used for cecal puncture2. In animals, CLP induces similar, biphasic hemodynamic cardiovascular, metabolic, and immunological responses as observed during the clinical course of human sepsis3. Thus, the CLP model is considered as one of the most clinically relevant models for experimental sepsis1-3.
Various animal models have been used to elucidate the intricate mechanisms underlying the pathogenesis of experimental sepsis. The lethal consequence of sepsis is attributable partly to an excessive accumulation of early cytokines (such as TNF, IL-1 and IFN-&gamma;)4-6 and late proinflammatory mediators (e.g., HMGB1)7. Compared with early proinflammatory cytokines, late-acting mediators have a wider therapeutic window for clinical applications. For instance, delayed administration of HMGB1-neutralizing antibodies beginning 24 hours after CLP, still rescued mice from lethality8,9, establishing HMGB1 as a late mediator of lethal sepsis. The discovery of HMGB1 as a late-acting mediator has initiated a new field of investigation for the development of sepsis therapies using Traditional Chinese Herbal Medicine. In this paper, we describe a procedure of CLP-induced sepsis, and its usage in screening herbal medicine for HMGB1-targeting therapies.

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection, and can be simulated by a surgical technique termed cecal ligation and puncture (CLP). Here we describe a method to use CLP-induced animal model to screen medicinal herbs for therapeutic agents.

Uso de Modelo Animal de Sepse para avaliar novas terapias à base de plantas

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several ...

Non-invasive Assessment of the Efficacy of New Therapeutics for Intestinal Pathologies Using Serial Endoscopic Imaging of Live Mice

Animal models of inflammatory bowel disease (IBD) and colorectal cancer (CRC) have provided significant insight into the cell intrinsic and extrinsic mechanisms that contribute to the onset and progression of intestinal diseases. The identification of new molecules that promote these pathologies has led to a flurry of activity focused on the development of potential new therapies to inhibit their function. As a result, various pre-clinical mouse models with an intact immune system and stromal microenvironment are now heavily used. Here we describe three experimental protocols to test the efficacy of new therapeutics in pre-clinical models of (1) acute mucosal damage, (2) chronic colitis and/or colitis-associated colon cancer, and (3) sporadic colorectal cancer. We also outline procedures for serial endoscopic examination that can be used to document the therapeutic response of an individual tumor and to monitor the health of individual mice. These protocols provide complementary experimental platforms to test the effectiveness of therapeutic compounds shown to be well tolerated by mice.

We describe methods for longitudinal monitoring of the efficacy of therapeutics for the treatment of colonic pathologies in mice using a rigid endoscope. This protocol can be readily used for the characterization of the therapeutic response of an individual tumor in live mice and also for monitoring potential disease relapse.

Avaliação não invasiva da eficácia de novos Therapeutics para Intestinal Patologias Usando imagem endoscópica série da Vivo Ratos

Animal models of inflammatory bowel disease (IBD) and colorectal cancer (CRC) have provided significant insight into the cell intrinsic and extrinsic ...

Dry Powder and Nebulized Aerosol Inhalation of Pharmaceuticals Delivered to Mice Using a Nose-only Exposure System

Obstructive respiratory diseases like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are currently treated by inhaled anti-inflammatory and bronchodilator drugs. Despite the availability of multiple treatments, both diseases are growing public health concerns. The majority of asthma patients are well controlled on current inhaled therapies but a substantial number of patients with severe asthma are not. Asthma affects an estimated 300 million people worldwide and approximately 20 percent have a severe form of the disease. In contrast to asthma, there are few effective therapies for COPD. An estimated 10% of the population has COPD and the trend in death rates is increasing for COPD while decreasing for other major diseases. Although developing drugs for inhaled delivery is challenging, the nose-only inhalation unit enables direct delivery of novel drugs to the lung of rodents for pre-clinical efficacy and safety/toxicology studies. Inhaled drug delivery has multiple advantages for respiratory diseases, where high concentration in the lung improves efficacy and minimizes systemic side effects. Inhaled corticosteroids and bronchodilators benefit from these advantages and inhaled delivery may also hold potential for future biologic therapies. The inhalation unit described herein can generate, sample for characterization, and uniformly deposit a drug aerosol in the lungs of rodents. This enables the pre-clinical determination of the efficacy and safety of drug doses deposited in the lungs of rodents, key data required before initiating clinical development.

The inhalation unit described herein can generate, sample for characterization, and uniformly deposit a drug aerosol in the lungs of rodents. This enables the pre-clinical determination of the efficacy and safety of drug doses deposited in the lungs; key data enabling clinical inhaled drug development.

Pó seco e nebulizada de inalação de aerossóis de produtos farmacêuticos entregue no Ratos Usando um nariz somente Sistema de Exposição

Obstructive respiratory diseases like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are currently treated by inhaled anti-inflammatory and ...

Taste Exam: A Brief and Validated Test

The emerging importance of taste in medicine and biomedical research, and new knowledge about its genetic underpinnings, has motivated us to supplement classic taste-testing methods in two ways. First, we explain how to do a brief assessment of the mouth, including the tongue, to ensure that taste papillae are present and to note evidence of relevant disease. Second, we draw on genetics to validate taste test data by comparing reports of perceived bitterness intensity and inborn receptor genotypes. Discordance between objective measures of genotype and subjective reports of taste experience can identify data collection errors, distracted subjects or those who have not understood or followed instructions. Our expectation is that fast and valid taste tests may persuade researchers and clinicians to assess taste regularly, making taste testing as common as testing for hearing and vision. Finally, because many tissues of the body express taste receptors, taste responses may provide a proxy for tissue sensitivity elsewhere in the body and, thereby, serve as a rapid, point-of-care test to guide diagnosis and a research tool to evaluate taste receptor protein function.

This protocol measures human taste responses and includes a brief anatomical assessment, a short taste test, and a validation method using the subject&#39;s reported sensation and taste receptor genotype.

: Sabor um breve e validado teste exame

The emerging importance of taste in medicine and biomedical research, and new knowledge about its genetic underpinnings, has motivated us to supplement ...

The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status epilepticus (SE) is frequently selected to recapitulate spontaneous recurrent seizures (SRS). Here we present a protocol of SE induction by intraperitoneal (i.p.) injection of pilocarpine and monitoring of chronic recurring seizures in live animals using a wireless telemetry video and electroencephalogram (EEG) system. We demonstrated notable behavioral changes that need attention after pilocarpine injection and their correlation with hippocampal neuronal loss at 7 days and 6 weeks post-pilocarpine. We also describe the experimental procedures of electrode implantation for video and EEG recording, and analysis of the frequency and duration of chronic recurrent seizures. Finally, we discuss the possible reasons why the expected results are not achieved in each case. This provides a basic overview of modeling chronic epilepsy in mice and guidelines for troubleshooting. We believe this protocol can serve as a baseline for suitable models of chronic epilepsy and epileptogenesis.

This manuscript describes a method of inducing status epilepticus by systemic pilocarpine injection and of monitoring spontaneous recurrent seizures in live animals using a wireless telemetry video and electroencephalogram system. This protocol can be utilized for studying the pathophysiologic mechanisms of chronic epilepsy, epileptogenesis, and acute seizures.

O modelo de pilocarpina de epilepsia do lobo Temporal e EEG monitoramento usando sistema de radiotelemetria em ratos

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status ...

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a diverting enterostomy. The etiology of this disease remains ill-defined but appears to differ from that of classical inflammatory bowel diseases such as Crohn's disease and ulcerative colitis. Research aimed to decipher the pathophysiological mechanisms leading to the development of this disease has been severely hampered by the lack of an appropriate murine model. This protocol generates a murine model of DC that facilitates the study of the immune system's role and its interaction with the microbiome in the development of DC. In this model using C57BL/6 animals, distal parts of the colon are excluded from the fecal stream by creating a distal colostomy, triggering the development of mild to moderate inflammation in the excluded bowel segments and reproducing the hallmark lesions of human DC with a moderate systemic inflammatory response. In contrast to the rat model, a large number of genetically-modified murine models on the C57BL/6 background are available. The combination of these animals with our model allows the potential roles of individual cytokines, chemokines, or receptors of bioactive molecules (e.g., interleukin (IL)-17; IL-10, chemokine CXCL13, chemokine receptors CXCR5 and CCR7, and the sphingosine-1-phosphate receptor 4) to be assessed in the pathogenesis of DC. The availability of congenic mouse strains on the C57BL/6 background largely facilitates transfer experiments to establish the roles of distinct cell types involved in the etiology of DC. Finally, the model offers the opportunity to assess the influences of local interventions (e.g., modification of the local microbiome or local anti-inflammatory therapy) on mucosal immunity in affected and non-affected bowel segments and the on systemic immune homeostasis.

Murine distal colostomy provides a murine model for human diversion colitis, a predominantly lymphocytic colitis in colon segment excluded from the fecal stream.

Murino colostomia Distal, um novo modelo de colite de diversão em camundongos C57BL/6

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Using a Knee Arthrometer to Evaluate Tissue-specific Contributions to Knee Flexion Contracture in the Rat

Normal knee range of motion (ROM) is critical to well-being and allows one to perform basic activities such as walking, climbing stairs and sitting. Lost ROM is called a joint contracture and results in increased morbidity. Due to the difficulty of reversing established knee contractures, early detection is important, and hence, knowing risk factors for their development is essential. The rat represents a good model with which the effect of an intervention can be studied due to the similarity of rat knee anatomy to that of humans, the rat's ability to tolerate long durations of knee immobilization in flexion, and because mechanical data can be correlated with histologic and biochemical analysis of knee tissue.
Using an automated arthrometer, we demonstrate a validated, precise, reproducible, user-independent method of measuring the extension ROM of the rat knee joint at specific torques. This arthrometer can be used to determine the effects of interventions on knee joint ROM in the rat.

The goal of the protocol is to measure the extension range of motion of the rat knee. The effects of various diseases that increase the stiffness of the knee joint and the effectiveness of treatments can be quantified.

Usando um artrômetro de joelho para avaliar as contribuições de tecido-específica para contratura de flexão do joelho em ratos

Normal knee range of motion (ROM) is critical to well-being and allows one to perform basic activities such as walking, climbing stairs and sitting. Lost ...

Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal cancer, inflammatory bowel disease, and Parkinson&#8217;s disease. To study the function of the appendix, a gut disease-associated murine appendectomy model has been established and its step-by-step protocol is described here. This report introduces a facile protocol for caecal patch removal in mice followed by the chemical induction of chronic colitis-associated colorectal cancer using a combination of dextran sulfate sodium (DSS) and azoxymethane (AOM). IgA specific cells and IgA concentration were significantly reduced upon removal of the caecal patch in male C57BL/6 mice&#160;compared to those in the sham group. Simultaneously administering 2% DSS and AOM resulted in nearly 80% mice survival in both sham and appendectomy groups without significant body weight loss. Histological results confirmed colonic inflammation and different degrees of adenocarcinoma. This model can be used for the study of the functional role of the appendix in maintaining gut microbiota homeostasis and pathogenesis of gut colitis and malignancies, as well as for the potential development of drug targeting therapies.

The presented protocol describes a facile surgical removal of the appendix (caecal patch) in a mouse followed by the induction of inflammatory bowel disease-associated colorectal cancer. This murine appendectomy model enables investigation of the biological role of the appendix in the pathogenesis of human gastrointestinal disease.

Modelo de apendicectomia Murina de colite crônica câncer colorretal associado por localização precisa do remendo de Caecal

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal ...

Establishing In Situ Closed Circuit Perfusion of Lower Abdominal Organs and Hind Limbs in Mice

Ex vivo perfusion is an important physiological tool to study the function of isolated organs (e.g. liver, kidneys). At the same time, due to the small size of mouse organs, ex vivo perfusion of bone, bladder, skin, prostate, and reproductive organs is challenging or not feasible. Here, we report for the first time an in situ lower body perfusion circuit in mice that includes the above tissues, but bypasses the main clearance organs (kidney, liver, and spleen). The circuit is established by cannulating the abdominal aorta and inferior vena cava above the iliac artery and vein and cauterizing peripheral blood vessels. Perfusion is performed via a peristaltic pump with perfusate flow maintained for up to 2 h. In situ staining with fluorescent lectin and Hoechst solution confirmed that the microvasculature was successfully perfused. This mouse model can be a very useful tool for studying pathological processes as well as mechanisms of drug delivery, migration/metastasis of circulating tumor cells into/from the tumor, and interactions of immune system with perfused organs and tissues.

A protocol is described for in situ perfusion of the mouse lower body, including the bladder, the prostate, sex organs, bone, muscle and foot skin.

Estabelecendo in Situ Circuito Fechado Perfusão de Órgãos Abdominais Inferiores e Membros Traseiros em Camundongos

Ex vivo perfusion is an important physiological tool to study the function of isolated organs (e.g. liver, kidneys). At the same time, due to the small ...