Os autores desejam agradecer a Jeanette Hayes-Klug e Kelly Anderson pela gestão da colônia muntjac, Dr. Alan Young por nos apresentarem ao muntjac e ao Sr. Cleve Tedford da Cervid Solutions Inc. por fornecerem a semente muntjac para este projeto. Este trabalho foi apoiado pela concessão do NIH R01AI093634.

1. Preparação Processual
Todos os procedimentos animais descritos foram revisados e aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade estadual do Colorado, uma Associação de Avaliação e Acreditação de Cuidados Animais Laboratoriais (AAALAC), instituição credenciada pela Intl.
<ol><li>Antes do exame, imobilize os animais usando protocolos adequados de sedação ou anestesia para proporcionar relaxamento e permitir o posicionamento adequado. Um manipulador restringe o veado enquanto uma segunda pessoa administra a sedação ao animal. Nota: Os autores encontraram a seguinte combinação para fornecer sedação eficaz nesta espécie: butorphanol (0,45 mg/kg), azaperona (0,035 mg/kg) e medetomidina (0,04 mg/kg), administrada intramuscularmente nos músculos glúteos.</li>
	<li>Uma vez que a doe tenha atingido um plano de sedação que permite o manuseio compatível, posicione-a em uma recumbência dorsal ou lateral em uma mesa de exame ou dentro de um cocho V. Eleve ligeiramente a cabeça, pescoço e tórax (aproximadamente 20-30°) para reduzir o risco de regurgitação e aspiração de conteúdo rumenal e facilitar a ventilação adequada durante o procedimento. Nota: Na maioria dos cervids ou outras espécies ruminantes, o ultrassom abdominal é realizado em animais em pé; no entanto, o pequeno tamanho e considerações comportamentais desta espécie requer sedação pesada para exame e posicionamento severo é, portanto, mais difícil e pode impedir uma técnica de imagem eficaz. Posicionar o animal no meio do caminho entre a recumência severa e lateral pode ser ideal para reduzir o risco de regurgitação e hipoventilação e deve ser considerado, se possível. Em qualquer posição recumbente, é fundamental monitorar cuidadosamente as respirações dos animais e parar imediatamente o exame e colocar o animal em recumbência severa se for notada regurgitação ou hipoventilação.</li>
	<li>Se necessário, corte os cabelos da área do abdômen a serem examinados para obter o contato adequado entre a pegada do transdutor e a pele. Nota: No início da gestação, evidências de gravidez podem ser detectadas no abdômen caudal perto das glândulas mamárias. Esta região do muntjac é tipicamente sem pelos e, portanto, a barba pode não ser indicada neste momento. À medida que o feto cresce e o útero distendência para ocupar uma posição mais craniana no abdômen, o recorte do cabelo será necessário antes da imagem. Deve-se tomar cuidado para evitar causar qualquer trauma mecânico na pele, incluindo lacerações de lâminas de barbear ou lesões térmicas de cortadores elétricos.</li>
	<li>Posicione a unidade de ultrassom em um local que permita ao técnico visualizar facilmente o monitor durante a realização do exame com sua mão dominante. Insira informações de identificação animal (nome, número de identificação, etc.) no sistema para rotular automaticamente imagens salvas e loops de vídeo.</li>
</ol>2. Exame de Ultrassom Reprodutivo Transabdominal
<ol><li>Aplique uma quantidade generosa de gel de acoplamento acústico no abdômen caudal.</li>
	<li>Coloque um transdutor linear curvo de 5-10 MHz na pele do abdômen caudal, imediatamente craniano para o púbis, e mova-o lentamente em uma direção craniana para avaliar as estruturas dentro da cavidade pélvica. Escaneie os quadrantes esquerdo e direito do abdômen caudal para avaliar ambos os chifres do útero bicornuato do muntjac. Nota: O ultrassom abdominal abrangente envolve avaliação de todas as vísceras abdominais, incluindo fígado, rins, baço, trato gastrointestinal, bexiga urinária e trato reprodutivo. Para efeitos deste protocolo, somente o exame da gravidez será discutido detalhadamente; no entanto, o aparecimento normal de outros órgãos abdominais caudais deve ser reconhecido, pois essas estruturas provavelmente serão encontradas durante o curso do estudo. Os órgãos mais comumente vistos neste local incluem segmentos do trato gastrointestinal, da bexiga urinária e do trato reprodutivo. Os intestinos grosso e pequeno são identificados pela aparência caracteristicamente em camadas da parede intestinal. O lúmen pode ou não ser pronunciado dependendo do tipo e quantidade de conteúdo, que pode incluir partículas fluidas, gasas, mucosas ou alimentares. A bexiga urinária pode ser difícil de identificar a menos que distendida com urina, e as camadas da parede da bexiga são significativamente menos distintas do que as dos intestinos. Além do útero, os ovários também podem ser encontrados no ultrassom do trato reprodutivo do muntjac feminino. Os ovários aparecerão como estruturas vazias perto do polo caudal dos rins, e sua aparência pode mudar ao longo do ciclo estrous. A presença de múltiplos folículos maduros e cheios de fluidos dentro do córtex é sugestiva de estrus. Nota: Ao girar e/ou "abanar" a cabeça de digitalização do transdutor, as estruturas podem ser avaliadas em planos transversais ou sagitos.<ol>
<li>Se necessário para diferenciar um útero gravid da bexiga urinária, esvazie a bexiga manualmente aplicando pressão suave no abdômen caudal ou colocando um cateter urinário e repetindo o exame. Nota: A expressão manual da bexiga só deve ser tentada quando o animal estiver em posição severa ou vertical, o que facilita uma orientação mais natural das vísceras abdominais e reduz o risco de trauma para outras estruturas. O útero também pode ser diferenciado da bexiga urinária, avaliando a espessura da parede do órgão. A espessura típica de uma bexiga moderadamente distendida é de aproximadamente 1,4 mm24,enquanto os autores descobriram que a parede mais muscular do útero gravid no muntjac geralmente mede entre 7-8 mm. Nota: A gravidez precoce é difícil de diagnosticar definitivamente devido à falta de estruturas fetais identificáveis, e de fato a primeira indicação de gravidez pode ser simplesmente um pequeno bolso fluido no abdômen caudal. Se visto neste momento, o embrião em desenvolvimento aparecerá como uma estrutura hiperecóica, ovalicada à amorfa dentro do útero(Figura 1).</li>
	</ol></li>
	<li>Faça ajustes na profundidade, frequência e ganho conforme necessário para melhorar o contraste e os detalhes da imagem. Nota:frequências mais altas estão associadas a comprimentos de onda mais curtos, necessários para uma melhor resolução de imagem. A maioria dos transdutores são capazes de operar dentro de uma faixa de frequências (por exemplo, 6-10 MHz)24. A frequência pode ser ajustada usando os controles do scanner na unidade de ultrassom, e o aumento da frequência resultará em uma imagem mais clara. O aumento da frequência reduz simultaneamente a profundidade da penetração de ondas sonoras; portanto, a redução da frequência pode ser necessária para visualizar estruturas mais profundas, mas a resolução pode ficar comprometida24. Por essa razão, é importante selecionar a maior frequência possível para alcançar a profundidade do tecido desejada. Os ajustes nos controles de ganho alterarão a amplificação das ondas sonoras que retornam ao transdutor dos tecidos e afetarão o grau de contraste na imagem24. O ganho deve ser ajustado a um ponto onde o contraste ideal entre tecidos hiperecóicos e hipoecóicos é alcançado, e essas configurações podem precisar ser ajustadas dependendo das estruturas que estão sendo imagens.</li>
</ol>3. Obtenção de Medidas Fetais
Nota: A idade gestacional em muitas espécies animais domésticas pode ser estimada utilizando faixas de referência estabelecidas para medidas fetais obtidas a partir do exame de ultrassom. As medidas mais utilizadas incluem comprimento reto de alcatra (SCRL), profundidade do peito (CD) e comprimento da cabeça (HL)17. Embora dados suficientes ainda não tenha sido coletados para desenvolver diretrizes de idade gestacional confiáveis no cervo muntjac de Reeves, as medidas podem ser coletadas para começar a estabelecer essas referências. A frequência cardíaca fetal (FHR) tem sido mostrada em outras espécies de cervid e ruminante para aumentar linearmente à medida que a gestação progride até um certo ponto (tipicamente em torno do dia 60 da gestação), momento em que a frequência cardíaca começa a diminuir17. A FHR pode ser usada para estimar a idade gestacional em conjunto com outras observações de ultrassom, porém é mais comumente utilizada como medida de viabilidade fetal17,24. A FHR foi calculada no muntjac de Reeves já em 35 dias após o acasalamento.
<ol><li>Para medir o SCRL, localize o útero no monitor e faça ajustes finos na posição do transdutor até que se obtenha uma visão sagital de todo o feto(Figuras 2 e 3). Congele a imagem e meça a distância entre o aspecto mais dorsal do crânio e a base do sacro (Figuras 2 e 3).</li>
	<li>Para medir o CD, obtenha uma visão sagital do feto (a mesma imagem pode ser usada para medir SCRL) e meça a distância entre os aspectos dorsal e ventral do tórax (Figuras 2 e 3).</li>
	<li>Para medir a HL, utilizando a mesma visão sagital do feto descrita para as medidas scrl e CD, meça a distância da crista occipital até a base do nariz (Figuras 2 e 3).</li>
	<li>Para calcular a frequência cardíaca fetal, identifique o coração dentro da cavidade torácica do feto visualizando suas contrações rítmicas. Calcule a frequência cardíaca contando o número de contrações (batimentos cardíacos) que ocorrem dentro de um período de 1 minuto de tempo. Nota: Se a unidade de ultrassom que está sendo usada tiver recursos do Doppler, esse recurso poderá ser empregado para ajudar ainda mais a distinguir o coração de outros movimentos fetais não específicos.</li>
	<li>Verifique se todas as imagens salvas e loops de vídeo incluem todas as informações de identificação necessárias, incluindo nome ou número de animais, data, medidas e etiquetas de estrutura apropriadas.</li>
</ol>4. Conclusões e Recuperação Processual
<ol><li>Remova todo o gel de contato de ultrassom residual do abdômen do animal usando um pano macio ou toalhas de papel. Limpe o gel do transdutor antes do armazenamento.</li>
	<li>Se utilizar o protocolo de sedação descrito na etapa 1.1, administre atipamezole subcutânea em uma dose de 0,25 mg/kg para reverter os efeitos da medetomidina. Se usar um protocolo de sedação diferente no qual um antagonista está disponível, administre este agente ao animal de acordo com doses publicadas na conclusão do procedimento para acelerar a recuperação.</li>
	<li>Coloque o muntjac em uma superfície de cama macia em recumbência popal, com a cabeça ligeiramente elevada para reduzir o risco de regurgitação e aspiração de conteúdo rumenal. Monitore o animal de perto até que esteja totalmente recuperado e capaz de ambular ao redor do recinto sem assistência.</li>
</ol>

<ol>
	<li>White, I. R., Russel, A. J., Wright, I. A., Whyte, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+ultrasonic+scanning+in+the+diagnosis+of+pregnancy+and+the+estimation+of+gestational+age+in+cattle.">Real-time ultrasonic scanning in the diagnosis of pregnancy and the estimation of gestational age in cattle.</a> Vet Rec. 117 (1), 5-8 (1985).</li><li>Sergeev, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+ultrasound+imaging+for+predicting+ovine+fetal+age.">Real-time ultrasound imaging for predicting ovine fetal age.</a> Theriogenology. 34 (3), 593-601 (1990).</li><li>Aiumlamai, S., Fredriksson, G., Nilsfors, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+ultrasonography+for+determining+the+gestational+age+of+ewes.">Real-time ultrasonography for determining the gestational age of ewes.</a> Vet. Rec. 131 (24), 560-562 (1992).</li><li>Lee, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasonic+measurement+of+fetal+parameters+for+estimation+of+gestational+age+in+Korean+black+goats.">Ultrasonic measurement of fetal parameters for estimation of gestational age in Korean black goats.</a> J. Vet. Med. Sci. 67 (5), 497-502 (2005).</li><li>Renaudin, C. D., Gillis, C. L., Tarantal, A. F., Coleman, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+equine+fetal+growth+from+day+100+of+gestation+to+parturition+by+ultrasonography.">Evaluation of equine fetal growth from day 100 of gestation to parturition by ultrasonography.</a> J. Reprod. Fertil. Suppl. (56), 651-660 (2000).</li><li>Lopate, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+gestational+age+and+assessment+of+canine+fetal+maturation+using+radiology+and+ultrasonography:+a+review.">Estimation of gestational age and assessment of canine fetal maturation using radiology and ultrasonography: a review.</a> Theriogenology. 70 (3), 397-402 (2008).</li><li>Gatel, L., Rosset, E., Chalvet-Monfray, K., Buff, S., Rault, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationships+between+fetal+biometry,+maternal+factors+and+birth+weight+of+purebred+domestic+cat+kittens.">Relationships between fetal biometry, maternal factors and birth weight of purebred domestic cat kittens.</a> Theriogenology. 76 (9), 1716-1722 (2011).</li><li>Mulley, R. C., English, A. W., Rawlinson, R. J., Chapple, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pregnancy+diagnosis+of+fallow+deer+by+ultrasonography.">Pregnancy diagnosis of fallow deer by ultrasonography.</a> Aust. Vet. J. 64 (8), 257-258 (1987).</li><li>Willard, S. T., Sasser, R. G., Jaques, J. T., White, D. R., Neuendorff, D. A., Randel, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+pregnancy+detection+and+the+hormonal+characterization+of+embryonic-fetal+mortality+in+fallow+deer+(Dama+dama).">Early pregnancy detection and the hormonal characterization of embryonic-fetal mortality in fallow deer (Dama dama).</a> Theriogenology. 49 (4), 861-869 (1998).</li><li>Willard, S. T., Petty, S. J., Sasser, R. G., White, D. L., Randel, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pregnancy+detection+and+the+effects+of+age,+body+weight,+and+previous+reproductive+performance+on+pregnancy+status+and+weaning+rates+of+farmed+fallow+deer+(Dama+dama).">Pregnancy detection and the effects of age, body weight, and previous reproductive performance on pregnancy status and weaning rates of farmed fallow deer (Dama dama).</a> J. Anim. Sci. 77 (1), 32-38 (1999).</li><li>Lenz, M. F., English, A. W., Dradjat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+ultrasonography+for+pregnancy+diagnosis+and+foetal+ageing+in+fallow+deer.">Real-time ultrasonography for pregnancy diagnosis and foetal ageing in fallow deer.</a> Aust. Vet. J. 70 (10), 373-375 (1993).</li><li>White, I. R., McKelvey, W. A., Busby, S., Sneddon, A., Hamilton, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+pregnancy+and+prediction+of+fetal+age+in+red+deer+by+real-time+ultrasonic+scanning.">Diagnosis of pregnancy and prediction of fetal age in red deer by real-time ultrasonic scanning.</a> Vet. Rec. 124 (15), 395-397 (1989).</li><li>Bingham, C. M., Wilson, P. R., Davies, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+ultrasonography+for+pregnancy+diagnosis+and+estimation+of+fetal+age+in+farmed+red+deer.">Real-time ultrasonography for pregnancy diagnosis and estimation of fetal age in farmed red deer.</a> Vet. Rec. 126 (5), 102-106 (1990).</li><li>Wilson, P. R., Bingham, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accuracy+of+pregnancy+diagnosis+and+prediction+of+calving+date+in+red+deer+using+real-time+ultrasound+scanning.">Accuracy of pregnancy diagnosis and prediction of calving date in red deer using real-time ultrasound scanning.</a> Vet. Rec. 126 (6), 133-135 (1990).</li><li>Revol, B., Wilson, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasonography+of+the+reproductive+tract+and+early+pregnancy+in+red+deer.">Ultrasonography of the reproductive tract and early pregnancy in red deer.</a> Vet. Rec. 128 (10), 229-233 (1991).</li><li>Revol, B., Wilson, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foetal+ageing+in+farmed+red+deer+using+real-time+ultrasonography.">Foetal ageing in farmed red deer using real-time ultrasonography.</a> Anim. Reprod. Sci. 25 (3), 241-253 (1991).</li><li>Yanagawa, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fetal+age+estimation+of+Hokkaido+sika+deer+(Cervus+nippon+yesoensis)+using+ultrasonography+during+early+pregnancy.">Fetal age estimation of Hokkaido sika deer (Cervus nippon yesoensis) using ultrasonography during early pregnancy.</a> J. Reprod. Dev. 55 (2), 143-148 (2009).</li><li>Savela, H., Vahtiala, S., Lindeberg, H., Dahl, R. E., Beckers, J. F., Saarela, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+accuracy+of+ultrasonography,+progesterone,+and+pregnancy-associated+glycoprotein+tests+for+pregnancy+diagnosis+in+semidomesticated+reindeer.">Comparison of accuracy of ultrasonography, progesterone, and pregnancy-associated glycoprotein tests for pregnancy diagnosis in semidomesticated reindeer.</a> Theriogenology. 72 (9), 1229-1236 (2009).</li><li>Vahtiala, S., Sakkinen, H., Dahl, E., Beckers, J. F., Ropstad, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasonography+in+early+pregnancy+diagnosis+and+measurements+of+fetal+size+in+reindeer+(Rangifer+tarandus+tarandus).">Ultrasonography in early pregnancy diagnosis and measurements of fetal size in reindeer (Rangifer tarandus tarandus).</a> Theriogenology. 61 (4), 785-795 (2004).</li><li>Chapman, N. G., Harris, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+that+the+seasonal+antler+cycle+of+adult+Reeves'+muntjac+(Muntiacus+reevesi)+is+not+associated+with+reproductive+quiescence.">Evidence that the seasonal antler cycle of adult Reeves' muntjac (Muntiacus reevesi) is not associated with reproductive quiescence.</a> J. Reprod. Fertil. 92 (2), 361-369 (1991).</li><li>Chapman, D. I., Chapman, N. G., Dansie, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+periods+of+conception+and+parturition+in+feral+Reeves'+muntjac+(Muntiacus+reevesi)+in+southern+England,+based+upon+age+of+juvenile+animals.">The periods of conception and parturition in feral Reeves' muntjac (Muntiacus reevesi) in southern England, based upon age of juvenile animals.</a> J. Zool. 204 (4), 575-578 (1984).</li><li>Chapman, N. G., Furlong, M., Harris, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproductive+strategies+and+the+influence+of+date+of+birth+on+growth+and+sexual+development+of+an+aseasonally-breeding+ungulate:+Reeves'+muntjac+(Muntiacus+reevesi).">Reproductive strategies and the influence of date of birth on growth and sexual development of an aseasonally-breeding ungulate: Reeves' muntjac (Muntiacus reevesi).</a> J. Zool. 241 (3), 551-570 (1996).</li><li>Liming, S., Yingying, Y., Xingsheng, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+cytogenetic+studies+on+the+red+muntjac,+Chinese+muntjac,+and+their+F1+hybrids.">Comparative cytogenetic studies on the red muntjac, Chinese muntjac, and their F1 hybrids.</a> Cytogenet. Cell Genet. 26 (1), 22-27 (1980).</li><li>Nyland, T. G., Mattoon, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Chapter 2. Small Animal Diagnostic Ultrasound. , 19-29 (2002).</li><li>Huang, F., Cockrell, D. C., Stephenson, T. R., Noyes, J. H., Sasser, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+serum+pregnancy+test+with+a+specific+radioimmunoassay+for+moose+and+elk+pregnancy-specific+protein+B.">A serum pregnancy test with a specific radioimmunoassay for moose and elk pregnancy-specific protein B.</a> J. Wildl. Manag. 64, 492-499 (2000).</li></ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Este protocolo descreve a aplicação da ultrassonografia transabdominal para diagnóstico de gravidez no cervo muntjac de Reeves. Consistente com outros estudos de ultrassom, equipamentos adequados e proficiência técnica são imprescindíveis para um exame reprodutivo bem sucedido do doe muntjac. Uma revisão cuidadosa da anatomia básica dos mamíferos, os princípios físicos do ultrassom diagnóstico e a aparência ultrasonográfica típica das vísceras abdominais ajudarão na redução dos diagnósticos equivocad...

O exame ultrasonográfico é um método bem descrito de diagnóstico de gravidez em bovinos1, ovinos2,3, cabras4,cavalos5, animaiscompanheiros 6,7e outras espécies animais domésticos. Esta modalidade de imagem também foi identificada como uma ferramenta valiosa para a detecção da gravidez e a estimativa da idade fetal em várias espécies de cervids cativos, incluindo veadosfallow 8-11, veado vermelho12-16, veado de ika hokkaido17e rena18,19. Em muitos casos, a ultrassonografia tem produzido taxas de precisão mais altas do que outros mecanismos de detecção da gravidez, como progesterona sémum ou análise de glicoproteína associada à gravidez9,18. Além disso, a visualização ultrasonográfica do trato reprodutivo pode fornecer informações adicionais sobre viabilidade fetal, idade gestacional e identificação de anormalidades no desenvolvimento que de outra forma seriam difíceis de avaliar. A utilidade da ultrassonografia para avaliação do estado reprodutivo sugere que essa metodologia deve ser adaptada a outras espécies nas quais são utilizados programas de reprodução ativa.
O cervo muntjac de Reeves(Muntiacus reevesi)é uma pequena espécie cervid nativa do sudeste da Ásia20. Embora o ciclo reprodutivo desses animais não seja bem caracterizado em seus territórios nativos, estudos de populações selvagens em partes do sul da Inglaterra melhoraram a compreensão de seus padrões de reprodução20. Ao contrário da maioria dos cervids, o muntjac de Reeves parece procriar o ano todo, sem picos aparentes de fawning sazonal20-22. Muntjac fêmea tipicamente dá à luz um único fawn após um período de gestação de 210 dias, e entra de forma confiável em um estrus pós-parto dentro de 24 horas20-22. Será que isso não concebe durante este período pós-parto retornará a estrus aproximadamente 24-25 dias depois20. Em situações cativas, a reprodução é tipicamente alcançada por moradias com um ou mais homens intactos. Este sistema produz taxas de concepção satisfatórias e requer pouca habilidade técnica para o pessoal, porém as datas exatas de reprodução são difíceis, se não impossíveis, de determinar.
Muntjac são comumente usados em estudos citogenéticos devido à ampla gama de números de cromossomo diploides e alta taxa de diversificação karyotípica entre as diferentes espécies23. Esses animais também estão sendo investigados atualmente como modelo de patogênese e transmissão da doença de prígion, com particular interesse colocado no estudo da transmissão vertical da doença de desomânudo crônico (CWD) em cervids. A importância do muntjac em várias aplicações de pesquisa diferentes sugere que tecnologias reprodutivas aprimoradas devem ser estabelecidas para complementar os procedimentos investigativos atuais. Especificamente, mecanismos não invasivos para avaliar o período gestacional poderiam potencialmente elucidar variações críticas no desempenho reprodutivo e no crescimento e desenvolvimento fetal em diferentes condições experimentais. Além disso, o desenvolvimento de referências de medição fetal em tempo real seria potencialmente valioso na estimativa da idade gestacional em situações em que as datas de reprodução não podem ser determinadas. Estudos anteriores descreveram mecanismos para o uso de medidas fetais, como comprimento de alcatra -coroa (CRL), profundidade torácica (CD) e comprimento da cabeça (HL) para estimar o estágio aproximado da gestação nas espécies cervid11-14, 16,17. Além disso, alguns desses estudos também estabeleceram diretrizes descrevendo quando marcos específicos do desenvolvimento, como a mineralização esquelética ou batimentos cardíacos fetais, podem ser identificados8-19. Embora esses dados possam ser úteis para ajudar a orientar a análise de ultrassom reprodutivo no muntjac, a maioria das outras espécies cervidas estudadas têm tamanho corporal muito maior e períodos gestacionais mais longos, reduzindo o valor translacional desses estudos para aplicações de muntjac.
O protocolo aqui descrito descreve a ultrassonografia transabdominal do muntjac feminino para fins de diagnóstico e monitoramento da gravidez. A execução bem-sucedida deste protocolo pode facilitar a detecção precoce da gravidez e a avaliação do crescimento e desenvolvimento fetal. Esta técnica possui aplicações valiosas na condução de estudos que investigam a reprodução, no desenvolvimento do útero, ou transmissão vertical de doenças infecciosas em um pequeno modelo cervid e também pode ser útil para fins clínicos em operações de reprodução em cativeiro.

<table><tbody><tr><td>Butorphanol tartrate (Torbugesic) (0.45 mg/kg)</td><td>Fort Dodge Animal Health, Fort Dodge, Iowa</td><td>NADA 135-780</td><td></td></tr><tr><td>Azaperone tartrate (0.035 mg/kg)</td><td>ZooPharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medetomidine HCl (0.04 mg/kg)</td><td>ZooPharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ultrasound contact gel</td><td>Medline, Mundelein, Illinois</td><td>MDS092005</td><td></td></tr><tr><td>Atipamezole hydrochloride (Antisedan) (0.25 mg/kg)</td><td>Orion Corporation, Espoo, Finland</td><td>NADA 141-033</td><td></td></tr><tr><td>V-trough (optional)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Animal may be supported in dorsal recumbency on a standard examination table or other surface without the use of a V-trough</td></tr><tr><td>Electrical clippers or razor blades for hair removal</td><td>Oster, McMinnville, Tennessee</td><td>78005-140</td><td></td></tr><tr><td>Ultrasound system: Ibex Pro portable ultrasound</td><td>E.I. Medical Imaging, Loveland, CO</td><td>Ibex Pro</td><td></td></tr><tr><td>5-10 MHz transducer: CL3.8 5-2.5 MHz 60 mm curved linear array</td><td>E.I. Medical Imaging, Loveland, CO</td><td>290420</td><td></td></tr><tr><td>3 ml syringes</td><td>Covidien</td><td>1.18E+09</td><td></td></tr><tr><td>22 G needles</td><td>Covidien</td><td>8.88E+09</td><td></td></tr></tbody></table>

transabdominal ultrasound for pregnancy diagnosis in reeves' muntjac deer

O deer muntjac de Reeves (Muntiacus reevesi) é uma pequena espécie cervid nativa do sudeste da Ásia, e atualmente está sendo investigada como um modelo potencial de transmissão da doença de prípcional e patogênese. A transmissão vertical é uma área de interesse entre pesquisadores que estudam doenças infecciosas, incluindo a doença de príptica, e essas investigações exigem métodos eficientes para avaliar os efeitos da infecção materna no desempenho reprodutivo. O exame ultrasonográfico é uma ferramenta bem estabelecida para diagnosticar a gravidez e avaliar a saúde fetal em muitas espécies animais1-7, incluindo várias espécies de cervidscultivados 8-19, no entanto essa técnica não foi descrita no veado muntjac de Reeves. Aqui descrevemos a aplicação de ultrassom transabdominal para detectar a gravidez em muntjac faz e avaliar o crescimento e desenvolvimento fetal ao longo do período gestacional. Com esse procedimento, os animais gestantes foram identificados até 35 dias após o emparelhamento doe-buck e este foi um meio eficaz para monitorar a gravidez com segurança em intervalos regulares. Os objetivos futuros deste trabalho incluirão o estabelecimento de referências normais de medição fetal para estimativa da idade gestacional, determinação da sensibilidade e especificidade da técnica para o diagnóstico da gravidez em vários estágios da gestação e identificação de variações no crescimento e desenvolvimento fetal em diferentes condições experimentais.

Usando o protocolo descrito aqui, a gravidez pode ser diagnosticada e monitorada no veado muntjac da Reeve com técnicas minimamente invasivas. O ponto de tempo mais antigo que a gravidez poderia ser detectada pelos autores foi de aproximadamente 35 dias após o comportamento observado de acasalamento.
Nos estágios iniciais da gestação, a gravidez foi diagnosticada visualizando um útero cheio de fluidos identificado como um espaço anecóico no abdômen caudal. Dentro do útero, o embrião...

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Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves' Muntjac Deer

O ultrassom transabdominal é descrito como um meio eficaz e não invasivo para avaliar o estado reprodutivo no cervo muntjac de Reeves. Esses métodos podem ser utilizados para alcançar o diagnóstico precoce da gravidez e avaliar a viabilidade fetal. As aplicações futuras desta técnica incluem a estimativa da idade gestacional e os efeitos da doença materna no desenvolvimento fetal.

Ultrassom transabdominal para diagnóstico de gravidez no Cervo Muntjac de Reeves

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of ...

transabdominal-ultrasound-for-pregnancy-diagnosis-reeves-muntjac

Research

JoVE Journal

Medicine

10.3K visualizações.  Colorado State University. O ultrassom transabdominal é descrito como um meio eficaz e não invasivo para avaliar o estado reprodutivo no cervo muntjac de Reeves. Esses métodos podem ser utilizados para alcançar o diagnóstico precoce da gravidez e avaliar a viabilidade fetal. As aplicações futuras desta técnica incluem a estimativa da idade gestacional e os efeitos da doença materna no desenvolvimento fetal.

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Murine Fetal Echocardiography

Transgenic mice displaying abnormalities in cardiac development and function represent a powerful tool for the understanding the molecular mechanisms underlying both normal cardiovascular function and the pathophysiological basis of human cardiovascular disease. Fetal and perinatal death is a common feature when studying genetic alterations affecting cardiac development 1-3. In order to study the role of genetic or pharmacologic alterations in the early development of cardiac function, ultrasound imaging of the live fetus has become an important tool for early recognition of abnormalities and longitudinal follow-up. Noninvasive ultrasound imaging is an ideal method for detecting and studying congenital malformations and the impact on cardiac function prior to death 4. It allows early recognition of abnormalities in the living fetus and the progression of disease can be followed in utero with longitudinal studies 5,6. Until recently, imaging of fetal mouse hearts frequently involved invasive methods. The fetus had to be sacrificed to perform magnetic resonance microscopy and electron microscopy or surgically delivered for transillumination microscopy. An application of high-frequency probes with conventional 2-D and pulsed-wave Doppler imaging has been shown to provide measurements of cardiac contraction and heart rates during embryonic development with databases of normal developmental changes now available 6-10. M-mode imaging further provides important functional data, although, the proper imaging planes are often difficult to obtain. High-frequency ultrasound imaging of the fetus has improved 2-D resolution and can provide excellent information on the early development of cardiac structures 11.

Fetal and perinatal death is a common feature when studying genetic alterations affecting cardiac development. High-frequency ultrasound imaging has improved 2-D resolution and can provide excellent information on early cardiac development and is an ideal method to detect the impact on cardiac structure and function prior to death.

Ecocardiografia Fetal murino

Transgenic mice displaying abnormalities in  cardiac development and function represent a powerful tool for the understanding  the molecular mechanisms ...

Medicina

A Novel Use of Three-dimensional High-frequency Ultrasonography for Early Pregnancy Characterization in the Mouse

High-frequency ultrasonography (HFUS) is a common method to non-invasively monitor the real-time development of the human fetus in utero. The mouse is routinely used as an in vivo model to study embryo implantation and pregnancy progression. Unfortunately, such murine studies require pregnancy interruption to enable follow-up phenotypic analysis. To address this issue, we used three-dimensional (3-D) reconstruction of HFUS imaging data for early detection and characterization of murine embryo implantation sites and their individual developmental progression in utero. Combining HFUS imaging with 3-D reconstruction and modeling, we were able to accurately quantify embryo implantation site number as well as monitor developmental progression in pregnant C57BL6J/129S mice from 5.5 days post coitus (d.p.c.) through to 9.5 d.p.c. with the use of a transducer. Measurements included: number, location, and volume of implantation sites as well as inter-implantation site spacing; embryo viability was assessed by cardiac activity monitoring. In the immediate post-implantation period (5.5 to 8.5 d.p.c.), 3-D reconstruction of the gravid uterus in both mesh and solid overlay format enabled visual representation of the developing pregnancies within each uterine horn. As genetically engineered mice continue to be used to characterize female reproductive phenotypes derived from uterine dysfunction, this method offers a new approach to detect, quantify, and characterize early implantation events in vivo. This novel use of 3-D HFUS imaging demonstrates the ability to successfully detect, visualize, and characterize embryo-implantation sites during early murine pregnancy in a non-invasive manner. The technology offers a significant improvement over current methods, which rely on the interruption of pregnancies for gross tissue and histopathologic characterization. Here we use a video and text format to describe how to successfully perform ultrasounds of early murine pregnancy to generate reliable and reproducible data with reconstruction of the uterine form in mesh and solid 3-D images.

Mice are widely used to study gestational biology. However, pregnancy termination is required for such studies which precludes longitudinal investigations and necessitates the use of large numbers of animals. Therefore, we describe a non-invasive technique of high-frequency ultrasonography for early detection and monitoring of post-implantation events in the pregnant mouse.

Um novo uso da ultra-sonografia tridimensional de alta frequência para caracterização de gravidez precoce no Mouse

High-frequency ultrasonography (HFUS) is a common method to non-invasively monitor the real-time development of the human fetus in utero. The mouse is ...

Biologia do Desenvolvimento

Fetal Echocardiography and Pulsed-wave Doppler Ultrasound in a Rabbit Model of Intrauterine Growth Restriction

Fetal intrauterine growth restriction (IUGR) results in abnormal cardiac function that is apparent antenatally due to advances in fetoplacental Doppler ultrasound and fetal echocardiography. Increasingly, these imaging modalities are being employed clinically to examine cardiac function and assess wellbeing in utero, thereby guiding timing of birth decisions. Here, we used a rabbit model of IUGR that allows analysis of cardiac function in a clinically relevant way. Using isoflurane induced anesthesia, IUGR is surgically created at gestational age day 25 by performing a laparotomy, exposing the bicornuate uterus and then ligating 40-50% of uteroplacental vessels supplying each gestational sac in a single uterine horn. The other horn in the rabbit bicornuate uterus serves as internal control fetuses. Then, after recovery at gestational age day 30 (full term), the same rabbit undergoes examination of fetal cardiac function. Anesthesia is induced with ketamine and xylazine intramuscularly, then maintained by a continuous intravenous infusion of ketamine and xylazine to minimize iatrogenic effects on fetal cardiac function. A repeat laparotomy is performed to expose each gestational sac and a microultrasound examination (VisualSonics VEVO 2100) of fetal cardiac function is performed. Placental insufficiency is evident by a raised pulsatility index or an absent or reversed end diastolic flow of the umbilical artery Doppler waveform. The ductus venosus and middle cerebral artery Doppler is then examined. Fetal echocardiography is performed by recording B mode, M mode and flow velocity waveforms in lateral and apical views. Offline calculations determine standard M-mode cardiac variables, tricuspid and mitral annular plane systolic excursion, speckle tracking and strain analysis, modified myocardial performance index and vascular flow velocity waveforms of interest. This small animal model of IUGR therefore affords examination of in utero cardiac function that is consistent with current clinical practice and is therefore useful in a translational research setting.

We describe examination of fetal cardiac function with contemporary functional fetal echocardiography and fetoplacental Doppler ultrasound using the VisualSonics VEVO 2100 microultrasound in a surgically induced model of intrauterine fetal growth restriction in a rabbit.

Ecocardiografia fetal e ultra-som Doppler pulsátil em um modelo de coelho de restrição do crescimento intra-uterino

Fetal intrauterine growth restriction (IUGR) results in abnormal cardiac function that is apparent antenatally due to advances in fetoplacental Doppler ...

High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo

Ultrasound imaging is a widespread method used to detect organ anomalies and tumors in human and animal tissues. The method is non-invasive, harmless, and painless, and the application is easy, fast, and can be done anywhere, even with mobile devices. During pregnancy, ultrasound imaging is standardly used to closely monitor fetal development. The technique is important to assess intrauterine growth restriction (IUGR), a pregnancy complication with short- and long-term health consequences for both the mother and fetus. Understanding the process of IUGR is indispensable for developing effective therapeutic strategies. 
The ultrasound system used in this manuscript is an ultrasound device produced for the analysis of small animals and can be used in various research fields, including pregnancy research. Here we describe the usage of the system for in vivo analysis of fetuses from natural killer (NK) cell/mast cell (MC)-deficient mothers that give birth to growth-restricted pups. The protocol includes preparation of the system, handling of the mice before and during measurements, and the usage of the B-mode, color doppler mode, and pulse-wave doppler mode. Fetal size, placental size, and blood supply to the fetus were analyzed. We found reduced implantation sizes and smaller placentas in NK/MC-deficient mice from mid-gestation onwards. In addition, MC/NK-deficiency was associated with absent and reversed end diastolic flow in the fetal Arteria umbilicalis(UmA) and an elevated resistance index. The methods described in the protocol can easily be used for related and non-related research topics.

High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo

Here we describe the technique of high frequency ultrasound for in vivo analysis of fetuses in mice. This method allows the follow-up of fetuses and the analysis of placental parameters as well as maternal and fetal blood flow throughout pregnancy.

Ultra-som de alta frequência para a análise do desenvolvimento Fetal e placentário na Vivo

Ultrasound imaging is a widespread method used to detect organ anomalies and tumors in human and animal tissues. The method is non-invasive, harmless, and ...

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

Uterine cancers can be studied in mice due to the ease of handling and genetic manipulation in these models. However, these studies are often limited to assessing pathology post-mortem in animals euthanized at multiple time points in different cohorts, which increases the number of mice needed for a study. Imaging mice in longitudinal studies can track the progression of disease in individual animals, reducing the number of mice needed. Advances in ultrasound technology have allowed for the detection of micrometer-level changes in tissues. Ultrasound has been used to study follicle maturation in ovaries and xenograft growth but has not been applied to morphological changes in the mouse uterus. This protocol examines the juxtaposition of pathology with in vivo imaging comparisons in an induced endometrial cancer mouse model. The features observed by ultrasound were consistent with the degree of change seen by gross pathology and histology. Ultrasound was found to be highly predictive of the observed pathology, supporting the incorporation of ultrasonography into longitudinal studies of uterine diseases such as cancer in mice.

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

This protocol describes a method for monitoring the progression of morphological changes over time in the uterus in an inducible mouse model of endometrial cancer using ultrasound imaging with correlation to gross and histological changes.

Avaliação Ultrassonográfica Não Invasiva da Progressão do Câncer de Endométrio na Deleção Dirigida por Pax8 dos Supressores Tumorais Arid1a e Pten em Camundongos

Uterine cancers can be studied in mice due to the ease of handling and genetic manipulation in these models. However, these studies are often limited to ...

Pesquisa do câncer

Is My Mouse Pregnant? High-Frequency Ultrasound Assessment

The mouse is the mammalian animal model of choice for many human diseases and biological processes. Developmental biology often requires staged-pregnant mice to determine evolving processes at various timepoints. Moreover, optimal and efficient breeding of model mice requires an assessment of timed pregnancies. Most commonly, mice are mated overnight, and the presence of a vaginal plug is determined; however, the positive predictive value of this technique is suboptimal, and one needs to wait to know if the mouse is truly pregnant. High-resolution ultrasound biomicroscopy is an effective and efficient tool for imaging: 1) Whether a mouse is pregnant; 2) What gestational stage the mouse has reached; and 3) Whether there are intrauterine losses. In addition to the embryos and fetuses, the investigator must also recognize common artifacts in the abdominal cavity so as not to mistake these for a gravid uterus. This article provides a protocol for imaging along with illustrative examples.

High-resolution ultrasound can help streamline experiments requiring timed-pregnant mice by determining the state of pregnancy, gestational age, and pregnancy losses. Presented here is a protocol to illustrate methods to assess mouse pregnancies as well as potential pitfalls (image artifacts) that may mimic pregnancy.

Meu rato está grávida? Avaliação de ultrassom de alta frequência

The mouse is the mammalian animal model of choice for many human diseases and biological processes. Developmental biology often requires staged-pregnant ...

Murine Neural Plate Targeting by In Utero Nano-Injection (NEPTUNE) at Embryonic Day 7.5

Manipulating gene expression in the developing mouse brain in utero holds great potential for functional genetics studies. However, it has previously largely been restricted to the manipulation of embryonic stages post-neurulation. A protocol was developed to inject the amniotic cavity at embryonic day (E)7.5 and deliver lentivirus, encoding cDNA or shRNA, targeting &gt;95% of the neural plate and neural crest cells, contributing to the future brain, spinal cord, and peripheral nervous system. This protocol describes the steps necessary to achieve successful transduction, including grinding of the glass capillary needles, pregnancy verification, developmental staging using ultrasound imaging, and optimal injection volumes matched to embryonic stages. 
Following this protocol, it is possible to achieve transduction of &gt;95% of the developing brain with high-titer lentivirus and thus perform whole-brain genetic manipulation. In contrast, it is possible to achieve mosaic transduction using lower viral titers, allowing for genetic screening or lineage tracing. Injection at E7.5 also targets ectoderm and neural crest contributing to distinct compartments of the eye, tongue, and peripheral nervous system. This technique thus offers the possibility to manipulate gene expression in mouse neural-plate- and ectoderm-derived tissues from preneurulation stages, with the benefit of reducing the number of mice used in experiments.

Murine Neural Plate Targeting by In Utero Nano-Injection NEPTUNE at Embryonic Day 7.5

In this protocol, we describe how to inject the mouse amniotic cavity at E7.5 with lentivirus, leading to uniform transduction of the entire neural plate, with minimal detrimental effects on survival or embryonic development.

Placa neural de Murine Alvo por In Utero Nano-Injection (NEPTUNE) no Dia Embrionário 7.5

Manipulating gene expression in the developing mouse brain in utero holds great potential for functional genetics studies. However, it has previously ...

Ultrasonography in Experimental Reproductive Investigations on Rats

With the development of assisted reproductive technology and the ethical limitations of research on humans, rat animal models have been widely used in reproductive medicine. In the past, the study of reproductive system development in rodents has been based on one-time histological examination of excised tissues. Recently, with the development of high-resolution transabdominal ultrasound, high-quality sonography can now be performed to evaluate the reproductive organs of rats, allowing a new method for studying the reproductive system. Images were obtained using a high-resolution ultrasonographic system. Gynecological ultrasonography was performed on 28 eight-week-old non-pregnant rats and 5 pregnant Sprague-Dawley rats. We describe how to recognize organs of the reproductive system and associated structures in typical views during different phases of the estrus cycle. Color flow Doppler was used to measure uterine artery blood flow and evaluate uterine blood flow pattern changes during different stages of pregnancy. We have demonstrated that ultrasound exploration is a useful method for evaluating changes in internal reproductive organs. Its use raises the possibility of conducting additional experiments, including medical or surgical procedures, and provides the ability to monitor sonographic changes to internal organs without sacrificing animals.

This manuscript describes the utility of ultrasound performed on female rats to design experimental models for reproductive and gynecological investigation. A step-by-step explanation of how to perform ultrasonographic evaluation is shown.

Ultrasonografia em investigações de reprodução Experimental em ratos

With the development of assisted reproductive technology and the ethical limitations of research on humans, rat animal models have been widely used in ...

Milk Collection Methods for Mice and Reeves' Muntjac Deer

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native host. Milk collection from animals allows scientists the opportunity to study many aspects of reproduction including vertical transmission, passive immunity, mammary gland biology, and lactation. Obtaining adequate volumes of milk for these studies is a challenging task, especially from small animal models. Here we illustrate an inexpensive and facile method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer that does not require specialized equipment or extensive training. This particular method requires two researchers: one to express the milk and to stabilize the animal, and one to collect the milk in an appropriate container from either a Muntjac or mouse model. The mouse model also requires the use of a P-200 pipetman and corresponding pipette tips. While this method is low cost and relatively easy to perform, researchers should be advised that anesthetizing the animal is required for optimal milk collection.

Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer.

Métodos de coleta de leite para Ratos e Reeves Muntjac cervos

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native ...

Biologia

Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians

Ovarian control and monitoring in amphibians require a multi-faceted approach. There are several applications that can successfully induce reproductive behaviors and the acquisition of gametes and embryos for physiological or molecular research. Amphibians contribute to one-quarter to one-third of vertebrate research, and of interest in this context is their contribution to the scientific community&#39;s knowledge of reproductive processes and embryological development. However, most of this knowledge is derived from a small number of species. In recent times, the decimation of amphibians across the globe has required increasing intervention by conservationists. The captive recovery and assurance colonies that continue to emerge in response to the extinction risk make existing research and clinical applications invaluable to the survival and reproduction of amphibians held under human care. The success of any captive population is founded on its health and reproduction and the ability to develop viable offspring that carry forward the most diverse genetic representation of their species. For researchers and veterinarians, the ability to monitor and control ovarian development and health is, therefore, imperative. The focus of this article is to highlight the different assisted reproductive techniques that can be used to monitor and, where appropriate or necessary, control ovarian function in amphibians. Ideally, any reproductive and health issues should be reduced through proper captive husbandry, but, as with any animal, issues of health and reproductive pathologies are inevitable. Non-invasive techniques include behavioral assessments, visual inspection and palpation and morphometric measurements for the calculation of body condition indices and ultrasound. Invasive techniques include hormonal injections, blood sampling, and surgery. Ovarian control can be exercised in a number of ways depending on the application required and species of interest.

The study of amphibian biology provides valuable information on the reproductive, physiological, embryological and developmental processes that drive organisms of many taxonomic groups. Here, we present a comprehensive guide on different methodologies that can be used to study ovarian control and monitoring in amphibians.

Técnicas reprodutivas para monitoramento e controle ovariano em anfíbios

Ovarian control and monitoring in amphibians require a multi-faceted approach. There are several applications that can successfully induce reproductive ...