O protocolo geral descreve procedimentos cirúrgicos facilmente realizados de remoção do apêndice conhecido como patch de caecal em camundongos. O modelo de apendicectomia de murina pode ser usado para estudar os papéis biológicos do apêndice em patogênese da doença gastrointestinal humana. O apêndice humano é um órgão discutível.
Estudos recentes sugerem que o apêndice desempenha um papel importante na manutenção da saúde intestinal. Estudar a função biológica do apêndice, gerar um modelo animal de apendicectomia associado à doença é fundamental. Neste protocolo, descreveremos uma etapa cirúrgica simples e segura de remoção do apêndice, conhecido como patch de caecal em camundongos.
Para garantir o sucesso deste modelo, existem três passos-chave como você verá no vídeo a seguir. Primeiro, localize o caecum dos ratos antes da cirurgia. Segundo, faça uma pequena incisão no abdômen.
Terceiro, desinfete e feche o toco de caecum. A primeira parte, apendicectomia de ratos. Prepare instrumentos cirúrgicos estéreis e soluções de limpeza antes da cirurgia.
Anestesiar e fixar o mouse em uma plataforma em uma posição supina, colocando quatro tiras de fita adesiva médica nos membros para evitar o movimento postural durante a cirurgia. Toque suavemente em todo o abdômen do mouse para encontrar a sensação de colisão. Cubra a cortina e desinfete a área raspada do abdômen do rato o mais largo possível usando duas vezes de entoiodina.
Faça uma incisão longitudinal variando de 0,5 centímetro a um centímetro na linha média do abdômen. De acordo com a localização predeterminada do caecum, procure o caecum e exteriorize-o suavemente por aproximadamente um centímetro de comprimento para identificar o patch caecal. Use um soro fisiológico pré-aquecido e estéril para hidratar o intestino.
Para evitar possíveis complicações de hemorragia pós-operatória e infecção, ligante os vasos sanguíneos mesentéricos de caecum usando o 8-0 Sutura. Hidrate o caecum com o soro fisiológico. Marque a região de ressecção usando a sutura 4-0 com laço aberto perto do ápice do caecum no cólon proximal.
Corte o patch de caecal abaixo da ressecção marcada usando micro-tesouras e elimine o teor de caecal residual com cotonetes de algodão médicos. Desinfete o toco de caecum com entoiodina. Feche o toco com sutura de corrida usando o 8-0 Sutura.
Remova cuidadosamente o laço de rosca 4-0, anteriormente usado para marcar a ressecção no toco do caecum. Esterilize a posição suturada usando entoiodina. Reidratar a área de corte com o soro fisiológico.
Feche a camada de musculatura com sutura de corrida usando 8-0 fio de sutura. Feche as camadas da pele usando suturas interrompidas com rosca de sutura 4-0. Desinfete o corte cirúrgico duas vezes com entoiodina.
Em seguida, remova o iodo usando 75% de álcool médico. Vire suavemente o mouse para trás. Injetar subcutâneamente 0,1 miligrama por quilograma de peso corporal de buprenorfina e 0,4 mililitros de soro fisiológico.
E descanse o rato na almofada de calor, até que ele volte à consciência. Coloque o rato de volta na gaiola estéril e monitore de perto o rato para obter sinais de dor durante três dias após a cirurgia para garantir sua recuperação. A segunda parte:Indução do Câncer Colorretal Associado à Colitis com Azoxymetano, AOM e Sulfato de Sódio Dextran, DSS, sete dias após apendicectomia.
Descongele uma alíquota de AOM e dilui-a ao 1 mililitro usando soro fisiológico 0,9%. Todo o processo de preparação é realizado no capô da fumaça. Dissolva quatro gramas de pó DSS em 200 mililitros autoclaved solução de água para preparar 2%DSS.
Cada gaiola contém cinco ratos. Faça uma injeção intraperitoneal de AOM com 0,01 mililitro por grama por mouse baseando-se em seu peso. Substitua a água autoclavada por 2%DSS por cinco dias.
Os ratos serão alimentados com água autoclavada por dois ciclos adicionais. A terceira parte:Resultados. Os resultados de Fluxo e ELISA indicam a remoção bem sucedida do patch caecal.
Este procedimento pode contribuir para uma redução significativa das células plasmáticas específicas da IgA, uma mudança óbvia do IgA secreto no intestino grosso, em comparação com 3%DSS, que tem alta taxa de mortalidade e mudança significativa de peso por causa de fezes sangrentas graves, prolapso ânus e abcess abdominal. O DSS de 2%é adequado para todo o processo para sua alta taxa de sobrevivência para quase 80% e mudança de peso razoável em grupos de sham e apendicectomia. Como mostrado nestas imagens, induzímos com sucesso os tumores colorretais associados à colite.
Nas imagens de manchas de H&E, a seta preta indica úlcera mucosa, ponta de flecha indica adenocarcinoma, e uma seta branca indica infiltração de neutrófilo entre glândulas. Diferentes estágios do adenocarcinoma podem ser vistos em grupos de apendicectomia e apendicectomia. Este modelo de apendicectomia murina econômica pode ser usado para responder a algumas perguntas importantes como: qual é o papel do apêndice na regulação de bactérias intestinais e como ela participa da resposta imune no tecido linfoide associado ao intestino.
Lembre-se, para evitar o dano na adesão do intestino, a pré-localização do caeco e a pequena incisão da pele são importantes. Além disso, usamos o DSS 2%para induzir colite. Mas uma maior concentração de DSS pode ser usada para outras cepas de camundongos.
