Gli autori desiderano ringraziare Jeanette Hayes-Klug e Kelly Anderson per la gestione della colonia muntjac, il Dr. Alan Young per averci presentato il muntjac e il Signor Cleve Tedford di Cervid Solutions Inc. Questo lavoro è stato supportato dalla sovvenzione NIH R01AI093634.

1. Preparazione procedurale
Tutte le procedure sugli animali descritte sono state riviste e approvate dall'Institutional Animal Care and Use Committee della Colorado State University, un'associazione per la valutazione e l'accreditamento della cura degli animali di laboratorio (AAALAC), istituzione accreditata Intl..
<ol><li>Prima dell'esame, immobilizzare gli animali utilizzando adeguati protocolli di sedazione o anestesia per fornire rilassamento e consentire un posizionamento appropriato. Un gestore trattiene il cervo mentre una seconda persona somministra la sedazione all'animale. Nota: Gli autori hanno trovato la seguente combinazione per fornire una sedazione efficace in questa specie: butorfanonolo (0,45 mg/kg), azaperone (0,035 mg/kg) e medetomidina (0,04 mg/kg), somministrato per via intramuscolare nei muscoli glutei.</li>
	<li>Una volta che la sedata ha raggiunto un piano di sedazione che consente una manipolazione conforme, posizionarla in rimescenza dorsale o laterale su una tabella d'esame o all'interno di un trogolo a V. Elevare leggermente la testa, il collo e il torace (circa 20-30°) per ridurre il rischio di rigurgito e aspirazione del contenuto di rumine e per facilitare una corretta ventilazione durante la procedura. Nota: Nella maggior parte delle cervidi o di altre specie di ruminanti, gli ultrasuoni addominali vengono eseguiti negli animali in piedi; tuttavia, le piccole dimensioni e le considerazioni comportamentali di questa specie richiedono una sedazione pesante per l'esame e il posizionamento sternale è quindi più difficile e può precludere un'efficace tecnica di imaging. Il posizionamento dell'animale a metà strada tra la reclinanza sternale e laterale può essere ideale per ridurre il rischio di rigurgito e ipoventilazione e dovrebbe essere considerato, se possibile. In qualsiasi posizione reclinata, è fondamentale monitorare attentamente le respirazioni degli animali e interrompere immediatamente l'esame e mettere l'animale in rimpipisurazione sternale se si nota rigurgito o ipoventilazione.</li>
	<li>Se necessario, ritagliare i capelli dall'area dell'addome da esaminare al fine di ottenere un contatto adeguato tra l'impronta del trasduttore e la pelle. Nota: Nella gestazione precoce, le prove della gravidanza possono essere rilevate nell'addome caudale vicino alle ghiandole mammarie. Questa regione del muntjac è tipicamente senza peli, e quindi la rasatura potrebbe non essere indicata al momento. Man mano che il feto cresce e l'utero si distenta per occupare una posizione più cranale nell'addome, il ritaglio dei capelli sarà necessario prima dell'imaging. Si deve fare attenzione a evitare di causare traumi meccanici alla pelle, comprese le lacerazioni da lamette da barba o lesioni termiche da tosaerba elettriche.</li>
	<li>Posizionare l'unità ad ultrasuoni in una posizione che consenta al tecnico di visualizzare facilmente il monitor durante l'esecuzione dell'esame con la mano dominante. Inserire nel sistema informazioni sull'identificazione degli animali (nome, numero di identificazione, ecc.)per etichettare automaticamente le immagini e i loop video salvati.</li>
</ol>2. Esame ecografico riproduttivo transabdominale
<ol><li>Applicare una generosa quantità di gel di accoppiamento acustico sull'addome caudale.</li>
	<li>Posizionare un trasduttore lineare curvo a 5-10 MHz sulla pelle dell'addome caudale, immediatamente cranica al pube, e spostarla lentamente in direzione cranica per valutare le strutture all'interno della cavità pelvica. Scansiona i quadranti sinistro e destro dell'addome caudale per valutare entrambe le corna dell'utero bicornuato del muntjac. Nota: L'ecografia addominale completa comporta la valutazione di tutti i visceri addominali, inclusi fegato, reni, milza, tratto gastrointestinale, vescica urinaria e tratto riproduttivo. Ai fini di questo protocollo, solo l'esame della gravidanza sarà discusso in dettaglio; tuttavia, la normale comparsa di altri organi addominali caudali dovrebbe essere riconosciuta in quanto è probabile che queste strutture si incontrino durante il corso dello studio. Gli organi più comunemente visti in questa posizione includono segmenti del tratto gastrointestinale, della vescica urinaria e del tratto riproduttivo. L'intestino grande e tenue è identificato dall'aspetto tipicamente stratificato della parete intestinale. Il lume può essere pronunciato o meno a seconda del tipo e della quantità di contenuto, che può includere fluido, gas, mucose o particelle di cibo. La vescica urinaria può essere difficile da identificare a meno che non sia distesa con l'urina e gli strati della parete della vescica siano significativamente meno distinti di quelli dell'intestino. Oltre all'utero, le ovaie possono anche essere trovate sugli ultrasuoni del tratto riproduttivo del muntjac femminile. Le ovaie appariranno come strutture ovoidali vicino al polo caudale dei reni e il loro aspetto potrebbe cambiare nel corso del ciclo estroso. La presenza di molteplici follicoli maturi pieni di liquidi all'interno della corteccia è suggestiva dell'estro. Nota: Ruotando e/o "sventolando" la testa di scansione del trasduttore, le strutture possono essere valutate in piani trasversali o sagittali.<ol>
<li>Se necessario per differenziare un utero gravid dalla vescica urinaria, svuotare manualmente la vescica applicando una leggera pressione sull'addome caudale o posizionando un catetere urinario e ripetendo la scansione. Nota: L'espressione manuale della vescica deve essere tentata solo quando l'animale si trova in una posizione sternale o eretta, il che facilita un orientamento più naturale dei visceri addominali e riduce il rischio di traumi ad altre strutture. L'utero può anche essere differenziato dalla vescica urinaria valutando lo spessore della parete dell'organo. Lo spessore tipico di una vescica moderatamente distesa è di circa 1,4 mm24, mentre gli autori hanno scoperto che la parete più muscolosa dell'utero gravid nel muntjac generalmente misura tra 7-8 mm. Nota: La gravidanza precoce è difficile da diagnosticare definitivamente a causa della mancanza di strutture fetali identificabili, e infatti la prima indicazione di gravidanza può essere semplicemente una piccola tasca fluida nell'addome caudale. Se visto in questo momento, l'embrione in via di sviluppo apparirà come una struttura iperecoica, ovoiida a amorfa all'interno dell'utero (Figura 1).</li>
	</ol></li>
	<li>Apportare modifiche alla profondità, alla frequenza e al guadagno, se necessario, per migliorare il contrasto e i dettagli dell'immagine. Nota:frequenze più alte sono associate a lunghezze d'onda più corte, che sono necessarie per migliorare la risoluzione dell'immagine. La maggior parte dei trasduttori è in grado di operare all'interno di un intervallo di frequenze (ad esempio, 6-10 MHz)24. La frequenza può essere regolata utilizzando i controlli dello scanner sull'unità ad ultrasuoni e l'aumento della frequenza si tradurrà in un'immagine più chiara. L'aumento della frequenza diminuisce contemporaneamente la profondità della penetrazione delle onde sonore; pertanto, la riduzione della frequenza può essere necessaria per visualizzare strutture più profonde, ma la risoluzione può diventarecompromessa 24. Per questo motivo è importante selezionare la frequenza più alta possibile per raggiungere la profondità del tessuto desiderata. Le regolazioni dei controlli di guadagno altereranno l'amplificazione delle onde sonore che ritornano al trasduttore dai tessuti e influenzeranno il grado di contrastonell'immagine 24. Il guadagno dovrebbe essere impostato su un punto in cui si ottiene un contrasto ottimale tra tessuti iperecoici e ipoecoici, e queste impostazioni potrebbero dover essere regolate a seconda delle strutture che vengono immagini.</li>
</ol>3. Ottenere misurazioni fetali
Nota: L'età gestazionale in molte specie animali domestiche può essere stimata utilizzando intervalli di riferimento stabiliti per le misurazioni fetali ottenute dall'esame ecografico. Le misure più comunemente utilizzate includono la lunghezza dritta della groppa della corona (SCRL), la profondità del torace (CD) e la lunghezza della testa (HL)17. Sebbene non siano ancora stati raccolti dati sufficienti per sviluppare linee guida affidabili sull'età gestazionale nel cervo muntjac di Reeves, possono essere raccolte misurazioni per iniziare a stabilire questi riferimenti. La frequenza cardiaca fetale (FHR) è stata mostrata in altre specie di cervidi e ruminanti per aumentare linearmente man mano che la gestazione progredisce fino a un certo punto (tipicamente intorno al giorno 60 di gestazione), quando la frequenza cardiaca inizia adiminuire 17. FHR può essere usato per stimare l'età gestazionale in combinazione con altre osservazioni ecografiche, tuttavia è più comunemente usato come misura della vitalitàfetale 17,24. FHR è stato calcolato nel muntjac di Reeves già 35 giorni dopo l'accoppiamento osservato.
<ol><li>Per misurare SCRL, individuare l'utero sul monitor e apportare sottili regolazioni alla posizione del trasduttore fino ad ottenere una visione sagittale dell'intero feto(figure 2 e 3). Congelare l'immagine e misurare la distanza tra l'aspetto più dorsale del cranio e la base dell'osso sacro (Figure 2 e 3).</li>
	<li>Per misurare il CD, ottenere una visione sagittale del feto (la stessa immagine può essere usata per misurare scrl) e misurare la distanza tra gli aspetti dorsali e ventrali del torace (Figure 2 e 3).</li>
	<li>Per misurare HL, utilizzando la stessa vista sagittale del feto descritta per le misurazioni SCRL e CD, misurare la distanza dalla cresta occipitale alla base del naso(figure 2 e 3).</li>
	<li>Per calcolare la frequenza cardiaca fetale, identificare il cuore all'interno della cavità toracica del feto visualizzandone le contrazioni ritmiche. Calcola la frequenza cardiaca contando il numero di contrazioni (battiti cardiaci) che si verificano entro un periodo di tempo di 1 minuto. Nota: Se l'unità ad ultrasuoni utilizzata ha capacità Doppler, questa funzione può essere utilizzata per aiutare ulteriormente a distinguere il cuore da altri movimenti fetali non specifici.</li>
	<li>Verificare che tutte le immagini e i cicli video salvati includano tutte le informazioni identificative necessarie, inclusi il nome o il numero dell'animale, la data, le misurazioni e le etichette di struttura appropriate.</li>
</ol>4. Conclusioni procedurali e recupero
<ol><li>Rimuovere tutto il gel di contatto ad ultrasuoni residuo dall'addome dell'animale utilizzando un panno morbido o asciugamani di carta. Pulire il gel dal trasduttore prima della conservazione.</li>
	<li>Se si utilizza il protocollo di sedazione descritto al punto 1.1, somministrare atipamezolo per via sottocutanea ad una dose di 0,25 mg/kg per invertire gli effetti della medetomidina. Se si utilizza un protocollo di sedazione diverso in cui è disponibile un antagonista, somministrare questo agente all'animale secondo dosaggi pubblicati al termine della procedura per accelerare il recupero.</li>
	<li>Posizionare il muntjac su una superficie morbida in recumbency sternale, con la testa leggermente elevata per ridurre il rischio di rigurgito e aspirazione del contenuto di rumine. Monitorare l'animale da vicino fino a quando non è completamente recuperato e in grado di ammbularsi intorno al recinto senza assistenza.</li>
</ol>

<ol>
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Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Questo protocollo descrive l'applicazione dell'ultrasonografia transabdominale per la diagnosi di gravidanza nel cervo muntjac di Reeves. Coerentemente con altri studi ecografici, le attrezzature appropriate e la competenza tecnica sono indispensabili per un esame riproduttivo riuscito della causa muntjac. Un'attenta revisione dell'anatomia di base dei mammiferi, dei principi fisici degli ultrasuoni diagnostici e del tipico aspetto ultrasonografico dei visceri addominali aii contribuirà alla riduzione delle diagnosi err...

L'esame ultrasonografico è un metodo ben descritto di diagnosi di gravidanza neibovini 1,pecore 2,3,capre 4,cavalli 5,animali dacompagnia 6,7e altre specie animali domestiche. Questa modalità di imaging è stata anche identificata come uno strumento prezioso per il rilevamento della gravidanza e la stima dell'età fetale in diverse specie di cervidi incattività, tra cui daini 8-11,cervi rossi 12-16,cervi sika Hokkaido17e renne18,19. In molti casi, l'ultrasonografia ha prodotto tassi di precisione più elevati rispetto ad altri meccanismi di rilevamento della gravidanza, come il progesterone sierica o l'analisi della glicoproteina associata allagravidanza 9,18. Inoltre, la visualizzazione ultrasonografica del tratto riproduttivo può fornire ulteriori informazioni riguardanti la vitalità fetale, l'età gestazionale e l'identificazione delle anomalie dello sviluppo che altrimenti sarebbero difficili da valutare. L'utilità dell'ultrasonografia per valutare lo stato riproduttivo suggerisce che questa metodologia dovrebbe essere adattata ad altre specie in cui vengono utilizzati programmi di riproduzione attivi.
I cervi muntjac di Reeves(Muntiacus reevesi)sono una piccola specie di cervide originaria del sud-est asiatico20. Mentre il ciclo riproduttivo di questi animali non è ben caratterizzato nei loro territori nativi, gli studi sulle popolazioni selvatiche in alcune parti dell'Inghilterra meridionale hanno migliorato la comprensione dei loro modelliriproduttivi 20. A differenza della maggior parte dei cervidi, il muntjac di Reeves sembra riprodursi tutto l'anno, senza apparenti picchi diceri stagionali 20-22. Il muntjac femminile in genere dà alla luce un singolo cerbiatto dopo un periodo di gestazione di 210 giorni e entra in modo affidabile in un estro postpartum entro 24ore 20-22. Ciò non concepisce durante questo periodo postpartum tornerà all'estro circa 24-25 giorni dopo20. In situazioni di captive, la riproduzione è tipicamente ottenuta dall'alloggiamento fa con uno o più maschi intatti. Questo sistema produce tassi di concepimento soddisfacenti e richiede poche competenze tecniche per il personale, tuttavia date di riproduzione esatte sono difficili, se non impossibili, da determinare.
I muntjac sono comunemente usati negli studi citogenetici a causa dell'ampia gamma di numeri cromosomici diploidi e dell'alto tasso di diversificazione cariotipica tra le diversespecie 23. Questi animali sono attualmente allo studio anche come modello di patogenesi e trasmissione della malattia da prione, con particolare interesse posto sullo studio della trasmissione verticale della malattia da sprecare cronica (CWD) nei cervidi. L'importanza del muntjac in una serie di diverse applicazioni di ricerca suggerisce che dovrebbero essere stabilite tecnologie riproduttive migliorate per integrare le attuali procedure investigative. In particolare, i meccanismi non invasivi per valutare il periodo gestazionale potrebbero potenzialmente chiarire le variazioni critiche nelle prestazioni riproduttive e nella crescita e sviluppo fetale in diverse condizioni sperimentali. Inoltre, lo sviluppo di riferimenti di misurazione fetale in tempo reale sarebbe potenzialmente prezioso per stimare l'età gestazionale in situazioni in cui le date di riproduzione non possono essere determinate. Studi precedenti hanno descritto meccanismi per l'uso di misurazioni fetali, come la lunghezza della groppa della corona (CRL), la profondità toracica (CD) e la lunghezza della testa (HL) per stimare lo stadio approssimativo di gestazione nella specie cervida11-14, 16,17. Inoltre, alcuni di questi studi hanno anche stabilito linee guida che descrivono quando specifiche pietre miliari dello sviluppo, come la mineralizzazione scheletrica o il battito cardiaco fetale,possono essere identificate 8-19. Mentre questi dati possono essere utili per aiutare a guidare l'analisi degli ultrasuoni riproduttivi nel muntjac, la maggior parte delle altre specie di cervidi studiate hanno dimensioni corporee molto più grandi e periodi gestazionali più lunghi, riducendo il valore trascizionale di questi studi per applicazioni muntjac.
Il protocollo qui delineato descrive l'ultrasonografia transabdominale del muntjac femminile ai fini della diagnosi e del monitoraggio della gravidanza. L'esecuzione riuscita di questo protocollo può facilitare il rilevamento e la valutazione precoce della crescita e dello sviluppo fetale. Questa tecnica ha preziose applicazioni nello svolgimento di studi che studiano la riproduzione, nello sviluppo utero o la trasmissione verticale di malattie infettive in un piccolo modello cervice e può anche essere utile per scopi clinici nelle operazioni di riproduzione in cattività.

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	<tbody>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:187px;">Butorphanol tartrate (Torbugesic) (0.45 mg/kg)</td>
			<td style="width:127px;">Fort Dodge Animal Health, Fort Dodge, Iowa</td>
			<td style="width:64px;">NADA 135-780</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:187px;">Azaperone tartrate (0.035 mg/kg)</td>
			<td style="width:127px;">ZooPharm</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:187px;">Medetomidine HCl (0.04 mg/kg)</td>
			<td style="width:127px;">ZooPharm</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:187px;">Ultrasound contact gel</td>
			<td style="width:127px;">Medline, Mundelein, Illinois</td>
			<td style="width:64px;">MDS092005</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:187px;">Atipamezole hydrochloride (Antisedan) (0.25 mg/kg)</td>
			<td style="width:127px;">Orion Corporation, Espoo, Finland</td>
			<td style="width:64px;">NADA 141-033</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Table 2 Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:187px;">Name of Equipment</td>
			<td style="width:127px;">Company</td>
			<td style="width:64px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:171px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="201">
			<td height="201" style="height:201px;width:187px;">V-trough (optional)</td>
			<td style="width:127px;">N/A</td>
			<td style="width:64px;">N/A</td>
			<td style="width:171px;">Animal may be supported in dorsal recumbency on a standard examination table or other surface without the use of a V-trough</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:187px;">Electrical clippers or razor blades for hair removal</td>
			<td style="width:127px;">Oster, McMinnville, Tennessee</td>
			<td style="width:64px;">78005-140</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:187px;">Ultrasound system: Ibex Pro portable ultrasound</td>
			<td style="width:127px;">E.I. Medical Imaging, Loveland, CO</td>
			<td style="width:64px;">Ibex Pro</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:187px;">5-10 MHz transducer: CL3.8 5-2.5 MHz 60 mm curved linear array</td>
			<td style="width:127px;">E.I. Medical Imaging, Loveland, CO</td>
			<td align="right" style="width:64px;">290420</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:187px;">3 ml syringes</td>
			<td style="width:127px;">Covidien</td>
			<td align="right" style="width:64px;">1.18E+09</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:187px;">22 G needles</td>
			<td style="width:127px;">Covidien</td>
			<td align="right" style="width:64px;">8.88E+09</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transabdominal ultrasound for pregnancy diagnosis in reeves' muntjac deer

I cervi muntjac di Reeves(Muntiacus reevesi)sono una piccola specie cervide originaria del sud-est asiatico e sono attualmente in fase di studio come potenziale modello di trasmissione e patogenesi della malattia da prioni. La trasmissione verticale è un'area di interesse tra i ricercatori che studiano le malattie infettive, compresa la malattia da prioni, e queste indagini richiedono metodi efficienti per valutare gli effetti dell'infezione materna sulle prestazioni riproduttive. L'esame ultrasonografico è uno strumento consolidato per diagnosticare la gravidanza e valutare la salute fetale in moltespecie animali 1-7, tra cui diverse specie di cervidi d'allevamento8-19, tuttavia questa tecnica non è stata descritta nel cervo muntjac di Reeves. Qui descriviamo l'applicazione di ultrasuoni transabdominali per rilevare la gravidanza in muntjac fa e per valutare la crescita fetale e lo sviluppo durante il periodo gestazionale. Utilizzando questa procedura, gli animali in gravidanza sono stati identificati già 35 giorni dopo l'accoppiamento doe-buck e questo era un mezzo efficace per monitorare in sicurezza la gravidanza a intervalli regolari. Gli obiettivi futuri di questo lavoro includeranno la definizione di normali riferimenti di misurazione fetale per la stima dell'età gestazionale, la determinazione della sensibilità e della specificità della tecnica per la diagnosi della gravidanza in varie fasi della gestazione e l'identificazione di variazioni nella crescita e nello sviluppo fetale in diverse condizioni sperimentali.

Utilizzando il protocollo qui descritto, la gravidanza può essere diagnosticata e monitorata nel cervo muntjac di Reeve con tecniche minimamente invasive. Il primo momento in cui la gravidanza poteva essere rilevata dagli autori era di circa 35 giorni dopo il comportamento di accoppiamento osservato.
Nelle prime fasi della gestazione, la gravidanza è stata diagnosticata visualizzando un utero pieno di liquidi identificato come uno spazio anecoico nell'addome caudale. All'interno dell'utero, ...

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Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves' Muntjac Deer

L'ecografia transabdominale è descritta come un mezzo efficace e non invasivo per valutare lo stato riproduttivo nel cervo muntjac di Reeves. Questi metodi possono essere utilizzati per ottenere la diagnosi precoce della gravidanza e per valutare la vitalità fetale. Le applicazioni future di questa tecnica includono la stima dell'età gestazionale e gli effetti della malattia materna sullo sviluppo fetale.

Ecografia transabdominale per la diagnosi di gravidanza nel cervo Muntjac di Reeves

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

10.2K Views.  Colorado State University. L'ecografia transabdominale è descritta come un mezzo efficace e non invasivo per valutare lo stato riproduttivo nel cervo muntjac di Reeves. Questi metodi possono essere utilizzati per ottenere la diagnosi precoce della gravidanza e per valutare la vitalità fetale. Le applicazioni future di questa tecnica includono la stima dell'età gestazionale e gli effetti della malattia materna sullo sviluppo fetale.

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FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis

Pre-implantation genetic diagnosis (PGD) is an established alternative to pre-natal diagnosis, and involves selecting pre-implantation embryos from a cohort generated by assisted reproduction technology (ART). This selection may be required because of familial monogenic disease (e.g. cystic fibrosis), or because one partner carries a chromosome rearrangement (e.g. a two-way reciprocal translocation). PGD is available for couples who have had previous affected children, and/or in the case of chromosome rearrangements, recurrent miscarriages, or infertility. Oocytes aspirated following ovarian stimulation are fertilized by in vitro immersion in semen (IVF) or by intracytoplasmic injection of an individual spermatozoon (ICSI). Pre-implantation cleavage-stage embryos are biopsied, usually by the removal of a single cell on day 3 post-fertilization, and the biopsied cell is tested to establish the genetic status of the embryo. Fluorescence in situ hybridization (FISH) on the fixed nuclei of biopsied cells with target-specific DNA probes is the technique of choice to detect chromosome imbalance associated with chromosome rearrangements, and to select female embryos in families with X-linked disease for which there is no mutation-specific test. FISH has also been used to screen embryos for spontaneous chromosome aneuploidy (also known as PGS or PGD-AS) in order to try and improve the efficiency of assisted reproduction; however, the predictive value of this test using the spreading and FISH technique described here is likely to be unacceptably low in most people's hands and it is not recommended for routine clinical use. We describe the selection of suitable probes for single-cell FISH, spreading techniques for blastomere nuclei, and in situ hybridization and signal scoring, applied to PGD in a clinical setting.

This article describes the selection of suitable probes for single-cell FISH, spreading techniques for blastomere nuclei, and in situ hybridization and signal scoring, applied to pre-implantation genetic diagnosis (PGD) in a clinical setting.

FISH per preimpianto Diagnosi Genetica

Pre-implantation genetic diagnosis (PGD) is an established alternative to pre-natal diagnosis, and involves selecting pre-implantation embryos from a ...

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Medicina

Intraoperative Ultrasound in Spinal Surgery

Since the 1980s, there have been several reports for the use of intraoperative ultrasound as a useful adjunct in spinal surgery. However, with the advent of newer cutting-edge imaging modalities, the use of intraoperative ultrasound in spine surgery has largely fallen out of favor. Despite this, intraoperative ultrasound continues to provide several advantages over other intraoperative techniques such as magnetic resonance imaging and computed tomography including being more cost-effective, efficient, and easy to operate and interpret. Additionally, it remains the only method for the real-time visualization of soft tissue and pathologies. This paper focuses on the advantages of using intraoperative ultrasound, especially in cases of intradural lesions and lesions ventral to the thecal sac when approaching posteriorly.

Here, we present a protocol on the use of intraoperative ultrasound in spinal surgery, particularly in cases of intradural lesions and lesions in the ventral spinal canal when using a posterior approach.

Ecografia intraoperatoria in chirurgia spinale

Since the 1980s, there have been several reports for the use of intraoperative ultrasound as a useful adjunct in spinal surgery. However, with the advent ...

Hydra, a Computer-Based Platform for Aiding Clinicians in Cardiovascular Analysis and Diagnosis

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect of different cardiovascular risk factors (e.g., diabetes, raised blood pressure, unhealthy diet, tobacco use, stress, etc.) that commonly coexist and act multiplicatively. Most CVDs can be prevented by an early identification of the highest risk factors and an appropriate treatment. The stratification of cardiovascular risk factors involves a wide range of parameters and tests that specialists use in their clinical practice. In addition to cardiovascular (CV) risk stratification, ambulatory blood pressure monitoring (ABPM) also provides relevant information for diagnostic and treatment purposes. This work presents a list of protocols based on the Hydra platform, a web-based system for clinical decision support which incorporates a set of functionalities and services that are required for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment and monitoring of patients over time. The program includes tools for inputting and managing comprehensive patient data, organized into different checkups to track the evolution over time. It also has a risk stratification tool to compute a CV risk factor based upon several risk stratification tables of reference. Additionally, the program includes a tool that incorporates ABPM analysis and allows the extraction of valuable information by monitoring blood pressure over a specific period of time. Finally, the reporting service summarizes the most relevant information in a set of reports that aid clinicians in their clinical decision-making process.

This article presents a protocol based on Hydra &#8212; a web-based system for clinical decision support that integrates a full and detailed set of functionalities and services required by physicians for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment, and monitoring over time.

Hydra, una piattaforma basata su Computer per aiutare i clinici nella diagnosi e analisi cardiovascolare

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect ...

International Expert Consensus and Recommendations for Neonatal Pneumothorax Ultrasound Diagnosis and Ultrasound-guided Thoracentesis Procedure

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic compromise, a life-threatening disorder. Traditionally, neonatal pneumothorax diagnosis has been based on clinical images, auscultation, transillumination, and chest X-ray findings. This approach may potentially lead to a delay in both diagnosis and treatment. The use of lung US in diagnosis of PTX together with US-guided thoracentesis results in earlier and more precise management. The recommendations presented in this publication are aimed at improving the application of lung US in guiding neonatal PTX diagnosis and management.

Pneumothorax is a common emergency and critical disease in newborn infants that needs rapid, clear diagnosis and timely treatment. Diagnosis and treatment based on chest X-rays are associated with delayed management and radiation damage. Lung ultrasound (US) provides useful guidance for rapid, accurate diagnosis and the precise thoracentesis of pneumothorax.

Consenso internazionale degli esperti e raccomandazioni per la diagnosi ad ultrasuoni pneumotorace neoatale e la procedura di toracemite guidata dall'ultrasuoni

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic ...

Measurement of Myocardial Lactate Production for Diagnosis of Coronary Microvascular Spasm

In about a quarter of patients with angina and non-obstructive coronary arteries, no epicardial spasm is noted on coronary arteriography during an angina attack. Since the pressure-rate product is almost identical at rest and the onset of attack in those patients, the decrease in coronary blood flow rather than increased myocardial oxygen consumption is likely to explain myocardial ischemia, indicating a substantial involvement with coronary microvascular spasm (MVS). Myocardial lactate production, which could be defined as a negative myocardial lactate extraction ratio (ratio of the coronary arterial-venous difference in lactate concentration to arterial concentration), is considered indicative of objective evidence to support the emerging myocardial ischemia. Thus, monitoring of the myocardial lactate production and the emergence of chest pain and ischemic electrocardiographic changes during acetylcholine (ACh) provocation testing is of significant value for detecting the entity of MVS. Practically, 1 min after incremental doses of ACh (20, 50, and 100 &#956;g) are administered into the left coronary artery (LCA), paired samples of 1 mL of blood are collected from the LCA ostium and coronary sinus for measurement of lactate concentration by a calibrated automatic lactate analyzer. Then, the development of MVS could be confirmed by negative myocardial lactate extraction ratio despite the absence of angiographically demonstrable epicardial coronary spasm or before its occurrence throughout ACh provocation testing. In conclusion, assessment of myocardial lactate production is essential and valuable for the diagnosis of MVS.

Myocardial lactate production (coronary arterial-venous difference in serum lactate level) during coronary spasm provocation testing is considered as a highly sensitive marker that reflects acetylcholine-induced myocardial ischemia due to microvascular spasm. This article presents the procedures to assess myocardial lactate production for the diagnosis of coronary microvascular spasm.

Misurazione della produzione di lattato miocardico per la diagnosi di spasmo microvascolare coronarico

In about a quarter of patients with angina and non-obstructive coronary arteries, no epicardial spasm is noted on coronary arteriography during an angina ...

Basophil Activation Test for Allergy Diagnosis

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and specific IgE (sIgE) determination in the evaluation of IgE-mediated allergic reactions to food, insect venom, drugs, as well as some forms of chronic urticaria. However, the role of this technique in the diagnostic algorithms is highly variable and not well determined.
BAT is based on the determination of basophil response to allergen/drug cross-linking IgE activation through the measurement of activation markers (such as CD63, CD203c) by flow cytometry. This test can be a useful and complementary tool to avoid controlled challenge tests&#160;to confirm allergy diagnosis, especially in subjects experiencing severe life-threatening reactions. In general, the performance of BAT should be considered if i) the allergen/drug produces false positive results in ST; ii) there is no allergen/drug source to use for ST or sIgE determination; iii) there is discordance between patient history and ST or sIgE determination; iv) symptoms suggest that ST may result in systemic response; v) before considering a CCT to confirm the culprit allergen/drug. The main limitations of the test are related to non-optimal sensitivity, especially in drug allergy, the need to perform the test no longer than 24 h after sample extraction, and the lack of standardization between laboratories in terms of procedures, concentrations, and cell markers.

The basophil activation test is a complementary in vitro diagnostic test for the evaluation of IgE-mediated allergic reactions based on the detection of basophil activation in the presence of a specific stimulus through the measure of activation markers by flow cytometry.

Test di attivazione dei basofili per la diagnosi di allergia

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and ...

Endoscopic Ultrasound-Guided Biliary Drainage: Endoscopic Ultrasound-Guided Hepaticogastrostomy in Malignant Biliary Obstruction

Patients with unresectable malignant biliary obstruction often require biliary drainage to decompress the biliary system. Endoscopic Retrograde Cholangiopancreatography (ERCP) is the primary biliary drainage method whenever possible. Percutaneous Transhepatic Biliary Drainage (PTBD) is used as a salvage method if ERCP fails. Endoscopic Ultrasound-Guided Biliary Drainage (EUS-BD) provides a feasible alternative biliary drainage method where one of the methods is EUS guided Hepaticogastrostomy (EUS-HGS). Here we describe the EUS-HGS technique in a case of unresectable malignant hilar biliary obstruction to achieve biliary drainage.
Presented here is the case of a 71-year-old female with painless jaundice and weight loss for 2 weeks. Computed Tomography (CT) imaging showed a 4 x 5 cm hilar tumor with lymphadenopathy and liver metastasis. EUS fine needle biopsy (FNB) of the lesion was consistent with cholangiocarcinoma. Her bilirubin levels were 212 &#181;mol/L (&lt;15) during presentation.
A linear echoendoscope was used to locate the left dilated intrahepatic ducts (IHD) of the liver. The segment 3 dilated IHD was identified and punctured using a 19 G needle. Contrast was used to opacify the IHDs under fluoroscopic guidance. The IHD was cannulated using a 0.025-inch guidewire. This was followed by the dilation of the fistula tract using a 6 Fr electrocautery dilator along with a 4 mm biliary balloon dilator. A partially covered metallic stent of 10 cm in length was deployed under fluoroscopic guidance. The distal part opens in the IHD and the proximal part was deployed within the working channel of the echoendoscope that subsequently released into the stomach. The patient was discharged three days after the procedure. Follow up performed in the second and fourth weeks showed that the bilirubin levels were 30 &#181;mol/L and 14 &#181;mol/L, respectively. This indicates that EUS-HGS is a safe method for biliary drainage in unresectable malignant biliary obstruction.

Endoscopic Ultrasound-Guided Biliary Drainage (EUS-BD) is an alternative method of biliary decompression in malignant biliary obstruction. Here we describe the technique of EUS guided-Hepaticogastrostomy (EUS-HGS) in a case of unresectable malignant hilar biliary obstruction.

Drenaggio biliare guidato da ultrasuoni endoscopici: epaticogastrostomia endoscopica guidata da ultrasuoni nell'ostruzione biliare maligna

Patients with unresectable malignant biliary obstruction often require biliary drainage to decompress the biliary system. Endoscopic Retrograde ...

In Vitro Apical-Out Enteroid Model of Necrotizing Enterocolitis

Necrotizing enterocolitis (NEC) is a devastating disease affecting preterm infants, characterized by intestinal inflammation and necrosis. Enteroids have recently emerged as a promising system to model gastrointestinal pathologies. However, currently utilized methods for enteroid manipulation either lack access to the apical surface of the epithelium (three-dimensional [3D]) or are time-consuming and resource-intensive (two-dimensional [2D] monolayers). These methods often require additional steps, such as microinjection, for the model to become physiologically translatable. Here, we describe a physiologically relevant and inexpensive protocol for studying NEC in vitro by reversing enteroid polarity, resulting in the apical surface facing outward (apical-out). An immunofluorescent staining protocol to examine enteroid barrier integrity and junctional protein expression following exposure to tumor necrosis factor-alpha (TNF-&#945;) or lipopolysaccharide (LPS) under normoxic or hypoxic conditions is also provided. The viability of 3D apical-out enteroids exposed to normoxic or hypoxic LPS or TNF-&#945; for 24 h is also evaluated. Enteroids exposed to either LPS or TNF-&#945;, in combination with hypoxia, exhibited disruption of epithelial architecture, a loss of adherens junction protein expression, and a reduction in cell viability. This protocol describes a new apical-out NEC-in-a-dish model which presents a physiologically relevant and cost-effective platform to identify potential epithelial targets for NEC therapies and study the preterm intestinal response to therapeutics.

In Vitro Apical-Out Enteroid Model of Necrotizing Enterocolitis

This protocol describes an apical-out necrotizing enterocolitis (NEC)-in-a-dish model utilizing small intestinal enteroids with reversed polarity, allowing access to the apical surface. We provide an immunofluorescent staining protocol to detect NEC-related epithelial disruption and a method to determine the viability of apical-out enteroids subjected to the NEC-in-a-dish protocol.

In vitro Modello enteroide apical-out di enterocolite necrotizzante

Necrotizing enterocolitis (NEC) is a devastating disease affecting preterm infants, characterized by intestinal inflammation and necrosis. Enteroids have ...

Point-of-Care Ultrasound: A Review of Ultrasound Parameters for Predicting Difficult Airways

Airway management remains a crucial part of perioperative care. The conventional approach to assessing potentially difficult airways emphasizes the LEMON method, which looks for and evaluates the Mallampati classification, signs of obstruction, and neck mobility. Clinical findings help predict a higher likelihood of difficult tracheal intubation, but no clinical result reliably excludes difficult intubation. Ultrasound as an adjunct to clinical examination can provide the clinician with a dynamic anatomical airway assessment, which is impossible with clinical examination alone. In the hands of anesthesiologists, ultrasound is becoming more popular in the perioperative period. This method is particularly applicable for identifying proper endotracheal tube positioning in specific patient populations, such as those who are morbidly obese and patients with head and neck cancer or trauma. The focus is on identifying the normal anatomy, correctly positioning the endotracheal tube, and refining the parameters that predict difficult intubation. Several ultrasound measurements are clinical indicators of difficult direct laryngoscopy in the literature. A meta-analysis revealed that the distance from the skin to the epiglottis (DSE) is most associated with a difficult laryngoscopy. An ultrasound of the airway could be applied in routine practice as an adjunct to the clinical examination. A full stomach, rapid sequence intubation, gross visual anatomical abnormalities, and restricted neck flexibility prevent using ultrasound to assess the airway. The airway evaluation is performed with a linear array transducer of 12-4 MHz, with the patient in the supine position, with no pillow, and with the head and neck in a neutral position. The central axis of the neck is where the ultrasound parameters are measured. These image acquisitions guide the standard ultrasound examination of the airway.

A point-of-care ultrasound (POCUS) is a simple, non-invasive, and portable tool that enables dynamic airway assessment. Several studies have attempted to determine the role of ultrasound parameters as an adjunct to clinical examination in predicting difficult laryngoscopies.

Ecografia point-of-care: una revisione dei parametri ecografici per prevedere le vie aeree difficili

Airway management remains a crucial part of perioperative care. The conventional approach to assessing potentially difficult airways emphasizes the LEMON ...

A Swin Transformer-Based Model for Thyroid Nodule Detection in Ultrasound Images

In recent years, the incidence of thyroid cancer has been increasing. Thyroid nodule detection is critical for both the detection and treatment of thyroid cancer. Convolutional neural networks (CNNs) have achieved good results in thyroid ultrasound image analysis tasks. However, due to the limited valid receptive field of convolutional layers, CNNs fail to capture long-range contextual dependencies, which are important for identifying thyroid nodules in ultrasound images. Transformer networks are effective in capturing long-range contextual information. Inspired by this, we propose a novel thyroid nodule detection method that combines the Swin Transformer backbone and Faster R-CNN. Specifically, an ultrasound image is first projected into a 1D sequence of embeddings, which are then fed into a hierarchical Swin Transformer. 
The Swin Transformer backbone extracts features at five different scales by utilizing shifted windows for the computation of self-attention. Subsequently, a feature pyramid network (FPN) is used to fuse the features from different scales. Finally, a detection head is used to predict bounding boxes and the corresponding confidence scores. Data collected from 2,680 patients were used to conduct the experiments, and the results showed that this method achieved the best mAP score of 44.8%, outperforming CNN-based baselines. In addition, we gained better sensitivity (90.5%) than the competitors. This indicates that context modeling in this model is effective for thyroid nodule detection.

Here, a new model for thyroid nodule detection in ultrasound images is proposed, which uses Swin Transformer as the backbone to perform long-range context modeling. Experiments prove that it performs well in terms of sensitivity and accuracy.

Un modello basato su trasformatore swin per il rilevamento di noduli tiroidei nelle immagini ecografiche

In recent years, the incidence of thyroid cancer has been increasing. Thyroid nodule detection is critical for both the detection and treatment of thyroid ...