We would like to acknowledge the funding contributions of the Canadian Surgical Research Fund, the Edmonton Civic Employees Research Assistance Fund, and the Alberta IBD Consortium through a grant from Alberta Innovates.

Protocolos de uso de animais foram aprovados pelo Animal Care and Use comissão de Ciência da Saúde da Universidade de Alberta. 1. Preparação de Instrumentos, Animais e Setup operativo <ol><li> Transferir os animais para uma nova, ausente gaiola limpa de todos os materiais sólidos de comida 24 horas antes do procedimento. Eles podem ter livre acesso à água e dieta líquida ad lib até o momento do procedimento. </li><li> Autoclave todos os instrumentos necessários para o procedimento. Superfície operacional limpo e cone do nariz anestésico com etanol 70%. </li><li> Defina-se a superfície de operação com microscópio cirúrgico, anestésico e material de máquina de uma maneira que é confortável para o cirurgião. Os cotovelos do cirurgião deve ser autorizado a descansar confortavelmente na mesa de operação, com as mãos e os braços desobstruídas por equipamento. Instruments, suturas, cotonetes, e uma seringa de 10 ml deve ser colocado num local que permite fácil acesso durante o procedimento. </li><li> Estabelecerlâmpadas de calor gerais para proporcionar tanto calor para o animal durante o procedimento e luz para a superfície operacional. </li><li> Encher um tubo de 50 ml com 0,9% de soro fisiológico, e um tubo de 1,5 ml com geleia de petróleo e lugar perto da superfície do operacional. NOTA: Esterilizar todos os instrumentos e materiais cirúrgicos. Uma vez que o intestino é seccionado, o próprio procedimento não é estéril. É considerada limpa-contaminada. Tomar medidas para evitar a introdução de fontes exógenas de infecção. </li></ol> 2. ileocolic ressecção com anastomose <ol><li> Induzir a anestesia pela administração de 4% de isoflurano com uma taxa de fluxo de oxigênio de 2 L / min através de nariz cone do vaporizador de isoflurano até o animais freqüência respiratória diminui para cerca de 30-40 ciclos / min. Aplique pressão moderada para a pata traseira do rato para garantir que não haja resposta da dor antes de iniciar o procedimento. Neste ponto, desligue o isoflurano a 2% e fluxo de oxigênio para 0,5 L / min. Intermitentementeverificar a resposta à dor durante o procedimento e ajustar a taxa de fluxo de isoflurano em conformidade. </li><li> Aplique vaselina para os olhos para evitar o ressecamento durante a cirurgia, e imobilizar o mouse na posição supina, com membros garantidos usando fita adesiva transparente. </li><li> Limpe o abdômen com solução povodine / iodo, e transformar-se em novas luvas estéreis. </li><li> Faça uma incisão na pele 1,5 centímetros na linha média superior do abdómen, utilizando ponta afiada dissecando tesoura para expor a fáscia e peritônio. Abra a camada da membrana fibrosa / peritoneal, de uma forma similar através da linha alba para expor o conteúdo peritoneal. </li><li> Em contraste com os seres humanos, o ceco do rato é tipicamente encontrado no quadrante superior esquerdo do abdómen. Uma vez identificados, compreender o ceco suavemente com uma pinça e entregá-lo através da incisão. Use cotonetes de algodão humedecido para fora do ventilador de aproximadamente 3 cm do íleo terminal que se projecta a partir do ceco ao longo de um gaze estéril envolto sobre a superfície abdominal (Figura 1A).Assegurar o intestino expostos é mantida húmida com 0,9% de soro fisiológico durante a totalidade do procedimento. </li><li> Identificar a artéria ileocecal ramificando-se a artéria mesentérica superior ao longo do cólon (Figura 1A) usando o microscópio de operação. Dissecar os tecidos avasculares adjacentes à artéria ileocecal, cercar e ligar a artéria com um laço de seda 5-0. Em seguida, localize o suprimento de sangue regional para o íleo terminal e escolher um ponto transection 1,5-2 cm proximal à junção ileocecal. Ligadura dos ramos para esta seção do íleo como acima. Divida as artérias com micro dissecando tesoura. </li><li> Divida as porções isquêmicas de íleo eo cólon garantir que haja fornecimento de sangue adequado para os fins transeccionados (Figura 1B). Muitas vezes, é útil para spatulate o íleo, dividindo-o em um ângulo de 30 graus para aumentar o diâmetro do lúmen de modo que corresponda mais estreitamente do cólon. Uma vez que a porção de ileocecal do intestino foi removido, a alinhartranseccionados extremidades do íleo e do cólon na gaze, garantindo as fronteiras de cada mesentéricos estão alinhados. </li><li> Confecção da anastomose, através da aproximação do fim seccionado do íleo para o final seccionado de cólon usando interrompido 8-0 suturas de polipropileno (Figura 1C). O primeiro ponto é colocado na borda mesentérica, com suturas posteriores colocados a cada 0,5 milímetros até a anastomose íleo-colônica é estanque. Ao passar a agulha de sutura através do íleo eo cólon, garantir que a borda do corte não é enrolado, e picadas de agulhas são 0,5 milímetros a partir das bordas do corte do intestino. A anastomose típico vai exigir 14-16 suturas interrompidas. Teste a integridade ea desobstrução da anastomose após a conclusão rolando uma proximal para distal cotonete sobre o íleo para forçar o conteúdo através da anastomose. Conteúdo do intestino delgado deve passar livremente para o cólon sem deiscência de anastomose. </li><li> Lavar o intestino expostos com 3-4 ml de solução salina a 0,9% a partir da seringa de 10 mlpara lavar fezes a partir da superfície do intestino, e entregar do intestino de volta para dentro da cavidade peritoneal. Usando 2 ml de solução salina a 0,9% lavar a cavidade peritoneal, e, em seguida, este fluido escorra através da aplicação de uma pressão suave para a parede abdominal lateralmente. </li><li> Feche a incisão com uma corrida de seda 3-0, e interromper o fluxo de isoflurano. Administrar 0,1 mg / kg de ópio longa ação -buprenorphine- por via subcutânea para controle da dor pós-operatória. </li><li> Observe os animais sob a lâmpada de calor até que eles são móveis, em seguida, transferi-los para uma gaiola continuamente aquecido. </li></ol> Cuidado 3. pós-operatória e Monitoramento <ol><li> Monitorizar os animais em uma gaiola aquecida continuamente para detectar sinais de desconforto para o resto do dia. Transferir os animais de volta para a facilidade de cuidado animal em uma nova gaiola estéril com acesso a dieta líquida e água ad lib. Os animais podem ser alojados em grupos de 3-4. </li><li> Execute uma verificação sobre os animais no pós-operatório, na manhã seguinte,garantir que os animais não aparecem em perigo. Alimente apenas dieta líquida. Se eles parecem desconfortáveis ​​(ou seja, a postura curvada ou atividade mínima) administrar uma dose adicional de buprenorfina subcutânea. Confira os animais mais uma vez à tarde em dia de pós-operatório 1. </li><li> Na manhã do dia pós-operatório 2 os animais deve aparecer totalmente recuperado. Provas do consumo de alimentos e stooling são sinais positivos de recuperação. Agora, retomar uma dieta de comida sólida para os animais. NOTA: Sinais de perigo incluem postura arqueada, má higiene e atividade mínima. Se os sinais de perigo são proeminentes os animais devem ser sacrificados. </li><li> Eutanásia dos animais através da indução de anestesia profunda com 4% de isoflurano a uma taxa de fluxo de O2, de 2 L / min até que os animais não respondem à pressão do pé. Realizar deslocamento cervical, e observar se há sinais de eutanásia adequada. </li><li> Orientações variam, por isso consulte as recomendações das instituições quanto às suas indicaçõespara os métodos adequados de eutanásia em camundongos. </li></ol>

<ol>
	<li>Hallet, J., Zih, F. S., Lemke, M., Milot, L., Smith, A. J., Wong, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neo-adjuvant+chemoradiotherapy+and+multivisceral+resection+to+optimize+R0+resection+of+locally+recurrent+adherent+colon+cancer.">Neo-adjuvant chemoradiotherapy and multivisceral resection to optimize R0 resection of locally recurrent adherent colon cancer.</a> European Journal of Surgical Oncology. 40 (6), (2014).</li><li>Rutgeerts, P., Geboes, K., Vantrappen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+history+of+recurrent+Crohn&#39;s+disease+at+the+ileocolonic+anastomosis+after+curative+surgery.">Natural history of recurrent Crohn&#39;s disease at the ileocolonic anastomosis after curative surgery.</a> Gut. 25 (6), 665-672 (1984).</li><li>Davis, D., Rivadeneira, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complications+of+colorectal+anastomoses:+leaks,+strictures,+and+bleeding.">Complications of colorectal anastomoses: leaks, strictures, and bleeding.</a> The Surgical clinics of North America. 93 (1), 61-87 (2013).</li><li>Helmrath, M. 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American journal of physiology.</a> Gastrointestinal and liver physiology. 293 (5), (2007).</li><li>Speck, K. E., De Cruz, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+enhances+resection-induced+intestinal+adaptive+growth+in+IL-10+null+mice.">Inflammation enhances resection-induced intestinal adaptive growth in IL-10 null mice.</a> The Journal of surgical research. 168 (1), 62-69 (2011).</li><li>Rigby, R. J., Hunt, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+animal+model+of+postsurgical+bowel+inflammation+and+fibrosis:+the+effect+of+commensal+microflora.">A new animal model of postsurgical bowel inflammation and fibrosis: the effect of commensal microflora.</a> Gut. 58 (8), 1104-1112 (2009).</li><li>Kostic, A. D., Xavier, R. 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A., Gonzalez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Impact of Ileocecal Resection and Concomitant Antibiotics on the Microbiome of the Murine Jejunum and Colon. 8 (8), (2013).</li><li>Bij, G. J., Oosterling, S. J., Beelen, R. H. J., Meijer, S., Coffey, J. C., van Egmond, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+perioperative+period+is+an+underutilized+window+of+therapeutic+opportunity+in+patients+with+colorectal+cancer.">The perioperative period is an underutilized window of therapeutic opportunity in patients with colorectal cancer.</a> Annals of surgery. 249 (5), (2009).</li><li>Scott, A. D., Uff, C., Phillips, R. 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L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Action+of+matrix+metalloproteinases+at+restricted+sites+in+colon+anastomosis+repair:+an+immunohistochemical+and+biochemical+study.">Action of matrix metalloproteinases at restricted sites in colon anastomosis repair: an immunohistochemical and biochemical study.</a> Surgery. 140 (1), 72-82 (2006).</li><li>Thompson, S. K., Chang, E. Y., Jobe, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+review:+Healing+in+gastrointestinal+anastomoses,+Part+I.">Clinical review: Healing in gastrointestinal anastomoses, Part I.</a> Microsurgery. 26 (3), 131-136 (2006).</li></ol>

The authors have nothing to disclose

O murino ICR é um poderoso modelo que pode ser usado para estudar os efeitos da cirurgia em doenças intestinais. Este artigo descreve um método de realizar ICR em camundongos com uma taxa de sucesso de 95% e sem problemas com déficit de crescimento que se reflete por pesos estáveis ​​até 28 dias após o procedimento. Os desafios mais significativos para o sucesso ICR incluem evitar obstruções intestinais da anastomose e fístulas. Elementos técnicos para a cirurgia para prevenir...

Ileocolic resection (ICR) is a common procedure performed in both emergent and elective situations for a variety of illnesses. Crohn&#8217;s disease and colon cancers are the two most common indications for ICR. In both illnesses, recurrence in the bowel at the site of surgery represents a major clinical problem. Local recurrence rates for colon cancer remain an issue even with the most aggressive resections1. Following ICR in Crohn&#8217;s disease, the disease most frequently (in up to 80%) recurs in the neo-terminal ileum at 1 year after surgery2. Given the impact of these two illnesses and their recurrence after surgery, it is important to understand local intestinal factors after ICR, which may have intrinsic influences on the natural history of these diseases. Further, it is also important to consider anastomotic healing after ICR. In the early post-operative period, anastomotic leaks can have devastating consequences for patients resulting in repeat surgeries, stoma creations, significant morbidity, and even mortality3. Despite the importance of this topic, our current understanding of anastomotic healing remains in its infancy as a subject of research. Animal models of ICR, in particular mice, are an excellent platform for studying the intestinal and anastomotic healing following surgery.
A mouse model of ICR was initially developed by Helmrath et al. to be used as a model of short gut syndrome4. The authors experimented with various diet regiments and suture sizes to optimize animal survival following ICR. They concluded that feeding with liquid diet in the perioperative period and using 9-0 monofilament sutures resulted in an optimal post-operative survival of 88%. Since this initial publication, ICR in mice removing 50% of the small bowel has been used in several studies to explore the dynamics of massive small bowel resection and the adaptive growth response in attempt to develop new therapies for short gut syndrome5,6.
The first application of the ICR mouse model to Crohn&#8217;s disease used the IL-10-/- mouse model, which spontaneously develops colitis7. The authors found that after ICR these animals developed inflammation in the neo-terminal ileum similar to that seen in post-operative Crohn&#8217;s disease patients, and that this inflammation was dependent on the presence of bacteria7. More recently, this model was used to explore bacterial changes induced by ICR. In Crohn&#8217;s disease there is an associated dysbiosis with relative decreases in bacteria known to have anti-inflammatory properties and increases in invasive species of bacteria8,9. The association holds true in cases of post-operative recurrence10. Two studies sought to identify microbial changes resulting from ICR. The first used IL-10 null mice, and performed denaturing gel electrophoresis to compare bacterial similarity between the small bowel and colon after ICR11. This study demonstrated that bacterial populations became similar in the small intestine and colon following ICR. A subsequent study used wild type mice and 16s pyrosequencing for phylogenetic classification of bacterial species post-operatively. This study demonstrated a marked shift in bacterial species resulting from surgery alone with Clostridium species becoming dominant as well as an increase in &#978;-proteobacteria. The results also confirmed the findings of the previous study with similar populations found in the small bowel and colon after ICR12. 
ICR is a common procedure for patients with colon cancer involving the cecum and ascending colon, and it is becoming increasingly recognized that the host-response to surgery likely contributes to both local and distant tumor recurrence13. Despite this observation, models of ICR have not been utilized for the study of colorectal cancer and post-operative recurrence. Understanding both the systemic and local immunologic changes resulting from ICR will be important in investigating future therapies. Potential pathways involved in cancer recurrence post ICR include up regulation of growth factors, which may rescue cells from apoptosis and stimulate proliferation, mechanical tumor disruption with cell shedding, and loss of immune surveillance through post-operative immunosuppression13,14. 
Mouse models of ICR have the potential to be a powerful tool for the investigation of short bowel syndrome, Crohn&#8217;s disease, and colon cancer. They may also provide lessons on how to prevent early post-operative anastomotic complications by further defining the cellular and biochemical pathways involved in healing the newly constructed anastomosis. A major barrier in utilizing the murine ICR model is the technical difficulty. The intestinal anastomosis requires the use of 8-0 or 9-0 suture, an operating microscope, and training in microsurgical techniques. The goal of this article is to provide clear instructions on how to perform ICR in mice with the goal of utilizing this procedure in models of disease.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="665">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:163px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">LD101 liquid rodent diet</td>
			<td style="width:163px;">testdiet.com</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">0.9% NaCl</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>FKE1324</td>
			<td>Injection quality saline</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Operating Microscope</td>
			<td>Ziess</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane Anesthetic Vaporizer</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>34-0483</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane</td>
			<td>Abbott&#160;</td>
			<td>05260-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass plate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For operating surface</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cotton swabs</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro Castroviejo Needle holder, curved</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td align="right">503377</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Castroviejo straight scissors</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>555530S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dissecting Scissors</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td align="right">15922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dressing Forceps x 2</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td align="right">500363</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">5-0 silk pre-cut sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>A182H</td>
			<td>For vessel ligation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">8-0 Prolene on BV130-5 needle</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>8732H</td>
			<td>For anastomosis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">3-0 Silk on FS-2 needls</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>8665G</td>
			<td>For abdominal wall closure</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petroleum Jelly</td>
			<td>Vaseline</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10 ml syringe</td>
			<td>BD biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Povidone-iodine 7.5% surgical Scrub</td>
			<td><a href="http://betadine.com">betadine.com</a></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Heat lamps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">buprenorphine 0.3 mg/ml</td>
			<td>Reckitt Benckiser Healthcare Ltd.&#160;</td>
			<td>PL36699/0006</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine ileocolic bowel resection with primary anastomosis

Intestinal resections are frequently required for treatment of diseases involving the gastrointestinal tract, with Crohn&#8217;s disease and colon cancer being two common examples. Despite the frequency of these procedures, a significant knowledge gap remains in describing the inherent effects of intestinal resection on host physiology and disease pathophysiology. This article provides detailed instructions for an ileocolic resection with primary end-to-end anastomosis in mice, as well as essential aspects of peri-operative care to maximize post-operative success. When followed closely, this procedure yields a 95% long-term survival rate, no failure to thrive, and minimizes post-operative complications of bowel obstruction and anastomotic leak. The technical challenges of performing the procedure in mice are a barrier to its wide spread use in research. The skills described in this article can be acquired without previous surgical experience. Once mastered, the murine ileocolic resection procedure will provide a reproducible tool for studying the effects of intestinal resection in models of human disease.

As taxas de mortalidade e alteração de peso no pós-operatório. As taxas de mortalidade seguintes ICR em 129S1 camundongos selvagens são geralmente ~ 5%. A causa mais comum da moralidade é obstrução intestinal na anastomose. Outras causas de mortalidade incluem fístula e hérnia interna que leva à obstrução intestinal. A perda de peso pode ser visto até 14 dias de pós-operatório, mas é geralmente não-significativo. Ratos tendem a recuperar completamente peso p...

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Murine Ileocolic Bowel Resection with Primary Anastomosis

Ileocolic resection is commonly performed in several human diseases; however, little is known regarding the impact of intestinal resection on surgical illnesses. This article provides instruction on executing the procedure in mice with high success, providing a means to study the effects of ileocolic resection in models of disease.

Murino ileocolic Bowel ressecção com anastomose primária

Intestinal resections are frequently required for treatment of diseases involving the gastrointestinal tract, with Crohn&#8217;s disease and colon cancer ...

murine-ileocolic-bowel-resection-with-primary-anastomosis

Research

JoVE Journal

Medicine

16.2K visualizações.  University of Alberta. Ileocolic resection is commonly performed in several human diseases; however, little is known regarding the impact of intestinal resection on surgical illnesses. This article provides instruction on executing the procedure in mice with high success, providing a means to study the effects of ileocolic resection in models of disease.