O escopo do nosso estudo é a imunidade intestinal. Estamos tentando ilustrar a fisiopatologia e o mecanismo das lesões de POI para o desenvolvimento de novas terapias. Um desafio é estabelecer modelos experimentais consistentes e reprodutíveis de POI em camundongos.
Isso envolve o controle de variáveis como técnicas cirúrgicas e avaliação de protocolos no cuidado com animais para minimizar a variabilidade entre os grupos experimentais. Outro desafio é ilustrar os mecanismos fisiopatológicos subjacentes do POI em camundongos. Nosso protocolo visa estabelecer um modelo reprodutível com variação mínima para o estudo da fisiopatologia da IOP e avaliação de novas estratégias anti-inflamatórias.
Nosso objetivo é preencher a lacuna entre os achados pré-clínicos em modelos de camundongos e que haja relevância clínica em humanos, aumentando assim o potencial de resultados experimentais se traduzirem em tratamentos eficazes para POI. Para começar, posicione o mouse anestesiado na plataforma cirúrgica. Use um barbeador elétrico para remover os pelos do abdômen.
Em seguida, use uma bola de algodão umedecida com solução salina para limpar todos os pelos soltos do abdômen. Estenda totalmente os membros para expor o abdômen e posicione a cabeça do mouse para manter as vias aéreas desobstruídas. Em seguida, usando uma bola de algodão embebida em álcool 75%, desinfete a pele da área cirúrgica duas vezes.
Depois disso, use uma gaze médica estéril seca para remover o excesso de álcool do abdômen. Em seguida, faça uma incisão na pele. Usando uma pinça, levante o músculo reto abdominal no meio do abdômen e faça uma pequena incisão ao longo da linha mediana.
Certifique-se de que a margem superior da incisão esteja de seis a oito milímetros do processo xifóide do esterno e a margem inferior de seis a oito milímetros da genitália externa. Em seguida, coloque gaze pré-umedecida com solução salina normal em ambos os lados da incisão abdominal. Fixe a gaze com pinça hemostática nas bordas superior e inferior da incisão para expô-la.
Depois de fixar a gaze corretamente, pressione suavemente contra ambos os lados da parede abdominal com dois cotonetes umedecidos com solução salina. Em seguida, esprema uma pequena quantidade do tubo intestinal através da incisão e coloque-a na gaze para expô-la. Localize o ceco.
E retire o intestino com cotonetes umedecidos com solução salina até dois centímetros antes do estômago para evitar tocar no pâncreas. Estenda o intestino da extremidade proximal do ligamento pancreaticoduodenal até a extremidade distal da região ileocecal. Em seguida, aplique pressão consistente ao longo de todo o intestino delgado, do proximal ao distal, por cinco minutos até que surjam pequenos pontos de sangramento.
Depois disso, use cotonetes pré-umedecidos para colocar cuidadosamente todo o intestino delgado de volta na cavidade abdominal. Em seguida, massageie suavemente o abdômen através da gaze e da parede abdominal por três a cinco segundos para garantir a posição intestinal normal e evitar obstrução ou torção pós-cirúrgica. Em seguida, injete 100 microlitros de solução salina na cavidade abdominal para repor os fluidos perdidos e lubrificar o tecido abdominal.
Em seguida, remova a gaze e faça um fechamento de duas camadas na incisão abdominal. Após a sutura, limpe suavemente a área próxima à incisão abdominal com gaze médica estéril seca para mantê-la seca e limpa de sangue, fluido tecidual ou solução salina normal. Aplique uma pequena quantidade de adesivo de incisão médica na incisão e ao redor dela para evitar rachaduras após a cirurgia.
Depois que o adesivo secar, coloque o mouse em um cobertor aquecido a 37,5 graus Celsius e monitore o mouse até que ele se recupere totalmente.
