Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave sobre os mecanismos de cura de anastómos colo-colonicos, e pode fornecer um modelo para reduzir as taxas de vazamento anastomóticos e suas consequências potencialmente devastadoras. Nossa técnica oferece um método relativamente simples e reprodutível para a realização de anastomose colo-colonica ou colo-retal em um modelo animal com taxas de vazamento clínico semelhantes aos pacientes humanos. Comece prendendo os membros de um camundongo anestesiado à superfície cirúrgica, e desinfetando o abdômen exposto com clorexidina.
Em seguida, coloque uma cortina estéril sobre o animal, e faça uma incisão de pele ao longo da linha média do abdômen inferior para o xifoide. Use fórceps para levantar a linha média da parede abdominal, e tomando cuidado para não ferir as estruturas intra-abdominais incisam o comprimento da fáscia abdominal média. Quando os intestinos estiverem expostos, localize o ceco e o intestino delgado, e gire as vísceras do lado esquerdo medialmente para expor o cólon descendente e sigmoide.
Em seguida, cubra as vísceras com gaze úmida e estéril. Cubra uma ponta de sonda sem corte com geleia lubrificante e avance cuidadosamente a sonda para o reto para ajudar na identificação do cólon sigmoide descendente. Uma vez identificado o cólon, retire parcialmente a sonda e use fórceps atraumatics para agarrar suavemente o cólon sigmoide superior à entrada pélvica.
Usando micro tesouras afiadas, faça um corte ao longo do cólon sigmoide, perpendicular ao tecido intestinal, e estendendo-se de 80 a 90% através da largura do cólon. Se um vaso sanguíneo mesenérico for ferido durante a rotação visceral, ou a colotomia, aplique suavemente pressão à visão da lesão por até dois minutos. Para reparar a colotomia sigmoide, use um motorista de agulha castroviejo e cinco a seis simples oito pontos de polipropileno não absorvíveis para reparar a colostomia.
Realizar a anastomose na fronteira mesentery e trabalhar bilateralmente até a fronteira anti-mesenteria ajuda a garantir uma patente e anastomose não estenose. À medida que o reparo progride, avance a sonda de dissecção de ponta trans-anal e contundente para cobrir o reparo antes que as suturas iniciais sejam colocadas para ajudar a evitar um reparo muito estreito e diminuir as taxas de restrição anastomótica. Quando todas as suturas tiverem sido colocadas, use uma seringa de 10 mililitros cheia de soro fisiológico estéril aquecido para irrigar o abdômen várias vezes.
Durante a irrigação final encha o abdômen com soro fisiológico estéril, e avance cuidadosamente um angiocateter lubrificado de 18 gage no reto para inflar o cólon com 5 a um centímetro cúbico de ar, para a identificação de um vazamento dentro da anastomose. Em seguida, coloque uma sutura adicional para reparo e infle o cólon novamente para ter certeza de que não há vazamentos. Esvazie o cólon com o angiocateter antes da remoção, e devolva suavemente as vísceras medial para sua posição anatômica normal.
Use quatro Suturas trançadas absorvíveis para fechar a incisão abdominal, com uma sutura de corrida ao longo da camada muscular da parede abdominal, começando na parte superior da incisão, e terminando no aspecto inferior da incisão. Em seguida, use uma sutura de monofilamento de quatro O para fechar a pele, e monitore o rato até que ele tenha se recuperado totalmente da anestesia. No ponto final experimental apropriado, esterilize o abdômen com clorexidina e 70% etanol, e use uma tesoura afiada para reinstirção da incisão média original.
Use a tesoura para cortar a camada muscular e realize cuidadosamente uma rotação visceral medial esquerda para expor o cólon sigmoide reparado. Identifique a visão de reparo localizando as caudas da sutura de polipropileno utilizada para o reparo. Dissecar suavemente e sem rodeios qualquer intestinal às aderências intestinais longe da visão do reparo, tomando cuidado para não interromper a anastomose.
Use uma caneta de marcação para demarcar a borda antimesenteric do cólon, antes da remoção do segmento de cólon. Em seguida, use a tesoura para transversalmente através do cólon descendente, um centímetro do par, até um centímetro distal da visão da anastomose. Os tecidos pós-operatórios tendem a ser extremamente frágeis e cirúrgicos, bem como manuseio suave e meticuloso do tecido, ajudam a garantir contra o rompimento da anastomose cirúrgica.
Use uma tesoura fina para dissecar o cólon do mesentery anexado ao longo da borda posterior do cólon para remover o segmento sigmoidal. E corte ao longo do comprimento da fronteira mesentérica de forma longitudinal, para criar uma seção retangular de cólon do espécime cilíndrico previamente removido. E fazer um corte longitudinal ao longo do comprimento do cólon, em frente à marcação.
Em seguida, conserte, embebeda, e corte o tecido amostral conforme necessário para histologia e ou imunossuagem. A análise histológica, sete dias após a lesão, revela uma resposta de cura fibrosa, mediada por músculos suaves alfa actin positivo myofibroblasts. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de realizar um teste de insuficiência com a anastomose submersa sob soro fisiológico normal, confirmar a patência da anastomose e garantir que não haja vazamento.
Este procedimento pode ser realizado em camundongos geneticamente modificados, ou patogênicos com distúrbios de cicatrização de feridas, como camundongos diabéticos ou imuno-suprimidos, para responder a perguntas adicionais sobre os fatores que contribuem para um vazamento anastomótico. Após esse procedimento, a imunohistoquímica e a cultura celular podem ser realizadas a partir de tecido anastomótico colhido em momentos específicos após a cirurgia, para proporcionar uma melhor compreensão das células envolvidas e seus papéis no processo de cura anastomótica. Não se esqueça que trabalhar com Isoflurane pode ser extremamente perigoso, e que precauções, como o uso de filtragem de carbono e capas de ventilação devem ser sempre tomadas durante a realização deste procedimento.
